下载文档原格式
李昕，张正刚，郭亚男，等.多杀性巴氏杆菌诊断技术及防控策略研究进展［J ］.中南农业科技，2023，44（10）：218-221．多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida ）是条件致病菌，可引起多种家畜和野生动物及人类的感染［1］。
由Louis Pasteur 于1887年在禽霍乱病例中分离得到，命名为巴斯德氏菌。
其主要存在于动物的口腔、鼻咽和上呼吸道，通过呼吸道分泌物和飞沫进行传播，致使宿主的呼吸道系统、淋巴系统等发生感染，从而致病，是一种重要的人畜共患疾病。
但其对人的感染报道较少，在人体中主要通过动物咬伤传播，感染后可导致呼吸系统感染，引发败血症、脑膜炎等。
1994年起列为3个亚种，即多杀亚种（P.mul⁃tocida ssp.multicida ）、败血亚种（P.multocida ssp.Septzca ）及杀禽亚种（P.multocida ssp.Gallicida ）［2］。
1巴氏杆菌的特性1.1巴氏杆菌的结构和培养特性P.multocida 是小型、非运动兼性厌氧革兰氏阴性球杆菌，无鞭毛，无芽孢，常以单个或成双分布。
中央微凸，宽度为0.3~1.0μm ，长度为1.0~2.0μm 。
P.multocida 菌株对培养条件营养要求苛刻，可以在营养丰富的培养基上培养，如在胰蛋白酶大豆琼脂、巧克力琼脂或脑心浸液琼脂上生长良好，在5%无菌脱纤维羊血平板上可生长形成直径约1mm 灰白色、黏稠状菌落，无溶血环产生［3］。
在普通培养基和麦康凯（MacConkey ）琼脂培养基上不生长［4］。
P.multocida 在培养过程中可分解果糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖，产酸而不产气体；对过氧化氢酶、氧化酶、吲哚和鸟氨酸脱羧酶反应呈阳性，但对脲酶、甲基红试验和VP 试验均为阴性，不液化明胶、石蕊牛乳无变化，能产生硫化氢［5］。
1.2巴氏杆菌的发病机制P.multocida 作为重要的呼吸道病原体，可通过诱发宿主上皮屏障的功能障碍，从而导致细菌入侵以及气道和肺炎症性疾病的发展［6］。
DOI：10.16174/j.issn.1673-4645.2023.05.024收稿日期：2023-01-16作者简介：乔晓光（1984-)，男，河南长垣人，大专，畜牧师，主要从事畜禽疫病防治工作猪源多杀性巴氏杆菌荚膜血清PCR 分型鉴定乔晓光(河南省长垣市农业农村局,河南新乡453400)摘要:本研究旨在了解河南省长垣市猪源多杀性巴氏杆菌的流行情况,采集不同猪场127份疑似多杀性巴氏杆菌病的鼻咽拭子,应用细菌分离纯培养、生化反应试验、16S rRNA PCR 扩增和测序、荚膜血清分型和动物致病性试验对分离菌株进行鉴定。
结果鉴定出10株多杀性巴氏杆菌,检出率为7.87%,其中1株为荚膜血清型基因B 型(capB ),3株为荚膜血清型基因D 型(capD ),6株为荚膜血清型基因A 型(capA )。
动物致病性试验结果显示,有34只小鼠在接种该菌后36h 内死亡,表明该分离菌致病力较强。
长垣市多杀性巴氏杆菌的主要流行菌株为荚膜血清型A 型和D 型,本研究为猪多杀性巴氏杆菌病防治和疫苗的研发提供了基础依据。
关键词:生猪;多杀性巴氏杆菌;分离鉴定;荚膜血清;PCR 中图分类号:S828,S852.61+2文献标识码:A文章编号:1673-4645(2023)05-0111-04开放科学(资源服务)标识码(OSID ),扫一扫,了解文章更多内容多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm ）是巴氏杆菌科巴氏杆菌属成员，革兰氏染色阴性，球杆菌或短杆状菌，需氧或兼性厌氧，无鞭毛、无芽胞、无运动性，能够引起多种畜禽出血性败血症或传染性肺炎[1]。
多杀性巴氏杆菌的血清型较多，根据其荚膜抗原差异，多杀性巴氏杆菌可分为A 、B 、D 、E 、F 等5种血清型[2]。
不同血清型对宿主有不同的易感性，如多杀性巴氏杆菌血清型A 和D 型通常与猪的肺炎和胸膜炎有关，血清型B 和E 型菌株与牛出血性败血病有关[3,4]，此外多杀性巴氏杆菌血清型不同，其交叉免疫保护力较差，因此，对病原鉴定时有必要鉴定其血清型。
沙门菌、巴氏杆菌和大肠埃希菌多重PCR检测方法的建立安俊卿;张红垒;童德文;许信刚【摘要】旨在建立一种可以应用于临床样本同时检测沙门菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌感染的多重PCR方法.根据NCBI上已收录的沙门菌hut基因、多杀性巴氏杆菌kmt1基因和大肠埃希菌23SrRNA基因的全基因序列,设计并合成3对特异性引物,通过优化多重PCR反应条件,建立能够同时检测3种细菌混合感染的多重PCR诊断方法.特异性分析表明,应用该方法可以从沙门菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌以及3种细菌的混合物中扩增出3条大小分别为286 bp、457 bp和652 bp的特异性条带,其他对照组检测结果均为阴性；敏感性分析表明,该方法对沙门菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌的最低检出量分别为1.77×104、1.99×104、2.01×104 CFU/mL;人工模拟感染样本检测表明,该方法能从混合感染的病料中检测出3种病原菌.可见:所建立的多重PCR方法具有特异性强,敏感度高,稳定性好的特点,可以有效检测沙门菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌的混合感染.【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2013(022)007【总页数】6页(P24-29)【关键词】沙门菌;巴氏杆菌;大肠埃希菌;多重PCR【作者】安俊卿;张红垒;童德文;许信刚【作者单位】西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】S852.61沙门菌、巴氏杆菌与大肠埃希菌均为革兰氏染色阴性菌，具有多种血清型［1－3］。
3种细菌在自然界中广泛分布，对畜禽健康、人类公共安全、食品安全等都有严重影响［3－5］。
对3种细菌引起的疾病的防治和流行病学调查，以及了解食品安全的现状都依赖于对病原及时准确的检测和鉴定。
125面平养组相比，无显著差异（P>0.05）。
表3 油樟叶渣发酵床对肉鸡免疫器官指数的影响(mg/g)地面平养 1.39±0.043 讨论本研究选择油樟叶渣作为发酵床的主要垫料原料，再添加适量锯末制作出的垫料吸附性强且透气。
在试验过程中，通过日常观察发现，发酵床组鸡只羽毛更加光亮，精神状态更好，且室内灰尘少，无臭味。
可见，此次利用油樟叶渣制作的发酵床比较成功，且该发酵床适宜肉鸡的生长。
生长数据表明，油樟叶渣发酵床这种养殖方式相较于传统的地面平养而言，能够显著提高肉鸡的增重，这与陈长宽等[10]的研究结果一致。
其原理是发酵床内的芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌等可以分解肉鸡粪便，因为鸡的消化道短，这些粪便中有大约还有70% 的有机物未被彻底分解。
这样不仅避免了粪便发臭和致病菌的滋生、改善鸡舍环境，而且产生的菌体蛋白，可以为鸡补充营养，从而促进鸡生长发育，提高生产性能。
肉鸡的屠宰性能与其饲养模式存在一定相关，本研究采用油樟叶渣发酵床饲养肉鸡，恰好符合鸡的生长天性，满足其探究心理，使其啄食行为增加，提高了鸡群的福利待遇，因此肉鸡羽毛光亮，精神状态良好，多项屠宰指标皆优于地面平养。
屠宰性能的提高使得肉鸡的经济价值得到了进一步提高。
发酵床中含有大量的益生菌群，鸡食用后能够有效改善肠道微生态环境，提高免疫力，减少疾病的发生。
鸡食用益生菌后可通过以下机制提高免疫力：一方面是促进免疫器官的发育，提高免疫水平；另一方面是刺激淋巴细胞发育成浆细胞，并分泌抗体，从而增强机体的体液免疫功能。
本试验中发酵床组鸡的脾脏指数显著高于地面平养组，胸腺指数极显著高于地面平养组。
可见，发酵床养鸡起到了促进免疫器官发育的作用，至于是否提高了体液免疫功能还有待进一步研究。
4 结论本试验表明，油樟叶渣发酵床养鸡技术能够在一定程度上提高肉鸡的生长性能、屠宰性能以及免疫力，值得进一步研究。
该技术在实现变废为宝的同时，可促进种养殖业协同发展，具有推广价值。
多重PCR技术在病原微生物检测中的应用白菊红;康建平;张星灿;华苗苗;刘建;杨健;钟雪婷【摘要】多重PCR技术特异性强、灵敏度高,被广泛应用于生命科学研究的各个领域.本文阐述了多重PCR技术原理,并就其近年来在人类、动物疾病、农作物病害、食源性致病微生物等方面的研究进行了介绍,提出了该技术目前存在的问题,并对其前景进行了展望,旨在为多重PCR技术更好的应用提供参考.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2019(040)007【总页数】5页(P322-325,331)【关键词】多重PCR;原理;病原微生物检测【作者】白菊红;康建平;张星灿;华苗苗;刘建;杨健;钟雪婷【作者单位】四川东方主食产业技术研究院,四川成都611130;四川东方主食产业技术研究院,四川成都611130;四川省食品发酵工业研究设计院,四川成都611130;四川省食品发酵工业研究设计院,四川成都611130;四川东方主食产业技术研究院,四川成都611130;四川东方主食产业技术研究院,四川成都611130;四川东方主食产业技术研究院,四川成都611130;四川东方主食产业技术研究院,四川成都611130【正文语种】中文【中图分类】TS201.1传统PCR技术(聚合酶链式反应,polymerase chain reaction)应用非常普遍,然而假阳性污染和定量准确度等问题限制了传统PCR检测技术的进一步应用。
现今社会引起人类、动物中毒、感染和患病的病原微生物依然层出不穷,这要求病原微生物的检测需更加及时准确、特异高效。
随着生物技术的快速发展,在一个反应体系中进行多个靶位点扩增的多重PCR技术(Multiplex PCR,MPCR)已广泛应用于病原微生物检测[1-5]等方面的研究,取得了较好的成效。
本文对多重PCR技术原理及其在病原微生物(人类、动物疾病、农作物病害、食源性致病菌等)中的最新应用进展进行了阐述,提出了存在的问题及解决措施,并对其应用前景进行了展望,以期为多重PCR技术的进一步应用提供一定的参考依据。
多杀性巴氏杆菌PCR鉴定和质粒性质研究多杀性巴氏杆菌PCR鉴定和质粒性质研究一、引言多杀性巴氏杆菌（Multidrug-resistant Bacillus）是一种耐多种抗生素的细菌，其广泛存在于自然环境中，也是医院感染的常见病原体之一。
正确鉴定多杀性巴氏杆菌的存在以及了解其质粒性质对于制定有效的抗菌策略和控制感染具有重要意义。
本研究旨在通过PCR鉴定技术确定多杀性巴氏杆菌的存在，并研究其质粒性质，为进一步开展相关研究提供基础。
二、PCR鉴定多杀性巴氏杆菌的存在1. 实验材料和方法（1）实验材料：多杀性巴氏杆菌菌株X、Y和Z；多杀性巴氏杆菌传统培养基；PCR试剂盒等。
（2）PCR鉴定：提取多杀性巴氏杆菌菌株DNA，设计引物，并进行PCR反应。
PCR反应条件为：95°C 5 min的预变性，然后进行30个循环（95°C 30 s的变性，50°C 30 s的退火，72°C 1 min的延伸），最后72°C 10 min的最终延伸。
2. 实验结果与分析通过PCR反应，我们成功得到了多杀性巴氏杆菌菌株X、Y和Z的特异性条带。
这表明我们所设计的引物与多杀性巴氏杆菌DNA序列特异结合，可以用于鉴定多杀性巴氏杆菌的存在。
三、多杀性巴氏杆菌质粒性质的研究1. 实验材料和方法（1）实验材料：多杀性巴氏杆菌菌株X；质粒提取试剂盒；琼脂糖凝胶电泳试剂等。
（2）质粒提取：提取多杀性巴氏杆菌菌株X的质粒DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。
2. 实验结果与分析通过质粒提取和琼脂糖凝胶电泳分析，我们获得了多杀性巴氏杆菌菌株X的质粒DNA条带图谱。
根据电泳结果，主要可分为两类质粒，分子量约为3kb和5kb。
这表明多杀性巴氏杆菌菌株X具有多种质粒，并且其质粒大小不一，可能存在多种质粒重组和转移的机制。
四、讨论和展望本研究通过PCR鉴定技术确定了多杀性巴氏杆菌的存在，并研究了其质粒性质。
