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第1篇一、实验目的1. 了解抗原抗体反应的基本原理和过程。
2. 掌握抗原抗体反应的实验操作方法。
3. 通过实验观察抗原抗体反应现象，加深对免疫学基础知识的理解。
二、实验原理抗原抗体反应是指抗原与特异性抗体在一定条件下发生的特异性结合反应。
抗原是一类能引起机体免疫应答的物质，抗体是一种由B细胞产生的具有特异性结合抗原能力的蛋白质。
抗原抗体反应具有高度的特异性，即一种抗原只能与相应的抗体结合。
实验中常用的抗原包括细菌、病毒、肿瘤细胞等，抗体则多为免疫球蛋白（Ig）。
根据抗原抗体反应的性质，可分为沉淀反应和凝集反应。
本实验主要观察凝集反应。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：- 羊红细胞（抗原）- 兔抗羊红细胞抗体（抗体）- 洗涤剂- 稀释液2. 实验试剂：- 磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）- 生理盐水- 0.1%碳酸钠溶液- 0.1%氢氧化钠溶液- 0.1%盐酸溶液四、实验步骤1. 准备实验器材：试管、移液器、滴管、显微镜等。
2. 将羊红细胞与兔抗羊红细胞抗体按一定比例混合，置于试管中。
3. 将混合液置于37℃水浴中孵育30分钟。
4. 取出试管，加入适量的洗涤剂，轻轻振荡，使未结合的抗体与红细胞分离。
5. 将洗涤后的混合液离心，弃去上清液。
6. 加入适量的稀释液，混匀。
7. 观察红细胞是否发生凝集现象。
五、实验结果与分析1. 正常情况下，羊红细胞与兔抗羊红细胞抗体发生特异性结合，形成红细胞凝集现象。
2. 通过观察，发现实验组红细胞发生明显的凝集现象，而对照组（未加抗体的红细胞）未发生凝集。
六、实验结论1. 本实验成功观察到抗原抗体反应现象，证明了抗原抗体反应的特异性和结合能力。
2. 通过实验，加深了对免疫学基础知识的理解，为后续学习提供了实践基础。
七、实验讨论1. 实验过程中，应注意避免交叉污染，确保实验结果的准确性。
2. 实验操作应严格按照实验步骤进行，避免人为误差。
3. 通过本实验，了解抗原抗体反应在免疫学研究和临床诊断中的应用。
抗原抗体反应及其应用摘要抗原抗体反应指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。
免疫印迹，又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。
双转印法、天然电泳及western blot 分析等是最近几年出现的新型蛋白印迹技术。
单克隆抗体技术是20世纪后20年内最为重要的生物高技术之一。
单克隆抗体药物在肿瘤治疗、抗感染等方面具有重要的作用。
关键词抗原抗体反应、Western blotting、单克隆抗体技术一、抗原抗体反应抗原抗体反应指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。
这种反应既可在机体内进行，也可以在机体外进行。
抗原抗体反应的过程是经过一系列的化学和物理变化，包括抗原抗体特异性结合和非特异性促凝聚两个阶段，以及由亲水胶体转为疏水胶体的变化[1]。
抗原是能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫效应（特异性反应）的物质。
抗原表位是抗原上与抗体结合的区域。
蛋白质抗原的表位是由相邻的连续的或非连续的氨基酸序列形成的局部表面结构[2]，如图1所示。
抗体是指宿主对体内存在的外来分子、微生物或其他因子的应答而产生的蛋白质。
抗体主要由B淋巴细胞系的终末分化细胞-浆细胞产生，并且循环在血液和淋巴液中，在那里与抗原结合。
抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。
链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。
整个抗体分子可分为恒定区和可变区两部分。
抗体上与抗原表位结合的位点由重链和轻链的可变区构成[3]，如图2所示。
抗原抗体复合物通过大量非共价键连接。
某些免疫复合物中抗体或抗原的结构未发生改变，而另一些则出现巨大的构像改变。
研究抗原抗体复合物最有说服力的的方法是抗体-抗原共结晶的X射线衍射技术。
图1 抗原表位示意图图2 抗体结构示意图二、蛋白印迹技术免疫印迹，又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。
第七章抗原抗体反应及应用不论天然的还是人工合成的分子，只要能被机体的免疫系统识别的都可以诱导机体的免疫应答，产生相应的抗体。
大多数抗体和抗原本身是既有免疫原性(诱发产生特异抗体)，又有反应原性(与特异的抗体相结合)。
抗原与抗体的特异性反应不仅可以在体内进行，而且可以在体外进行。
一切利用血清学技术方法所进行的各种测试都是基于这一根本的特性。
抗体反应技术的应用之广泛已经远远超出了免疫学、医学、甚至生命科学的范围，成为—类微量，灵敏，快速的检测分析方法。
本章着重介绍抗体制备，抗体抗原反应原理及技术方法的应用。
第一节抗体的制备环境中的大部分生物(包括病原生物)及其产物分子和一些化合物对哺乳动物的免疫系统而言是外源抗原，这些抗原能通过侵染或其他的途径刺激免疫系统，产生以抗体为主的体液免疫应答。
同样用抗原人工免疫实验动物，可以获得含有特异性抗体的血清，称为抗血清(antiserum)，因血清中抗体是多个抗原决定簇刺激不同B细胞克隆而产生的抗体，所以称多克隆抗体(polyclonal antibody)。
一个B细胞克隆所分泌的抗体即为单克隆抗体。
用免疫动物的B细胞与骨髓瘤细胞融合，在体外可以分离出许多单个B细胞克隆，以此方法可制备单克隆抗体(monoclonal antibody)。
随着分子生物学技术的发展，已经可以用抗体基因文库(antibody combinatorial library)筛选制备单克隆抗体。
应用基因工程技术，根据需要对抗体进行改造，获得基因工程抗体(engineering antibody)，以及催化性抗体(catalytic antibody 或abozyme)等的全新的抗体。
一、抗血清的制备1．免疫动物(1)抗原：免疫动物是制备抗血清的第—步。
免疫所用的抗原可用病毒、细菌或者其他蛋白质抗原，如果使用半抗原如小分子激素等，必须与大分子载体连接，连接剂见表7—1。
抗原的用量视抗原种类及动物而异，—次注射小鼠可以少至几个微克，免、羊甚至更大的动物每次注射的量就相应增加，从几百μg／次至几mg／次。
