下载文档原格式
细胞共培养细胞共培养是一种在细胞生物学领域广泛应用的技术，它可以促进不同类型的细胞相互作用，有助于揭示细胞间的相互关系、细胞与外界环境的互动以及细胞功能的调控机制。
在细胞共培养中，通常会选择两种或多种不同类型的细胞种类共同培养，通过它们的相互影响，我们可以更好地理解细胞之间的相互作用以及共生关系。
细胞共培养的意义细胞共培养技术的应用可以为多种领域带来重要的研究价值。
首先，细胞共培养可以模拟体内细胞相互作用的情况，有助于理解细胞间的信号传导、代谢调节等机制。
其次，通过细胞共培养，可以研究不同类型细胞在共同培养条件下的相互影响，推测细胞之间的相互作用对细胞功能和生理活动的影响。
此外，细胞共培养也可以应用于药物研发领域，通过模拟体内环境，评估药物对细胞相互作用的影响，为药物筛选和疾病治疗提供重要参考。
细胞共培养的技术原理细胞共培养的技术原理主要包括细胞种类的选择、培养基的配方和共培养体系的建立。
在细胞共培养过程中，不同类型的细胞根据研究需要选择合适的比例和细胞密度进行混合培养，通常会在含有足够营养物质和生长因子的培养基中进行共培养实验。
培养基的pH值、温度、湿度等条件也需要精心控制，以确保细胞在共培养过程中能够生长和相互作用。
细胞共培养的应用细胞共培养技术在生物学研究、药物筛选和组织工程等领域都有重要的应用。
在细胞学研究中，可以通过共培养实验探究细胞间的相互作用，揭示新的细胞通信机制、信号传导路径等；在药物筛选领域，细胞共培养可以评估药物对多种细胞类型的影响，提供更接近体内情况的药效评价方法；在组织工程领域，利用不同类型细胞的共培养，可以构建更接近天然组织结构和功能的人工组织，为组织修复和再生医学研究提供新思路和技术支持。
总结细胞共培养作为一种重要的细胞实验技术，有助于揭示细胞相互作用的本质、理解细胞功能的调控机制，对生物医学研究和应用具有重要的意义。
通过合理设计共培养实验，可以进一步拓展我们对细胞间相互关系的认识，为深入探讨生命活动的奥秘提供新思路和方法。
细胞培养技术与应用细胞培养技术是生物科技领域的重要组成部分，其应用范围广泛，涉及医学、农业、食品工业、环境保护等多个领域。
本文将简单介绍细胞培养技术的基本原理、分类、常见技术及应用。
一、细胞培养技术的基本原理细胞是生物体内组成单位，是生物学研究的基本对象。
细胞培养技术是指将生物体内的细胞从组织或器官中分离出来，放入含有必需营养物质和适当环境的培养基中，进行生长、增殖和分化的一种技术。
培养基是一种液态或固态的生物学培养用基质，其中含有细胞生长所需的各种营养物质、维生素、微量元素和生长因子等，而无菌的操作条件、适当的pH值和氧气浓度以及温度和湿度的控制，也是细胞培养过程中必须关心的问题。
细胞培养技术的基本原理就是通过对培养基中培养的细胞进行试验和分析，研究细胞生长、增殖、分化和功能等方面的问题。
二、细胞培养技术的分类细胞培养技术的分类主要依据种类、来源、形态等特性，可分为以下几类：1.原代细胞培养（Primary cell culture）此类培养为第一次从组织或器官中分离的细胞，具有原代细胞特征，具有细胞衰老限制，常能增殖到35-60倍，适于生物学仿真实验的研究；2.细胞株培养（Cell line culture）细胞株是长期经连续传代而获得的细胞世代，可分为稳定细胞株和不稳定细胞株。
稳定细胞株经多次传代后，还能保持原始形态和功能，代表性细胞株有HeLa、CHO、Vero等，常用于药理学、生物学及生物工程等领域中进行研究；3.二次扩增或转染细胞培养（Secondary cell culture）此类培养为从原代细胞或细胞株中分离后通过扩增或转染处理的细胞。
常用于细胞毒性实验、用于表达蛋白质、病毒、植物和昆虫细胞的重组蛋白等；4.三维细胞培养（3D Cell culture）此类培养方式为采用特殊的培养基和培养方法，使细胞形成三维组织结构。
其应用领域涉及人体组织再生医学、肝内药代动力学等。
5.定量检测型细胞培养（qPCR and ELISA）此类培养突出利用优化的细胞培养条件，量化检测细胞中与特定指标相关的分子量、酶活性、基因表达等，是常用于诊断、监测疾病和药效评估的技术。
细胞培养基种类及用途1. DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）：DMEM 是最常用的无血清培养基之一，是以鹰的鸟胚为基础改进而来的，含有大量氨基酸、糖类、维生素和一些重要的生长因子。
适用于大多数哺乳动物细胞的培养，具有优良的细胞增殖和生长效果。
2.RPMI1640：RPMI1640是一种由罗斯韦尔公立医院制备的细胞培养基，主要用于淋巴细胞、淋巴瘤和骨髓细胞的培养。
它具有高浓度的氨基酸和维生素，适合长期的培养以及体外细胞繁殖实验。
3. MEM（Minimum Essential Medium）：MEM 是一种最简单的细胞培养基，含有大量的必需氨基酸、维生素和果糖。
它广泛用于原代细胞和肿瘤细胞的培养，具有适应性强、成本低的优势。
4. FBS（Fetal Bovine Serum）：FBS 不是一种细胞培养基，而是培养基中添加的血清。
FBS 富含细胞生长因子、激素和营养物质，可提供所需的细胞补体和血浆蛋白。
它被广泛用于细胞培养中，可以促进细胞的增殖和生长。
5. StemPro MSC SFM：StemPro MSC SFM 是一种专门设计用于人类间充质干细胞（MSC）培养的无血清培养基。
它富含生长因子和维生素，可以维持 MSC 的干性状态，有利于其增殖和多向分化。
6. Neurobasal medium：Neurobasal 是一种特殊的神经元细胞培养基，用于神经元细胞的培养。
它含有许多神经营养因子和激素，能够促进神经细胞的生长和分化。
7.DMEM/F12：DMEM/F12是一种混合型细胞培养基，是DMEM和HAMF12培养基的混合产物。
它具有增强细胞的生存能力和增殖速度的优势，适用于许多类型的肿瘤细胞和原代细胞的培养。
细胞培养基的选择要根据具体实验目的和细胞类型来确定。
不同种类的细胞培养基在细胞生长、增殖和分化方面有不同的影响，因此合理的选择细胞培养基可以提高实验效果和数据可靠性。
几种细胞混合培养特点及应用高征摘要：混合细胞培养又称协同培养(coculture)，系指两种或多种细胞在同一个培养容器内，同样的培养条件(如培养液、培养温度等)下进行混合培养。
根据实验不同的要求，可采用不同种类的敏感细胞，以细胞合适的比例进行混合培养。
本文介绍了几种常见的细胞混合培养方法及其特点。
关键字：混合细胞；培养；淋巴细胞；兔成骨细胞；兔骨髓基质干细胞；肝癌细胞；大鼠皮层神经元细胞；大鼠胶质细胞；表皮细胞；纤维细胞；U937；鼻咽癌细胞混合细胞培养又称协同培养(coculture)，系指两种或多种细胞在同一个培养容器内，同样的培养条件(如培养液、培养温度等)下进行混合培养。
根据实验不同的要求，可采用不同种类的敏感细胞，以细胞合适的比例进行混合培养。
1.混合淋巴细胞培养1.1混合淋巴细胞培养定义混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture）是指同种异体的淋巴细胞在体外共同培养的现象。
若一方(通常为供者)淋巴细胞经灭活处理，则称“单向混合淋巴细胞培养(one-way mixed lymphocyte culture)”。
两个无关个体功能正常的淋巴细胞在体外混合培养时，由于HLAⅡ类抗原中D和DP抗原不同，可相互刺激对方的T细胞发生增殖，此为双向混合淋巴细胞培养(two way MLC)。
若将其中一方的淋巴细胞先用丝裂霉素C(mytomycine C)处理或射线照射使之细胞中DNA失去复制能力，但仍能刺激另一方淋巴细胞发生转化，称为单向混合淋巴细胞培养(one way MLC)。
1.2混合淋巴细胞培养用途混合淋巴细胞培养(MLC)或称混合淋巴细胞反应(MLR) 常用于器官移植前的组织配型，以测定受体和供体主要组织相容性抗原(HLA抗原)相容的程度。
由于MLC中淋巴细胞接受同种异型抗原的刺激而发生活化、增殖，产生种类众多的细胞因子，促进NK、LAK和CTL等杀伤细胞的分化，因此又是免疫调节研究中常用的实验模型。
两个个体间HLA抗原差异程度越大，反应越强烈，可通过细胞数量、形态检查或3H-TdR掺入率检测反应细胞的增殖水平。
如用经照射的、已知D位点抗原的纯合子分型细胞(Homozygous typing cell，HTC)作为刺激细胞，则可检测待检者的D位点抗原型别。
若待检者抗原与标准HLA-D抗原相同，MLC不发生增殖，此为HLA-D抗原阴性分型法。
EB病毒转化的B淋巴母细胞表达高水平的HLAⅡ类抗原，常作为单向混合淋巴细胞培养中的刺激细胞。
2.混合细胞培养在病毒学和肿瘤学研究中的应用2.1混合细胞培养的具体应用方法根据实验不同的要求，可采用不同种类的敏感细胞，以细胞合适的比例进行棍合培养。
待细胞形成致密的单层后接种病毒，研究蚀斑形成的条件，或以受染病毒的病人或尸解组织经胰酶消化成单个细胞后再与其它种类的敏感细胞进行棍合培养，分离病毒，或以正常人体细胞与癌肿病人的肿瘤细胞混合培养、观察细胞之间的相互影响，由此达到实验者所要研究的目的。
2.2 研究进展研究病毒蚀斑的形成在探索影响流感病毒蚀斑形成的因素时，曾观察到流感病毒可对鸡胚肾单层细胞引起细胞病变，但鸡胚肾单层细胞在培养液中维持的时间短暂，尤其在琼脂培养基复盖下细胞极易团缩，细胞间隙加大，故不易形成明显的流感病毒蚀斑。
虽有关于流感病毒在鸡胚肾细胞上形成蚀斑的简报幻，但实验不稳定，数据不足，似乎不能重复。
皮肌细胞对流感病毒虽不如鸡胚肾细胞敏感，但在琼脂培养基复盖下维持时间较长。
综合鸡胚肾细胞对流感病毒比鸡胚皮刃细胞敏感以及鸡胚皮肌细胞比鸡胚肾细胞在琼脂培养基下维持时间较长的特点，将鸡胚肾细胞与鸡胚皮肌细胞各以适当的比例进行混合培养，结果流感病毒在此混合培养细胞上形成明显的蚀斑。
在鸡胚肾与鸡胚皮肌混合细胞上形成的流感病毒蚀斑(直径2~3mm)比鸡胚皮肌细胞上形成的蚀斑(直径1~Zmm)大而清楚。
前者的蚀斑形成。
单位(PFU)比后者高达100倍。
试验证明采用鸡胚肾与鸡胚皮肌混合细胞，既保留了鸡胚肾细胞对流感病毒较为敏感的特点，又在与鸡胚皮肌细胞棍合培养时延长了鸡胚肾细胞在琼脂培养丛复盖下维持的时间，保证蚀斑的形成。
实验结果能反复重演且稳定。
运用这一混合细胞培养技术对甲型流感病毒WS株、原甲型的PRS、亚甲型的洛57一4、亚洲甲卫不敏感相的贵57一2、兰生60一2以及乙型的Lee等株均能成功地在鸡胚肾与鸡胚皮肌棍合细胞。
_L形成蚀斑。
3. 兔成骨细胞与骨髓基质干细胞混合培养3.1 研究背景对骨髓基质干细胞进行改造，使其在保持快速生长的同时向成骨细胞方向分化是目前国内外研究的热点。
实验发现，成熟的成骨细胞可以通过细胞间的直接接触作用促进骨髓基质干细胞增殖，此外成骨细胞可产生多种生长因子促进其骨髓基质干细胞的增殖、分化。
但骨髓基质干细胞通过诱导向成骨细胞分化后，难以再与原有的成骨细胞区分开。
3.2 试验方法实验组：取第3代成骨细胞与第3 代骨髓基质干细胞以1∶1 比例直接混合培养，一定时间后测定细胞的增殖及成骨情况。
对照组：分别取上述两种细胞在与混合培养细胞完全相同的条件下单独进行培养，按测定混合培养细胞相同的方法分别测定该两种细胞的相应指标。
将混合培养细胞与同期两种对照细胞相应指标的平均值进行比较。
3.3 试验结果在细胞增殖和细胞成骨能力等方面均是实验组明显高于相应的平均值。
3.4 试验结论将第3代成骨细胞与骨髓基质干细胞混合培养，可以使其中一种或两种细胞增殖加快，成骨能力加强。
该方法可能成为一种新的骨组织工程种子细胞的获取方法。
4. 淋巴细胞与肝癌细胞混合培养4.1 试验目的通过肝癌细胞和淋巴细胞混合培养，体外诱导产生高活性的肝癌特异性细胞T淋巴细胞(H S CTL)。
4.2 试验方法采用淋巴细胞和肝癌细胞混合培养技术，在IL 1，IL 2 ，IL 4和IL 6刺激下，诱导产生H S CTL ，应用间接免疫荧光法和51Cr释放法检测其对靶细胞的杀伤效应。
4.3 试验结果H S CTL与自身LAK相比，CD3+，CD4+和CD8+细胞明显增多，抗肿瘤效应明显增强。
4.4 试验结论采用淋巴细胞和肝癌细胞混合培养同时应用白细胞介素可获得大量扩增的高活性的H S CTL。
5. 大鼠皮层神经元和胶质细胞混合培养5.1 试验目的建立大鼠皮层神经元胶质细胞混合培养牵张损伤模型。
5.2试验方法提取出生时间24h到48h的SD大鼠大脑皮层组织行神经元和胶质细胞原代混合培养，根据Ellis方法采用CICⅡ型细胞损伤装置建立大鼠皮层神经元和胶质细胞混合培养牵张损伤模型，根据硅胶膜的变形距离将实验组分为轻度组、中度组和重度组。
同时设立对照组，不作牵张损伤。
分别在不同时间进行神经细胞的PrI染色和测定培养上清液中的LDH含量，以确定损伤的程度。
5.3试验结果随着牵张损伤程度加重，PrI红染细胞数逐渐增多，同时细胞培养液中LDH 释放量也逐渐增多。
5.4试验结论成功建立了大鼠皮层神经元胶质细胞体外牵张损伤模型，可分别模拟轻、中、重度损伤。
使用方便，可重复性好，可用于颅脑创伤的病理机制和药物作用的进一步研究。
6. 表皮细胞、纤维细胞与淋巴细胞混合培养6.1 研究目的异体、自体皮肤混合移植是提高大面积三度烧伤治愈率的有效方法。
根据烧伤后皮肤混合移植的病理生理变化和组织学特点的研究，通过表皮细胞、纤维细胞与淋巴细胞混合培养，进一步证实人体表皮细胞的组织特异性和较强的抗原性。
根据这个特点，可在今后皮肤混合移植的过程中识别异体表皮，从而可更深入地探讨混合移植的排异规律。
6.2试验原理皮肤表皮细胞、淋巴细胞混合培养与淋巴细胞混合培养一样，它们之间的反应强度均能反映出组织相容性差异程度。
组织相容性相同的同卵双生间反应均为阴性，皮肤移植能长期存活，组织相容性差异越大，反应亦越强，皮肤移植存活时间越短。
7.U937与鼻咽癌细胞的混合培养7.1 试验背景U937是一种前单核细胞，其主要是以悬浮生长为主，细胞形态成圆球状，表面光滑，没有突起。
在PMA、内毒素或生长因子的刺激下细胞可由悬浮状态衍变为贴壁生长，细胞形态由圆球状变化为多边型，细胞表面有突起伸出。
本实验采用流式细胞术检测了U937与鼻咽癌细胞CNE- 2混合培养对其CD36表达的影响。
7.2 试验结果U937与CNE- 2混合培养以促进U937对CD36的表达，共同培养24小时，CD36表达显著增加。
7.3 试验结论前单核细胞与肿瘤细胞混合培养可促进前单核细胞向单核细胞的分化。
参考文献[1] 张汉荆.混合细胞培养在病毒学和肿瘤学研究中的应用[J]. 国外医学. 1986年06期.[2] 蔡国锋,章庆国,黄开. 兔成骨细胞与骨髓基质干细胞混合培养的实验研究[J]. 现代医学. 2005年04期[3] 李均乐,叶小鸣,程权永,等. 淋巴细胞与肝癌细胞混合培养诱导特异性细胞毒T淋巴细胞的形成[J]. 中华普通外科杂志. 2003年03期.[4] 范东东,钟春龙,夏蓉,等. 大鼠皮层神经元和胶质细胞混合培养牵张损伤模型的建立[J]. 立体定向和功能性神经外科杂志. 2010年04期.[5] 李映月,韦巧妹,杨之骏. 表皮细胞、纤维细胞与淋巴细胞混合培养-异体、自体皮肤混合移植的研究[J]. 上海医学. 1981年第05期.[6] 冷启新,李瑞祥,刘执玉. U937与鼻咽癌细胞混合培养对其CD36表达的影响[J].四川解剖学杂志. 2000年02期.。
