无机与分析化学课件比色法和分光光度法

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分光光度法

二、定义
基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，称为吸光光度法。包括：比色法、可见及紫外吸光光度法和红外光谱法。本章重点介绍：可见吸光光度法。在选定波长下，被测溶液对光的吸收程度与溶液中的吸光物质的浓度有简单的定量关系。吸收光波范围是紫外，可见和红外光区。它所测量的是物质的物理性质－物质对光的吸收，测量所需的仪器是特殊的光学电子学仪器，所以光度法不属于传统的化学分析法，而属于近代的仪器分析，这里只是按照我国现行教学习惯把可见光的光度法作为化学分析部分的一章。
(一)朗伯一比耳定律的推导
当一束平行单色光通过任何均匀、非散射的固体、液体或气体介质时，光的一部分被吸收，一部分透过溶液，一部分被器皿表面反射。设入射的单色光强度为I0，反射光强度为Ir，吸收光强度为Ia，透过光强度为It，则它们之间的关系为：
I0=Ir+Ia+It
因为λ射光常垂直于介质表面射λ，Ir很小(约为λ射光强度的4％)又由于进行光度分析时都采用同样质料，同厚度的吸收池盛装试液及参比溶液，反射光的强度是不变的。因此，由反射所引起的误差可校正，抵消。故上式可简化为：
ΔE=hc/λ
这里，ΔE=E2-E1，表示某一能吸级差的能量。由于不同物质的分子其组成与结构不同，它们所具有的特征能级不同，能级差也不同，所以不同物质对不同波长的光的吸收就具有选择性，有的能吸收，有的不能吸收。在电子能级发生变化时,不可避免地也伴随着分子的振动和转动能级的变化.分子光谱又成为带状光谱.
2、溶液有色的原因。
具有单一波长的光称为单色光，在可见光中，通常所说的白光是由许多不同波长的可见光组成的复合光。由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫这些不同波长的可见光按照一定的比例混合得到白光。进一步的研究又表明，只需要把两种特定颜色的光按一定比例混合，就可以得到白光，如绿光和紫光混合，黄光和蓝光混合，都可以得到白光。

无机及分析化学01.第一章-绪论ppt课件

➢ 个人误差：又称主观误差，是由于分析人员的主观原因。(如个人对颜色的敏感程度不同，在辨别滴定终点的颜色或偏深或偏浅）
Chapter One
32
（2）随机误差：由测量过程中一系列有关因素的微小的随机波动而引起的误差，具有统计规律性，可用统计的方法进行处理。多次测量时正负误差可能相互抵消。无法严格控制，仅可尽量减少。
A. 精度高且准确度也好 B. 精度不高但其平均值
的准确度仍较好 C. 精度很高但明显存在
负的系统误差 D. 精度很差，且准确度
也很差，不可取
Chapter One
30
2. 定量分析误差产生的原因
（1）系统误差由某种固定因素引起的误差，是在测量过
程中重复出现、正负及大小可测，并具有单向性的误差。可通过其他方法验证而加以校正。
Chapter One
11
传统化学按研究对象的内在逻辑不同，分为无机化学、有机化学、分析化学和物理化学四大分支。
现代化学已经渗透到很多领域，形成了许多应用化学的新分支和边缘学科，如农业化学、生物化学、医药化学、环境化学、材料化学、核化学、等；另一方面，原有的“四大分支”中的某些内容，已经发展成为一些新的独立分支，如热化学、配位化学、化学生物学、稀有元素化学等。
Chapter One
31
系统误差的分类
➢ 方法误差：由所选择的方法本身（分析系统的化学或物理化学性质）决定的，无法避免。
➢ 操作误差：操作者本人所引起的，可通过提高操作者技能来消除或减少（所选试样缺乏代表性、溶样不完全、观察终点有误、观察先入为主等）
➢ 仪器及试剂误差：由仪器性能及所用试剂的性质（仪器准确度不够、器皿间不配套、试剂不纯等）所决定

武汉大学无机及分析化学ppt (吸光光度法)

选择性
2 测定浓度控制
控制浓度吸光度A：0.2～0.8
减少测量误差
3 参比溶液选择
仪器调零消除吸收池壁和溶液对入射光的反射扣除干扰
试剂空白试样空白褪色空白
4 标准曲线制作
理论基础：朗伯-比尔定律
相同条件下测定不同浓度标准溶液的吸光度A A～c 作图
A
0 .3 5
0 .3 0
0 .2 5
0 .2 0
0 .1 5
0 .1 0
0 .0 5
0 .0 0
0
1
2
3
4
5
6
7
8
c o n c e n tra tio n
12.6 吸光光度法的误差
对朗伯-比尔定律的偏移非单色光引起的偏移物理化学因素：非均匀介质及化学反应吸光度测量的误差
显M 色+ n反L应= 体M系Ln中显的色副反反应应影响 *其它离子可能与显色剂反应：M´ + nL = M´Ln,消耗显色剂； *L受酸效应影响，有L-、HL+等形态存在；被测离子有络合效应
e 表示物质的浓度为1mol/L,液层厚度为1cm时溶液的吸光度。单位：
(L•mol-1 •cm-1)
桑德尔(sandell)灵敏度： S 当仪器检测吸光度为0.001时，单位截面积光程内所能检测到
的吸光物质的最低含量。单位：mg/cm2
S=M/e
推导：根据定义0.001＝εbc 故 bc ＝0.001/ε （1） c为浓度，单位为mol/1000cm3,b为cm, bc表示单位截面积光程内的摩尔数，即 mol/1000cm2，如果bc乘以被测物质的分子量M,则得单位截面积光程内被测物质的量，即桑德尔灵敏度S。 S=（bc/1000）×M×106 = bcM × 103（μg·cm-2），将（1）的bc＝0.001/ε代入，S＝

无机及分析化学可见光分光光度法

广泛地应用于紫外光、可见光、红外光区的吸收测量。
（2）摩尔吸光系数ε的特性
吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数，不随浓度c和光程长度b的改变而改变。在温度和波长等条件一定时，ε 仅与吸收物质本身的
性质有关。
可作为定性鉴定的参数。同一吸收物质在不同波长下的ε 值是不同的。在最大吸收波长λ max处的摩尔吸光系数，常以ε 示。
光的互补：蓝黄
对于固体物质:
当日光（复合光）照射到物质上时，如果物质对各种波长的光完全吸收则呈现黑色；如果完全反射则呈现白色；如果对各种波长的光均匀吸收则呈现灰色。各种物质的颜色（透过光）与吸收光颜色的互补关系列于下表中：
物质颜色与吸收光颜色和波长的关系
物质颜色（互补色）
黄绿黄
③不同物质，它们的吸收曲线形状和λ max则都不同。
c4
c3
c2 c1
④吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的依据
a.不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度 A 有差异，在λmax=508nm处吸光度A 的差异最大。图10-3 邻菲罗啉络铁(Ⅱ)离子此特性可作为物质定量分析的重要依据。所以测定最灵敏。
吸颜色
紫蓝
收
光波长（nm）
400～450 450～480
橙
红紫红紫蓝绿蓝
绿蓝
蓝绿绿黄绿黄橙
480～490
490～500 500～560 560～580 580～600 600～650
蓝绿
红
650～750
（2）吸收曲线 M + h M* 基态激发态 E1 （△E） E2 E = E2 - E1 = h ：
•

无机及分析化学课件(第四版)第一章

总结词
根据不同的分类标准，分析化学可以分为多种类型。按分析对象可以分为无机分析和有机分析，这是根据被测物质中是否含有碳元素来划分的。按分析方式可以分为化学分析和仪器分析，前者依赖于化学反应进行定量或定性分析，后者则利用各种精密仪器对物质进行测量。另外，根据待测组分的含量，分析化学可分为常量分析、微量分析和痕量分析。
分子结构
分子由原子通过化学键连接而成，分子的几何构型和成键方式决定了分子的性质。常见的分子结构有共价键、离子键和金属键。
晶体结构
晶体是由原子或分子在空间周期性排列形成的固体，晶体的性质与原子或分子的排列方式密切相关。晶体分为金属晶体、离子晶体、共价晶体和分子晶体等。
分子结构和晶体结构
酸和碱之间的反应称为酸碱反应，反应中质子转移是酸碱反应的本质。酸和碱的相对强弱可以通过电离常数来衡量。
实验数据处理和误差分析
实验安全
01
实验安全是实验过程中的首要问题，需要遵守实验室安全规定，正确使用实验器材和防护用品。
环境保护
02
环境保护是每个实验者应尽的责任，需要合理处理实验废弃物，减少对环境的污染。
实验安全和环境保护的实验实例
03
通过具体的实验实例，如实验室安全规定、废液处理等，来掌握实验安全和环境保护的方法。
04
无机及分析化学实验基础
1
2
3
掌握实验基本操作技术是进行无机及分析化学实验的基础，包括称量、加热、冷却、萃取、蒸发、结晶等操作。
实验基本操作技术
在进行实验基本操作时，需要注意安全、准确、快速、环保等原则，避免误差和事故的发生。
实验基本操作技术的注意事项
通过具体的实验实例，如硫酸铜晶体的制备、碘的萃取等，来掌握实验基本操作技术。

目视比色法和分光光度法的分析和比较

目视比色法和分光光度法的分析和比较2015年12月5日龙浪李珂璇王宇鑫李嘉浩程卫东王佳佳临床医学院指导教师：徐尧一、摘要本讨论报告通过分析和比较目视比色法和分光光度法两种比色法的主要优缺点，即目视比色法操作简便但精度较低，分光光度法精确度较高但对溶液的性质要求较高；并且结合实例说明两种比色法各自的适用范围和浓度限制，即两种比色方法分别在光的波长、物质的组分、以及对朗伯-比尔定律的符合情况上有不同的适用范围，并给出了适用的吸光度范围（0.2-0.8）和浓度范围。

由此针对不同情况给出了不同的选择方案。

这对实际的研究和生产生活具有指导性的意义。

二、前言在确定有色溶液待测组分含量时，常常可以通过比较和测量溶液的颜色来进行，这种方法叫做比色法。

早在19世纪30-40年代，比色法就开始作为一种定量分析的方法被应用到研究和生产中。

常用的比色法有目视比色法和分光光度法两种，其中前者主要通过眼睛观察得出结论，后者借助光电比色计进行。

由于这两种比色方法的实际应用非常广泛，因此分析和比较两种方法对于方法的优化显得尤为重要。

三、内容（一）两种比色方法优缺点比较1.目视比色法1）优点（1）比色时操作简便，成本较低相比分光光度法，目视比色法不需要动用分光光度计，只需要几个比色管便可以完成测定，因此显得仪器设备简单，操作简便，使用成本低。

同时节省了电能，有利于能源的节约和保护。

在分析大批试样时，其优势就显得更加明显，大大节省了人力、物力、财力以及测定消耗时间。

在本实验中，我们仅需配置5个标准溶液，便可直接在比色管架上进行比较，与分光光度法中所需的多次清洗比色皿的操作要求相比比较简易。

（2）适用范围较广，可用于不严格符合Lambert-Beer定律的情况目视比色法是通过比较通过光的强度来测定组分含量，可以在白光下进行[2]，因此对于有些不严格符合Lambert-Beer定律的显色反应也是适用的。

例如在用碘量比色法测定油脂中过氧化值时，碘和淀粉反应的特征蓝色只有在含碘量在2~10μg[6]时才较为严格地符合Lambert-Beer定律，因此只要反应产生的碘稍稍过量或不足，使用分光光度法测定就会产生较大误差，只能使用目视光度法。

比色法和分光光度法

例如, 白光通过CuSO4溶液时, 溶液颜色为蓝色。
吸收曲线: 为了精确表明溶液对不同波长光的吸收情况, 可将不同波长的单色光依次通过某一固定浓度的有色溶液, 测量该溶液对各单色光的吸收程度, 即吸光度, 以波长为横坐标, 吸光度为纵坐标作图所得曲线, 即为吸收曲线, 或称吸收光谱。
光栅:色散元件, 利用光的衍射和干涉原理制成。当白光通过密刻平行条痕的光栅后, 将不同波长的光色散成连续光谱。具有波长范围宽、色散均匀、分辨本领高等优点。
c. 吸收池(比色皿) 用于盛装被测试液和参比溶液。按制作材料不同分为石英吸收池和玻璃吸收池。
d. 检测器作用: 是将光强度信号转换为可测电信号, 常见检测器有光电池和光电管。光电池: 国产581-G型光电比色计及72型分光光度计。
与目视比色法相比, 光度法的特点: ① 灵敏度高;10-5 ~ 10-6mol/L ② 准确度较高; ③ 仪器设备较简单, 操作简便、快速； ④ 应用广泛。
(2) 光的性质和物质的颜色光的性质: 光是一种电磁波, 具有波粒二象性。光的波动性可用波长来描述, 其单位常用纳米(nm) 表示, 波长越短, 能量越高。
具有同一波长的光称为单色光,由不同波长光组成的光称为复合光。
互补色光: 若将两种颜色的光按适当的强度比混合可成白光, 那么这两种光称为互补色光。
物质的颜色: 物质对光的吸收是具有选择性的。当一束白光通过溶液时, 若溶液对各种色光都不吸收, 则白光全部通过, 溶液呈无色透明; 若各种色光几乎全被吸收, 则溶液呈黑色; 若溶液只吸收某种色光, 则溶液呈透过光的颜色, 也就是说, 溶液呈吸收光的互补色光的颜色。
(2) 吸光系数当b以cm, c以g/L为单位, K为吸光系数, 用符号a表示, 单位为L/g · cm A=abc 当b以cm, c以mol/L为单位时, K为摩尔吸光系数, 用符号ε表示, 单位为L/ mol · cm A=εbc a a与ε的关系: M

无机及分析化学完美版PPT

分析化学在工农业生产和科学实验等方面应用广泛。
13
分析化学发展
进入20世纪，经历了三次巨大的变革：
* 第一次在世纪初，物理化学溶液理论的发展，建
立了四大平衡理论，由一种技术发展为一门科学。 * 在第二次世界大战前后，物理学和电子学的发展，
促使了各种仪器分析方法的发展。
*自20世纪70年代以来，以计算机应用为主要标志的
❖ 物质处于永恒的运动中； ❖ 一切自然科学（包括化学）都是以客观存
在的物质世界作为它考察和研究的对象
3
化学研究的对象与内容
❖ 化学是一门在原子、分子或离子层次上研 ——The Central,Useful and Creative
无机化学家不是单纯地提供实验结果而是也在不遗余力地进行理论探索。化学实验是人们认识物质化学性质，揭示化学变化规律和检验化学理论的基本手段。重要元素简介：即教材第十七章和第十八章。因此，无机化学的研究任务异常繁重, 但同时也说明它是一门丰富多彩具有无限发展前途的学科。
* 产生新的边缘学科。如:有机金属化合物化学、无机固体化学、物理无机化学、生物无机化学和无机生物化学.
12
§0.3 分析化学简介
分析化学的任务和作用
分析化学的任务是确定物质的化学组成，测量各组成的含量以及表征物质的化学结构。它们分别隶属于定性分析、定量分析和结构分析研究的范畴。
分析化学是化学研究中最基础、最根本的领域之一。
究物质的组成、结构、性质、变化及其内 * 发展总趋势：从基本上是从描述性的科学向推理性的科学
*自20世纪70年代以来，以计算机应用为主要标志的前三部分是学习该门课程要重点掌握的内容，也是网络课程的讲授内容，有多媒体课件和习题，考试内容都在这三部分。因此，无机化学的研究任务异常繁重, 但同时也说明它是一门丰富多彩具有无限发展前途的学科。化学实验是人们认识物质化学性质，揭示化学变化规律和检验化学理论的基本手段。

无机及分析化学——分光光度法

测定时，选择多大波长的入射光需由实验决定，一般可从手册上查得，也可用不同波长光通过待测溶液，测量其吸光度绘制成吸收曲线，测量时选择其最大吸收波长(λMax)作为入射光波长，但在λMax时若有干扰物质共存时也可选择其它波长
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四、物质颜色的本质
物质对光的选择性吸收与物质内部结构有密切关系。物质
剂化作用或离解或异构化都会引起偏离朗伯比耳定律。 Cr2O72-(橙色)+H2O=2CrO42- (黄色) +2H+ 3、入射光的非单色性。一般分光光度计失光系统获得的不
并非严格的单色光，而是有一定半宽度的复合光。
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二、偏离朗伯-比耳定律的原因(2/2)
现假定入射光为λ1和λ2的两单色光组成的复合光。则有
1、光源：W灯(波长320～2500nm)；氢灯(波长180～ 375nm) 同时应包括稳压电源，以保证光强一致。
2、单色器：最简单的是滤色片，已不常用。现主要有二类（1）棱镜：入射狭缝-准直透镜-棱镜-聚焦透镜-出射狭缝
◎→○→△→○→◎ 单色光纯度常用半宽度表示，棱镜分光可得10nm左右。玻璃棱镜可透过350～3200nm的光石英棱镜可透过185～4000nm的光（2）光栅：这是由不的干涉和衍射原理制成的色散器件，
第十八章分光光度法
本章主要内容
第一节、分光光度法概论第二节、朗伯-比耳定律第三节、紫外-可见分光光度计第四节、显色反应及显色条件第一节主要内容
一、一般分析过程及特点二、物质对光的选择性吸收三、物质呈现颜色的本质
返回
一、一般分析过程及特点
吸光度 A lg I0 K"C It
3、朗伯-比耳定律
吸光度 A lg I0 KbC b C 其中：C为溶液浓I度t (mol/L)，

分析化学--分光光度法

D。减少，不变
答案： A
3、下列表述不正确的是
A。吸收光谱曲线，表明了吸光度随波长的变化关系
B。吸收光谱曲线中,最大吸收处的波长为最大吸收波长
C。吸收光谱曲线，以波长为纵坐标,以吸光度为横坐标
D。吸收光谱曲线，表明了吸光物质的吸收特性
答案： C
4、影响有色物质摩尔吸收系数的因素是
1-2 光的吸收定律
一、朗伯-比尔定律
1、朗伯定律（Lambert’s Law）：
1760 Lambert通过实验发现电磁被物质吸收时，透过能量呈指数减少。假定一辐射能通过光路后被吸收25%，再通过下一个光路时被吸收0.75×25%，剩56.25%,
依次类推，在无限大的光路中
有关。浓度愈大，颜色愈深。因此，可以用比较颜色的深浅来测定物质的
浓度，这种测定分析方法称为比色析分法。
C
一、吸光光度法
1、定义：基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法。它包括比色法，可见分光光度法，紫外分光光度法及红外分光光度法。
2、特点：
（1）灵敏度高：常用于测量1%~1‰的微量组分，还可测定10－4 ~10－6的痕量组分。
练习题
1、人眼能感觉到的光称为可见光，其波长范围是
A。400-800nm
B。200-320nm
C。200-800nm
D。200-1000nm
答案： A
2 、符合比尔定律的一有色溶液，当其浓度增大时，最大吸收波长和吸光度分别是
A。不变，增加
B。不变，减少
C。增加，不变
玻璃棱镜：400－700nm
石英棱镜：200－1000nm
c 光栅：利用光的衍射和干涉原

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Hale Waihona Puke 真空紫外 X-射线 -射线
190－400nm
2
2. 可见吸收光谱
绿 •单色光：单一波长光
•复合光：复合波长光
•互补光：处于同一直线上的两种光。 •互补光按一定强度比例混合，光。
黄
青
橙
白光
青蓝
红
蓝
•溶液颜色：即得白互补光的颜色。
紫
光的互补色示意图
3
3. 吸收光谱曲线
透过率：某波长的光通过含有紫外-可见光吸收的溶液后，没有被吸收（透过）的光的比例。吸光度：某波长的光通过含有紫外-可见光吸收的溶液后，被吸收的光的比例。吸收光谱曲线：溶液对不同波长光的吸收强度，即以入射光波长为横坐标，吸光度为纵坐标所做的一条曲线。最大吸收波长：物质对该波长的光吸收最大，即吸收光谱曲线上的最大峰值。
1
二、吸收光谱红 620 － 750nm 1. 光谱区的划分微波
1000um 10um
橙 590 － 620nm 黄 570 － 590nm
远红外近红外
绿 550 － 570nm
青 495 － 550nm 蓝 450 － 495nm 紫 380 － 450nm
波长
100nm
可见光
近紫外
10nm
5
•吸收光谱与发射光谱
分子吸收能量后受到激发，分子就从基态能级跃迁到激发态能级，因而产生吸收光谱。处于激发态的分子返回基态或能级较低的激发态，就会以光子的形式释放能量，从而产生发射光谱。 •紫外-可见吸收光谱分子中的价电子吸收特定波长的光（紫外-可见光）后，从基态跃迁到激发态。
6
§20.2
4
4. 物质吸收光的本质 •物质分子的运动状态分子轨道中价电子的高速旋转；原子在平衡位置的振动；分子自身的转动。 •分子的能量
价电子能级的能量＋振动能级的能量＋转动能级的能量
•能级差与对应的光谱
价电子能级间的能量差1-20eV，紫外-可见光的能量；
振动能级间的能量差0.05-1eV，红外光的能量；转动能级间的能量差10-4-0.05eV，远红外光及微波的能量；
12
2. 分光光度计的基本部件
单色器吸收池检测系统结果显示
光源
光源：在可见和近红外区使用钨灯或碘钨灯，波长范围320-2500nm；在紫外区使用氢灯或氘灯，波长范围180-375nm。使用稳压器保证光强稳定。
13
单色器
•色散元件：将连续光谱分解为单色光的元件，如棱镜、光栅； •单色器：由入射狭缝、准直透镜、色散元件、聚焦透镜和出射狭缝构成。 •玻璃吸收紫外光，所以玻璃棱镜仅用于350-3200nm波长范围，
只能用于可见分光光度计；石英（ 185-4000nm ）则可用于整个紫外-可见光区。
•光栅利用光的衍射与干涉作用，其优点是适用波长范围宽、色
散均匀、分辨率高；但其缺点是各级光谱有重叠而产生相互干扰。
14
吸收池（比色池、比色皿）：
•用无色透明、耐腐蚀的光学玻璃或石英制造。 •因玻璃吸收紫外光，所以玻璃吸收池只能用于可见光区。 •杯差：一对比色池对光吸收的差异，实验前要先校杯差。检测系统：光电转换元件（硒光电池、光电二极管）。结果显示部分：直接显示出测定结果的数值（吸光度、透过率等）。
§20.1
概述
一、分光光度法及其特点比色法：利用有色溶液颜色的深度测定该溶液的浓度。目视比色法：用肉眼直接比较样品和标准溶液的颜色深浅。分(吸)光光度法：用光电比色计或分光光度计测量溶液吸光度。
分光光度法的特点：
• 灵敏度高。10-3 －10-6 mol/L。 • 准确度高。相对误差2－5％。 • 仪器设备简单、操作简便。 • 应用范围广。
I0 A lg k c I
•朗伯-比耳定律：
A abc
当b单位为cm，c的单位为mol/L时的吸光系数称摩尔吸光系数（），其单位为cm-1mol-1 L。
的大小与吸光物质的性质、入射波长和温度有关。
8
A= ()bc
思考：摩尔吸光系数如何测定方法朗伯-比耳定律的适用范围：
11
§20.3
比色法和分光光度法及其仪器
1. 光度分析方法
• 目视比色法：
• 光电比色法：用光电比色计测定未知溶液和标准溶液的吸光度。
• 分（吸）光光度法：用分光光度计测定未知溶液和标准溶液的吸光度。
光电比色计用滤光片得到较窄波长范围的入射光；分光光度计用棱镜或光栅做分光元件得到单色入射光。
光吸收的基本定律
• 朗伯定律：一束单色光通过吸光物质的溶液后，光
的吸收程度与溶液液层厚度成正比关系。即：
I0 1 A lg lg k b I T
A为吸光度; I0为入射光强 I为透过光强; T为透光度(率) I0 I
k为比例常数
b为液层厚度（光程长度） b
7
•比耳定律：
一束单色光通过吸光物质的溶液后，光的吸收程度与吸光物质微粒（分子）的数目(浓度c)成正比关系。即：
15
§20.4
显色反应与显色条件的选择
• 许多无机离子无色，即使有色的无机离子也多因吸光系数不
大而无法直接进行紫外-可见分光光度测定；
• 很多有机化合物具有较强紫外或可见光吸收，可直接测定。
显色反应：将无色或吸光系数很小的被测物质与显色
•不仅使用于溶液，也适用于均匀气态吸光物质
和固态吸光物质；
•它是各种吸光光度法定量分析的依据。
9
工作曲线（标准曲线）：测定信号的大小随被测物质浓度变化的曲线，在分
析化学中，要求这一曲线为直线，即测定信号与被
测物浓度成正比。
•理想情况下工作曲线是一过原点，具有一定斜率的直线； •直线的线性范围是有限的；一般的分析方法要求两个数量级以上的线性范围；
•未知样品中被测物的浓度应在工作曲线的线性范围内，否则
测定结果不准确。
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偏离比耳定律：即工作曲线在高浓度端发生偏离。偏离比耳定律的原因： •比尔定律本身的局限性。比尔定律假设了吸光分子之间无相互作用，事实上，在较高浓度下，分子间相互作用不可忽略。
•入射光为非单色光时的偏离。仪器的分光元件（单色器）很难得到真正的单色光，而是波长范围很窄的复合光带，而比耳定律仅在入射光为单色光时才是正确的。 •化学因素引起的偏离。其一是介质不均匀（胶体、乳浊液、悬浮液）而产生折射、散射和反射，使透过光强减弱（A增大）。其二是吸光分子发生化学变化而改变浓度。