动物细胞融合和单克隆抗体

1、在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞有没 有可能无限增殖？ 不可能 2、我们学过的什么细胞具有这样的能力？
癌细胞
3、你认为有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？
细胞融合
２、实验原理：
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖
柯勒
单克隆 动物细胞培养技术 杂种细胞 动物细胞融合 抗体 既能产生特异性抗 体，又能大量繁殖 创始人：米尔斯坦
⑵.诱导方式：
二醇（PEG）
生物法： 灭活的病毒 例如：仙台病毒
3.意义和应用：
打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；
重要用途：制备单克隆抗体。
知识回顾
1、抗体是由何种细胞产生的？
三、单克隆抗体 浆细胞（效应B细胞）
2、抗体是如何产生的？
B淋巴细胞 抗原 增殖分化成浆细胞
浆 细胞 骨髓瘤细胞 选出能产生 特定抗体的 细胞群继续 培养
细胞融合 筛选
杂交 瘤细胞
细胞培养
体外培养
从培养液或小 鼠腹水中取出 单克隆抗体
体内培养
练习：
1、动物细胞融合和植物原生质体融合比较， 在动物细胞融合中有特殊性的是（ A、融合的原理 C、融合的诱导手段 ）
B、融合的优点 D、融合的过程
2.制备过程：
注射抗原的目的是什么
诱导其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几种细胞 怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交 瘤细胞有何优点 为何要进行克隆化培养和专 一抗体检测，多次筛选 大量增殖杂交瘤细胞获得单 抗的方法
1.在制备单克隆抗体的过程中，选用 哪两种细胞进行融合？为什么选择这 两种细胞？ 浆细胞和骨髓瘤细胞 浆细胞能产生单一抗体，但不能无限 增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖，但不 能产生单一抗体。

一、动物细胞融合
1、定义：指用自然或人工方 法使两个或多个不同的细胞 融合成一个细胞的过程。
◆细胞杂交：不同基因型的细
胞之间的融合就是细胞杂交。
◆杂交细胞：融合后形成的具
有原来两个或多个细胞遗传 信息的单核细胞成为杂交细 胞。
细胞融合是正常的生命活动
受精作用
两个细胞正在融合
二.动物细胞融合
2、诱导融合的因素
• 生物法：灭活的病毒诱导融
合.(利用灭活仙台病毒是动物细
胞融合所特有的。 这是由于病毒
的磷脂外衣与动物细胞的膜十分 相似的缘故。病毒外壳上的某些 细胞膜被 病毒颗粒穿通 病毒颗粒黏 附细胞表面
糖蛋白可能还有促进细胞融合的
功能。)
• 化学法：聚乙二醇PEG诱导融 合. • 物理法：电激融合
细胞膜连接
细胞融合、形成杂种细胞
3、动物细胞融合技术的应用
• 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使 远缘杂交成为可能。 • 利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。
思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的 病毒需要灭活？不灭活行吗？
因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。
内增殖。
提取单克隆抗体。
问题强化：
1）、本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理 2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？
这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具 有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以 获得大量单克隆抗体
3）、为何要进行两次筛选？ 第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得到能产生 特异性抗体的杂交瘤细胞群。

提示:第一次筛选的目的是获得杂交瘤细胞,第二次筛选的目的是获得能 产生所需单一抗体的杂交瘤细胞。体外培养和注射到小鼠腹腔内培养。
知识点一
知识点二
[归纳提升]
1.血清抗体与单克隆抗体的比较
比较项目 产生
特点
血清抗体 由B淋巴(浆)细胞分泌 产量低、纯度低、特异性差
单克隆 由杂交瘤细胞分泌 抗体
能准确地识别抗原的细微差异,与特定抗 原发生特异性结合,并且可以大量制备
知识点一
知识点二
(2)单克隆抗体制备过程中的两次筛选 第一次筛选:B淋巴细胞和骨髓瘤细胞经诱导剂处理后,会出现多种细胞, 如B—B细胞、瘤—瘤细胞、B—瘤细胞、B淋巴细胞、骨髓瘤细胞等,因 而要用选择培养基筛选获得杂交瘤细胞(即B—瘤细胞)。用特定的培养基 筛选,未融合的和融合的具有同种核的细胞死亡,只有杂交细胞才能生长。 第二次筛选:B淋巴细胞有多种,与骨髓瘤细胞融合后产生多种杂交瘤细 胞,因而需要对杂交瘤细胞作进一步的筛选。通常用“有限稀释法”,将杂交 瘤细胞稀释,用多孔培养板培养,使每孔中的细胞不超过一个,培养增殖后, 检测各孔上清液中细胞分泌的抗体,以确定是不是所需要的杂交瘤细胞。 (3)杂交瘤细胞具备双亲的遗传物质,不仅具有B淋巴细胞产生特异性抗 体的能力,还具有骨髓瘤细胞在体外培养条件下大量增殖的能力,从而可以 克服单纯B淋巴细胞不能无限增殖的缺点,大量生产单克隆抗体知。识点一 知识点二
知识点一
知识点二
2.下列关于植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较,正确的是( ) A.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同,诱导融合的方法 也完全相同 B.两者都可以跨越种属间的生殖隔离,突破有性杂交的局限,使远缘杂交 成为可能 C.利用植物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术,为制造单克隆抗体开 辟了新途径 D.目前科学家终于实现了两个植物物种间的体细胞杂交,得到了同时具 有两个物种遗传物质的超级植物,并使它们的性状全部得以体现 答案:B

《动物细胞融合和单克隆抗体》教学设计一、教学目标1、知识目标（1）简述动物细胞融合的概念和方法。

（2）理解单克隆抗体的制备过程及应用。

2、能力目标（1）通过对动物细胞融合过程的学习，培养学生的逻辑思维能力。

（2）通过分析单克隆抗体的制备流程，提高学生的信息处理和综合应用能力。

3、情感态度与价值观目标（1）体验科学研究的严谨性和创新性。

（2）关注生物科技在医学和生活中的应用，增强对生物学科的兴趣。

二、教学重难点1、教学重点（1）动物细胞融合的原理和方法。

（2）单克隆抗体的制备过程。

2、教学难点（1）单克隆抗体的制备过程中细胞筛选的原理和方法。

（2）动物细胞融合和单克隆抗体在实际应用中的意义。

三、教学方法讲授法、讨论法、直观演示法、问题驱动法四、教学过程1、导入新课通过展示一些利用动物细胞融合和单克隆抗体技术的实际应用案例，如癌症的靶向治疗药物，引发学生的兴趣和好奇心，从而导入新课。

2、讲授新课（1）动物细胞融合①概念讲解：向学生解释动物细胞融合的定义，即两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。

②原理介绍：强调细胞膜的流动性是动物细胞融合的基础。

③方法阐述：详细介绍诱导动物细胞融合的方法，如物理法（离心、振动、电激）、化学法（聚乙二醇）和生物法（灭活的病毒）。

④实例展示：通过图片或动画展示动物细胞融合在实际中的应用，如杂交瘤细胞的制备。

（2）单克隆抗体①抗体的传统制备方法及局限性：回顾抗体的传统制备方法，指出其产量低、纯度不高、特异性差等局限性。

②单克隆抗体的概念：明确单克隆抗体是由单个 B 淋巴细胞克隆形成的细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。

③单克隆抗体的制备过程a 免疫小鼠：给小鼠注射特定的抗原，使其体内产生相应的 B 淋巴细胞。

b 细胞融合：将免疫后的 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。

c 筛选杂交瘤细胞：通过特定的培养基筛选出既能大量增殖又能产生特定抗体的杂交瘤细胞。