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2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体(共23张PPT)

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动物细胞融合和单克隆抗体公开课ppt课件

动物细胞融合和单克隆抗体公开课ppt课件

8
二：动物细胞融合的成功应用
思 考
——单克隆抗体的制备
• 人们获得抗体的传统方法是?
– 将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体
• 这种方法的缺点是什么?
– 效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能 产生严重的过敏反应。
• 运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？
• 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来
ppt课件.
7
Hale Waihona Puke 结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理 融合前处理 诱 导方法
细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性
细胞膜的流动性
用纤维素酶、 果胶酶去壁
用胰蛋白酶 使细胞分散
物理、化学方法
物理、化学、 生物方法
用
途
获得部分 或完整植株
主要用于制备 单克隆抗体
ppt课件.
2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质， 不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的 本领，因而可以获得大量单克隆抗体
3）、为何要进行两次筛选？
第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得 到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。
4）、如何进行第2次筛选？ 培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。
ppt课件.
病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜被 病毒颗粒穿通 细胞膜连接
细胞融合、形成杂种细胞 5
3、动物细胞融合技术的应用
• 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使
远缘杂交成为可能。
• 利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。
ppt课件.

动物细胞融合与单克隆抗体PPT课件(原文)PPT

动物细胞融合与单克隆抗体PPT课件(原文)PPT
栏目 导引
2．单克隆抗体的制备过程
专题2 细胞工程
骨髓瘤
杂交瘤细胞
能产生所需抗体
栏目 导引
专题2 细胞工程
3.单克隆抗体的优点及应用 (1)优点：__特__异__性__强____、灵敏度高、产量高。 (2)应用 ①作为诊断试剂，具有准确、___高__效_____、简易、快速的优点。 ②用于治疗疾病和__运__载__药__物____。
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√
)
按ESC键退出全屏播放
(4) 动 物 杂 按ESC键退出全屏播放
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交
瘤
细
胞
产
生
单
克
隆
抗
体
能
体
现
细
胞
的
全
能
性
。
(×)
(5)动物细胞融合和植物体细胞杂交的结果是相同的。( × )
栏目 导引
专题2 细胞工程
动物细胞融合 结合下面动物细胞融合的过程，探究下列问题：
栏目 导引
专题2 细胞工程
比较项目
植物体细胞杂交 (番茄—马铃薯植株)
单克隆抗体制备
过程 第 4 步
杂种植株鉴定
提纯单克隆抗体(特异性 强、灵敏度高)
酶解法除去细胞壁： 注射特定抗原，免疫处理 融合前处理
纤维素酶、果胶酶 正常小鼠
①克服有性远缘杂交 ①制备单克隆抗体；
意义和用途 不亲和的障碍；
②有助于疾病的诊断、治
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按按EESS从CC键键退退_出出_全全细_屏屏_播播_胞放放__培__养__液_____或小鼠的__腹__水____中提取单克隆抗体。
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动物细胞融合与单克隆抗体PPT

动物细胞融合与单克隆抗体PPT

跟踪训练
(2011年滦县高二检测)能使动物细胞融 )
合的特有的诱导因素是( A．离心
B．灭活的病毒
C．电激
答案：B
D．振动
单克隆抗体的制备 1．关键思路及操作依据 (1)关键思路
①克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。
②将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤细 胞。 (2)用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因
)
动物细胞工程 动物细胞培养和融合，单 克隆抗体的制备 胰蛋白酶处理，制作细胞 悬液 物理方法、化学方法、生 物方法 单克隆抗体的制备 动物血清不可缺少
A.1 C．3
B．2 D． 4
【尝试解答】
【解析】
B
选B。植物细胞工程常采用的技术手段
有植物组织培养和植物体细胞杂交。动物细胞工程
常采用的技术手段有动物细胞培养、细胞融合、单 克隆抗体的制备，还有胚胎移植、核移植等。动、
细胞。
远缘 杂交的不亲合性，成为研 4．意义：克服了______ 遗传 、_________ 细胞免疫 、肿瘤和生物_______ 新品种 培 究细胞_____
育的重要手段。
二、单克隆抗体
1．传统抗体的获得
抗原 ，使动 (1)方法：①向动物体内反复注射某种_____ 抗体 ；②从动物_____ 血清 中分离所需抗体。 物产生_____ 产量低 、纯度低、_______ 特异性 差。 (2)特点：_______
动物细胞融合 1．原理：膜的流动性。 2．诱导方法：物理法——离心、振动、电激；化 学法——聚乙二醇；生物方法——灭活的病毒。
3．动物细胞融合的过程
4．优点：动物细胞融合技术突破了有性杂交方法
的局限性，使远缘杂交成为可能。 特别提醒 灭活是指用物理或化学的手段使病毒或细菌失去感 染能力，但是并不破坏这些病原体的抗原结构。

222动物细胞融合和单克隆抗体-PPT精品文档

222动物细胞融合和单克隆抗体-PPT精品文档
融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细 胞就是杂交瘤细胞。 但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞， 通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释， 用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通 过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的 抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与 特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还 不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进 行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中 增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的 克隆化培养。
杂交细胞 选择性培养基 杂交瘤细胞增殖 未融合细胞死亡
1.单克隆抗体 的制备 5
大侠
将不同种杂交细胞分 开，并克隆专一抗体， 检测阳性细胞
体内培养
体外培养
单克隆抗体
6
大侠
PEG 灭活的仙台 病毒
选择性培养基 杂交瘤细胞增殖 未融合细胞死亡
7
大侠
筛选产生特异抗 体的细胞群
8
大侠
如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？
§2 －2 动物细胞工程
•2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体
一、动物细胞融合（细胞杂交）
将两个或多个细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传 信息的单核细胞，称为杂交细胞。 诱导动物细胞融合的方法：聚乙二醇、灭火 的病毒（仙台病毒）、电激 意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘 杂交称为可能。
14
大侠
9
大侠
体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞，从上清中获取单 克隆抗体。但此方法产量低 体内实体瘤法 对数生长期的杂交瘤细胞接种于小鼠背部皮 下，每处注射0.2 ml, 共2～4点。待肿瘤达到一定大小后(一 般10～20天)则可采血，从血清中获得单克隆抗体含量可达 到1-10mg／ml。但采血量有限。 体内腹水的制备 腹腔注射1×106个杂交瘤细胞，接种细胞 7～10天后可产生腹水，密切观察动物的健康状况与腹水征 象，待腹水尽可能多，而小鼠频于死亡之前，处死小鼠，用 滴管将腹水吸入试管中，一般一只小鼠可获1～10ml腹水。 也可用注射器抽取腹水，可反复收集数次。腹水中单克隆抗 体含量可达5-20mg/ml， 这是目前最常用的方法，还可将腹 水中细胞冻存起来，复苏后转种小鼠腹腔则产生腹水快、量 多。 10

动物细胞融合与单克隆抗体讲课 (2)-PPT精选文档

动物细胞融合与单克隆抗体讲课 (2)-PPT精选文档

C
6.“生物导弹”是指 A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物
（
D ）
练一练
A 、 B细胞为动物细胞,请据图回答问题:
A细胞
C 细 胞
D 细 胞
B细胞
(1)若A细胞为骨髓瘤细胞B细胞为淋巴细胞,那么D细胞 称为 杂交瘤 细胞,D细胞具有两个亲本细胞的特征,一 有丝分裂 方面因具有骨髓瘤细胞的 性质 ,通过 连续分裂 方式产生大量细胞 ,我们称之为 过程;另一方面 单克隆 能分泌大量的抗体 ,我们把该过程分泌的抗体 单克隆抗体 称 .
）
A．PEG
B．灭活的病毒
C．电刺激
D．离心
5. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定 养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （ ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B.①③⑤ C.①②③④ D.②③
？
3. 用传统的方法如何获得抗体？
抗体的传统生产方法
抗 原
动 物 体 内
多 种 效 应 B 细 胞
多 种 抗 体
从 血 清 中 分 离 抗 体
该法制备抗体的特点：
产量低、纯度低，且抗 体的特异性差、灵敏度低。
单克隆抗体的制备
• 单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学
质单一特异性强的抗体
性
设计方案：
利用效应B细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂
人-鼠(想像图)
一、动物细胞融合
1.概念：
动物细胞融合（cell fusion）也成细胞杂 交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细 胞的过程。 融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传 物质的单核细胞，称为杂交细胞。

动物细胞融合与单克隆抗体 课件人教版高中生物选修三ppt

动物细胞融合与单克隆抗体 课件人教版高中生物选修三ppt

一 动物细胞融合技术
杂交细胞：具有原来两个 或多个细胞的遗传信息
使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
细胞膜的流动性
动物细胞融合特有
PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。 （化学法 物理法 生物法 ）
灭活的病毒诱导动物细胞融合的原理
1.什么是病毒的灭活？
灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。
三 单克隆抗体的应用
1.单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，可以大量制备。 单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性 结合，并且可以大量制备。
2.单克隆抗体的应用 （1）广泛用作诊断试剂
（2）运载药物：如ADC（抗体 - 接头 - 药物）
（3）用于治疗疾病。
2(2020全国卷)为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了 以下实验流程。
2.2.2 动物细胞融合技术与单克隆抗体
本节聚焦： 1.什么是动物细胞融合技术？ 2.单克隆抗体是如何制备的？
在临床上有哪些应用？
知识回顾：植物体细胞杂交的过程
植物细胞融合
植物组织培养
运用植物体细胞杂交技术，可以跨越不同植物之间的生殖隔离的屏障
那么，有没有技术能让不同种动物的体细胞进行杂交，培育出集不同细胞 的优势于一身的动物细胞呢？
单克隆抗体制备的过程：
能产生所需抗体的杂交瘤细胞
注射到小鼠腹腔内 从小鼠腹水中提取
体外培养 从细胞培养液中提取
单克隆抗体
两次筛选的比较
第一次筛选
第二次筛选
原因
诱导融合后得到的细胞中，除 杂交瘤细胞之外，还有未融合 的亲本细胞，也有融合的具有 同种核的细胞

高中生物课件-2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体


单
克 隆
3、融合后培养液中有几种细胞？
抗
体 制
4、第一次筛选的方法和目的
备
过 程
5、第二次筛选的方法和目的
示
意 图
6、杂交瘤细胞有什么特点？
7、本过程利用了哪些技术？
2.3单克隆抗体的应用
单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏 度高，并能大量制备。
1、诊断试剂——最广泛应用
准确、高效、简易、快速
2、治疗疾病和运载药物
杂交瘤细胞特点： 既能产生专一抗体， 又能大量增殖。
（二选）抗体检 测：选能产生所 需专一抗体的杂 交瘤细胞
小鼠腹腔内培养
获得产生相应 抗体的B细胞
√ BB 、B瘤 、瘤
瘤 （B、瘤） （一选）选择 性培养基：筛 选杂交瘤细胞
体外培养
注射抗原 免疫
经过免疫的 B淋巴细胞
骨髓瘤 细胞
单 克 隆 抗 体 的 制
异性结合的免疫球蛋白。
能产生抗体的细胞是浆细 胞（即效应B细胞）。
抗体的传统生产方法
抗原 反复注射动物
该法制备抗体的缺பைடு நூலகம்：
产量低、纯度低，且 抗体的特异性差、灵 敏度低。
从动物的血清中分离抗体
单克隆抗体
★ 利用B淋巴细胞产生抗体的功能。 ★ 利用骨髓瘤细胞无限增殖的特性。 ★ 利用细胞融合的技术将两种细胞融合 获得具有B淋巴细胞和骨髓瘤细胞特性的 杂交瘤细胞。 ★ 利用动物细胞培养技术大量培养杂交 瘤细胞。
1.3 比较动、植物细胞杂交技术
比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合
融合原理 融合前处理
细胞膜的流动性 细胞的全能性
纤维素酶、果胶酶 去除细胞壁后诱导 原生质体融合

2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件-高二下学期生物人教版选择性必修3


多孔细胞培养板 阳性孔
一段时间后，检测各孔上清液中细 胞分泌的抗体
上清液可与特定抗原结合的培养孔 为阳性孔
抗体检测板
分泌抗体能跟特定抗原结合的细胞 即为所需杂交瘤细胞
在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的目的和方法是不相同的
（三）单克隆抗体的制备过程（非常重要）
02
将抗体检测为阳
新课程p64杂交瘤细胞在小鼠腹腔 性的杂交瘤细胞
3、灭活病毒诱导细胞融合过程：
动物细胞融合实质及完成的标志：细胞核的融合 融合后形成单核细胞
书本P49右上角问题： 19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻 疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。 如何解释这一现象？
病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。
一、一动.动物物细细胞胞融融合合技技术术
多种已免疫 B淋巴细胞
小鼠的脾脏中获取
方法：电融合法 、PEG融合法、 灭活病毒诱导法
等诱导融合
骨髓瘤细胞
（三）单克隆抗体的制备过程（非常重要）
02
诱导融合后的细胞
B
BB
B1-瘤 B2-瘤 B3-瘤
瘤瘤 瘤
第一次筛选 置于选择培养基上培养
1
2
3
杂交瘤细胞(多种)
第一次筛选：用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本 细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。
有没有技术能让不同种动物的体细胞杂交？
实例：1970年，人—鼠细胞荧光标记融合实验
红色荧光 染料标记 的膜蛋白
人细胞
绿色荧光 染料标记 的膜蛋白
鼠细胞
人鼠杂交细胞
细胞 融合
37° 培养40min
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单一抗体的B淋巴细胞。
C
(3)A是从小鼠的脾脏中取得__B_淋__巴__细__胞_ 该
细胞能够产生_抗__体___ 。
足够数量的细胞群
(4).图中B为____细__胞__融__合______过程，常 用___灭__活__的__病__毒______诱导，该细胞继承 体外培养 双亲细胞的遗传特性，既能分__泌专__一__抗__体__, 又能_迅__速__大__量__增__殖。
2、动物细胞融合基本原理 细胞膜的流动性
3、诱导方式 物理法：电激、振动、离心 化学法：聚乙二醇（PEG） 生物法：灭活的病毒 如：仙台病毒
为什么要用灭活的病毒？ 仙台病毒 物理/化学 丧失感染活性
方法 保留融合活性
灭活的病毒
灭活的病毒颗粒
黏附于细胞表面
动
物
细
Байду номын сангаас
细胞膜被病毒
胞
颗粒穿通
融
合
过
程
有丝分裂
在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ）C ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身
融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂
交瘤细胞
A．②④
B．①③⑤
C．①②③④
D．②③
3、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆
抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ C ）
经过免疫的 B淋巴细胞
融合 多种细胞
骨髓瘤 细胞
随堂测试
置于选择培 养基上培养
B淋巴细胞 培养几天后
死亡
杂交瘤细胞
由于培养基 中缺乏相应 的营养物， 骨髓瘤细胞
死亡
随堂测试
用培养液稀释
多 孔 细 胞 培 养 板
阳性克隆的筛选和 克隆化培养
随堂测试
注射到小鼠体内
体外培养
单克隆抗体
由单个杂交瘤细胞通过克隆，所产生的化学性质 单一、特异性强的抗体。
2.2.2 动物细胞融合与单 克隆抗体
学习目标
1.通过观察图片、阅读文本，能够了解动 物细胞融合的原理、过程和意义。 2.通过师生交流、图像分析，能够理解单 克隆抗体制备的过程和应用。
【问题导学二】植物体细胞杂交技术
植物细胞 A（番茄）
植物细胞 B（马铃薯）
植
物
体 原生质体 A
细
胞 杂
植物细 胞融合
细胞融合，
形成杂种细胞
动物细胞融合技术的意义和应用
4、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 植物细胞的全能性
细胞融合前的处 去除细胞壁后诱导 使细胞分散后诱导
理方法
原生质体融合
细胞融合
诱导方法
物理（离心、振荡、 物理、化学方法
电刺激）
多孔细胞培养板
随堂测试
交
过
程
学习目标 1.去除细胞壁
纤维素酶、果胶酶
原生质体 B
2.原生质体融合
物理方法和
化学药剂:聚乙二醇
杂种细胞 杂种细胞再生出细胞壁 脱分化
植物组织培养
愈伤组织 再分化
杂种植株(番茄马铃薯)
一、动物细胞融合技术
1.概念： 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个
或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
融合后形成的具有两个或多个细胞遗传 信息的单核细胞，称为杂交细胞。
（同左）
化学（聚乙二醇） 灭活的病毒
用途
克服远源杂交的障 碍，获得杂种植株
制备单克隆抗体
传统抗体生产方法随：堂测试
抗原 刺激 动物体内
反复注射
已B淋经巴免细疫胞的抗体(抗体不纯)
筛选单一已经免疫的B 淋巴细胞
不能增殖，产生大量抗体
缺点：产量低、纯度低、特异性差
二、单克隆抗体的制备
用抗原免疫小鼠
骨髓瘤细胞的培养
A.经过免疫的T淋巴细胞 B.未经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的B淋巴细胞 D.未经过免疫的B淋巴细胞
4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产
破伤风杆菌的实验方案 A
(1)该实验方案的目的是： 制备单克隆抗体
骨髓瘤细胞
B
(2)该方案能达到预期效果吗？为什么？
杂交瘤细胞
不能，没有注射抗原，无法获得产生
思考问题
1、整个制备过程为何要经过几次筛选? 第一次筛选： 用特定的选择培养基筛选出多种 杂交瘤细胞 第二次筛选： 筛选出能产生所需抗体的杂交瘤 细胞。
2、本过程运用了哪些技术手段？原理？ 技术手段：动物细胞融合技术、动物细胞培养 原理：细胞膜的流动性、细胞增殖
三、单克隆抗体的特点和应用
1、特点：特异性强，灵敏度高，产量高。 2、应用：诊断试剂 优点：准确，高效，快速
细胞融合后培养液中有几种细胞？ B BB B瘤 瘤瘤 瘤 筛选杂种细胞
已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨 基嘌呤阻断。 人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增 殖。 鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖。 将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，在筛选培养 基上筛选获得杂种细胞。
注射到 小鼠腹腔
课堂小结
动物细 胞融合
单克隆 抗体制备
过程： 原理：细胞膜的流动性 意义：突破有性杂交局限，使远 缘杂交成为可能 应用：主要用于制备单克隆抗体 制备过程：
特点：特异性强，灵敏度高，产量大 应用：用作诊断试剂，治疗疾病和 运载药物
【作业布置】
1.复习本节知识,做学案习题。 2.复习专题一、二内容,构建知识 网络。
用于治疗疾病 用于运载药物
“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物
随堂测试
1、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比
较中，正确的是（ B ）
A．结果是相同的 B．杂种细胞的形成过程基本相同 C．操作过程中酶的作用相同 D．诱导融合的手段相同
2、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细
胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，