猪瘟的间接免疫荧光实验_畜牧兽医_农林牧渔_专业资料.ppt
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猪瘟中和免疫荧光试验操作规程猪瘟是一种严重的、可怕的猪传染病。
为了防止猪瘟的爆发并控制疫情,对瘟疫点和疫区进行的检测和排查显得至关重要。
而免疫荧光试验是一种常用的检测方法。
下面介绍一下猪瘟中和免疫荧光试验的操作规程。
一、试验仪器与试剂1.试验仪器:医用荧光显微镜、丙酮脱脂仪、超声清洗仪等;2.试剂:抗猪瘟病毒血清、猪瘟病毒离体分离液、红细胞、荧光素等。
二、试验样品处理1.猪瘟病毒离体分离液的制备:将猪瘟病毒A型、C型等不同株系分离液混合后,按1:1000稀释,作为试验抗原。
保持冷藏状态。
2.丙酮脱脂红细胞的制备:从猪的全血中取得,淋巴化学法处理后,用NSF缓冲液洗涤多次,然后浓度调节至2%。
三、试验操作步骤1.准备工作:(1)取出所需试剂并放置在试验台上,保持洁净状态;(2)将荧光显微镜插上电源并调整镜头至适宜位置;(3)将丙酮脱脂红细胞和试验样本进行标记和分类,并在试验纸板上排列,以便使用。
2.将红细胞悬液和猪瘟病毒离体分离液混合,使红细胞与病毒结合,形成红细胞病毒复合物。
3.分别将红细胞病毒复合物、猪瘟抗体和荧光素混合,孵化于33℃、37℃、41℃等温度下,让其反应。
4.荧光检测:将荧光显微镜的滤色镜片旋转至450-490nm,观察试验细胞的荧光强度,从而判断样品是否呈阳性反应。
四、实验注意事项1.在操作过程中必须佩戴手套、口罩、防护服等防护措施,确保实验室环境洁净和操作人员的健康安全;2.严格按照规定的时间、温度等条件操作试验过程,保证试验结果的准确性;3.注意操作步骤中的样品分离、稀释等工作,确保实验品质量;4.注意设备测量标准化,防止误差的产生。