乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒(CNP-NAG底物法)产品技术要求senmeixikema

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明书(酶法·液体双试剂)用途本试剂盒用以测定尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活力。

原理在第一反应中用己糖激酶(HK)消去血清中内源性葡萄糖的影响，在第二反应中，NAG作用于基质P-硝基苯酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(PNP-NAG)，生成N-乙酰氨基葡萄糖，此N-乙酰氨基葡萄糖在N-乙酰氨基葡萄糖氧化酶(NAGOD)的作用下生成H2O2。

此H2O2在过氧化物酶(POD)的作用下与高灵敏的发色剂双〔3-双(4-氯酚)甲基-4-•二甲氨苯基〕胺(BCMA)反应，生成绿色色素。

通过测定此色素可求得NAG的活力。

第一反应：HK葡萄糖+ A TP ─────────→葡萄糖-6-磷酸+ ADP第二反应：NAGPNP-NAG + H2O ──────→N-乙酰氨基葡萄糖+ p-硝基苯酚NAGODN-乙酰氨基葡萄糖+ O2 + H2O ───→N-乙酰氨基葡萄糖酸+ H2O2PODH2O2 + BCMA + H+────→绿色色素+ 2H2O试剂━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━试剂成份含量──────────────────────────────────R-1A1(冻干) NAGOD ≥3000U/LPOD ≥12500U/LHK ≥8000U/LA TP·2Na ≥5mg/mlR-1A2(冻干) PNP-NAG 10.5mmol/LR-1B 2-吗啉乙烷磺酸(MES) 30mmol/L──────────────────────────────────R-2A(冻干) BCMA 0.17mmol/LR-2B MES 30mmol/L──────────────────────────────────标准酶NAG 约为50U/L标准酶溶解液MES 30mmol/L ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━标本尿液试剂配制R-1：以一瓶R-1B溶解一瓶R-1A2，再以此溶液溶解一瓶R-1A1。

氨基葡萄糖苷酶(NAG)酶联免疫试剂盒【试剂配制】洗液工作液：洗液需提前配制，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制。

取出洗液浓缩液，浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

浓洗涤液按1:20倍进行稀释。

例如用量筒量取285ml去离子水，倒入烧杯或其他洁净容器中，再量取15ml浓洗涤液，均匀加入，搅拌混匀。

【注意事项】1.实验开始前，请提前配置好所有试剂。

试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。

2.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

3.如样品浓度过高时，用合适的溶液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

【操作步骤】1.将各种试剂移至室温（18-25℃）平衡至少30分钟，按前述方法配制试剂，备用。

2.将酶标板取出，设一个空白对照孔、不加任何液体；每个标准点依次各设两孔，每孔加入相应标准品50μl；其余每个检测孔直接加待测标本50μl。

3.每孔加入酶结合物50μl（空白对照孔除外），充分混匀，贴上不干胶封片，置37℃温育1小时。

4.手工洗板，弃去孔内液体。

洗涤液注满各孔，静置10秒甩干，重复三次后拍干；洗板机洗板，选择洗涤三次程序，洗板后拍干。

5.每孔加显色剂A液50μl，显色剂B液50μl，振荡混匀后，37℃避光显色15分钟，每孔加终止液50μl。

6.用酶标仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。

在反应终止后10分钟内进行检测。

【操作要点】1.为保证检测结果的准确性，建议标准品及样品均设双孔测定。

每次检测均需做标准曲线。

2.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时再乘以相应的稀释倍数。

3.加样时，请使用一次性的洁净吸头，避免交叉污染。

加样时应尽量轻缓，避免起泡，将样品加于酶标板孔底部，切勿沿孔壁加样。

4.为防止样品蒸发，温育过程中酶标板必须覆上板贴，任何时候都应避免酶标板处于干燥的状态。

5.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性，在每次洗涤过程中，需要将孔内液体完全甩干，并在吸水纸上拍干，切勿将吸水纸直接放入反应孔中吸水，或用枪在孔中吸取液体。

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）测定试剂盒（MPT法）适用范围：本产品用于体外定量测定人尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的含量。

1.1 规格试剂1（R1):2×45mL、试剂2（R2): 2×15mL；校准品（选配）：1×2mL；质控品（选配）：1×2mL。

1.2 组成试剂盒由试剂、质控品（选配）和校准品（选配）组成。

试剂1(R1)：柠檬酸缓冲液（PH=4.5），200mmol/L。

试剂2(R2)：6－甲基－2吡啶－N－乙酰－1－硫代－β－D－氨基葡萄糖苷，6mg/dl。

校准品：冻干品，含NAG：（100～200）IU/L、磷酸盐缓冲液：50mM、乳糖：5％、酶稳定剂：1％。

质控品：冻干品，含NAG：（5～25）IU/L、磷酸盐缓冲液：50mM、乳糖：5％、酶稳定剂：1％。

2.1 外观液体双试剂：R1：无色澄清液体；R2：无色或淡黄色液体。

校准品：冻干品，溶解后为无色液体。

质控品：冻干品，溶解后呈黄色匀质液体。

2.2 装量:不得低于标示体积。

2.3 溯源性：根据GB/T 21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，该校准品溯源至Inner standard。

＜1.5ABS ( 1cm；340nm；37℃)。

2.4 空白吸光度： A（空白）2.5 灵敏度：浓度为100IU/L时，吸光度变化△A/min＞0.01 ABS。

2.6 线性：测定结果在(0,200]IU/L范围内r≥0.996；测定结果(5,200] IU/L 时相对偏差应≤15%，测定结果(0,5] IU/L时绝对偏差应<0.75 IU/L。

2.7 精密度：用（5～12）IU/L和（15～25）IU/L的样本各重复检测10次，其变异系数CV<5%。

2.8 批间差：取三个批号试剂，分别测定浓度接近正常值上限的样本，每个批号测3次，不同批号之间测定结果的相对极差应<10%。

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）测定试剂盒（MPT底物法）适用范围：用于体外定量测定人体尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性。

1.1试剂盒包装规格试剂1：1×15ml，试剂2：1×5ml；试剂1：2×54ml，试剂2：2×18ml；试剂1：3×39ml，试剂2：3×13ml；试剂1：4×54ml，试剂2：4×18ml；试剂1：2×300ml，试剂2：1×200ml；试剂1：2×30ml，试剂2：2×10ml。

校准品（选配，冻干品）：1×1ml；1×2ml。

质控品（选配，冻干品）：1×1ml；1×2ml。

1.2试剂盒主要组成成分2.1 外观试剂1：无色澄清液体；试剂2：无色或淡黄色液体。

校准品：冻干品，溶解后为无色至黄色液体。

质控品：冻干品，溶解后为无色至黄色液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于1.5。

2.3.2试剂空白吸光度变化率在37℃、340 nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度变化率（△A/min）应不大于0.05。

2.4 分析灵敏度测定活性为100U/L样本时，吸光度变化率（ΔA/min）应不小于0.01。

2.5 线性范围在（0，200）U/L线性范围内，线性相关系数r应不小于0.996。

在（20，200）U/L范围内的线性相对偏差应不大于±15%；在（0，20] U/L范围内的线性绝对偏差应不大于±3U/L。

2.6 重复性重复测试两份高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于5%。

2.7 批间差不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定标准操作程序1.摘要N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶检测主要用于肾脏疾病、肝硬化和慢性活动性肝炎的诊断。

2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测尿液中NAG的浓度。

3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定NAG浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）试剂盒采用的是速率法。

5.原理26N---O---β−+−→−DN NAG-H-氨基葡萄糖苷乙酰硫代吡啶甲基巯基吡啶氨基葡萄糖-甲基-乙酰62--2--N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)催化底物6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)水解产生6-甲基-2-巯基吡啶(MPT)和N-乙酰-氨基葡萄糖，MPT在340nm附近有吸收峰，所以，可以通过监测340nm附近的吸光度变化值计算样本中的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力。

6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：柠檬酸缓冲液、Tris6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷、防腐剂7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。

试剂不可冰冻。

7.4试剂准备：试剂为即用式。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用上海科华公司提供的K校准因子对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：上海科华公司提供的生化质控血清做为室内质控品。

每日在测定前做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

复星长征体外诊断试剂标准操作规程试剂名称：N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒（MPT 底物法）上海复星长征医学科学有限公司目录1 试剂盒概况2 方法学原理3 试剂主要组分4 样本准备5 试剂准备6 校准要求7 质量控制8 计算方法9 参数设定10 参考范围11 试剂性能概要12 超出可报告范围的处理13 其他必须说明的内容14 参考文献1 试剂盒概况1．1 货号：1.02.5001/1.02.5002/1.02.5003/1.02.5005。

1．2 包装规格：试剂1（R1）：4×45mL 试剂2（R2）：2×30mL。

试剂1（R1）：2×60mL 试剂2（R2）：2×20mL。

1．3 医疗器械注册证编号/产品技术要求编号沪械注准20172400274/沪械注准201724002742 方法学原理试剂采用6-甲基-2硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（MPT-NAG）为底物。

MPT-NAG在N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（NAG）的作用下分解生产6-甲基-2-巯基吡啶（MPT）,使波长340nm处的吸光度值的上升速率进行监测，即可测得样本中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（NAG）的活性。

NAGMPT-NAG+H2O N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷+MPT3 试剂主要组分3．1 试剂1（R1）柠檬酸盐缓冲液200mmol/L3．2 试剂2（R2）6-甲基-2硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷15mmol/L3．3 储存条件3．3 . 1 在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起效期12个月。

3．3 . 2 试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定20 天。

4 样本准备样本要求：血清或者尿液标本新鲜，应不溶血，避光保存。

5 试剂准备试剂为液体双试剂形式，无须特别准备，可直接上机使用。

6 校准要求6．1 校准品：使用与试剂配套使用的复星长征N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶校准血清对测定进行校。

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒(MPT底物法)适用范围：用于体外定量测定人血清或尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）的活性。

1.1规格试剂Ⅰ(R1)：60ml×3，试剂Ⅱ(R2)：20ml×3试剂Ⅰ(R1)：60ml×2，试剂Ⅱ(R2)：20ml×2试剂Ⅰ(R1)：60ml×1，试剂Ⅱ(R2)：20ml×1试剂Ⅰ(R1)：45ml×3，试剂Ⅱ(R2)：15ml×3试剂Ⅰ(R1)：90ml×2，试剂Ⅱ(R2)：15ml×41.2主要组成成分2.1 外观试剂盒外观应整洁，文字符号标识清晰；试剂均为澄清溶液，无未溶解物。

2.2装量用通用量具测量，液体试剂的净含量应不少于标示值。

2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度用纯化水作样本，在波长A340nm，比色光径1cm,反应温度37℃下，试剂空白吸光度测定值，应≤0.80A。

2.3.2 试剂空白吸光度变化率在波长A340nm，比色光径1cm,反应温度37℃下，试剂空白吸光度变化率绝对值（|△A/min|），应不超过0.10。

2.4分析灵敏度测试浓度50U/L的样本时，吸光度变化值≥0.005。

2.5线性在[0.2，200]U/L范围内，线性回归的确定系数r应不低于0.990；在[0.2，50)U/L范围内，线性绝对偏差不超过±5.0U/L；在[50，200]U/L范围内，线性相对偏差不超过±10%。

2.6重复性用低、高二个水平的样本检测，检测结果批内变异系数（CV）应不超过10％。

2.7批间差用三个批号的试剂盒测定同一血清样本，试剂盒批间相对极差≤15%。

2.8准确度使用sigma公司的纯品，进行回收试验，计算回收率，应介于85%-115%之间。

2.9稳定性试剂在未开瓶状态下，于2℃～8℃可保存12个月。

有效期后两个月进行测定2.3、2.4、2.5、2.6、2.8的方法进行测定。

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定试剂盒（MPT法）适用范围：该产品用于体外定量测定人尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性。

1.1 产品规格1.2 组成成分1.2.1 试剂组成试剂1：柠檬酸缓冲液（PH=4.5），200mmol/L试剂2：6－甲基－2吡啶－N－乙酰－1－硫代－β－D－氨基葡萄糖苷，6mg/dL。

1.2.2 校准品的组成冻干品，含NAG（30IU/L）、磷酸盐缓冲液（50mM）、乳糖（50g/L）。

定值范围为：20-50U/L。

1.2.3质控品的组成冻干品，含NAG（10IU/L）、磷酸盐缓冲液（50mM）、乳糖（50g/L）。

定值范围为：5-25U/L。

2.1 外观液体双试剂：试剂1：无色至淡黄色液体；试剂2：无色至淡黄色液体。

校准品：冻干品，溶解后为无色至淡黄色液体。

质控品：冻干品，溶解后呈黄色匀质液体。

2.2 装量不得低于标示体积。

2.3 空白吸光度空白吸光度应≤1.02.4 空白吸光度变化率空白吸光度变化率应≤0.05。

2.5 灵敏度浓度为100IU/L时，吸光度变化（△A/min）应≥0.01 。

2.6 线性：在(0,200.0]IU/L线性范围内，线性相关系数r 应≥0.990；在(0,50]IU/L范围内绝对偏差不超过5IU/L；在(50,200]U/L范围内的相对偏差不超过±10%。

2.7 精密度：变异系数CV应≤5%。

2.8 批间差：不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。

2.9 准确度回收试验：回收率在90%-110%之间。

2.10 质控品赋值有效性测定值在质控靶值范围内。

2.11瓶间重复性（均一性）校准品、质控品瓶间重复性CV≤5%。

2.12校准品溯源性根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容。

n-乙酰基-β-d-氨基葡萄糖苷酶n-乙酰基-β-d-氨基葡萄糖苷酶（NAG酶）是一种重要的酶类，其在生物体内起着关键的作用。

NAG酶具有催化水解N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖苷的作用，将其分解为N-乙酰-D-氨基葡萄糖和乙酸。

这个过程是生物体内一种常见的代谢途径，对于维持生物体内的能量平衡和物质交换具有重要意义。

NAG酶在生物体内广泛存在，包括细菌、真菌、植物和动物等。

在人体内，NAG酶在多种生理过程中发挥作用，如细胞壁合成、组织修复、细胞生长和免疫反应等。

因此，对NAG酶的研究具有重要意义，可以为人类疾病的治疗和预防提供理论基础和实验依据。

NAG酶的结构和功能一直是生物化学领域的研究热点之一。

通过分子生物学和生物化学手段，科学家们已经对NAG酶的结构和功能机制有了较为深入的了解。

NAG酶主要是由蛋白质组成，其活性部位含有特定的氨基酸残基，可以与底物结合并催化反应进行。

通过对NAG酶的结构进行进一步研究，可以揭示其催化机制和底物特异性，为合成具有特定功能的酶类药物提供指导。

此外，NAG酶在生物体内的生理功能也备受关注。

研究表明，NAG酶不仅参与碳水化合物代谢过程，还在免疫应答和炎症反应中发挥重要作用。

在免疫细胞如巨噬细胞和中性粒细胞中，NAG酶可以促进细胞因子的产生和炎症介质的释放，从而调节细胞的免疫活性。

因此，NAG酶可能成为治疗免疫性疾病和炎症性疾病的潜在靶点。

NAG酶的研究还涉及生物制药领域。

由于NAG酶具有特异性和高效性，可以被应用于高效合成生物活性物质、分离和纯化生物大分子、以及代谢工程和生物技术等领域。

因此，对NAG酶的深入研究将有助于推动生物制药领域的发展，为新药物的研发和生物技术的应用提供支持。

总之，NAG酶作为一种重要的酶类，其在生物体内具有广泛的生理功能和应用价值。

通过对NAG酶的结构和功能进行深入研究，可以为生物医学领域的科学研究和药物开发提供重要的理论依据和实验依据。

相信随着科学技术的不断进步，NAG酶将会有更广泛的应用前景和更深入的研究价值。

N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（NAG）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC4290规格:50T/24S产品简介：N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（EC 3.2.1.52，N-acetyl-β-D-glucosidase,NAG）广泛分布于各种组织中，是一种细胞内溶体酶，测定NAG活性可用于肾小管间质性肾炎、尿路感染、糖尿病肾病综合症、高血压肾病、肾移植后的排异反应和肾病综合症的早期诊断NAG分解N-β-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定400nm下吸光度的变化来计算NAG活性。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、天平、台式离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管。

产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入5mL蒸馏水溶解备用；可-20℃分装保存，避免反复冻融，-20℃可保存2周；试剂三：液体60mL×1瓶，4℃保存；标准品：液体1mL×1支，5μmol/mL的对硝基苯酚溶液，4℃保存。

临用前用蒸馏水将标准品稀释8倍得0.625μmol/mL的标准溶液。

操作步骤：一、粗酶液的提取：1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。

15000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量104个：提取液体积（ml）500~1000:1的比例，建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）然后15000g，4℃，离心10min，取上清置冰上待测。

3、血清（浆）等液体：直接测定。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。