MLR混合淋巴细胞反应

新概念疫苗一、名词解释1.新概念疫苗：与传统疫苗成分,机制,作用不同,且能激发机体特异性免疫应答的新型疫苗。

(1.成分不同：传统疫苗多为死疫苗/减毒活疫苗或重组亚单位疫苗,新概念疫苗则为编码无毒力抗原蛋白的病毒核酸或能激发特异性机体免疫应答的细胞疫苗2.机制不同：传统疫苗主要靠病毒的抗原蛋白刺激机体产生中和性保护抗体,新型疫苗不仅刺激机体产生中和性保护抗体,而且能激发特异性细胞免疫应答 3.作用不同：传统疫苗只能起一定预防作用,新型疫苗不仅能预防疾病,且更能起到特异性治疗作用)2.核酸疫苗：把编码外源蛋白基因的质粒DNA直接导入到动物体内, 使外源基因在活体内表达,3.T细胞疫苗：将引起自身免疫性疾病的自身反应性T细胞或导致同种移植排斥反应的同种反应性T细胞活化并灭活后作为疫苗,可诱导机体产生针对致病性T细胞或同种反应性T细胞的免疫应答,从而消除或减轻这些细胞的致病作用.称为T细胞疫苗4.T细胞表位：抗原经过抗原递呈细胞(APC)加工后,由MHC分子递呈给T细胞受体(TCR)的短肽。

5.树突状细胞（DC）疫苗：荷载抗原的DC具有疫苗的功能，故称~6.抗原提呈细胞(APC)：能摄取、加工处理抗原，并将抗原递呈给T淋巴细胞的一类免疫细胞，在机体免疫应答中发挥重要作用，也称辅佐细胞7.专职APC：能组成性表达MHC-II类分子和T细胞活化的共刺激分子，抗原递呈能力强，包括巨噬细胞、树突状细胞和B细胞等8.内源性抗原：APC内合成的，如被病毒感染细胞合成的病毒蛋白9.外源性抗原：来源于细胞外的抗原,如被吞噬的细胞或细菌等10.交叉递呈：有些APC的MHC-I类分子具有提呈外源性抗原给CD8+细胞的能力。

11.Th1：特征性分泌IL-2、IFN-γ、LT等细胞因子，主要介导迟发型超敏反应（DTH）和巨噬细胞活化等细胞免疫反应。

12.Th2：特征分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13等细胞因子，主要促成B细胞增殖并分化成浆细胞，分泌特异性抗体，介导体液免疫和过敏反应。

BTLA介导的负调共刺激信号对混合淋巴细胞反应抑制的研究冯嘉瑜;方针强;宋波;张艮甫;黄赤兵;王平贤;范明齐;肖亚;贾维胜【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2006(035)015【摘要】目的 HVEM基因突变体腺病毒载体对大鼠混合淋巴细胞反应(MLR)的影响.方法 RT-PCR获得人HVEM的cDNA,使其与LIGHT分子结合的表位点突变,保留与BTLA结合的关健位点.构建经修饰的HVEM基因的复制缺陷型腺病毒载体Adv-mHVEM-IRES2-EGFP并对其进行鉴定和转染效率测定.将该载体用于混合淋巴细胞反应中,观察对淋巴细胞增殖的影响.结果成功构建HVEM突变体和EGFP 复制缺陷型腺病毒载体,经过测序与预期一致,体外培养细胞转染效率达到95%以上.该载体能够对大鼠MLR有明细的抑制作用.结论构建的腺病毒载体能够共表达目的基因的产物HVEM突变体和EGFP蛋白,对体外细胞具有高效转染能力.该载体能够对大鼠混合淋巴细胞反应有明显的抑制作用.【总页数】3页(P1366-1368)【作者】冯嘉瑜;方针强;宋波;张艮甫;黄赤兵;王平贤;范明齐;肖亚;贾维胜【作者单位】第三军医大学西南医院泌尿外科,重庆,400038;第三军医大学新桥医院泌尿外科,重庆,400037;第三军医大学西南医院泌尿外科,重庆,400038;第三军医大学新桥医院泌尿外科,重庆,400037;第三军医大学新桥医院泌尿外科,重庆,400037;第三军医大学新桥医院泌尿外科,重庆,400037;第三军医大学新桥医院泌尿外科,重庆,400037;第三军医大学新桥医院泌尿外科,重庆,400037;第三军医大学新桥医院泌尿外科,重庆,400037【正文语种】中文【中图分类】Q26【相关文献】1.BTLA介导的负调共刺激信号对小鼠心脏移植受体Treg的影响 [J], 冯嘉瑜;肖亚;范明齐;黄赤兵;张艮甫;王平贤;贾维胜;方针强2.同种和异种混合淋巴细胞反应及分类混合淋巴细胞反应的比较 [J], 王英禹;王云杰;张瑞3.同种异基因成骨细胞对混合淋巴细胞反应体系中T细胞的免疫抑制 [J], 盘荣贵;范鍥;邓耀良;赵劲民4.混合淋巴细胞反应体系中胎盘间充质干细胞的免疫抑制效应 [J], 薛一峰;黄建荣;孙鸿丽;苗宗宁5.浓缩红细胞和去白细胞的浓缩红细胞对双向混合淋巴细胞反应的抑制作用研究[J], 骆群;刘景汉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

混合淋巴细胞反应（MLR）分别于0h , 24h和48h收集BMDCs，与未接触过的受试菌的native小鼠脾脏内的CD4+和CD8+T细胞进行反应，用3H-TdR掺入法检测其活化T细胞的能力。

小鼠脾脏CD4+和CD8+细胞的制备（1）脾脏单细胞悬液的制备：颈椎脱臼处死小鼠，自来水冲洗后浸泡在75%酒精中5min。

无菌取脾脏放人平皿，加入5ml四型胶原酶溶液，用1ml针筒给每个脾脏注射500ul四型胶原酶溶液，剪碎脾脏后37℃孵育30min。

将上述脾脏细胞悬液转移至200目不锈钢筛网，用注射器针芯研磨，过滤剩余组织。

加入6ml PBS混匀，4℃，1500 rpm/min ,离心5min ，弃上清后重复一次，加入6ml PBS 重悬备用。

（2）密度梯度离心法分离脾脏单个核细胞（mononuclear cells,MNCs）:吸取3ml已预热的小鼠淋巴细胞分离液至华氏管，缓慢加入6ml脾脏细胞悬液，20℃，1800 rpm/min ,离心25min。

吸出云雾状MNCs层液体，加入6ml PBS混匀，4℃，1500 rpm/min ,离心5min 。

弃上清后重复一次，再加入5ml PBS重悬。

取少量细胞适当稀释后混匀，显微镜下计数。

（3）抗体标记细胞：每106 MNCs加入1ug anti-CD4或anti-CD8单抗混匀，4℃孵育10min后加入1~2 ml buffer , 4℃，1500 rpm/min ,离心洗涤10min ，弃上清后重复一次。

加入90ul buffer和10ul streptavidin microbeads混匀，6~12℃孵育30min，每隔10min晃动均匀一次。

用1~2ml buffer洗涤，4℃，1500 rpm/min ,离心10min，弃上清后加入500ul buffer。

（4）磁珠法分离CD4+和CD8+T细胞：将LS column 固定于磁珠细胞分选磁场中，加入3ml buffer润洗柱子。

3H-TdR掺入法检测淋巴细胞转化率—液体闪烁滤膜测量法【目的】1.掌握示踪法的原理及其在机体免疫功能检测上的应用。

2.初步掌握液认计数滤膜测量的基本技术。

【原理】胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA合成的前身物。

人外周血T淋巴细胞在PHA 刺激下发生母细胞转化而增殖，处于S期的细胞不断地摄取TdR用以合成DNA。

与此同时，3H-TdR也不断地被摄入细胞内而被放射性标记。

通过液体闪烁计数测量方法，便可了解淋巴细胞增殖活动的情况，籍以了解机体的细胞免疫功能。

【材料和方法】1、主要材料：消毒肝素抗凝管（内含肝素10～20单位）、注射器、微量加样器、微量细胞培养板、49型玻璃纤维滤膜、离心机、细胞培养箱、干燥箱、多头细胞收集器，FJ-2107液体闪烁计数仪。

2、主要试剂完全RPMI-1640培养液（内含15% FCS，25 mM Hepes，5×10-2 mM=巯基乙醇），植物血凝素（PHA，用完全RPMI—1640配成浓度为30 ug/ml）；3H-TdR 工作液18.5KBq/20 ul（中国原子能研究院同位素所）。

闪烁液（二甲苯1000 ml,ppo 7 g,popop 0.5 g）。

3、主要步骤①静脉采血肝素抗凝，充分摇匀后加入细胞微量培养板内（20 ul/孔）。

每个样品设自发转化孔和分裂原刺激孔，均为三个复孔。

②自发转化孔每孔内加完全RPMI 1640液0.2 ml，分裂原刺激孔每孔内加PHA液0.1 ml, RPMI 1640液0.1 ml。

加样后，轻轻震荡混匀，置37℃CO2培养箱内培养。

③细胞培养至56 h，每孔内加入3H-TdR工作液各20 ul。

轻轻震荡混匀后置37℃,CO 2培养箱内继续培养至72 h 终止培养。

④终止培养时，用多头细胞收集器将细胞收集在49型玻璃纤维滤膜上，将滤膜置烤箱内烘干。

⑤滤膜冷却后移入存有5 ml 闪烁液的闪烁杯中，避光放置一段时间后，用FJ-2107液闪计数器测量放射性，结果用刺激指数（SI ）表示。

b细胞抗原递呈的试验方法
B细胞的抗原递呈功能可以通过多种实验方法进行研究和验证，以下是一些常见的试验方法：
1.混合淋巴细胞反应（MLR）：
可以通过体外混合B细胞与带有特定受体的CD4+ T细胞，如果B细胞表面提呈了T细胞识别的抗原肽-MHCⅡ类分子复合物，则会激活相应
的T细胞增殖。

通过检测T细胞增殖或细胞因子释放（如IFN-γ、IL-2
等）来评估B细胞的抗原递呈能力。

2.荧光激活细胞分选（FACS）分析：
用已知抗原处理B细胞后，可以使用荧光标记的特异性抗体来检测B细胞表面MHCⅡ类分子与其结合的抗原肽复合物表达水平，或者检测共
刺激分子如CD80、CD86的变化。

3.抗原肽加载实验：
人工合成含有特定抗原表位的短肽，将这些短肽与纯化的MHCⅡ类分
子体外结合后，再将其加载到B细胞上，随后观察这些加载有抗原肽的B细胞是否能够有效活化对应的CD4+ T细胞。

4.报告基因系统：
利用转基因技术构建报告基因小鼠模型，其中CD4+ T细胞携带报告基因，在与抗原提呈B细胞相互作用时可启动报告基因表达，从而间接证明B细胞的抗原递呈活性。

5.共培养及功能性实验：
将抗原预先刺激的B细胞与T细胞共培养，并监测T细胞分化为效应子细胞（如Th1、Th2、Th17或Treg细胞）的能力，或者其分泌的细胞因子类型和数量。

6.单细胞测序技术：
近年来，单细胞转录组测序等高通量技术也用于解析B细胞在抗原递呈过程中的转录变化，揭示不同亚群B细胞在抗原加工和递呈方面的异质性。

每种方法都有其适用范围和局限性，选择哪种方法取决于研究的具体目标和条件。

医学免疫学_南昌大学2中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年1.人T淋巴细胞分化成熟的场所是答案:胸腺2.人类B淋巴细胞分化成熟的场所是答案:骨髓3.黏膜相关淋巴组织中的B细胞主要分泌答案:IgA类抗体4.抗原的特异性取决于答案:抗原决定基的性质、数目和空间构象5.刺激B细胞产生抗体时需要Th细胞辅助的抗原是答案:胸腺依赖性抗原6.下列属于天然佐剂的是答案:百日咳杆菌7.下列哪种物质通常没有免疫原性答案:半抗原8.关于抗体，以下错误的是答案:抗体都是体外产生的9.抗体分子中，与抗原结合的部位是答案:VH与VL区10.脐血中哪类Ig增高提示胎儿有宫内感染答案:IgM11.在种系发生过程中出现最早的Ig是答案:IgM12.参与组成sIgA的分泌片由下述哪种细胞合成表达答案:黏膜上皮细胞13.儿童患肠道寄生虫病时血液和肠粘液中哪种Ig可显著升高答案:IgE14.具有调理吞噬作用的补体裂解产物是答案:C3b15.以下参与补体正向调节的是答案:P因子16.补体活化三条激活途径均参与的是答案:C317.可组成补体膜攻击复合物（MAC）的是答案:C5b678918.能抑制C1r和C1s酶活性的补体调节因子是答案:C1INH19.能与免疫球蛋白Fc段补体结合点相结合的是答案:C1q20.同时具有较强趋化作用和过敏毒素作用的是答案:C5a21.可协助I因子裂解C3b的是答案:H因子22.在机体抗感染过程中，按激活先后顺序依次出现的是答案:旁路途径-MBL途径-经典途径23.对外源性抗原起加工提呈作用的是答案:HLA-DM基因和HL-DO基因24.拥有等位基因数量最多的是答案:HLA-B25.属于MHC非经典Ⅰ类基因的是答案:HLA-E26.由Th1细胞产生、可抑制Th2细胞活性的是答案:IFN-γ27.不属于CK基本生物学效应的是答案:激活补体28.关于CK的作用特点，叙述错误的是答案:以特异性方式发挥作用29.LFA-1的配体是答案:ICAM-130.HIV的感染性受体是答案:CD431.DC成熟后答案:体外激发MLR（混合淋巴细胞反应）能力增强32.可促进Th0向Th1细胞分化，抑制Th0向Th2细胞分化的是答案:IFN-γ33.关于B淋巴细胞，描述错误的是答案:可直接破坏靶细胞34.关于T细胞与APC的非特异结合描述错误的是答案:与APC分离的T细胞不再进入淋巴循环系统35.关于T细胞与APC的特异性结合，描述错误的是答案:CD4和CD8分子不参与36.可为T细胞提供第二活化信号的是答案:CD28/B737.T细胞活化的表现不包括答案:表达Ig38.可对肿瘤细胞产生特异性杀伤作用的是答案:CTL细胞39.CD4+ Th1细胞通常不产生的是答案:IL-440.T细胞介导的细胞免疫作用不包括答案:抗胞外菌感染41.以下不需要Ab参加的是答案:NK细胞的天然细胞毒作用42.关于Ig类别转换，叙述错误的是答案:不发生时，通常生成IgG43.体液免疫再次应答主要产生答案:IgG44.B细胞在生发中心分化成熟过程中发生的主要事件不包括答案:阴性选择45.关于Ⅰ型超敏反应皮肤试验，描述错误的是答案:可有单个核细胞浸润46.可用于预防Rh血型不合引起的新生儿溶血症的是答案:分娩72小时内给产妇注射抗Rh免疫血清47.属于自身免疫性疾病的是答案:系统性红斑囊疮48.参与系统性红斑狼疮(SLE)致病的主要是答案:Ⅲ型超敏反应49.刺激机体产生类风湿因子（RF）的主要是答案:变性IgG50.关于自身免疫叙述正确的是答案:可产生自身抗体和(或)自身反应性T细胞51.关于腺苷脱氨酶缺陷引起的免疫缺陷病，正确的是答案:属于联合免疫缺陷52.AIDS属于答案:获得性免疫缺陷病53.Digeorge综合征属于答案:T细胞缺陷病54.AIDS的主要传播途径是答案:性接触传播、血液传播、垂直传播55.Bruton病的发病机制是答案:Btk基因缺陷56.HIV攻击的最主要靶细胞是答案:CD4+T细胞57.X性联锁高IgM综合征的发病原因是答案:活化T细胞CD40L突变58.对NK细胞杀瘤作用，叙述错误的是答案:依赖补体，通过CDC方式杀瘤59.引起移植排斥反应最重要的抗原是答案:HLA抗原60.根据移植物来源，以下肾移植存活率最高的是答案:单卵孪生子或近交系动物间的供体肾。

名词解释：Ab：antibody，抗体，与特定抗原发生特异性结合的蛋白质。

ADCC：抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用。

携带有Fc受体的细胞通过该受体识别包被在靶细胞表面的抗体恒定区，从而杀死细胞。

大多数由NK细胞介导。

Affinity maturation ：亲和力成熟。

指在体液免疫应答进程中，针对特异性抗原产生的抗体出现亲和力增强的现象。

在再次免疫和以后的免疫中尤其突出。

Ag：antigen, 抗原。

任何可与抗体发生特异性结合的分子。

Antigen Presentation：抗原呈递。

即抗原以抗原肽片段与MHC分子结合的形式展示于细胞表面，然后由T细胞识别以这种方式呈递的抗原。

Antigen receptors：抗原受体。

T和B淋巴细胞表面都携带有高度多样的抗原受体，它们可以识别广泛多样的抗原，而每个淋巴细胞表面只携带有单一的抗原特异性受体。

Basophils：嗜碱性粒细胞。

一类具有颗粒的白细胞，这些颗粒能用碱性染料染色，一般认为它具有与肥大细胞相似的功能。

BC：B细胞或B淋巴细胞。

被抗原激活后能分化成产生抗体的浆细胞，分泌与抗原受体有相同的抗原特异性的抗体的免疫细胞。

B-cell co-receptor：B细胞协同受体。

由CD19，TAPA-1，CR2 共同组成的复合体，可与B细胞表面抗原受体相连，使B细胞对抗原的应答能力增强100 倍左右。

BCR：B细胞受体。

B细胞表面的特异性抗原受体，由跨膜免疫球蛋白分子与恒定的Igα和Igβ链通过非共价键组成的复合体。

BM：骨髓。

机体的造血部位，可生成血液中包括红细胞、单核细胞、多形核白细胞和血小板在内的细胞成员。

在哺乳动物中是B细胞发育的场所，也是形成T细胞相应的干细胞的源泉。

CAM：cell-adhesion molecules.细胞粘附分子。

一类介导组织中细胞间相互结合的细胞表面蛋白质，有时也参与细胞与细胞间的瞬时相互作用。

CD：白细胞分化抗原。

Cluster of differentiation。

一、实验名称生物排斥反应实验二、实验目的1. 了解生物排斥反应的基本原理。

2. 掌握检测生物排斥反应的方法。

3. 分析生物排斥反应的机制及影响因素。

三、实验原理生物排斥反应是指宿主免疫系统对外来组织、器官或细胞产生的免疫反应。

在本实验中，我们采用混合淋巴细胞反应（MLR）和补体依赖细胞毒性试验（CDC）来检测生物排斥反应。

四、实验仪器和材料1. 仪器：细胞培养箱、离心机、显微镜、酶标仪等。

2. 材料：T淋巴细胞、B淋巴细胞、靶细胞、补体、荧光标记抗体、细胞培养液、酶联免疫吸附剂等。

五、实验步骤1. 细胞分离与培养：- 将T淋巴细胞、B淋巴细胞和靶细胞分别进行分离和培养。

- 将分离后的细胞调整至相同的浓度。

2. 混合淋巴细胞反应（MLR）：- 将T淋巴细胞和靶细胞按一定比例混合，置于细胞培养箱中培养。

- 在培养过程中，加入荧光标记抗体，观察T淋巴细胞对靶细胞的杀伤作用。

3. 补体依赖细胞毒性试验（CDC）：- 将T淋巴细胞、靶细胞和补体混合，观察补体对靶细胞的杀伤作用。

- 加入荧光标记抗体，观察细胞毒性。

4. 数据分析：- 通过酶标仪检测MLR和CDC的实验结果。

- 分析实验数据，评估生物排斥反应的程度。

六、实验结果1. 混合淋巴细胞反应（MLR）：- 在MLR实验中，T淋巴细胞对靶细胞的杀伤作用显著，说明生物排斥反应发生。

2. 补体依赖细胞毒性试验（CDC）：- 在CDC实验中，补体对靶细胞的杀伤作用显著，进一步证实了生物排斥反应的发生。

七、实验讨论1. 生物排斥反应的机制：- 生物排斥反应主要通过细胞免疫和体液免疫两种途径进行。

在细胞免疫中，T 淋巴细胞直接杀伤靶细胞；在体液免疫中，抗体与靶细胞结合，激活补体系统，导致靶细胞损伤或死亡。

2. 生物排斥反应的影响因素：- 生物排斥反应的发生受多种因素影响，如HLA基因型、免疫抑制剂的使用、移植器官的质量等。

3. 实验结果分析：- 本实验结果显示，生物排斥反应在MLR和CDC实验中均得到证实。