黄酮标准曲线绘制的实验报告记录

实验报告
一、实验课题：石韦总黄酮的提取及鉴定
二、实验目的：对不同种石韦的总黄酮的提取以及鉴定；
三、实验原理：利用超声波技术，是超声波的空化作用对细胞膜的破坏有助于黄酮类化合物
的释放和溶出；
四、实验仪器及试剂：
仪器：超声波清洗仪、搅拌机、紫外分光光度计、离心机、分析天平；
试剂：80%乙醇、0.1mg/ml芦丁溶液、5%亚硝酸钠、10%硝酸铝、4%氢氧化钠；
五、实验步骤：
Ⅰ、样品的处理：
称取1g干燥的样品，置于搅拌机中搅拌30-40秒，取出粉末，置于50ml离心管中，以1:30的比例加入80%乙醇，放入超声波清洗仪中振荡40min；振荡后取出，1500r离心15min，离心后取上清液保存；
Ⅱ、标准曲线的制备：
取1mg芦丁，加入10ml无水乙醇，制成0.1mg/ml芦丁溶液，分别精密吸取芦丁对照液0.00,0.50,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00ml于10.00ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，静置6min；再加10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，静置6min；再加4%氢氧化钠溶液4ml，用80%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12min，以试剂做空白参比液，于510nm处测定吸光度；
Ⅲ、提取物含量的测定：
精密吸取各样品液0.1ml，置于10ml容量瓶中，按标准曲线的制备方法测定各样品吸光度
六、实验结果分析：。

一、实验目的1. 掌握紫外-可见分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理和方法。

2. 学习使用紫外-可见分光光度计进行定量分析。

3. 了解黄酮类化合物的性质及其在自然界中的应用。

二、实验原理黄酮类化合物是一类广泛存在于植物中的天然化合物，具有较强的生物活性。

本实验采用紫外-可见分光光度法测定黄酮含量，其原理基于黄酮类化合物在特定波长下有最大吸收峰，通过测定该波长下的吸光度值，根据标准曲线计算样品中黄酮的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：芦丁标准品、样品（含黄酮类化合物）、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等。

2. 仪器：紫外-可见分光光度计、电子天平、容量瓶、移液管、试管等。

四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）准确称取芦丁标准品0.01g，用无水乙醇溶解，转移至100mL容量瓶中，定容至刻度，得到0.1mg/mL的芦丁标准溶液。

（2）分别取1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL芦丁标准溶液于试管中，加入2.5mL 5%NaNO2溶液，混匀，放置6分钟。

（3）加入2.5mL 10%Al（NO3）3溶液，混匀，放置6分钟。

（4）加入10mL 4%NaOH溶液，混匀，用无水乙醇定容至25mL，摇匀。

（5）以无水乙醇为空白，在510nm波长下测定吸光度值。

（6）以吸光度值为纵坐标，芦丁标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2. 样品测定（1）准确称取样品0.01g，用无水乙醇溶解，转移至100mL容量瓶中，定容至刻度，得到0.1mg/mL的样品溶液。

（2）按照绘制标准曲线的步骤，测定样品溶液在510nm波长下的吸光度值。

（3）根据标准曲线，计算样品中黄酮的含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线根据实验数据绘制标准曲线，得到线性回归方程为：A=0.0685C+0.0035，相关系数R2=0.9988。

2. 样品测定根据标准曲线，计算样品中黄酮的含量为0.045mg/g。

六、实验结论1. 本实验成功运用紫外-可见分光光度法测定了样品中黄酮的含量，结果表明该方法准确可靠。

黄酮含量测定实验报告1. 实验目的本实验旨在探究不同食材中黄酮含量的差异，并利用比色法测定黄酮的含量。

2. 实验原理比色法是利用物质对可见光的吸收特性进行定量分析的方法。

黄酮是一类具有广泛生物活性的天然化合物，常常用作药物和食品添加剂。

黄酮的浓度可以通过其在特定波长下的吸光度来确定。

3. 实验步骤3.1 准备工作- 准备所需食材样品，如黄芩、枸杞、山楂等。

- 准备试剂：甲醇、石油醚、2N盐酸、硼酸溶液、盐酸。

3.2 提取黄酮1. 将所选食材样品粉碎，并称取3克样品。

2. 将样品加入25mL石油醚，室温条件下搅拌30分钟，以去除油脂。

3. 过滤样品，将滤液收集入锥形瓶中。

4. 再加入25mL甲醇，室温条件下搅拌30分钟，以提取黄酮。

5. 过滤后，用甲醇定容至100mL。

3.3 构建标准曲线1. 取黄酮标准品，分别称取0.1g、0.2g、0.3g、0.4g和0.5g，置于50mL锥形瓶中。

2. 分别加入25mL石油醚和25mL甲醇，按上述方法提取黄酮。

3. 过滤后，用甲醇定容至50mL，得到浓度分别为2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL和10mg/mL的黄酮溶液。

3.4 测定样品黄酮含量1. 将提取得到的样品溶液取5mL，并用甲醇定容至25mL。

2. 取适量样品溶液置于比色皿中，以甲醇为对照组。

3. 在波长为380nm的紫外可见光谱仪中测定吸光度。

4. 实验结果与分析4.1 标准曲线根据所得的吸光度数据，绘制出黄酮浓度与吸光度之间的标准曲线。

4.2 样品含量计算根据所测得的样品吸光度值，利用标准曲线可得到样品中黄酮的浓度。

5. 实验讨论与结论本实验利用比色法测定了不同食材中黄酮的含量。

通过对标准曲线的测定和样品吸光度的测量，可以准确计算出样品中黄酮的含量。

本实验的结果对于食品科学和药物研发具有重要意义。

黄酮作为一种天然化合物，具有多种生物活性，可以抗氧化、抗炎和抗肿瘤等。

因此，了解黄酮含量对于评估食材的营养价值和药物疗效具有指导意义。

槐花药材中总黄酮的质量分析一、实验目的1.掌握比色法测定槐花药材中总黄铜含量的方法和原理。

2.熟悉槐花药材的薄层色谱鉴别法。

二、实验原理槐花为豆科植物槐的干燥花及花蕾。

夏季花开放或花蕾系形成时采收，及时干燥，除去枝、梗及杂质。

前者习称“槐花”。

槐花药材的主要有效成分是黄铜类化合物，其中芦丁的含量最高，所以槐花药材的鉴别及含量测定均以芦丁为指标。

芦丁（C27H30O16，610.510)黄酮类化合物在碱性条件下与铝盐发生配位反应，生成红色的配位化合物，使得最大吸收波长红移至可见光区，且具有较高的吸收系数。

黄酮类与铝盐的配位反应是定量完成的，因此可采用比色法测定槐花药材中宗黄酮的含量，避免其他非黄酮成分对测定准确度的影响。

三、仪器与试药仪器:紫外-分光光度计1台、分析天平1台、25ml容量瓶9个、100ml容量瓶3个、具塞锥形瓶2个、10ml量筒2个、移液管(1ml、2ml、5ml、10ml)各2个、药匙1个、玻璃棒1个、50ml烧杯1个、250ml烧杯1个试剂与药材:槐花药材25g、芦丁对照品60mg、三氯化铝试液、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、氢氧化钠试液：甲醛、乙酸、乙醇。

四、实验步骤（一）、总黄酮的含量测定（1）对照品溶液的制备：取芦丁对照品50mg，精密称定取，置于25ml量瓶中，加乙醇适量，至水浴上微热使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。

精密量取10ml时，置于100ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得浓度为0.2mg/ml的芦丁对照品溶液。

（2）标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml与6ml时，分别置于6个25ml量瓶中，各加水使成6.0ml时，精密加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，再加10%硝酸铝溶液1.0ml，摇匀，放置15分钟，不加对照品溶液同法配置空白溶液，按照紫外可见分光光度法，在500nm波长处测定各溶液的吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

实验报告（终2）紫外分光光度法测定槐花中总黄酮含量的方法学验证（实验报告）实验日期温度相对湿度实验人员学号一、实验目的1、掌握比色法测定槐花药材中总黄酮含量的方法及原理2、掌握方法学验证并证明采用的方法适合于相应的检测要求二、实验原理槐花药材的主要有效成分是黄酮类化合物，其中芦丁的含量最高，所以槐花药材的鉴别及含量测定均以芦丁为指标成分。

黄酮类化合物在碱性条件下与铝盐发生配位反应，生成红色的配位化合物，使得最大吸收波长红移至可见光区，且具有较高的吸收系数。

黄酮类与铝盐的配位反应是定量完成的，因此可采用比色法测定槐花药材中黄酮的含量，避免其他非黄酮成分对测定准确度的影响。

药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求，在建立药品质量标准时，分析方法需经验证。

本次实验所进行的是槐花总黄酮含量测定的方法学验证，验证内容包括线性、精密度、重现性、稳定性、准确度（回收率）。

三、仪器与试剂仪器：紫外-可见分光光度计，电子天平，玻璃比色皿，超声仪，25ml量瓶（15个），100ml量瓶（10个），150ml锥形瓶（6个），100ml量筒（2个），50ml烧杯（7个），洗耳球（2个），洗瓶(2个)，胶头滴管（2支），药匙（2支），玻棒（2支），移液枪（2支），移液枪头（若干），长颈漏斗（4个），1ml吸量管（3支），2ml吸量管（2支），5ml吸量管（2支），10ml吸量管（2支），500ml烧杯（1个）试剂：槐花药材，芦丁对照品，5%亚硝酸钠溶液，10%硝酸铝溶液，氢氧化钠试液，甲醇，乙醇四、实验步骤1．供试品溶液的制备：将槐花研碎，取粗粉约1g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入60%（v/v）乙醇100ml，称定重量，超声30分钟，取出冷却至室温，用60%（v/v）乙醇补足失重，摇匀，过滤，取续滤液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

2．对照品溶液的制备：取芦丁对照品50mg，精密称定，置于25ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热时溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。

实验题目学生姓名学号班级同组姓名学号班级学号班级学号班级上交日期综述山楂为蔷薇科植物( Rosaceae) 山楂( Crataeguspinnatifida Bunge ) 、山里红( Crataegus pinnatifida Bunge var. Major N. E. Br. ) 及野山楂( Crataeguscuneata Sieb et Zucc. )的干燥成熟果实,是我国为数不多的既是食品又是药品的天然产物。

可食用植物，核果类水果，质硬，果肉薄，味微酸涩。

落叶灌木。

枝密生，有细刺，幼枝有柔毛。

小枝紫褐色，老枝灰褐色。

山楂形态特征：落叶小乔木。

枝密生，有细刺，幼枝有柔毛。

小枝紫褐色，老枝灰褐色。

叶片三角状卵形至棱状卵形，长2～6cm，宽0.8～2.5cm，基部截形或宽楔形，两侧各有3～5羽状深裂片，基部1对裂片分裂较深，边缘有不规则锐锯齿。

复伞房花序，花序梗、花柄都有长柔毛；花白色，有独特气味。

直径约1.5cm；萼筒外有长柔毛，萼片内外两面无毛或内面顶端有毛。

梨果深红色，近球形。

花期5～6月，果期9～10月。

果实较小，类球形，直径0.8～1.4cm，有的压成饼状。

表面棕色至棕红色，并有细密皱纹，顶端凹陷，有花萼残迹，基部有果梗或已脱落。

山楂的作用：山楂能防治心血管疾病，具有扩张血管、强心、增加冠脉血流量、改善心脏活力、兴奋中枢神经系统、降低血压和胆固醇、软化血管及利尿和镇静作用；防治动脉硬化，防衰老、抗癌的作用。

山楂酸还有强心作用，对老年性心脏病也有益处。

它能开胃消食，特别对消肉食积滞作用更好，很多助消化的药中都采用了山楂；山楂有活血化淤的功效，有助于解除局部淤血状态，对跌打损伤有辅助疗效；山楂对子宫有收缩作用，在孕妇临产时有催生之效，并能促进产后子宫复原；山楂所含的黄酮类和维生素C、胡萝卜素等物质能阻断并减少自由基的生成，能增强机体的免疫力，有防衰老、抗癌的作用。

山楂中有平喘化痰、抑制细菌、治疗腹痛腹泻的成分。

植物黄酮含量测定
对照品溶液的制备
精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。

精密量取20ml，置50ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1ml中含无水芦丁0.2mg）。

标准曲线的制备
精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外-可见分光光度法（通则0401），在500mn 的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定方法
取植物干燥细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色（约4小时），提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品贮备液。

取供试品贮备液，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。

一、实验目的本实验旨在通过化学和色谱方法对黄酮类化合物进行鉴定，验证样品中是否含有黄酮类成分，并对其结构进行初步分析。

二、实验原理黄酮类化合物是一类广泛存在于植物中的天然酚类化合物，具有多种生物活性。

其结构特点为含有两个苯环通过三碳链相连。

本实验采用以下方法进行鉴定：1. 紫外光谱法：黄酮类化合物在紫外光区有特征吸收峰，可通过测定其紫外光谱图进行鉴定。

2. 薄层色谱法（TLC）：利用黄酮类化合物在特定溶剂中的分配系数差异，将其与其他物质分离，并通过与标准品进行对比鉴定。

3. 高效液相色谱法（HPLC）：对黄酮类化合物进行定性和定量分析。

三、实验材料与仪器材料：1. 样品：茶叶、水果皮、植物提取物等。

2. 标准品：槲皮素、芦丁等黄酮类化合物。

3. 试剂：甲醇、乙酸乙酯、乙醇、浓盐酸、镁粉等。

4. 仪器：紫外可见分光光度计、薄层色谱仪、高效液相色谱仪、电子天平等。

四、实验步骤1. 紫外光谱法鉴定（1）将样品用甲醇溶解，配制成一定浓度的溶液。

（2）用紫外可见分光光度计测定溶液在200-400nm范围内的吸收光谱。

（3）与标准品的光谱图进行对比，确定样品中是否含有黄酮类化合物。

2. 薄层色谱法鉴定（1）将样品用甲醇溶解，制成一定浓度的溶液。

（2）取少量溶液点于薄层板上，并将标准品溶液点在同一薄层板上作为对照。

（3）将薄层板置于展开缸中，加入适宜的展开剂，进行展开。

（4）取出薄层板，晾干，用紫外灯照射，观察样品斑点与标准品斑点的对应关系，鉴定黄酮类化合物。

3. 高效液相色谱法鉴定（1）将样品用甲醇溶解，制成一定浓度的溶液。

（2）用高效液相色谱仪对溶液进行检测，记录色谱图。

（3）与标准品的色谱图进行对比，鉴定黄酮类化合物。

五、实验结果与分析1. 紫外光谱法结果通过紫外光谱法，样品在200-400nm范围内有特征吸收峰，与标准品的光谱图相似，表明样品中可能含有黄酮类化合物。

2. 薄层色谱法结果在薄层色谱板上，样品斑点与标准品斑点位置一致，表明样品中可能含有黄酮类化合物。

黄酮的测定在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐生成赘合物，加氢氧化钠溶液后显红色，与芦丁标准系列比较定量。

一．试剂1.芦丁标准贮备溶液2.0mg/mL：称取0.2 g经120℃减压干燥到恒重的无水芦丁(已知质量分数大于99.0%)，置于100 mL容量瓶中，用体积分数为60%乙醇溶液溶解并定容至刻度，摇匀。

2.芦丁标准应用溶液0.2 mg/mL：吸取10m L芦丁标准贮备溶液于100m1容量瓶中，用水定容至刻度，临用现配。

3. 10g /L氢氧化钠溶液:，称取10.0 g 氢氧化钠，用水溶解后定容至1L4. 50g /L亚硝酸钠溶液：称取5.0 g 亚硝酸钠，用水溶解后定容至100mL.5.100 g/L硝酸铝溶液：称取10. 0 g硝酸铝，用水溶解后定容到100 mL6. 200g /L氢氧化钠溶液：称取20.0 g 氢氧化钠，用水溶解后定容到100m L二．实验步骤称取一定量经混合均匀的样品（果汁饮料5 g -10g )于100ml烧杯中，以氢氧化钠溶液(10g /L) 调至中性，再多加2滴，移入100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，备用。

1. 工作曲线的绘制吸取0，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00m L芦丁标准应用溶液(0.2 mg/mL) ，相当于0,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00m g无水芦丁，分别置于25m L具塞比色管中，补水至约10m l,，加1mL亚硝酸钠溶液(50g /L),混匀，放置6min，加1.0 mL硝酸铝溶液(100 g/L),混匀，放置6m in，加4.0 m l氢氧化钠溶液(200 g/L) ，再加水至刻度，摇匀，放置15m in。

用1 cm 比色皿，以试剂空白调节零点，在波长510 nm处测定吸光度。

以吸光度为纵坐标，芦丁的质量为横坐标，绘制工作曲线或计算回归方程。

2. 样品测定吸取2m L样品溶液两份，分别置于25m L具塞比色管中，补水至约10m l，其中一份不加硝酸铝溶液，做样品空白。

一、实验目的1. 了解黄酮类化合物的性质和提取方法。

2. 掌握紫外-可见分光光度法测定蜂胶中黄酮类化合物含量的原理和方法。

3. 学习实验数据的处理和分析。

二、实验原理黄酮类化合物是一类广泛存在于植物中的天然产物，具有多种生物活性。

本实验采用紫外-可见分光光度法测定蜂胶中黄酮类化合物的含量。

该方法基于黄酮类化合物在特定波长下有最大吸收的特点，通过测定吸光度，可以计算出蜂胶中黄酮类化合物的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：蜂胶样品、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、标准黄酮溶液（如芦丁溶液）等。

2. 仪器：紫外-可见分光光度计、电子天平、研钵、移液器、容量瓶、试管等。

四、实验步骤1. 样品处理：将蜂胶样品研磨成粉末，准确称取0.1g，置于50mL容量瓶中，加入10mL无水乙醇，超声提取30min，过滤，定容至刻度，备用。

2. 标准曲线的绘制：准确移取不同体积的标准黄酮溶液，加入2.5mL 5%亚硝酸钠溶液，摇匀，静置6min；再加入2.5mL 10%硝酸铝溶液，摇匀，静置6min；最后加入5mL 4%氢氧化钠溶液，摇匀，定容至25mL，室温下放置15min。

以试剂空白为参比，在510nm波长下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，黄酮浓度（μg/mL）为横坐标，绘制标准曲线。

3. 样品测定：准确移取 2.0mL蜂胶样品溶液，按照标准曲线的绘制步骤进行操作，测定吸光度。

4. 结果计算：根据标准曲线，计算蜂胶样品中黄酮类化合物的含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制：绘制标准曲线，得到线性方程为A=0.0631C-0.0024，相关系数R²=0.9969，表明该方法具有良好的线性关系。

2. 样品测定：测定蜂胶样品溶液的吸光度，计算得到黄酮类化合物的含量为0.98mg/g。

3. 结果分析：本实验结果表明，蜂胶中黄酮类化合物的含量较高，具有较好的开发和应用价值。

六、实验总结1. 本实验采用紫外-可见分光光度法测定蜂胶中黄酮类化合物的含量，方法简便、准确，可适用于蜂胶样品的检测。

黄酮标准曲线绘制的实验报告1.总黄酮的测定1.1 实验仪器电子天平AR2140;紫外可见分光光度计UV2754;型数控超声波清洗器KQ3200DB;超级恒温槽;Rotavapor R200 旋转蒸发仪;FD21C250 冷冻干燥机21.2 试剂及药品芦丁标准品硝酸铝国产分析纯（配成5 %）亚硝酸钠国产分析纯（配成10 %）氢氧化钠国产分析纯配成（配成1mol/L）95%乙醇，无水乙醇国产分析纯（配成60%乙醇50%乙醇）DPPH·（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，二苯代苦味肼基自由基）Vc（Ascrobic acid，维生素C，抗坏血酸）没食子酸对照品：基准纯。

大青叶子采摘于海南大学东坡湖畔1.3实验步骤：1.3.1准备工作及波长的确定样品60℃烘干粉碎机粉碎，过20目筛，装入试剂瓶中备用。

根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。

1.3.2参照品芦丁标准溶液的制备精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁标准样品37.5mg置于100mL烧杯中,用60%乙醇溶解后定容至25mL 容量瓶中,摇匀，即可得1.5mg/mL的芦丁标准溶液。

1.3.3标准品的测量及绘制标准曲线精密吸取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL ,分别置于10mL 容量瓶中，并定容至刻度线。

得到0.0mg/ml、0.15mg/ml、0.3mg/ml、0.45mg/ml、0.6mg/ml、0.75mg/ml、0.9mg/ml的标准品溶液，分别取1ml到试管中各加5 %亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol /L氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min 后,分别在510nm 处测定其吸光度（Tai,Cai&Dai,2011）。

（以试剂空白做参比）以吸光度A 为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线。

黄酮提取⼯艺.总结黄酮提取⼯艺2-1 微波辅助提取⾦银花总黄酮⼯艺流程图3.实验⽅法3.1 标准曲线的制备3.1.1最⼤吸收波长的选择⽅法以亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠为显⾊剂，分别作各样品提取液以及芦丁标准品的吸收曲线，在510nm处均有1个强吸收峰，因此选择510nm为测定波长。

3.1.2对照品溶液的制备⽅法精密称取芦丁对照品10.2mg置50mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，并稀释⾄刻度，摇匀备⽤。

3.1.3 标准曲线的制备精密量取对照品溶液0，1，2，3，4，5mL，分别置10mL容量瓶中，加⼊5%亚硝酸钠溶液0.3mL，振荡摇匀，放置6min；再加⼊10%硝酸铝0.3mL，振荡摇匀，放置6min；最后加⼊4%氢氧化钠试液4mL，加甲醇定容⾄刻度，摇匀，放置15min。

采⽤分光光度法，在510nm处测定吸光度，以对照品量（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

3.2 微波提取单因素实验⽅法分别考察不同的微波辐射功率,辐射时间,⼄醇浓度,固液⽐对提取效果的影响3.3 提取⼯艺正交试验设计⽅法系统考察微波提取法的⼯艺参数，根据已有的资料及实际情况，选⽤微波辐射功率（A），辐射时间（B），⼄醇浓度（C），固液⽐（D）作为考察因素，以测得的浸提取样品中总黄酮含量为考察指标，选⽤L9（34）正交表设计，得到供试液。

3.4微波辅助提取法与⼄醇回流法⽐较⽐较两种提取⽅法的处理时间和液固⽐对总黄酮提取量的影响。

传统⼄醇回流法提取总黄酮的所需时间⽐微波辅助提取法提取长得多，且⾦银花总黄酮提取量⽐较低;⽽微波辅助提取的总黄酮较⼄醇回流法⾼。

⽐较此两种⽅法在最佳条件下的总黄酮含量。

3.5总黄酮含量测定⽅法取0.5mL液，加⼊5%亚硝酸溶液0.3mL荡摇匀，放置6min加⼊10%硝酸铝0.3mL荡摇匀，放置6min⼊4%氢氧化钠试液4mL，30%（V/V）⼄醇定容⾄刻度，摇匀，放置15min分光光度法，在510nm定吸光度值由标准曲线计算得总黄酮含量。

1、黄酮标准曲线制作1.1 芦丁标准溶液配制精密称取干燥芦丁对照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，60 ％乙醇溶解，定容，得标准对照液（含无水芦丁0．200 0 g/ L）。

1.2 芦丁标准溶液最大吸收波长的测定准确吸取芦丁标准溶液10mL于25mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.7mL，摇匀，静置5 min；再加10%硝酸铝溶液0.7mL，摇匀，静置6 min；再加4% 氢氧化钠溶液5 mL，60 ％乙醇稀释至刻度，摇匀，静置10 min后，在100~600nm波长范围测定测定其最大吸收波长，参比为空白试剂。

1.3芦丁标准曲线的制作分别精密移取芦丁标准对照液0、1、2、3、4、5 mL 置25 mL 容量瓶中，补60 ％乙醇10 mL，加入5%亚硝酸钠溶液0．7mL，摇匀，静置5 min；再加10%硝酸铝溶液0．7mL，摇匀，静置6 min；再加4% 氢氧化钠溶液10 mL，60 ％乙醇稀释至刻度，摇匀，静置10 min，以第1瓶溶液为空白调零，于500 nm测各瓶溶液吸光度；以浓度（C）和吸光度（A）进行线性回归。

2、多糖标准曲线制作2.1葡萄糖标准溶液配制精密称取干燥至恒重的葡萄糖10 mg，加适量去离子水溶解，转移至100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，即得0.1 mg/mL的葡萄糖标准溶液。

2.2 葡萄糖标准溶液最大吸收波长的测定取1ml葡萄糖标准溶液于干燥洁净试管中然后分别加入2．0 mL 5 ％的苯酚试剂，再迅速加入7 mL浓硫酸振摇，待其冷却到25 ℃，放置30 min。

在100~600nm波长范围测定测定其最大吸收波长，2.3葡萄糖标准曲线制作用移液管分别量取葡萄糖标准溶液0．1、0．2、0．4、0．6、0．8、1 mL转于干燥洁净的试管中，补加去离子水至刻度使其成1 mL。

并编号为1、2、3、4、5、6，然后分别加入2．0 mL 5 ％的苯酚试剂，再迅速加入7 mL浓硫酸振摇，待其冷却到25 ℃，放置30 min。

综合化学实验实验报告实验名称： 黄酮类化合物的提取及其功能化妆品中的应用姓名： 王虹岩 学号：1011080215 专业： 应用化学 班级： 0802班 同 组 人： 裴丽娜 王朋娜 孙 明 指导教师： 赵永光 张建平 赵 莹 完成时间： 2011.11.28河北科技师范学院理化学院综合化学实验室Hebei Normal University of Science & T echnology目录1 绪论2 实验原理3 实验仪器和药品4 实验过程4.1 侧柏叶中黄酮的提取及定性分析4.1.1 采样侧柏叶，洗净自然阴干后于60 ℃恒温烘干4 h ,粉碎后过筛（40目）,备用。

4.1.2提取1、超声波法提取侧柏叶中黄酮类化合物称取5g左右的样品，按照1∶10的料液比加入50 %乙醇水溶液浸泡2h，然后在70℃下超声波40 Hz时超声处理40 min。

趁热过滤,过滤后将滤渣再按上述方法超声处理一次,过滤,合并滤液定容250ml,测定含量。

2、索氏提取侧柏叶中黄酮类化合物以乙醇作提取剂，称取5.0g左右的样品，加乙醇约100mL，浸提时间4 h。

250ml容量瓶定容,测定含量。

3、黄酮含量测定芦丁质量25mg在50ml容量定容。

浓度为0.5mg/mlA 标准曲线的绘制：精密吸取芦丁对照品液(0.5mg / ml )1、2、3、4、5ml 分别用50%乙醇稀释至10ml，准确加入1 %三氯化铝溶液1ml，于50ml容量瓶定容，摇匀,同法制成空白对照，在415nm 处测定吸度.以吸收度值为纵坐标,以浓度值为横坐标绘制标曲线。

数据如下：V芦丁1ml 2ml 3ml 4mlC（mg/ml）0.01 0.02 0.03 0.04A 0.197 0.385 0.563 0.733\A =18.32C +9.2×10-3, r = 0.99956式中: A为吸光度, C为芦丁的浓度(mg/mL) 。

B 含量测定：精密吸取上层清液5ml，准确加入1 %三氯化铝溶液1ml，于50ml容量瓶定容，摇匀,同法制成空白对照，在415nm 处测定吸度.A，计算含量。

一、黄酮含量的测定方法1、样品的处理取材料地上部分洗净，晾晒至表面无水分，置于干燥箱中，80℃下干燥至恒重，磨成粉末，过筛待用。

2、标准曲线的绘制准确称取芦丁对照品20mg，置于100ml容量瓶中，加体积分数70%乙醇溶解至刻度，摇匀得0.2mg/ml的对照品溶液。

然后，分别吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4ml，分别置于7支试管中，加水补齐至2.4ml，分别加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。

再加入10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。

加入4.3%氢氧化钠溶液4ml，然后分别加2.2ml水，摇匀，放置15min。

以空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长处测定吸光度。

3、黄酮的提取（微波提取法）准确称取干燥至横重的野生马齿苋粉末3份，每份1g，分别置于锥形瓶中，喷洒适量蒸馏水润湿，用中高火微波处理90s。

加入一定量体积分数为70%的乙醇溶液，于80℃恒温水浴加热提取1.5h，趁热过滤，洗涤残渣，用70%乙醇定容于50ml容量瓶中，摇匀，得黄酮提取液。

4、黄酮含量的计算吸取分别黄酮提取液1ml，加1.4ml蒸馏水，摇匀，加入5%亚硝酸钠0.4ml，摇匀，放置6min。

再加10%硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6min。

加入4.3%氢氧化钠溶液4ml。

加入蒸馏水2.8ml，摇匀放置15min。

以蒸馏水代替黄酮提取液的空白试剂为参比，用紫外分光光度计在500nm波长出测定吸光度。

带入标准曲线中，计算黄酮含量。

总黄酮含量（mg/g）= c*v/m式中：c为1ml样品中测得的黄酮含量（mg）；v为提取液总体积（ml）；m为叶片干重。

二、矿质元素的测定每份需0.2g。

荞麦黄酮含量测定
准备：把样品用无菌水洗干净，在室温下晾干后，放入烘箱中105℃杀青，杀青后样品放到60℃恒温干燥箱至恒重。

将处理好的样品研磨成粉末，放入干燥器中保存备用。

黄酮的测定参考(刘娜，2006)紫外分光光度法。

1.标准曲线的绘制
①芦丁标准品56㎎于50ml容量瓶中；
②用70%甲醇溶液溶解，并定容至刻度线（标准溶液）；
③用移液枪分别吸取芦丁标准溶液0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml、3ml置于25ml容量瓶中；
④加入三氯化铝2ml，乙酸甲溶液3ml，用70%的甲醇溶液定容至刻度，摇匀，得到芦丁对照品浓度梯度溶液；
⑤静置30min后用试剂空白作背景；
⑥分别对上述芦丁对照品浓度梯度进行测定，用吸光度(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线。

2.样品的测定
①准确称取研磨后的样品粉末1g，加入30ml75%的甲醇，置于60℃恒温水浴锅中水浴4h；
②趁热过滤于50ml的容量瓶中，用75%的甲醇溶液清洗滤纸和残渣，合并滤液，冷却至室温，加甲醇溶液定容至刻度，摇匀，为待测液。

③准确吸取1.0ml待测液置于25ml容量瓶中，分别后加入三氯化铝2ml，乙酸甲3ml，用75%的甲醇定容至刻度，摇匀，室温下放置30min，于波长420nm处测定吸光值。