体外标记免疫分析

核医学体外免疫分析的质量控制一、室内质量控制（IQC）（一）体外免疫分析的室内质量控制内部质量控制（internal quality control， IQC）是实验室内控制各种因素造成的误差，监督测定结果以保证准确地测定样品中某种物质含量的办法。

1、目的通过对结果的分析，对每次测定的质量作出评价，并按照规定的指标决定结果的取舍（个别测定数据的取舍，或整个实验结果的取舍），以保证测定结果的质量，最终目的为提高及保证测定结果的可信性，发现及消除误差的原因。

2、要求（1）标本的正确采集、处理与保存。

①密切与临床科室联系，指导其正确采集及送检各种标本；②及时、正确地处理送检标本，包括选择分离方法及合适的贮存条件。

（2）试剂与仪器的稳定性保证：试剂与测定方法应相对稳定，妥善保存各种试剂。

如更换试剂来源，应由主管质量的主任认可。

①放射免疫分析a.试剂盒不任意更换；b.γ免疫计数器：仪器效率每年测定一次125I效率应≥55%），本底每日测定一次（本底应<80cpm），多探头仪器每月校正一次（CV应≤5%）；c.标准曲线应做复管，不可任意取舍各标准点（包括T及NSB管）；d.每批实验必须带做质控备清（试剂盒或室内的参考血清2～3个）。

②全自动分析仪a.应按仪器操作规定按时或按批进行标准曲线校正；b.每周做质控血清（试剂盒或室内的参考血清2～3个）。

3、指标应有详细记录。

（1）批内质量控制主要参数为：①最大结合率（Bo）应控制在一定范围（30%～50%）；②ED20、ED50、ED75及斜率；③非特殊异结合（NSB）；④标记品用量（T）；⑤最小可测值（灵敏度）；⑥取代比：Bo0Bi应>30%，取代比=Bmax/Bmin 应≥2.5。

（2）批间质量控制主要有以下指标：①RER或平均变异系数（ABCV）的变化；②QC血清的偏差值；按WHO要求在一批实验中有下述情况应整批舍去：a.3个质控血清中有一个测定值超过3SD；b.3个质控血清中有两个测定值在同一个方面超过2SD；c.3个质控血清的测定值在同一个方向超过1SD。

免疫学检验的方法和特点免疫学检验是一种通过检测和分析机体免疫系统相关指标来评估机体免疫功能的方法。

它可以用于疾病的诊断、预防和治疗过程中，对于研究免疫系统的功能和疾病的免疫机制也具有重要意义。

免疫学检验的方法主要包括体外诊断试验、免疫组化技术和流式细胞术等。

下面将逐一介绍这些方法的特点和应用。

1. 体外诊断试验：体外诊断试验是最常用的免疫学检验方法之一，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫分析（RIA）、免疫印迹（Western Blot）等。

这些试验通过检测血清中的抗体或抗原来评估机体的免疫状态。

其特点是操作简单、结果准确可靠、样本来源广泛，可以用于检测多种疾病，如感染病、自身免疫病等。

体外诊断试验的优势在于可以进行大规模筛查，对于人群健康状况的监测和疾病的早期诊断具有重要意义。

2. 免疫组化技术：免疫组化技术是利用抗体与组织或细胞中特定分子的结合反应来检测和定位这些分子的方法。

常用的免疫组化技术包括免疫组织化学（IHC）和免疫荧光染色（IF）等。

这些技术可以用于检测和定位肿瘤标志物、炎症细胞因子、免疫细胞表面标志物等，对于疾病的诊断和治疗有重要的指导意义。

免疫组化技术的优势在于可以直接观察到分子的表达和分布情况，具有较高的灵敏度和特异性。

3. 流式细胞术：流式细胞术是一种通过检测和分析细胞表面标志物来鉴定和分类细胞的方法。

通过标记细胞表面的抗原或抗体，结合流式细胞仪的高速流式分析技术，可以对单个细胞进行高通量的检测和分析。

流式细胞术可以用于检测和鉴定免疫细胞亚群、肿瘤细胞、干细胞等，对于疾病的诊断和治疗选择有重要的指导作用。

流式细胞术的优势在于可以同时检测多个指标，对于复杂的样本分析有较高的效率和准确性。

免疫学检验的特点包括以下几个方面：1. 高度特异性：免疫学检验方法可以通过特异的抗体-抗原反应来检测和定量分析特定的分子或细胞，具有较高的特异性。

这使得免疫学检验方法在疾病的诊断和治疗中具有重要的优势，可以准确地鉴定和区分不同的疾病类型。

标记免疫分析临床标记免疫分析（Immunoassay）是一种基于免疫学原理的生物分析方法，广泛应用于临床诊断和研究领域。

通过标记特定抗原或抗体，结合其与靶分子的特异性相互作用，标记免疫分析能够准确检测和定量分析目标分子的存在和浓度。

在标记免疫分析中，通常使用荧光、酶、金颗粒等标记物作为信号发生器。

这些标记物能与目标分子或抗体发生特异性结合，并通过其特性来输出检测结果。

标记免疫分析的灵敏度高、专一性强，且具有高通量性和自动化程度高的优势，因此在临床应用中得到了广泛的应用。

一、标记免疫分析在临床诊断中的应用1. 临床生化指标检测标记免疫分析在临床生化指标检测中具有广泛的应用，如血糖、血脂、肝肾功能、心脏标志物等。

通过检测相关指标的浓度变化，可以快速准确地评估患者的健康状况以及疾病的进展情况，提供临床决策的依据。

2. 肿瘤标志物检测标记免疫分析在肿瘤标志物检测中扮演重要角色。

通过检测特定肿瘤标志物的浓度变化，可以帮助医生判断肿瘤的存在与否、疗效评估及预后预测等。

例如，CA125在卵巢癌的早期筛查和监测中具有重要意义。

3. 传染病诊断标记免疫分析对于传染病的诊断与监测也有着重要的作用。

例如，HIV、乙肝病毒等病原体的抗体检测，用于早期发现感染，以采取相应的预防和治疗措施。

标记免疫分析可以提供高灵敏度和高特异性的检测结果，有助于及早干预和控制传染病的传播。

二、标记免疫分析在疾病研究中的应用1. 免疫相关疾病的研究标记免疫分析在免疫相关疾病的研究中发挥着重要作用。

例如，自身免疫病的发病机制研究、药物治疗的监测和疗效评估等都离不开标记免疫分析。

通过检测某些自身抗体或免疫相关因子的变化，可以深入了解疾病的发生和发展过程，为新药研发和治疗提供理论依据。

2. 药物代谢及药物监测在药物研究和临床应用中，标记免疫分析可以用于检测药物及其代谢产物的浓度。

通过测定药物浓度的定量变化，可以评估药物的吸收、分布、代谢和排泄过程，进而调整药物剂量、制定个体化治疗方案，提高疗效、减少副作用。

时间分辨荧光免疫（简称TRF）分析法是用三价稀土离子作为示物，标记蛋白质，多肽，激素，抗体，核酸探针或生物活性细胞，待反应体系发生后，用时间分辨光分析仪测定最后产物中的荧光强度，以此来判断反应体系中被测物质的浓度。

原理：TRF采用了双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析法，其中抗原与已包被的抗体结合成抗体抗原复合物，洗涤后再加入銪标记抗体与已结合的抗原联接成抗一抗体—抗原—抗—抗体—Eu复合物。

增强液将标记在抗体上的Eu3+离子解离到溶液中，在溶液中Eu3+离子和增强液形成了高荧光强度的螯合物。

荧光强度和样品中的抗原浓度成正比。

电化学发光免疫测定(Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI).ECLI 是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术.电化学发光法源于电化学法和化学发光法,而ECLI 是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物,是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,包括了电化学和化学发光二个过程.ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定,而且还可用于DNA／RNA探针检测。

ECL 反应底物有两种：·三氯联吡啶钌和·三丙胺电化学发光反应原理电化学反应过程：在工作电极上(阳极)加一定的电压能量作用下,二价的三氯联吡啶钌释放电子发生氧化反应而成为三价的三氯联吡啶钌,同时,电极表面的三丙胺也释放电子发生氧化反应而成为阳离子自由基TPA+ ,并迅速自发脱去一个质子而形成三丙胺自由基TPA·,这样,在反应体系中就存在具有强氧化性的三价的三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]3+ 和具有强还原性的三丙胺自由基TPA·.化学发光过程:具有强氧化性的三价的三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]3+ 和具有强还原性的三丙胺自由基TPA·发生氧化还原反应,结果使三价的三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]3+ 还原成激发态的二价的三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+,其能量来源于三价的三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]3+ 与三丙胺自由基TPA·之间的电势差,激发态[Ru(bpy)3]2+ 以荧光机制衰变并以释放出一个波长为62Onm 光子的方式释放能量,而成为基态的[Ru(bpy)3]2+.循环过程:上述化学发光过程后,反应体系中仍存在二价的三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+ 和三丙胺(TPA),使得电极表面的电化学反应和化学发光过程可以继续进行,这样,整个反应过程可以循环进行.通过上述的循环过程,测定信号不断的放大,从而使检测灵敏度大大提高,所以ECL 测定具有高灵敏的特点.化学发光免疫分析原理化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。

体外分析技术一、概论体外标记免疫分析是当今先进的超微量检测技术，它的测量值可精确到毫微克（ng）—微微克（pg），甚至达毫微微克级（fg），它的基础是先进的放射性或非放射性标记技术和先进的抗原—抗体结合的免疫技术。

它主要被用于检测人体的各种激素和各种肿瘤标志物。

是当前的重要检测技术之一。

体外标记免疫分析技术起始于1959年，由美国的Berson和Yalow共同建立了放射免疫分析法（RIA），由于RIA具有灵敏度高、特异性强、重复性好、测量简便、成本低等优点。

在生物学和医学中对机体超微量活性物质的分析取得重要突破而获得飞速的发展，故Yalow在1977年获得诺贝尔奖。

但因RIA法必须使用放射性物质，所以在发展中受到一定限制。

自70年代起科学家们曾先后研究并建立了多种非放射性物质的标记免疫分析，如酶标记免疫分析（EIA）、时间分辨荧光分析（TRFIA)、酶放大发光分析（CLEIA）、化学放光（CLIA）、电化学发光（ECLRA）等，并且可进行仪器的全自动化测定和全自动的数据分析。

各种测定方法主要是标记技术、标记品的不同而采用的测量方法不同，各具特点和优点，其基本原理还是标记免疫技术，其中最基本的还是放射免疫分析和免疫放射分析。

二、放射免疫分析的基本原理放射免疫分析法（Radioimmunoassay,RIA）是建立在放射性分析的高度灵敏性与免疫反应高度特异性基础之上的超微量分析技术。

通过测定放射性标记抗原—抗体复合物的量来计算出待测抗原（样品）的量。

20世纪50年代末Berson和Yalow在研究胰岛素抗体时，首先了建立放射免疫分析法定量测定胰岛素含量，从而开创了生物活性物质微量测定分析的新时代，从此放射免疫分析技术以其灵敏度高、特异性强、重复性好、准确度高等优点而独树一帜。

目前应用放射免疫分析技术能测定生物活性物质达300余种，被广泛应用于生物学医学各个领域。

放射免疫分析法的基本原理是竞争性抑制反应。

单分子免疫体外诊断关键技术简介单分子免疫体外诊断是一种基于单分子水平的体外诊断技术，通过检测和分析生物样品中的特定分子，如蛋白质、抗体等，来实现疾病的早期诊断和监测。

这项技术具有高灵敏度、高特异性和快速检测等优点，已经在临床医学、生物学研究和药物开发等领域得到广泛应用。

技术原理单分子免疫体外诊断技术主要基于以下原理：1.免疫反应：该技术利用生物样品中的抗原与特异性抗体之间的免疫反应进行检测。

当抗原与抗体结合时，可以产生特定的信号，如荧光信号、电化学信号等。

2.单分子检测：单分子检测是指在实验条件下只能检测到单个分子的技术。

通过使用高灵敏度的仪器设备和适当的探针标记，可以实现对单个抗原或抗体的检测。

3.信号放大：为了提高检测的灵敏度，单分子免疫体外诊断技术通常会采用信号放大的策略。

常用的信号放大方法包括荧光共振能量转移（FRET）、表面增强拉曼散射（SERS）等。

技术流程单分子免疫体外诊断技术的一般流程如下：1.样品处理：首先需要对生物样品进行预处理，如离心、稀释等，以获得适合检测的样品。

2.抗原-抗体反应：将样品与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。

可以通过直接结合或间接结合等方式实现。

3.信号检测：利用高灵敏度的仪器设备对抗原-抗体复合物进行检测。

常用的检测方法包括荧光检测、电化学检测、质谱分析等。

4.数据分析：对得到的信号数据进行处理和分析，以确定样品中目标分子的存在与否，并计算其浓度。

5.结果解读：根据数据分析的结果，判断样品中目标分子是否超过了临床阈值，从而给出相应的诊断结果。

应用领域单分子免疫体外诊断技术在医学、生物学和药物开发等领域具有广泛的应用前景，包括但不限于以下几个方面：1.疾病诊断：单分子免疫体外诊断技术可以用于早期癌症的诊断和监测、感染性疾病的检测、遗传性疾病的筛查等。

2.药物开发：该技术可以用于检测药物在体内的代谢过程、评估药物的效果和副作用，为药物开发提供重要的参考数据。

标记免疫分析的临床应用标记免疫分析（immunoassay）是一种常用的生化分析技术，通过利用抗体与抗原相互作用的特性，实现对分析目标的定性定量检测。

它已在临床医学中得到广泛应用，具有高灵敏度、高特异性和高效率等优点。

本文将探讨标记免疫分析在临床应用上的重要性和进展。

一、临床应用的意义标记免疫分析在临床医学中具有重要意义。

首先，它能够帮助医生对疾病进行早期诊断。

通过对患者体液中特定标记物的检测，可以发现潜在的疾病风险，并及时采取干预措施。

其次，标记免疫分析可以实现对疾病的定性定量检测，为医生提供科学依据，指导治疗方案的制定和调整。

此外，它还能够用于监测疾病的进展和预后评估，为患者个体化的治疗提供支持。

二、常见的标记免疫分析方法1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验是一种常见的标记免疫分析方法，已被广泛应用于临床实验室。

它通过将特定抗原与酶标记的抗体结合，通过酶促反应产生可见的颜色或发光信号，从而实现对分析目标的定性定量检测。

ELISA技术操作简单、灵敏度高，广泛用于肿瘤标志物、传染病等的检测。

2. 荧光免疫分析荧光免疫分析是一种利用荧光探针标记的抗体与抗原结合，通过测量荧光信号强度来实现对分析目标的检测。

相比于传统的染料标记方法，荧光标记具有更高的灵敏度和稳定性，对多样性分子的检测更加敏感。

因此，荧光免疫分析在病毒检测、免疫组化等方面得到广泛应用。

3. 放射免疫分析放射免疫分析是利用放射性同位素标记的抗体或抗原进行检测的方法。

其优点是高灵敏度和高特异性，但由于放射性物质的使用，安全性成为其一个不容忽视的问题。

然而，随着技术的发展，非放射性同位素标记的放射免疫分析逐渐得到广泛应用。

放射免疫分析在甲状腺功能、生殖激素等检测中有着重要的临床价值。

三、临床应用领域1. 临床诊断标记免疫分析在临床诊断中发挥着重要作用。

例如，在传染病的早期诊断中，可以利用ELISA等方法检测特定病原体的抗体或抗原，对疾病进行准确的筛查。

体外分析技术放射免疫分析体外分析技术是指在试管内进行反应从而测定某生物活性物质的超微量分析技术。

该类技术的特点是高灵敏度和高特异性，广泛用于临床和科学研究的很多领域。

应用最多的是：放射免疫分析、免疫放射分析、受体的放射配基结合分析及非放射性免疫分析。

一、原理放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)的基本原理是，限量标记抗原［*Ag］和可变量的非标记待测抗原［Ag］与定量的特异抗体［Ab］发生竞争结合反应，通过测定复合物的放射性来计算出待测非标记抗原的量。

这一过程可用下式表示：*Λg+Λg+Ab< »［ΛgΛb］*+［ΛgΛb］上述式中，Ab的分子数少于*Ag,因此即使系统中没有Ag,仅有*Ag,当反应达到平衡时，绝大部分(因为是可逆反应，不会是100%)Ab将形成*AgAb复合物。

如果系统中加入Ag,则Ag与*Ag竞争结合Ab,形成AgAb,*AgAb将减少。

Ag越多则*AgAb越少。

实践和理论推导都证明，*AgAb和Ag呈二次方程的函数关系，如以Ag为横坐标，*AgAb(B)或*AgAb占加入总*Ag的％(B%)为纵坐标，是一条斜率逐步由大变小的下降曲线。

如以游离的*Ag(F)或游离*Ag占加入总*Ag的％(F%)为纵坐标，则是一条斜率逐步由大变小的上升曲线。

也可以*AgAb∕*Ag的比值(R)为纵坐标，也是一条斜率逐步由大变小的上升曲线。

分析中，首先以不同量的已知标准品Ag和定量*Ag及限量Ab进行竞争结合反应，得到以B或B%、F或F%、或R为纵坐标的剂量效应曲线(也称标准曲线)，然后以未知样品测得的B或B%、F或F%、或R从曲线上查出相应的剂量。

二、试剂盒基本试剂试剂盒由国家批准的生产单位提供，提供R1A的主要试剂、操作方法、保存条件及保存期限。

使用者应按说明书的要求合理使用。

如果临床工作需要，使用者可以对试剂稀释度、操作步.骤等进行适当修改，但应当对改变了的方案进行精密度、准确度、灵敏度等考核，并作详细记录。