如何选择二抗

*教你如何正确选择二抗通常情况下，某一特定的实验中可能同时有几种二抗可供选择，如何能选择到最适合该实验的二抗，需要综合以下几个方面进行考虑：●一抗的物种来源一抗是在什么物种来源的，相应的二抗也要是抗该物种的抗体。

例如，如果一抗是在小鼠体内制备的，那么你就应当选择抗小鼠的二抗，如果一抗是在兔体内制备的，那么二抗就应当是抗兔的抗体。

至于二抗本身是在什么动物中制备的对二抗的质量并无明显的影响。

●一抗是属于哪个类或亚类二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体.单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品列表中列出，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM，或是抗小鼠IgG抗体。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

如果你不知道一抗是哪一类别或亚类，那么抗小鼠IgG是一个不错的选择，因为此种抗体可以识别大多数类型的IgG免疫球蛋白。

二抗的特异性下面总结了几种具有不同特异性的二抗：针对整个抗体分子（H＋L）具有特异性：如抗IgG(H+L)，此类抗体既可以与抗体的重链结合也可以与轻链结合，即与抗体分子的Fc，F(ab’)2/Fab部分（见图5）均可反应，抗IgG(H+L)也可以与其他免疫球蛋白家族反应（如IgM和IgA），因为所有的免疫球蛋白都具有相同的轻链（kappa链或lambda 链）。

针对Fab片段具有特异性：这类抗体与重链轻链均可以结合，由于它们可以与轻链反应，它们同时也已和具有相同轻链的其他种类的免疫球蛋白反应。

这对Fc片段或重链具有特异性：这类抗体和重链的Fc部分反应，一次它们是类别特异性的（即gamma链特异性抗体只与IgG反应，mu链特异性抗体只识别IgM，依此类推）。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求，听起来好像很高级的样子，但是其实咱们普通人也能轻松理解。

今天，我就来给大家讲讲这个话题，希望能够帮助大家更好地进行荧光双染实验。

咱们要明确一点，荧光双染实验是用来检测细胞中特定蛋白的表达情况的。

那么，为什么我们需要选择一抗和二抗呢？因为一抗和二抗可以特异性地识别我们想要检测的蛋白，从而帮助我们找到这些蛋白在细胞中的定位。

那么，如何选择合适的一抗和二抗呢？这里有几个基本的要求：
1. 一抗和二抗要能够特异性地识别我们想要检测的蛋白。

这就意味着，它们不能识别其他无关的蛋白。

否则，我们的实验结果就会被干扰。

2. 一抗和二抗的亲和力要足够强。

这是因为，如果它们的亲和力不够强，它们就不能很好地与我们想要检测的蛋白结合。

这样一来，我们的实验结果也会受到影响。

3. 一抗和二抗的价格要合理。

毕竟，我们做实验是为了得到有用的结果，而不是为了花很多钱买昂贵的试剂盒。

所以，我们在选择一抗和二抗的时候，也要考虑到它们的价格因素。

4. 一抗和二抗要容易保存和使用。

这是因为，有些试剂盒可能需要特殊的条件才能保存稳定，或者需要特殊的操作步骤才能使用。

如果一抗和二抗不能方便地保存和使用，那么我们在实验过程中也会遇到很多麻烦。

选择合适的一抗和二抗对于荧光双染实验来说是非常重要的。

希望大家在进行实验的时候，能够根据这些基本要求来选择合适的试剂盒，从而得到准确、可靠的实验结果。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求，听起来好像很专业的样子，但是其实很简单，就是让我们的实验数据更加清晰明了。

那么，我们该如何选择合适的一抗和二抗呢？接下来，就让我来给大家普及一下吧！我们要明确什么是一抗和二抗。

一抗，就是第一抗体，也就是我们要检测的目标物质；二抗，就是第二抗体，它可以与一抗结合，形成一种复合物，从而使我们能够看到目标物质的存在。

那么，如何选择合适的一抗和二抗呢？1.1 选择一抗选择一抗的时候，我们要考虑到以下几个方面：(1)特异性：一抗要能够准确地识别目标物质，不能误识别其他物质。

这就好比是我们要找一个人，但是他长得像很多人，我们不能因为他长得像别人就把他当成那个人。

(2)灵敏度：一抗要有足够的敏感性，能够在低浓度下检测到目标物质。

这就好比是我们要在人海中找到一个特定的人，但是他的出现频率很低，我们不能因为他出现的次数少就忽略了他。

(3)稳定性：一抗要具有一定的稳定性，不会因为外界因素的影响而失去活性。

这就好比是我们要找一个人，但是他总是在关键时刻消失不见。

选择合适的一抗就是要找到一个既能准确识别目标物质，又有足够敏感性和稳定性的人。

1.2 选择二抗选择二抗的时候，我们要考虑到以下几个方面：(1)特异性：二抗要能够准确地识别一抗，不能误识别其他一抗或者背景分子。

这就好比是我们要找一个人，但是他长得像很多人，我们不能因为他长得像某个特定的人就把他当成那个人。

(2)灵敏度：二抗要有足够的敏感性，能够在低浓度下检测到与一抗结合的复合物。

这就好比是我们要在人海中找到一个特定的人，但是他出现的频率很低，我们不能因为他出现的次数少就忽略了他。

(3)稳定性：二抗要具有一定的稳定性，不会因为外界因素的影响而失去活性。

这就好比是我们要找一个人，但是他总是在关键时刻消失不见。

选择合适的二抗就是要找到一个既能准确识别一抗，又有足够敏感性和稳定性的人。

2.1 一抗和二抗的选择时机在进行荧光双染实验时，我们需要根据实际情况来选择合适的一抗和二抗。

如何选择人源血清学检测二抗？血清学检测是许多健康问题诊断过程中的关键检测方法，包括交叉匹配，疾病诊断，监测等。

这些检测在临床决策中起着至关重要的作用，免疫分析是目前可用的强大，灵敏的血清学检测方法之一，它基于抗原抗体之间的高度特异性结合，即使在低浓度下也能进行定性和定量检测。

有多种免疫测定方法，以下是其中常见两种检测方法示意图，分别是夹心法（图1A）和直接法（图1B），当选择用于夹心法检测的抗人二抗时（图1A），需要考虑一抗的种属，并使用与该物种有最小交叉反应的二抗。

图1：测定方式：A.夹心法，B.直接法免疫分析在多种疾病诊断起重要作用各类免疫测定技术各有优缺点，例如，快速测定法（如胶体金侧向流动法）可在数min 内提供定性结果，可进行即时检测，而ELISA可能需要花费数小时才能完成，但可提供定量数据。

而当前严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2（SARS-CoV-2）大流行更加凸显了侧向流动分析的优势，由于该疾病具有快速传播和较高的死亡率等特征，美国FDA已采取相关措施，允许各州未经FDA批准就可开展新的SARS-CoV-2检测。

该修订允许使用快速检测试剂盒，该试剂盒定性检测患者针对SARS-CoV-2产生的IgG和IgM抗体，从而显著加大了SARS-CoV-2的检测能力，尽可能地减少病毒的传播。

尽管侧向流动检测具有明显的优势，但这种分析方法无法提供定量的数据。

表1.几种类型的免疫测定法的优缺点，检测过程，检测的Ig类型抗人二抗是各类免疫分析中的关键试剂尽管免疫测定的功能和目的有所不同，但为了在临床上获得准确，可靠数据，开发血清学试剂盒时，高质量试剂至关重要。

抗人二抗的质量是开发免疫测定试剂盒时的关键考虑因素，二抗需要谨慎选择，因为它们会结合一种一抗的多个表位上，从而增强了信号的灵敏度和选择性。

表2总结了在进行免疫测定选择合适的二抗时需要考虑的多个方面。

表2.在免疫分析中选择合适的二抗时的考虑因素以及我们抗体的特征抗人二抗产品推荐：亲和纯化山羊抗人IgG（H+L）二抗，货号：109-005-088；HRP标记亲和纯化山羊抗人IgG二抗，货号：109-035-008；亲和纯化山羊抗人IgG+IgM二抗，货号：109-065-127；亲和纯化山羊抗人IgM二抗，货号：109-005-129Note：Bov：牛；Hrs：马；Ms：小鼠；Rb：兔子；Sr Prot：血清蛋白。

WB检测抗体如何选择WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。

例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。

二抗选择要考虑的问题有：①对单抗类一抗，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配（多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗IgG F(ab’)2二抗，避免各种Ig保守结构域导致的交叉反应。

然而各种Ig仍具有保守的轻链结构域，因此还是有一定程度的交叉反应。

WB检测之内参抗体Western Blot检测方法不仅能检测靶蛋白存在与否，还能比较不同条件下或者不同组织中靶蛋白的相对表达量，可作为蛋白表达水平最直接的证据。

在WB实验中有众多不确定因素影响靶蛋白表达水平的测定，如方法学本身性质、操作误差等。

为准确衡量靶蛋白表达水平，需要精确一致的上样量，使用内参的意义即是保证上样量的一致。

内参即内部参照（Internal Control），对哺乳动物细胞一般指管家基因的表达蛋白(Housekeeping Proteins)。

此类蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为检测蛋白表达水平变化的参照物。

当内参条带亮度基本一致时，基本可以确定上样量是一致的，通常采用比较靶蛋白和内参蛋白条带亮度比值来进行相对定量。

WB实验中涉及到的蛋白-抗体结合是一个复杂的活性生物大分子间的相互作用，众多因素都会影响实验的结果。

例如时间、温度、浓度、离子强度等，在实验设计时就需要有严谨的对照方案，通过对照就容易判断问题所在，严谨的WB实验中需要设立蛋白分子量标准、空白载体对照、未诱导对照、已知量标准物正对照和内参。

内参使用方法1.标记内参：酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带，使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体，按照正常操作即可。

如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。

检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。

即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。

艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。

【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。

这通常是针对单克隆抗体而言。

多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。

其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgM。

如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以选择抗IgG1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。

在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种IgG。

艾美捷能为您提供通用的IgG(H+L)二抗，或者特异性只结合IgM的Anti IgM (mu) Antibody、IgA的Anti IgA (alpha-Antibody、IgE的Anti IgE (epsilon) Antibody等。

【二抗的种属来源】一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。

WB检测抗体如何选择WB检测之二抗二抗选择二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体，选择范围较窄，基本是商品化的，在不考虑二抗修饰类型的前提下，二抗的选择需要遵循以下原则：二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。

例如如果研究对象是人的蛋白X，选择了鼠抗X一抗，则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。

二抗选择要考虑的问题有：①对单抗类一抗，二抗需与一抗的类别或亚类相匹配（多抗类一抗主要是IgG类免疫球蛋白故相应二抗就是抗IgG F(ab’)2二抗，避免各种Ig保守结构域导致的交叉反应。

然而各种Ig仍具有保守的轻链结构域，因此还是有一定程度的交叉反应。

WB检测之内参抗体Western Blot检测方法不仅能检测靶蛋白存在与否，还能比较不同条件下或者不同组织中靶蛋白的相对表达量，可作为蛋白表达水平最直接的证据。

在WB实验中有众多不确定因素影响靶蛋白表达水平的测定，如方法学本身性质、操作误差等。

为准确衡量靶蛋白表达水平，需要精确一致的上样量，使用内参的意义即是保证上样量的一致。

内参即内部参照（Internal Control），对哺乳动物细胞一般指管家基因的表达蛋白(Housekeeping Proteins)。

此类蛋白在各组织和细胞中的表达相对恒定，可作为检测蛋白表达水平变化的参照物。

当内参条带亮度基本一致时，基本可以确定上样量是一致的，通常采用比较靶蛋白和内参蛋白条带亮度比值来进行相对定量。

WB实验中涉及到的蛋白-抗体结合是一个复杂的活性生物大分子间的相互作用，众多因素都会影响实验的结果。

例如时间、温度、浓度、离子强度等，在实验设计时就需要有严谨的对照方案，通过对照就容易判断问题所在，严谨的WB实验中需要设立蛋白分子量标准、空白载体对照、未诱导对照、已知量标准物正对照和内参。

内参使用方法1.标记内参：酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带，使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体，按照正常操作即可。

如何正确选择二抗二抗选择指南2012-03-28 20:18 来源：丁香园点击次数：691 关键词：二抗单抗一抗片段基因如何选择正确的二抗？以下指南将帮助您选择最适合该应用的二抗。

常见问题1.一抗的宿主物种是什么？2.需要了解哪些有关一抗同型的内容？3.需要酶学或荧光检测吗？4.是否需要预吸附的二抗？5.是否需要亲和纯化的抗体或IgG 片段？6.有必要使用F(ab) 或F(ab')2 片段抗体吗？7.是否需要抗IgG 重链和轻链、抗轻链或抗F(ab')2二抗？1. 一抗的宿主物种是什么？二抗指向一抗的物种。

如果使用来源于兔的一抗，则需要来源于除兔以外的其它物种的抗兔二抗。

例如山羊多克隆抗兔IgG - H&L (HRP) 二抗(ab6721) 可以检测兔多克隆抗Ki67 一抗(ab15580)。

2. 需要了解哪些有关一抗同型的内容？二抗必须指向一抗同型。

多克隆一抗通常来源于兔、山羊、绵羊或驴，并且是IgG 同型。

二抗通常为抗IgG 重链和轻链的抗体。

单克隆一抗通常来源于小鼠、兔和大鼠。

例如，如果单克隆一抗为小鼠IgG1，则需要抗小鼠IgG 或特异性较低的F(ab) 片段抗小鼠IgG。

人免疫球蛋白类、亚类、型和亚型：•类或同型：IgG (γ heavy chains), IgM (μ), IgA (α), IgE (ε), IgD (δ)•亚类：IgG1 (γ1 heavy chains), IgG2 (γ2), IgG3 (γ3), IgG4 (γ4); IgA1 (α1), IgA2 (α2)•型：κ light chain, λ light chain•亚型：λ1, λ2, λ3, λ4其它类型的反应：•多价抗体与所有免疫球蛋白类反应•抗Fc 或重链(α, δ, ε, γ, and μ) 抗体仅与重链反应•抗F(ab) 或完整分子抗体与重链和轻链反应，而与免疫球蛋白类无关•由于所有免疫球蛋白类均使用相同的κ 和λ 轻链，因此抗轻链（κ 和λ）抗体与所有免疫球蛋白类反应3. 需要酶学或荧光检测吗？偶联类型是依赖于应用的。

荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求荧光双染实验一抗和二抗选择的基本要求，听起来好像很高大上，其实也就是让我们的实验结果更加准确、清晰。

那么，我们该如何选择合适的一抗和二抗呢？别着急，让我来给大家普及一下相关知识。

我们要明确什么是一抗和二抗。

一抗，就是单克隆抗体，它可以特异性地识别我们想要研究的蛋白质。

而二抗，就是针对一抗的抗体，它可以帮助我们检测一抗与目标蛋白的结合情况。

所以，一抗和二抗就像是一对默契的搭档，相互配合，共同完成实验任务。

那么，如何选择合适的一抗和二抗呢？这里我们要遵循以下几个原则：1. 一抗的选择要与目标蛋白高度匹配。

这意味着我们要选择能够特异性识别目标蛋白的一抗。

这样一来，当我们用一抗与样品中的蛋白结合时，只有目标蛋白会被一抗识别，其他无关蛋白则不会被结合。

这样可以避免背景干扰，提高实验准确性。

2. 二抗的选择要与一抗相匹配。

这是因为二抗是针对一抗设计的，它们之间有很强的互补性。

如果我们选择了与一抗不匹配的二抗，那么它们可能无法正确识别一抗与目标蛋白的结合情况，从而导致实验结果不准确。

所以，我们在选择二抗时，要确保它与我们选择的一抗相匹配。

3. 一抗和二抗的灵敏度要足够高。

这意味着它们能够在低浓度的目标蛋白存在时也能检测到信号。

这样一来，我们就可以在不同浓度的目标蛋白样品中进行实验，从而获得更全面的实验数据。

4. 一抗和二抗的特异性要高。

这意味着它们不能与其他蛋白质发生结合反应。

这样一来，我们就可以避免背景干扰，提高实验准确性。

5. 一抗和二抗的价格要合理。

虽然高质量的一抗和二抗价格可能会比较高，但我们需要权衡利弊。

如果我们选择了质量不高的一抗和二抗，那么实验结果可能会受到影响，从而导致实验失败。

所以，在选择一抗和二抗时，我们要综合考虑它们的价格、质量等因素。

选择合适的一抗和二抗是我们进行荧光双染实验的关键。

只有选择了高质量的一抗和二抗，我们的实验结果才能更加准确、清晰。

所以，大家在进行实验时，一定要注意选择合适的一抗和二抗哦！。