芦丁标准曲线
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【关键字】结构黄酮类化合物的结构黄酮类化合物以黄酮(2-苯基色原酮)为母核而衍生的一类黄色色素。
其中包括黄酮的同分异构体及其氢化的还原产物,也即以C6-C3-C6为基本碳架的一系列化合物。
二氢黄酮类二氢黄酮醇类黄烷-3,4-二醇类(Flavanones)(Flavanonols)(Flavan-3,4-diols)黄烷三醇类(Flavan-3-ols)芦丁1.3 黄酮类物质的提取1.3.1 溶剂提取法水提法热水仅限于提取甙类,例如自槐花米中提取芦丁。
由于热水浸提时易溶于水的杂质(如蛋白质、鞣质、淀粉、多糖类化合物等)较多,后处理较复杂,提取效率也不高,故不常使用。
有机溶剂提取法黄酮类化合物的提取,主要是根据被提取物的性质及伴随的杂质来选择适合的提取溶剂,甙类和极性较大的甙元,一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、水或某些极性较大的混合溶剂进行提取。
大多的甙元宜用极性较小的溶剂,如乙醚、氯仿、乙酸乙酯等来提取,多甲氧基黄酮类甙元,甚至可用苯来提取。
乙醇和甲醇是最常用的黄酮类化合物提取溶剂,高浓度的醇(如90% ~95% )宜于提取甙元,60%左右浓度的乙醇或甲醇水溶液适宜于提取甙类物质。
如采用70%乙醇提取芦笋中芦丁,浸提5h,条件为最优。
提取过程中常用冷浸法或回流法,提取次数一般为2-4次。
两种方法各有优缺点前者无需加热,有好处保持提取物的成分,但提取时间长,效率低,后者效率高,但需加热,因此成分不稳定的原料(如一些中药药材)不宜用此法。
一般来说,醇提法的对总黄酮的提取效果要好于水提法。
碱溶酸沉法由于黄酮类成分大多具有酚轻基,具有易溶于碱性水而难溶于酸性水的性质,可用碱性水(如碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液)或碱性稀醇(如50%乙醇)浸出,在提取液中,加酸酸化,黄酮类化合物即可沉淀析出。
用碱性溶剂提取时,所用的碱浓度不宜过高,以免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物母核,当有邻二酚轻基时,应加硼酸保护。
实验一芦丁的提取精制与鉴定芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutinoside),在植物界广泛存在,其中以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多,可作为提取芦丁的原料。
槐花米系豆科植物Sophora japonica 的未开放花蕾,具有调节毛细血管渗透性之作用,临床用作毛细血管止血药,如复方芦丁,也作为高血压的辅助治疗药物。
除此之外,还可作为制药原料,用于制造槲皮素(Quercetin)、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啡芦丁、6-而乙基氨基芦丁等。
槐花米中芦丁的含量高达12%~16%,另含少量皂苷。
芦丁水解后得到槲皮素,皂苷水解后可得到白桦酯醇(Betulin)及槐花二醇(Sophoradiol)。
芦丁为淡黄色细小针状结晶,含三个结晶水,熔点177~178℃。
;芦丁溶于热水(1:200),难容于冷水(1:8000);溶于热甲醇(1:7),冷甲醇(1:100);热乙醇(1:30),冷乙醇(1:300),难溶于乙酸乙酯、丙酮,不溶于苯、三氯甲烷、乙醚及石油醚等溶剂。
易溶于碱液中呈黄色,酸化后又析出。
其结构如下图:一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、通过芦丁的结构检识,了解苷类结构研究的一般程序和方法二、实验原理芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶,含有三分子的结晶水。
溶解度:冷水1:10000;热水1:200;冷乙醇1:650;热乙醇1:60;冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚,溶于碱而呈黄色。
芦丁为黄酮苷,分子中具有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出,可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶于热水、热乙醇,较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
三、实验器材研钵,500mL烧杯,广泛试纸,四层纱布,滤纸,漏斗,10mL试管,5mL移液管,波棒,洗耳球,温控烘箱石灰乳,浓盐酸,镁粉,10%α-萘酚乙醇溶液,浓硫酸,乙醇,2%二氯氧锆甲醇溶液,2%柠檬酸甲醇溶液四、实验流程pH8~9滤液药渣10分钟,维持pH8~9pH至4~5沉淀低温(60℃)干燥,称重。
一、实验目的1. 掌握芦丁提取和分离的基本原理和方法。
2. 学习运用分光光度法测定芦丁含量。
3. 了解黄酮类化合物的性质和应用。
二、实验原理芦丁(Rutin)是一种黄酮类化合物,具有抗氧化、抗炎、降血脂等生物活性。
本实验采用碱提酸沉法提取芦丁,然后利用分光光度法测定芦丁含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:槐花米、芦丁标准品、无水乙醇、浓硫酸、盐酸、氢氧化钠、硫酸铜、硝酸铁、三氯化铁、无水碳酸钠等。
2. 实验仪器:分析天平、电子恒温水浴锅、紫外可见分光光度计、研钵、烧杯、漏斗、玻璃棒、滤纸等。
四、实验步骤1. 芦丁标准溶液的配制(1)称取0.1g芦丁标准品,用无水乙醇溶解并定容至100mL,配制成浓度为1mg/mL的芦丁标准溶液。
(2)取芦丁标准溶液1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL分别置于5个10mL容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,配制成浓度为100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL、400μg/mL、500μg/mL的芦丁标准系列溶液。
2. 样品溶液的制备(1)称取3g槐花米,用研钵研成粉末。
(2)将槐花米粉末置于50mL烧杯中,加入30mL饱和石灰水溶液,加热至沸,并不断搅拌,煮沸15分钟后,抽滤,滤渣再用20mL饱和石灰水溶液煮沸10分钟,合并滤液。
(3)用15%盐酸中和滤液至pH值为4.5,转移至100mL容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,配制成样品溶液。
3. 标准曲线的绘制(1)取5个10mL容量瓶,分别加入不同浓度的芦丁标准溶液0.5mL,用无水乙醇定容至刻度。
(2)在510nm波长处,用紫外可见分光光度计测定芦丁标准溶液的吸光度。
(3)以芦丁浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。
4. 样品溶液中芦丁含量的测定(1)取2.0mL样品溶液,置于10mL容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度。
(2)在510nm波长处,用紫外可见分光光度计测定样品溶液的吸光度。