项目：维生素B12注射液含量测定[优质PPT]

5.学会pH值检查及注射 剂常规检查。
6.掌握紫外-可见分光光 度法中吸收系数法定量方 法及标示百分含量计算。
7.能正确填写相关检验原 始记录及检验报告单。
8.培养正确操作、仔细观 察、认真记录的良好习惯。
I.能根据样品量及任务 要求计算取样量
2•熟悉注射剂内容物颜 色及其溶解性
3.依据中国药典（二部）， 正确使用紫外-可见分光 光度法进行鉴别。
10.能处理实验中的异 常现象
II.实验后能关闭、清洗、 干燥、贮存仪器
16
维生素
B12注射
液质量检 验
维生素B12注射液质量检验
序 号
项目
（章知识目标
技能目标
教学实施设计
教学方法
教学环境
4
项目 四注
射 剂 质 量 检 验
任
务2
16
维生素
B12注
射液质 量检验
1.学会查阅中国药典（二 部）及相关资料。
2.学会注射剂的一般取样 方法。
3.熟悉注射剂的外观性状 检查及标示量。
4.掌握紫外-可见分光光 度法进行鉴别。
5.依据中国药典（二部附 录），正确进行维生素B12注射液PH值检查
6.依据中国药典（二部附 录）中注射剂项下各项规 定进行操作
7.依据中国药典（二部）， 正确使用紫外-可见分光 光度法测疋本品的标示 百分含量。
8.会选用合适容器将药
品留样，贴好标签，并按 规定期限留样
9.会填写实验记录，并粘 贴取样标志

实验原理
维生素B12注射液含量测定： 标准维生素B12的 E1cm 361nm 207
1%
中国药典2015年版规定：本品维生素B12的灭菌水溶 液，含维生素B12应为标示量的90.0%-110.0%。
实验步骤
1.
参看紫外—可见分光光度计仪器简介和
使用操作部分，熟悉其性能和操作方法。 接通电源，打开仪器，预热20min。
实验步骤

2. 取维生素B12注射液1支（1mL:0.5mg），全部转入
25mL容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，

置于1cm石英比色皿中以蒸馏水作参比溶液， 在波长230nm～580nm的范围内，每间隔20nm测定一次 吸光度，并记录每次测量的吸光度A值，

在最大吸收峰278nm、361nm、550nm附近，每间隔2nm 测量一次，然后绘制A—λ吸收曲线图，确定最大吸收峰 位置，并计算吸光度之比值，进行定性鉴定。
吸收池中用245nm波长的单色光测其吸光度为0.551，
试求维生素C的质量分数。已知 (245nm)标= 560。
实验步骤
3.
依据在361nm处测得的吸光度值，计算
试样中维生素B12的质量浓度。
思考题

1. 紫外—可见分光光度计测定维生素B12含量及定性鉴 定的原理是什么？

2. 称取0.0500g维生素C，溶于0.01mol/L H2SO4溶液中， 然后转移至100mL容量瓶中，稀释至刻度。吸取该溶 液2.00mL，准确稀释至100.0mL。取此溶液在1cm厚的
2018/12/11
实验原理
维生素B12是含有Co的有机化合物，为深红色
结晶或结晶性粉末。其注射液在278±1nm、 361±1nm、550±1nm波长处有最大吸收。

含量。
笃学求真 懿德善能
三、实验原理
结构特点：含钴的卟啉类化合物 临床用途：控制恶性贫血 性状：红色晶体物质
在361nm有最大吸收。 可以采用紫外分光光度法测 定含量。
笃学求真 懿德善能
三、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验原理
吸光系数法
1、配制待测溶液，计算配制浓度的百分浓度Cx；
2、以溶剂作为空白参比，测定待测溶液的吸光度Ax；
3
笃学求真 懿德善能
数据处理
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%

EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
E1% 1cm（样） 207
=
Ax
100%
0.0025 207
笃学求真 懿德善能
笃学求真 懿德善能
3、计算待测溶液的吸收系数
E = 1% 1cm（样品）
Ax Cx
4、计算含量
w%
E1% 1cm（样品）
E1% 1cm（标准）
已知E11c%m（标）=207
笃学求真 懿德善能
四、实践步骤
• 1、维生素B12样品溶液的配制：
准备0.5mg/ml 注射液
取5.00ml
定容至100ml
C样

0.5mg/ml 5.00ml 100.00ml
=0.0025g/100ml
• 2、以纯化水为参比，测定样品溶液的吸光度
• 3、计算样品含量
笃学求真 懿德善能
四、实践步骤
• 3、计算样品含量
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%

EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=

实验十六维生素B12注射液的定性鉴别及定量分析一、实验目的1．掌握定性鉴别的方法和吸光系数法的定量方法；2．熟悉紫外分光光度计的操作方法；3．了解含量测定、标示量的百分含量及稀释度等计算方法。

二、实验原理维生素B12是一类含钴的卟啉类化合物，具有很强的生理作用，可用于治疗恶性贫血等疾病。

维生素B12不是单一的一种化合物，共有七种。

通常所说的维生素B12是指其中的氰钴素，为深红色吸湿性结晶，制成注射液其标示含量有每毫升含维生素B1250、100或500μg等规格。

维生素B12的水溶液在278n m±1nm、361nm±1nm与550nm±1nm三波长处有最大吸收。

药典规定，在361nm波长处的吸光度与278nm波长处的吸光度的比值应为1.70～1.88。

361nm波长处的吸光度与550nm波长处的吸光度比值在3.15～3.45范围内，这为定性鉴别E值（207）为测定注射液的依据。

药典规定，以361nm±1nm处吸收峰的百分吸光系数%11cm实际含量的依据。

三、实验仪器及试剂1．仪器紫外－可见分光光度计、石英吸收池、容量瓶、吸量管。

2．试样维生素B12注射液。

四、实验内容与步骤1．试样溶液制备精密吸取维生素B12注射液样品（100μg/mL）3.0mL，置于10mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得试样溶液。

2．测定将试样稀释液装入1cm石英吸收池中，以蒸馏水为空白，在278nm、361nm波长处与550nm 波长处分别测定吸光度。

五、数据处理1．定性鉴别根据测得的278nm、361nm与550nm波长处的吸光度数据，计算该两两波长处的吸光度比值，并与药典规定的幅度值比较，进行维生素B 12的鉴别。

2．吸光系数法将361nm 波长处测得的吸光度A 值与48.21相乘，即得试样稀释液中每毫升含维生素B 12的微克数。

按照百分吸光系数的定义，每100mL 含1g 维生素B 12的溶液（1％）在361nm 处的吸光度应为207。