磷脂酰肌醇合成酶PIS基因植物表达载体的构建

一种植物质体表达载体的构建方法及应用与流程技术构建植物质体表达载体是一种将外源基因导入植物细胞并在植物细胞内进行表达的方法。

以下是一种常见的植物质体表达载体的构建方法及其应用与流程技术：
1.选择载体：选择适合植物质体表达的载体，通常是质粒
（plasmid）或病毒载体。

质粒载体通常由选择标记基因、启动子、终止子和目标基因构成。

2.克隆目标基因：将目标基因（外源基因）插入载体的多克
隆位点中。

这可以通过限制性内切酶切割质粒载体和目标基因的DNA，然后利用DNA连接酶将两者连接起来。

3.构建表达载体：将含有目标基因的质粒进行转化，例如通
过化学方法或电穿孔等手段将质粒导入植物细胞，形成表达载体。

4.选择转化植物细胞：通过对转化植物细胞进行筛选，例如
添加抗性选择剂或利用标记基因表达进行筛选，以筛选出含有目标基因的转基因植物细胞。

5.确认目标基因表达：通过PCR、RNA分析或蛋白质分析等
技术，检测和确认目标基因在转基因植物细胞内的表达情况。

6.稳定转基因植物的培养：将成功表达目标基因的转基因植
物细胞进行培养，以获得稳定转基因植物种子或植株。

7.功能性验证与应用：对获得的稳定转基因植物进行功能性
验证，例如检测表达的蛋白质具有特定的生物活性或应用
于农艺改良、抗病虫害等方面。

8.申请相关许可：如果打算将转基因植物及其产品用于商业
化目的，需要申请相关的许可和审批文件，以确保遵守法
规和伦理规范。

需要注意的是，植物质体表达载体的构建方法与特定目标基因、植物物种和研究目的有关。

磷脂酰肌醇-3-激酶家族与急性肺损伤研究新进展华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉科（430022）王月兰姚尚龙摘要磷脂酰肌醇-3-激酶以其广泛的分布，参与并产生酯类第二信使，激活细胞内大量酶联级反应，调节多种细胞的生存、激活、分化和繁殖而成为研究细胞信号转导机制的热点。

该文重点介绍PI3K结构与功能、激活途径及参与急性肺损伤的机制及其临床意义。

关键词肺损伤；磷脂酰肌醇脂激酶；机制近年来对急性肺损伤（ALI）机制的研究发现，除了目前正在研究的MAPK信号转导通路对ALI影响外，越来越多的试验和临床发现PI3K在急性肺损伤的形成中有着不可忽视的作用。

并且还发现PI3K是肺细胞重要的调节酶之一，影响着肺组织的生理和病理变化【1】。

因此对PI3K及其下游底物的研究，可将成为研究和治疗肺部疾病的新靶点。

1 PI3Ks结构、功能与生物活性磷脂酰肌醇－3－激酶（phosphatidylinositol 3-kinases，PI3K）的研究始于1980s后期。

近年来对PI3Ks家族的构成、功能研究有了新的突破。

PI3Ks 是普遍存在于体内各类细胞，属于酯类的激酶（或酶），能磷酸化与膜相关的磷脂酸肌醇家族，它可以募集和激活下游的靶物质而启动一系列信号联级反应，其在细胞的有丝分裂发生、细胞存活、分化和激活、细胞骨架的构型与重塑以及囊胞的运输起着重要的作用[1]。

1. 1 结构与分类据其结构、特异底物和不同调节功能PI3Ks可分为三大类[2，3]。

其中PI3-Ks家族已有9个成员从哺乳类生物细胞中分离出来。

I类：由P110催化亚基和调配亚基（regulatory adapter subunit）：P50、P55、P85、P101构成的异二聚体，其中P110又有四种亚型分别为：P110α、P110β、P110γ和P110δ。

目前已经明确的I类PI3Ks又有两个亚家族，分别为：IA和IB。

IA是由p110α、p110β和p110δ催化亚单位和调节亚基（P85α、P85β、P55γ）构成，对酪氨酸激酶相关受体（tyrosine kinase-lingked receptor ）的信号转导系统比较敏感。

兽疫链球菌磷脂酰甘油磷酸合成酶基因的分离曲凯;田平芳;谭天伟【期刊名称】《北京化工大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2008(035)005【摘要】根据化脓链球菌(Streptococcus pyogenes)磷脂酰甘油磷酸合成酶(phosphatidylglycerophosphate synthase,PGPS)基因序列设计引物,通过PCR 从兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus )基因组中克隆得到开读框为53lbp的同源序列pgsa-sz.pgsa-sz的预测编码蛋白含有176个氨基酸残基,分子量19400,等电点8.8,其中含有63个疏水氨基酸,预示其可能的膜结合特性.二级结构预测发现该蛋白含3个跨膜域.此外,该蛋白与S.pyogenes的PGPS具有85%的氨基酸序列相似性.将该蛋白与金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的PGPS进行序列比对,发现该蛋白包含PGPS中保守的活性位点区域.上述结果表明,pgsa-sz为S.zooepidemicus细胞膜中PGPS 的编码基因.【总页数】4页(P78-81)【作者】曲凯;田平芳;谭天伟【作者单位】北京化工大学生命科学与技术学院,北京,100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京,100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京,100029【正文语种】中文【中图分类】Q291【相关文献】1.重组磷脂酰丝氨酸合成酶的分离纯化及酶学性质研究 [J], 张业尼;路福平;李玉;王建玲2.基因工程手段提高磷脂酰丝氨酸合成酶活性的研究 [J], 陈梦雪;卢欣睿;马玉;孙明波;罗维佳;王培琪;章朦玥;张怡轩3.拟南芥5-烯醇式丙酮酰-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(EPSPS)的定点突变及抗草甘膦转基因拟南芥获得 [J], 陈荣荣;曹高燚;刘允军4.磷脂酰肌醇合成酶PIS基因植物表达载体的构建 [J], 庞彩红;毛秀红;咸洋;夏阳;李双云;刘翠兰;燕丽萍;李丽;杨青山;王学文5.阿维链霉菌来源的磷脂酰丝氨酸合成酶基因的克隆及其在毕氏酵母中的异源表达[J], 欧广云;熊智强;周圣靓;王勇;李平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

细胞与分子免疫学杂志（Chin J Cell Mollmmunol)2021，37( 1)39•论著•文章编号：1007-8738(2021 )01>0039~08磷脂酰肌醇3激酶p(PI3Kp)和PI3K8在K IT突变介导的细胞转化中起不同作用张少婷，朱光荣，石君，杨继辉，蒋宗英，张良颖，窦凯凯，孙建民*(宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医学免疫学系，宁夏银川750004)[摘要]目的探究磷脂酰肌醇3激酶(P I3K)的不同亚型在三型酪氨酸激酶受体KIT突变介导的信号传递及细胞增殖中的作 用。

方法在B aF3细胞中稳定表达野生型KIT及胃肠间质瘤中常见的KIT突变V560D、W557K558del,分别用PI3K a、P I3KP、P I3K5亚型特异性抑制剂或者广谱P I3K抑制剂处理细胞，免疫沉淀法和W estern blot法检测KIT及其下游信号活化情况。

胃肠 间质瘤G IST-T1细胞采用相同药物及浓度处理，免疫共沉淀和W estern blot法检测KIT及其下游信号的活化情况，噻唑蓝 (M T T)法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡。

结果与对照组相比，在表达野生型KIT及其突变体的B aF3细胞中，P I3K8亚型特异性抑制剂对KIT及其下游信号分子蛋白激酶B(AKT)和胞外信号调节激酶（ERK)活化的抑制作用最强，其次为 P I3K a和P I3KP亚型特异性抑制剂。

在G IST-T1细胞中，P I3KP亚型特异性抑制剂对KJT及其下游信号活化的抑制作用最强,其次为P I3K&和P I3K a亚型特异性抑制剂。

结论在B aF3细胞中，P I3KS亚型在KIT活化及其下游信号传递中起主要作用，而在G IST-T1细胞中，P I3Kp亚型在KIT活化及其下游信号传递中起主要作用，这些结果表明不同P I3K亚型在KIT突变介导 的细胞转化中起不同作用，且在不同的细胞中其作用也有不同。

GST-Glypican 3 N端融合蛋白表达载体构建及表达纯化肖明兵;赵敏星;倪润洲;江枫;周嘉伟【摘要】目的构建人磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达及纯化.方法以重组质粒pcDNA3.1-GPC3N为模板,扩增GPC3 N端基因,产物经纯化回收后与载体PGEX-4T-1连接并转化大肠埃希菌Rosetta,酶切鉴定序列完全正确者诱导表达GST-GPC3 N端融合蛋白,并以谷胱甘肽琼脂糖小珠亲和纯化.结果 Glypican 3 N 端基因片段成功插入载体PGEX-4T-1,插入位点及碱基序列完全正确,转化Rosetta 后,经IPGT诱导成功表达分子质量为64 000的GST-GPC3 N端融合蛋白.结论成功建立了重组GST-GPC3 N端融合蛋白的原核表达载体、表达菌株及诱导表达和纯化的方法,为GPC3 N端融合蛋白的进一步应用打下基础.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2010(028)003【总页数】3页(P212-214)【关键词】磷酯酰肌醇蛋白聚糖3;载体;克隆;表达【作者】肖明兵;赵敏星;倪润洲;江枫;周嘉伟【作者单位】南通大学附属医院消化病研究室,江苏南通226001;南通大学附属医院消化病研究室,江苏南通226001;南通大学附属医院消化病研究室,江苏南通226001;南通大学附属医院消化病研究室,江苏南通226001;中国科学院上海神经科学研究所,上海200030【正文语种】中文【中图分类】Q78Glypican 3(磷酯酰肌醇蛋白聚糖3，GPC3) 可参与细胞增殖、分化、黏附等, 其异常表达与一些肿瘤关系密切[1-3]。

国内外已相继有表达GPC3 C末端融合蛋白的相关报道，但GPC3 N端融合蛋白的表达国内尚未见报道。

本实验室曾成功构建人GPC3 N端融合基因pcDNA3.1重组载体[4]。

GPI锚定蛋白的研究进展摘要】糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白（GPI-APs）是一类通过自身羧基末端糖基-磷脂酰肌醇结构锚定在真核细胞膜表面但不穿过磷脂膜双层的蛋白质。

它们具有广泛的功能，涉及细胞识别、生长、分化和程序性死亡等重要的生命过程，并与许多疾病有一定的关系。

现在普遍认为，GPI-APs与膜上脂筏的连接在信号转导和其他功能方面具有重要意义。

本文就GPI-APs的生物特征及功能进行综述。

【关键词】GPI锚定蛋白；膜蛋白；信号传递；疾病检测【中图分类号】R379 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）19-0010-02糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白(glycosylphosphatidy-linositol-anchored protein，GPI-APs)是一类通过其羧基末端的GPI结构锚定于细胞膜表面而不跨越其磷脂双层结构的蛋白。

[1]在脊椎动物，真核生物，植物，软体动物，昆虫，血吸虫病，真菌和原生动物中发现了大量的GPI-AP[2]。

目前，GPI-AP主要用于细胞生物学，分子生物学及相关疾病的研究。

例如，IL-12基因与GPI信号肽序列的融合为初步制备肾癌疫苗奠定了基础[3]；B7-1和GPI-AP的剪接和相关细胞的融合可以促进T细胞的活化。

从而介导肿瘤细胞凋亡以达到治疗目的[4]。

GPI-APs还可锚定CD等细胞因子，促进T细胞活化，从而介导抗肿瘤[5]。

1.GPI-APs的分子结构GPI锚定蛋白的基因位于第19号染色体，基因跨度大于40kbp，包括18个内含子，17个外显子[6],全长蛋白约56kD，是一个与多种疾病相关的多功能蛋白。

GPI-APs广泛分布于各类生物体内，它含有大约20个氨基酸的组成的特殊C末端序列，该序列即为膜钩连接的标志，从而能将蛋白质锚定于细胞膜表面，但不跨越膜结构，从而不干涉细胞内信号传递[7]。

研究认为[8]，GPI-APs和其他脂化蛋白是与脂质相关联的，这些蛋白质大部分分布于细胞膜的脂筏上，可看作是膜相关的含脂双层脂筏域的蛋白质。

磷脂酰肌醇代谢过程-概述说明以及解释1.引言1.1 概述磷脂酰肌醇代谢过程是指磷脂酰肌醇在生物体内发生的一系列化学反应，包括其合成、降解和转运等过程。

磷脂酰肌醇作为一种重要的次级信号分子，在细胞内起着调控多种生理生化过程的关键作用。

磷脂酰肌醇代谢过程的研究对于解析细胞信号传导、细胞增殖和存活、细胞周期调控等生物学过程具有重要的意义。

通过研究磷脂酰肌醇的合成、降解和转运途径，我们可以深入了解其在细胞内的作用机制，从而为疾病的发生和治疗提供理论依据。

本文将对磷脂酰肌醇代谢过程进行全面综述，包括磷脂酰肌醇的定义和作用、磷脂酰肌醇的合成过程以及磷脂酰肌醇的代谢途径等内容。

通过对这些方面的系统介绍和分析，我们可以对磷脂酰肌醇代谢过程有一个全面的了解，为进一步的研究和应用提供基础。

总之，磷脂酰肌醇代谢过程的研究具有重要的科学意义和应用价值。

通过深入了解磷脂酰肌醇的代谢途径，我们可以对其在细胞信号传导和生物学过程中的作用机制有更为清晰的认识，为疾病治疗和新药开发提供理论指导。

希望本文的介绍和分析能够对读者对磷脂酰肌醇代谢过程有所启发，并促进相关领域的研究进展。

1.2文章结构文章结构部分的内容可以如下编写：1.2 文章结构本文将按照以下顺序介绍磷脂酰肌醇的代谢过程：1. 引言：本部分将对磷脂酰肌醇的概述进行介绍，包括其定义和作用。

同时，还将介绍本文的目的，即阐述磷脂酰肌醇的合成过程和代谢途径。

2. 正文：本部分将详细介绍磷脂酰肌醇的合成过程和代谢途径。

2.1 磷脂酰肌醇的定义和作用：本部分将介绍磷脂酰肌醇的概念和在细胞中的重要作用，包括信号传导、细胞生存和代谢调节等方面。

2.2 磷脂酰肌醇的合成过程：在本部分中，将详细介绍磷脂酰肌醇的合成途径和相关的酶催化反应，包括从原料到中间产物再到最终产物的步骤。

2.3 磷脂酰肌醇的代谢途径：本部分将探讨磷脂酰肌醇在细胞内的代谢途径，包括通过酶的催化以及相关的调控机制来介绍其代谢途径。

PI-PLC基因调节植物花粉管生长作用的研究进展李丽丽;常如慧;杨丽凤;梁塔娜;张艳欣;姜桐桐;孙雪;黄凤兰【摘要】磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)能够水解植物细胞中的磷脂生成三磷酸肌醇(IP3),而IP3可以促进花粉管细胞中Ca2+的释放,从而促进植物花粉管生长.深入了解PI-PLC调节植物生长的作用,从而为PI-PLC基因在植物生长中的进一步研究提供参考,从PI-PLC基因的定位与结构、PI-PLC与质膜的结合方式、IP3促进Ca2+释放的途径以及PI-PLC调节植物花粉管极性生长的作用机制等方面进行综述,并对磷脂酶C的水解产物及其调控植物生长发育的分子机制研究进行了展望.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2018(046)006【总页数】4页(P20-23)【关键词】特异性磷脂酶C;PI-PLC基因;三磷酸肌醇;Ca2+信号【作者】李丽丽;常如慧;杨丽凤;梁塔娜;张艳欣;姜桐桐;孙雪;黄凤兰【作者单位】内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028000;内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028000;内蒙古自治区高校蓖麻产业工程技术中心,内蒙古通辽028000;内蒙古自治区蓖麻育种重点实验室,内蒙古通辽028000;内蒙古自治区蓖麻产业协同创新培育中心,内蒙古通辽028000【正文语种】中文【中图分类】S188磷脂酶基因家族主要有磷脂酶A1(PLA1)、磷脂酶A2(PLA2)、磷脂酶C(PLC)和磷脂酶D(PLD)4种。

磷脂酶C(phospholipase C，PLC)是一种脂质水解酶，根据水解底物不同可以将其分为磷脂酰肌醇特异性的磷脂酶C(PI-PLC)和非特异性的磷脂酶C(NPC)[1]。