N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定试剂盒(MPT底物法)产品技术要求sainuopu

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)试剂盒使用说明书(酶法·液体双试剂)用途本试剂盒用以测定尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活力。

原理在第一反应中用己糖激酶(HK)消去血清中内源性葡萄糖的影响，在第二反应中，NAG作用于基质P-硝基苯酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(PNP-NAG)，生成N-乙酰氨基葡萄糖，此N-乙酰氨基葡萄糖在N-乙酰氨基葡萄糖氧化酶(NAGOD)的作用下生成H2O2。

此H2O2在过氧化物酶(POD)的作用下与高灵敏的发色剂双〔3-双(4-氯酚)甲基-4-•二甲氨苯基〕胺(BCMA)反应，生成绿色色素。

通过测定此色素可求得NAG的活力。

第一反应：HK葡萄糖+ A TP ─────────→葡萄糖-6-磷酸+ ADP第二反应：NAGPNP-NAG + H2O ──────→N-乙酰氨基葡萄糖+ p-硝基苯酚NAGODN-乙酰氨基葡萄糖+ O2 + H2O ───→N-乙酰氨基葡萄糖酸+ H2O2PODH2O2 + BCMA + H+────→绿色色素+ 2H2O试剂━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━试剂成份含量──────────────────────────────────R-1A1(冻干) NAGOD ≥3000U/LPOD ≥12500U/LHK ≥8000U/LA TP·2Na ≥5mg/mlR-1A2(冻干) PNP-NAG 10.5mmol/LR-1B 2-吗啉乙烷磺酸(MES) 30mmol/L──────────────────────────────────R-2A(冻干) BCMA 0.17mmol/LR-2B MES 30mmol/L──────────────────────────────────标准酶NAG 约为50U/L标准酶溶解液MES 30mmol/L ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━标本尿液试剂配制R-1：以一瓶R-1B溶解一瓶R-1A2，再以此溶液溶解一瓶R-1A1。

氨基葡萄糖苷酶(NAG)酶联免疫试剂盒【试剂配制】洗液工作液：洗液需提前配制，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制。

取出洗液浓缩液，浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

浓洗涤液按1:20倍进行稀释。

例如用量筒量取285ml去离子水，倒入烧杯或其他洁净容器中，再量取15ml浓洗涤液，均匀加入，搅拌混匀。

【注意事项】1.实验开始前，请提前配置好所有试剂。

试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。

2.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

3.如样品浓度过高时，用合适的溶液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

【操作步骤】1.将各种试剂移至室温（18-25℃）平衡至少30分钟，按前述方法配制试剂，备用。

2.将酶标板取出，设一个空白对照孔、不加任何液体；每个标准点依次各设两孔，每孔加入相应标准品50μl；其余每个检测孔直接加待测标本50μl。

3.每孔加入酶结合物50μl（空白对照孔除外），充分混匀，贴上不干胶封片，置37℃温育1小时。

4.手工洗板，弃去孔内液体。

洗涤液注满各孔，静置10秒甩干，重复三次后拍干；洗板机洗板，选择洗涤三次程序，洗板后拍干。

5.每孔加显色剂A液50μl，显色剂B液50μl，振荡混匀后，37℃避光显色15分钟，每孔加终止液50μl。

6.用酶标仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。

在反应终止后10分钟内进行检测。

【操作要点】1.为保证检测结果的准确性，建议标准品及样品均设双孔测定。

每次检测均需做标准曲线。

2.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时再乘以相应的稀释倍数。

3.加样时，请使用一次性的洁净吸头，避免交叉污染。

加样时应尽量轻缓，避免起泡，将样品加于酶标板孔底部，切勿沿孔壁加样。

4.为防止样品蒸发，温育过程中酶标板必须覆上板贴，任何时候都应避免酶标板处于干燥的状态。

5.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性，在每次洗涤过程中，需要将孔内液体完全甩干，并在吸水纸上拍干，切勿将吸水纸直接放入反应孔中吸水，或用枪在孔中吸取液体。

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）测定试剂盒（MPT法）适用范围：本产品用于体外定量测定人尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的含量。

1.1 规格试剂1（R1):2×45mL、试剂2（R2): 2×15mL；校准品（选配）：1×2mL；质控品（选配）：1×2mL。

1.2 组成试剂盒由试剂、质控品（选配）和校准品（选配）组成。

试剂1(R1)：柠檬酸缓冲液（PH=4.5），200mmol/L。

试剂2(R2)：6－甲基－2吡啶－N－乙酰－1－硫代－β－D－氨基葡萄糖苷，6mg/dl。

校准品：冻干品，含NAG：（100～200）IU/L、磷酸盐缓冲液：50mM、乳糖：5％、酶稳定剂：1％。

质控品：冻干品，含NAG：（5～25）IU/L、磷酸盐缓冲液：50mM、乳糖：5％、酶稳定剂：1％。

2.1 外观液体双试剂：R1：无色澄清液体；R2：无色或淡黄色液体。

校准品：冻干品，溶解后为无色液体。

质控品：冻干品，溶解后呈黄色匀质液体。

2.2 装量:不得低于标示体积。

2.3 溯源性：根据GB/T 21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，该校准品溯源至Inner standard。

＜1.5ABS ( 1cm；340nm；37℃)。

2.4 空白吸光度： A（空白）2.5 灵敏度：浓度为100IU/L时，吸光度变化△A/min＞0.01 ABS。

2.6 线性：测定结果在(0,200]IU/L范围内r≥0.996；测定结果(5,200] IU/L 时相对偏差应≤15%，测定结果(0,5] IU/L时绝对偏差应<0.75 IU/L。

2.7 精密度：用（5～12）IU/L和（15～25）IU/L的样本各重复检测10次，其变异系数CV<5%。

2.8 批间差：取三个批号试剂，分别测定浓度接近正常值上限的样本，每个批号测3次，不同批号之间测定结果的相对极差应<10%。

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定标准操作程序1.摘要N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶检测主要用于肾脏疾病、肝硬化和慢性活动性肝炎的诊断。

2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测尿液中NAG的浓度。

3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定NAG浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）试剂盒采用的是速率法。

5.原理26N---O---β−+−→−DN NAG-H-氨基葡萄糖苷乙酰硫代吡啶甲基巯基吡啶氨基葡萄糖-甲基-乙酰62--2--N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)催化底物6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)水解产生6-甲基-2-巯基吡啶(MPT)和N-乙酰-氨基葡萄糖，MPT在340nm附近有吸收峰，所以，可以通过监测340nm附近的吸光度变化值计算样本中的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力。

6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：柠檬酸缓冲液、Tris6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷、防腐剂7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。

试剂不可冰冻。

7.4试剂准备：试剂为即用式。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用上海科华公司提供的K校准因子对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品：上海科华公司提供的生化质控血清做为室内质控品。

每日在测定前做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

复星长征体外诊断试剂标准操作规程试剂名称：N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶测定试剂盒（MPT 底物法）上海复星长征医学科学有限公司目录1 试剂盒概况2 方法学原理3 试剂主要组分4 样本准备5 试剂准备6 校准要求7 质量控制8 计算方法9 参数设定10 参考范围11 试剂性能概要12 超出可报告范围的处理13 其他必须说明的内容14 参考文献1 试剂盒概况1．1 货号：1.02.5001/1.02.5002/1.02.5003/1.02.5005。

1．2 包装规格：试剂1（R1）：4×45mL 试剂2（R2）：2×30mL。

试剂1（R1）：2×60mL 试剂2（R2）：2×20mL。

1．3 医疗器械注册证编号/产品技术要求编号沪械注准20172400274/沪械注准201724002742 方法学原理试剂采用6-甲基-2硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（MPT-NAG）为底物。

MPT-NAG在N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（NAG）的作用下分解生产6-甲基-2-巯基吡啶（MPT）,使波长340nm处的吸光度值的上升速率进行监测，即可测得样本中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（NAG）的活性。

NAGMPT-NAG+H2O N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷+MPT3 试剂主要组分3．1 试剂1（R1）柠檬酸盐缓冲液200mmol/L3．2 试剂2（R2）6-甲基-2硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷15mmol/L3．3 储存条件3．3 . 1 在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起效期12个月。

3．3 . 2 试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定20 天。

4 样本准备样本要求：血清或者尿液标本新鲜，应不溶血，避光保存。

5 试剂准备试剂为液体双试剂形式，无须特别准备，可直接上机使用。

6 校准要求6．1 校准品：使用与试剂配套使用的复星长征N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶校准血清对测定进行校。

β-N-乙酰葡萄糖苷酶检测试剂盒(PNP 比色法)简介：β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)可水解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷，也能水解β-N-乙酰氨基半乳糖苷，该酶广泛存在于多种组织、体液、细胞，是溶酶体中的一种酸性水解酶，其测定方法有比色法和荧光光度法。

Leagene β-N-乙酰葡萄糖苷酶检测试剂盒(PNP 比色法)(NAG Colorimetric Assay Kit)检测原理是在酸性条件下NAG 可使底物对硝基酚-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷水解，释放出游离的对硝基酚(p -nitrophenol ，PNP)，在碱性条件下p -nitrophenol 呈黄色产物，产物黄色越深，说明β-N-乙酰葡萄糖苷酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法测定吸光值，据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。

该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中的β-N-乙酰葡萄糖苷酶活性。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 离心管2、 恒温箱3、 比色杯4、 分光光度计或生化分析仪操作步骤(仅供参考)：1、 配制检测工作液：① 配制显色工作液： 取出1支4-NAG ，恢复至室温后溶解于2 ml NAG Assaybuffer ，混匀，冰上预冷备用。

新配制的显色工作液应在10天内用完。

② 配制标准品工作液：取出p -nitrophenol(10mM) 恢复至室温后，取10μl 溶解于编号 名称TE0063 50T Storage试剂(A): NAG Assay buffer 150ml 4℃ 试剂(B): 4-NAG 1支 -20℃ 避光 试剂(C): Alkaline buffer 1ml 4℃ 试剂(D): p -nitrophenol(10mM) 1ml -20℃ 避光 试剂(E): ddH 2O 10mlRT 使用说明书1份ACP Assay buffer，使p-nitrophenol达到3mM。

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)测定试剂盒（MPT法）适用范围：该产品用于体外定量测定人尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的活性。

1.1 产品规格1.2 组成成分1.2.1 试剂组成试剂1：柠檬酸缓冲液（PH=4.5），200mmol/L试剂2：6－甲基－2吡啶－N－乙酰－1－硫代－β－D－氨基葡萄糖苷，6mg/dL。

1.2.2 校准品的组成冻干品，含NAG（30IU/L）、磷酸盐缓冲液（50mM）、乳糖（50g/L）。

定值范围为：20-50U/L。

1.2.3质控品的组成冻干品，含NAG（10IU/L）、磷酸盐缓冲液（50mM）、乳糖（50g/L）。

定值范围为：5-25U/L。

2.1 外观液体双试剂：试剂1：无色至淡黄色液体；试剂2：无色至淡黄色液体。

校准品：冻干品，溶解后为无色至淡黄色液体。

质控品：冻干品，溶解后呈黄色匀质液体。

2.2 装量不得低于标示体积。

2.3 空白吸光度空白吸光度应≤1.02.4 空白吸光度变化率空白吸光度变化率应≤0.05。

2.5 灵敏度浓度为100IU/L时，吸光度变化（△A/min）应≥0.01 。

2.6 线性：在(0,200.0]IU/L线性范围内，线性相关系数r 应≥0.990；在(0,50]IU/L范围内绝对偏差不超过5IU/L；在(50,200]U/L范围内的相对偏差不超过±10%。

2.7 精密度：变异系数CV应≤5%。

2.8 批间差：不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。

2.9 准确度回收试验：回收率在90%-110%之间。

2.10 质控品赋值有效性测定值在质控靶值范围内。

2.11瓶间重复性（均一性）校准品、质控品瓶间重复性CV≤5%。

2.12校准品溯源性根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容。

N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（NAG）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC4290规格:50T/24S产品简介：N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（EC 3.2.1.52，N-acetyl-β-D-glucosidase,NAG）广泛分布于各种组织中，是一种细胞内溶体酶，测定NAG活性可用于肾小管间质性肾炎、尿路感染、糖尿病肾病综合症、高血压肾病、肾移植后的排异反应和肾病综合症的早期诊断NAG分解N-β-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定400nm下吸光度的变化来计算NAG活性。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、天平、台式离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管。

产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入5mL蒸馏水溶解备用；可-20℃分装保存，避免反复冻融，-20℃可保存2周；试剂三：液体60mL×1瓶，4℃保存；标准品：液体1mL×1支，5μmol/mL的对硝基苯酚溶液，4℃保存。

临用前用蒸馏水将标准品稀释8倍得0.625μmol/mL的标准溶液。

操作步骤：一、粗酶液的提取：1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。

15000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量104个：提取液体积（ml）500~1000:1的比例，建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）然后15000g，4℃，离心10min，取上清置冰上待测。

3、血清（浆）等液体：直接测定。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。

料目录N-乙酰-Β-D-氨基葡糖糖苷酶测定试剂盒（比色法）综述资料 (1)1.产品的预期用途 (1)1.1产品预期用途 (1)1.2 与预期用途相关的临床适应症背景情况 (1)2. 产品描述 (2)2.1产品的技术原理 (2)2.2 主要原材料的来源及制备方法 (2)2.3主要生产工艺过程 (3)2.3.1生产配方及生产工艺流程图 (3)2.3.2生产操作步骤与工艺技术要求 (5)2.4 质控品、校准品的制备方法及溯源（定值）情况 (5)3. 有关生物安全性方面说明 (5)3.1 各原料的生物安全性评价 (6)3.2 N-乙酰-Β-D-氨基葡糖糖苷酶测定试剂盒（比色法）的生物安全性评价 (6)4. 有关产品主要研究结果的总结和评价 (6)4.1主要研究结果的总结 (6)4.2产品性能的评价 (7)4.3临床试验评价 (7)5. 其他 (7)5.1 同类产品在国内外批准上市的情况 (7)5.2 相关产品所采用的技术方法及临床应用情况 (8)5.3 申请注册产品与国内外同类产品的异同 (10)6. 结论 (10)7. 主要参考文献 (10)附件..校准品溯源资料附件1..校准品标准物质证书附件2..校准品的配置操作规程附件..校准品稳定性研究附件..干扰实验研究料1.产品的预期用途1.1产品预期用途本试剂盒主要是用于检测人体尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）的活性。

临床上主要用于辅助评价肾小管损害。

1.2 与预期用途相关的临床适应症背景情况NAG又称尿酶，是广泛分布于人体各组织细胞中的溶解体水解酶，与黏多糖类及糖蛋白代谢有关。

在近曲小管上皮细胞和前列腺中含量较高。

NAG分子量约为14kD，正常情况下，血清中NAG不能通过肾小球滤过从尿中排泄。

故尿中的NAG主要来自肾近曲小管上皮细胞，此酶在尿中稳定，成人尿中正常参考值范围为0.3-12U/L（各医院的测试方法不同，参考值不完全相同）。

尿中NAG的升高是肾脏疾病的早期表现，是肾小管损伤的敏感指标。