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2 结果与讨论
实验测得的荔枝壳粉澄清液中植物多酚的质量浓 度为 01389 m g /mL。 ・32・
图 2 荔枝壳粉澄清液对酪氨酸酶的抑制作用
Fig12 Inhibitory effect of extracts from litchi shell on activity of tyrosinase
[7]
化关系
酶促反应将 L - 多巴转化为红色产物多巴醌 , 试 管中红色的深浅与产物的浓度成正比 。考察反应产物 的 A475随反应时间变化 , 实验结果见图 1。由图 1 可 知 ,随着时间的延长 , 体系的吸光度增大 , 即产物浓度 增大 ,但反应速度 (斜率 ) 降低 。这是因为每一瞬间的 反应速度不同 ,越接近初速度 ,越能反映酶的活力 。反 应时间过短 ,不便操作 ,实验选取反应 2 m in 吸光度的 变化来计算酶促反应速度 。
m g /mL 和 615 × 10 mg /mL , 测定相应的 酶促反应速度 (实验所涉及底物和澄清液质量浓度值
- 2 - 2
212 荔枝壳粉澄清液对酪氨酸酶活力的影响
保持 反 应 体 系 中 底 物 L - 多 巴 的 质 量 浓 度 为为 310 mL ,
1 2 2 3 3
( 1. The School of Basic Courses of Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou, Guangdong 510006, China; 2. Grandway International B. C. Cosmetics M anufacturer, Guangzhou, Guangdong 510425, China; 3. Pharmaceutical Colloge of Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou, Guangdong 510006, China)
・31・
研究与开发
日 用 化 学 工 业 第 40 卷
211 酪氨酸酶促反应产物的 A 475随时间的变
11212 荔枝壳粉澄清液中植物多酚质量浓度的测定
采用普鲁士蓝法 , 以没食子酸为标准品 , 作标 准曲线测定荔枝壳粉澄清液中植物多酚质量浓度 。 11213 酪氨酸酶活力测定 按参考文献 [ 8 ]进行 ,酪氨酸酶活力以催化 L - 多 巴氧化反应生成多巴醌的二酚酶活力衡量 。试管中加 入 L - 多巴 014 mL ( 110 m g /mL ) , pH = 618 磷酸缓冲 液 214 mL , 30 ℃水浴保温 10 m in 后 , 加入酪氨酸酶 012 mL ( 250 U /mL )混匀 ,酶促反应将 L - 多巴转化为 红色产物多巴醌 ,在 475 nm 处有最大吸收 。读取从混 匀开始 2 m in 时在 475 nm 处的吸光度 A, 以每分钟 A475增加 01001 为 1 个酶活力单位 , 酶促反应的速度用 每分钟 A475增加值来表示 。 11214 不同浓度荔枝壳粉澄清液对酪氨酸酶活力的 影响 不 同 试 管 中 加 入 底 物 L - 多 巴 014 mL ( 110 mg /mL ) ,然后加入不同体积的澄清液 ,酪氨酸酶 012 mL ( 250 U /mL ) ,以磷酸缓冲液补足反应液总体积 为 3 mL ,测定反应开始 2 m in时的吸光度 ,按如下两式 计算相对酶活力和酶抑制率 : A3 - A4 相对酶活力 = × 100 % A1 - A2 酶抑制率 = 1 A 3 - A4 A 1 - A2
图 4 荔枝壳粉澄清液对酪氨酸酶催化氧化 L - 多巴 抑制作用的 L ineweaver - B urk 曲线
Fig14 L ineweaver - Burk p lots for inhibition of extracts from
10 000 r/m in 离心 10 m in 得上清液 , 上清液经减压旋
转蒸发溶剂后得到膏状荔枝壳提取物 , 使用时以一定 量的重蒸水溶解 , 经 10 000 r/m in离心 10 m in 得到澄 清液 。
收稿日期 : 2009 - 07 - 10; 修回日期 : 2009 - 09 - 24 作者简介 : 王庆华 ( 1969 - ) ,男 ,瑶族 ,广西人 ,副教授 , E - mail: wqhw j@1631 com。
第 1 期 王庆华等 : 荔枝壳提取物对酪氨酸酶的抑制作用
研究与开发
213 底物质量浓度对酶抑制率的影响
考察底物 L - 多巴质量浓度在 01133 mg /mL ～ 01533 mg /mL 内对酶抑制率的影响 , 实验结果见图 3。 由图 3 可知 ,随着底物质量浓度的增加 ,酶抑制率稍有 降低 ,表明抑制率与测定体系的底物质量浓度相关 ,不 [9] 符合单一非竞争抑制剂的特点 。
[3]
氨酸酶 , 美国 Worthington 公司 ; L - 多巴 , 美国 Sigma 公司 ; 水为重蒸水 ; 其他试剂均为国产分析纯 。 721 分 光光度计 ,上海第三分析仪器厂 ; 5804R 高速离心机 , 德国 Eppendorf公司 ; RE - 52A 旋转蒸发仪 , 上海青浦 沪西仪器厂 ; HH - 1 恒温水浴锅 , 江苏金坛环宇科学 仪器厂 。
第 40 卷第 1 期 日用化学工业 Vol . 40 No. 1 Feb. 2010 2010 年 2 月 China Surfactant Detergent & Cos m etics
荔枝壳提取物对酪氨酸酶的抑制作用
王庆华 ,邓志刚 ,刘 山 ,卢汝莲 ,林燕飞
112 实验方法
11211 荔枝壳粉澄清液的制备
1 实验部分
111 试剂与仪器
荔枝壳样品 ,市售荔枝经剥壳烘干后粉碎 ; 蘑菇酪
称取一定质量的荔枝壳粉 , 加入体积分数为 50% 的乙醇水溶液 (按 m (荔枝壳粉 ) ∶ m (乙醇水溶液 ) = 1∶ 10 ) ,在 70 ℃ 加热回流 2 h,所得提取液在室温下于
目前市场上的化妆品中酪氨酸酶抑制剂多为氢 醌、 熊果苷和曲酸等 ,但研究发现这些物质或多或少存 [ 1, 2 ] 在安全问题 。从植物提取物中寻找安全的酪氨酸 酶抑制剂是美白化妆品的一个趋势 , 我国研究人员对 中药材提取物进行分离筛选 , 发现了至少上百种酪氨 酸酶抑制成分 。荔枝是我国华南地区的资源性农 产品 ,荔枝壳提取物含有丰富的植物多酚类物质 ,如黄 [4 - 6] 酮、 原花青素 、 根皮素等 , 此类物质具有良好的抗 氧化活性 ,如能开发荔枝壳中的酪氨酸酶抑制成分则 意义更大 。作者研究了荔枝壳提取物对酪氨酸酶的抑 制作用并对其抑制机理进行了探讨 。
改变反应体系中澄清液体积 , 考察酪氨酸酶的相对酶 活力 ,实验结果见图 2。由图 2 可知 ,酶抑制率为 50% (酪氨酸酶活力下降 50% ) 时所需的澄清液中多酚的 质量浓度为 01052 mg /mL。
319 × 10
均以在试管中的终浓度来表示 ) 。采取 L ineweaver Burk 作图 ,根据酶促反应的米氏常数 Km 和表观最大 反应速率 Vm 的变化分析荔枝壳粉澄清液对酪氨酸酶 抑制作用 。
Abstract: The inhibitory effect of 50% ethanol extracts from litchi shell on the activity of tyrosinase were studied by m easuring the oxidation rate of L - dopa that catalyzed by tyrosinase. Results indicated that the m ass concentration of poly phenol in the extract needed for inhibitory effect of 50% ( 50% dep ression of tyrosinase activity; I C50 ) is 01052 m g /mL. The characteristics of L ineweaver - Burk graph for comp lex inhibitor were studied. Results indicated that the tyrosinase inhibitory action on the litchi shell ethanol extract is caused by com bined action of multip le ingredients containing in the litchi shell instead of action of single ingredient . Key words: additives of cos m etics; litchi shell extract; tyrosinase; comp lex inhibitors; inhibitory mechanis m
3. 广东药学院 药科学院 ,广东 广州 510006 )
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(1. 广东药学院 基础学院 ,广东 广州 510006; 2. 广州雅纯化妆品制造有限公司 ,广东 广州 510425;
摘要 : 通过对酪氨酸酶催化 L - 多巴氧化速率的测定 ,研究了荔枝壳粉的乙醇萃取液对体外酪氨酸酶活性的抑制作用 。 结果表明 ,酶抑制率达到 50% (酪氨酸酶活力下降 50% )时所需的澄清液中多酚的质量浓度为 01052 mg/mL。复合抑制 剂的酶抑制作用的 L ineweaver - Burk线特点的分析结果显示 , 荔枝壳粉提取物对酪氨酸酶的抑制作用不是单一成分的 抑制作用 ,而可能是多种抑制成分共同作用的结果 。 关键词 : 化妆品添加剂 ; 荔枝壳提取物 ; 酪氨酸酶 ; 复合抑制成分 ; 抑制作用 中图分类号 : TQ65815 文献标识码 : A 文章编号 : 1001 - 1803 ( 2010 ) 01 - 0031 - 04
