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生物化学实验指导实验一蛋白质的性质实验（一）（呈色反应）一、目的1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接方式。
2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、虽色反应：(一)双缩脱反应：1.原理：尿素加热至180℃左右生成双缩脲并放出一分子氨。
双缩脲在碱性环境中能与cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。
可用于蛋白质的定性或定量测定。
一切蛋白质或二肽以上的多肽部有双纳脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
2.试剂：(1)尿索： 10克(2)10%氢氧化钠溶液 250毫升(3)1%硫酸铜溶液 60毫升(4)2％卵清蛋白溶液 80毫升3.操作方法：取少量尿素结晶，放在干燥试管中。
用微火加热使尿素熔化。
熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。
冷后，加10％氢氧化钠溶液约1毫升，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。
观察出现的粉红颜色。
避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
向另一试管加卵清蛋白溶液约l毫升和10％氢氧化钠溶液约2毫升，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇，观察紫玫色的出现。
(二)茚三酮反应1.原理：除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
该反应十分灵敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分于和氨缩合生成有色物质。
反应机理如下：此反应的适宜pH为5—7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
2.试剂：(1)蛋白质溶液 100毫升2％卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液(蛋清：水＝1：9)(2)0.5％甘氨酸溶液 80毫升(3)0.1％茚三酮水溶液 50毫升(4)0.1％茚三酮—乙醇溶液 20毫升3.操作方法：(1)取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升，再各加0.5毫升0.1％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告(1)氨基酸的分离鉴定纸层析法生物化学实验报告一、实验目的通过纸层析法将混合氨基酸分离并鉴定其种类及含量。
二、实验原理纸层析法的原理是根据化合物的物理化学性质在纸质或硅胶薄层中移动的速度不同，从而实现对混合物中各种物质的准确分离。
对于氨基酸而言，其分子结构均包含有羧基和氨基，因此都是具有弱酸和弱碱性的。
通过没食子酸和氯化钠的混合缓冲液，可使氨基酸在纸层析板上逐渐向上移动，从而实现了混合氨基酸的分离。
三、实验步骤1. 准备滤纸、混合氨基酸标准溶液、混合缓冲液、酸性洗涤液、碱性洗涤液及定量分装棒。
2. 在滤纸的底端画一个以棕色标识的线，表示样品的注入位置。
3. 用定量分装棒把混合溶液从注入位置滴入滤纸中，约需滴入 5 μl。
4. 将悬浊液放在平台上，加入具有吸附性但不溶于缓冲液的薄层纸片，等待它变成透明状态。
5. 将滤纸放入盒中，使其完全覆盖盒底，并加入混合缓冲液。
6. 等待溶液上升至顶端时立即取出滤纸，并在溶液升至预定高度后标注液位高度。
7. 筛选并选择相应的染色剂将其喷在纸层析板上，以便于观察分离效果。
四、实验分析通过对实验纸层析图的分析，可以确定混合溶液中所含有的氨基酸种类及各种氨基酸的比例。
在该纸层析图上，靠近底部的区域标示着杂质的位置，应当忽略不计。
通过纸层析图，我们得到了以下氨基酸的分离和鉴定结果：1. Alanine（6μg）2. Leucine（4μg）3. Isoleucine（3μg）4. Phenylalanine（1μg）5. Tyrosine（1μg）六、实验结论通过实验结果表明，纸层析法能够成功地将混合溶液中的氨基酸分离，并且通过染色剂的辅助，可以更加清晰地看到氨基酸的分散情况。
此外，通过对实验结果的分析，我们可以得出混合溶液中所含有的各种氨基酸的种类及含量，为进一步的实验提供了帮助和指导。
生化实验室的一般规则1. 进入实验室应穿着工作服。
留长发的同学应挽短、戴帽。
2. 整洁。
实验台必须洁净，各种仪器放置要有秩序。
实验完毕，必须将仪器洗净、放好，拭净台面，方可离开实验室。
3. 安静。
实验时不可谈笑，如有问题可以小声请教师解答。
4. 废物及废液处理。
实验完的废液应倾入水槽中，并用水冲净。
但浓酸、浓碱及氰化物等不可倒入水槽，应倾入预先准备的废液盆或污物桶中。
少量浓酸、浓碱可直接倾入水槽，然后以大量流水冲净。
火柴梗、废滤纸、棉花等不可扔入水槽，应弃入废物盆或垃圾箱中，以免堵塞水管。
5. 试剂与标准溶液。
取用试剂后，应立即将瓶塞盖好；放回原处。
取用有毒试剂时，须用滴定管或滴管。
取样时，应注意用多少取多少。
如未用完只可弃去，不可倒回瓶中；6. 凡可产生烟雾或有毒气体的实验必须在通风橱中操作。
7. 在用恒温水浴箱保温时，应注意随时盖好箱盖。
调节温度到所需温度后，即不再旋动调温旋扭。
8. 贵重仪器如分光光度计、离心机等必须爱护，使用前应熟读使用方法，记住操作要点，按操作规程工作。
如有问题应请教师帮助，不得自行拆卸检修。
9. 防火。
勿使酒精、乙醚或其它易燃试剂靠近火焰。
若蒸发此类溶液时，应用水浴，不得直火加热，以免发生火灾。
10. 实验前应熟读实验指导，记住要点。
实验时应仔细操作并注意观察现象及结果，及时记录。
生化实验的基本操作-1-一、玻璃器皿的洗涤玻璃器皿的洗涤在生物化学实验中是一项重要的工作。
实验性质不同所采取的洗涤方法也不同。
例如研究酶制备的反应时，组织匀浆对金属的污染是非常敏感的，至于细菌的悬浮液对少量的金属可能不敏感，但少量的维生素和其它有机物质则有较大的影响。
一般氧化剂洗液如重铬酸洗液不能有效地除去油脂、硫酸钡等污迹。
因此污迹不同所应采用的洗涤试剂和方法也不同。
如可用汽油或洗涤剂（洗衣粉液或洗洁净）除去油脂，用酸性硫代硫酸钠溶液或热草酸除去氧化性污迹MnO2等，用40％尿素除去附着管内壁的血凝块等。
茶叶生物化学(含实验)DOCX（一）茶叶生物化学 (含实验)引言概述茶叶是一种被广泛饮用的饮品，也是中国传统文化中的重要组成部分。
茶叶中含有丰富的生物化学成分，这些成分不仅赋予了茶叶独特的香气和口感，还对人体健康具有一定的益处。
本文将对茶叶的生物化学成分进行探讨，并介绍与茶叶相关的实验。
一、茶叶中的多酚类化合物茶叶中含有丰富的多酚类化合物，包括儿茶素、黄酮类化合物和茶多酚等。
这些化合物具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤和降低心血管疾病风险等生物活性。
1. 儿茶素 1.1 儿茶素的分类 1.2 儿茶素对人体健康的影响 1.3 儿茶素的提取方法2. 黄酮类化合物 2.1 黄酮类化合物的种类和分布 2.2 黄酮类化合物的生物活性 2.3 黄酮类化合物的检测方法3. 茶多酚 3.1 茶多酚的种类和含量 3.2 茶多酚的生物活性 3.3 茶多酚的提取和分离方法二、茶叶中的咖啡因咖啡因是茶叶中的重要成分之一，具有兴奋神经系统、提神醒脑的作用。
了解茶叶中咖啡因的含量及其释放规律对于合理饮用茶叶具有重要意义。
1. 咖啡因的含量测定 1.1 咖啡因的提取方法 1.2 咖啡因的定量分析方法2. 咖啡因的释放规律 2.1 不同种类茶叶中咖啡因的释放规律 2.2 咖啡因在体内的代谢过程 2.3 咖啡因对人体的影响三、茶叶中的氨基酸氨基酸是茶叶中的重要组成部分，不仅赋予了茶叶特有的香气和口感，还对茶叶的品质具有重要影响。
1. 主要氨基酸类别 1.1 茶叶中常见的氨基酸 1.2 氨基酸在茶叶中的作用2. 氨基酸的分析与检测 2.1 氨基酸的提取方法 2.2 氨基酸的定量分析方法四、茶叶中的挥发性成分茶叶的香气来自于其中存在的挥发性成分，这些成分不仅赋予了茶叶特有的芳香，还对人体健康具有一定的影响。
1. 主要挥发性成分 1.1 茶叶中常见的挥发性成分 1.2 挥发性成分与茶叶的香气关系2. 挥发性成分的分析与检测 2.1 挥发性成分的提取方法 2.2 挥发性成分的定性和定量分析方法五、茶叶的发酵过程及影响因素茶叶的发酵过程是指茶叶中的一些化学成分在微生物和酶的作用下发生变化的过程，这个过程对茶叶的品质和风味具有重要的影响。
生物化学物理实验初中教案实验目的：1. 学习生物组织中糖类、脂肪和蛋白质的检测方法。
2. 培养学生的实验操作能力和观察能力。
3. 加深对生物大分子的理解。
实验原理：1. 糖类的检测：使用费林试剂，与还原性糖反应生成红色沉淀。
2. 脂肪的检测：使用苏丹Ⅲ染液，与脂肪反应呈橘黄色。
3. 蛋白质的检测：使用双缩脲试剂，与蛋白质反应生成紫色复合物。
实验材料：1. 生物组织样本（如苹果、花生、鸡蛋等）。
2. 费林试剂。
3. 苏丹Ⅲ染液。
4. 双缩脲试剂。
5. 显微镜。
实验步骤：1. 糖类的检测：a. 取一小块苹果组织，放入试管中。
b. 加入适量的费林试剂。
c. 加热试管，观察是否出现红色沉淀。
2. 脂肪的检测：a. 取一小块花生组织，制成临时装片。
b. 用显微镜观察花生组织中的脂肪滴。
c. 加入适量的苏丹Ⅲ染液，观察颜色变化。
3. 蛋白质的检测：a. 取一小块鸡蛋组织，放入试管中。
b. 加入适量的双缩脲试剂。
c. 观察是否出现紫色复合物。
实验结果：1. 糖类的检测：苹果组织与费林试剂反应生成红色沉淀。
2. 脂肪的检测：花生组织中的脂肪滴被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色。
3. 蛋白质的检测：鸡蛋组织与双缩脲试剂反应生成紫色复合物。
实验讨论：1. 解释糖类、脂肪和蛋白质在生物组织中的作用和分布。
2. 讨论实验结果与预期的一致性。
3. 探讨实验中可能出现的误差和解决方法。
实验作业：1. 总结实验原理、步骤和结果。
2. 写一篇短文，描述实验过程中的观察和思考。
实验评价：1. 学生实验操作的准确性和规范性。
2. 学生对实验结果的分析和讨论能力。
3. 学生完成实验作业的质量。
注意事项：1. 实验过程中要严格遵守实验室安全规定。
2. 实验器材要清洗干净，避免交叉污染。
3. 显微镜使用时要轻拿轻放，避免损坏。
通过本实验，学生可以深入了解生物组织中糖类、脂肪和蛋白质的检测方法，培养实验操作能力和观察能力，加深对生物大分子的理解。
同时，实验也培养了学生的团队合作意识和科学思维。
实验一生物组中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定一、教材分析：1．该实验是高中阶段生物课程的第一个实验。
从此以后生物化学方面的内容增加。
本实验的操作技能的学习为以后该类型实验打好基础，一定要强调规范化操作方法。
2．低高倍镜的使用、徒手切片、临时装片等技能，学生经初三、高一两年的搁置，已显生疏。
实验时教师可考虑予复习，或通过演示提醒学生，注意规范操作要领。
3．本实验难度并不大，但由于内容较多、实验时间长，必须作周密安排才能完成。
如实验中教师应做好学生的分工合作可缩短实验时间。
同时又能培养学生的合作精神。
二、教学目标：知识目标：阐明实验原理—颜色反应，识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。
能力目标：培养学生主动获取知识，应用知识分析现象，归纳总结的能力，培养学生实际操作的能力及从现象出发探求事物本质的能力。
情感与价值目标：通过亲手实验体验科学家严谨治学的科学态度，培养实事求是的世界观。
三、教学重点：掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
四、教学难点：实验内容较多，实验时间长，必须周密安排，才能按时完成。
学生要分工合作、教师指导演示。
五、材料用具：实验材料：葡萄糖液、苹果组织液，植物油滴、浸泡过的花生种子或新鲜的花生种子，鸡蛋蛋白稀释液、黄豆组织液。
仪器：徒手切片刀，试管架，试管夹，大小烧杯，小量筒，滴管，酒精灯，三脚架，石棉网，火柴，载玻片，盖玻片，毛笔，吸水纸，显微镜。
试剂：斐林试剂，苏丹Ⅲ染液或苏丹Ⅳ染液，双缩脲试剂A、双缩脲试剂B，体积分数为50％的酒精溶液，蒸馏水。
六、教学过程：（一）实验原理讲解：1．可溶性还原糖鉴定原理生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。
前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有，为非还原糖。
实验一 蛋白质和氨基酸的呈色反应一、目的要求验证蛋白质特性；学习和掌握蛋白质呈色反应的原理和方法；学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
二、实验原理蛋白质中的某些化学键或氨基酸残基中的某些化学基团可以与某些特殊试剂形成特定的有色物质。
这些反应称为蛋白质的呈色反应。
各种蛋白质的氨基酸残基不完全相同。
因此，呈色反应产物的颜色也不完全一样。
呈色反应不是蛋白质所特有，一些非蛋白物质也能呈现类似的呈色反应。
因此，不能仅以呈色反应结果来判别被测物质是否为蛋白质。
三、呈色反应双缩脲反应1.原理两分子尿素经加热至180°C 后可以缩合成一分子双缩脲，并放出一分子氨。
双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成紫红色络合物，此反应称为双缩脲反应。
多肽及所有蛋白质均具有肽键，与双缩脲分子中亚酰胺键结构相同，也能发生此反应，因此，蛋白质在碱性溶液中与铜离子也能呈现出类似于双缩脲的颜色反应。
2.器材与试剂1)器材试管、药匙、电炉、试管夹、滴管。
2)试剂〈1〉蛋白质溶液(10%卵清蛋白溶液)：吸取鸡蛋清溶液10ml ，加蒸馏水稀释，定容至100ml 。
〈2〉10%氢氧化钠溶液。
〈3〉1%硫酸铜(CuSO4)溶液。
〈4〉0.1%甘氨酸(Gly)溶液：称0.1g 甘氨酸溶于蒸馏水中，稀释至100ml 。
〈5〉结晶尿素。
3.实验步骤双缩脲反应实验1234尿素＋加热后的尿素＋蛋白质溶液/滴30.1%Gly/滴310%NaOH/滴55551%CuSO 4/滴1111显色现象试管试剂/滴(1)制备双缩脲：取结晶尿素少许(约火柴头大小)，放入干燥的小试管中。
微火加热至尿素熔解至硬化，刚硬化时立即停止加热，尿素放出氨，此时双缩脲即已形成。
冷却后作为双缩脲样品(1号管)。
(2)另取3支试管，与1号管一起按表加样，混匀，观察各管颜色变化，记录结果并解释现象。
茚三酮反应1.原理蛋白质或氨基酸在弱碱性条件下，其上的氨基与茚三酮共热可产生蓝紫色缩合物。
最新生物化学设计性实验报告实验目的：本实验旨在通过设计性实验，探究特定生物化学过程的机制和特点，验证理论假设，并培养学生的科研能力和实验技能。
实验背景：生物化学是研究生物体化学组成、化学变化及这些变化与生物体功能之间关系的科学。
设计性实验是生物化学教学和研究中的重要组成部分，它能够帮助学生更好地理解生物化学的基本概念，并通过实践活动加深对知识的掌握。
实验材料：1. 酶类样品2. 底物溶液3. 缓冲液4. 酶活性测定试剂盒5. 分光光度计6. 离心机7. 微量移液器8. 试管和比色皿9. 冰浴和恒温水浴实验方法：1. 预实验：首先对酶样品进行纯化，并通过酶活性测定初步了解其活性范围。
2. 实验设计：根据预实验结果，设计一系列实验，包括不同pH值、温度、底物浓度对酶活性的影响。
3. 实验操作：a. 准备一系列不同pH值的缓冲液，并调整酶样品和底物溶液至相应pH值。
b. 在不同温度下（如25℃、37℃、50℃）测定酶活性，记录数据。
c. 改变底物浓度，观察米氏常数（Km）和最大速率（Vmax）的变化。
4. 数据分析：利用图表和统计学方法分析实验数据，得出酶活性与实验条件之间的关系。
实验结果：1. pH值对酶活性的影响图显示，酶活性在特定pH值下达到最大，而在过高或过低的pH值下活性显著降低。
2. 温度对酶活性的影响图表明，酶活性随温度升高而增加，但在接近50℃时急剧下降，表明酶可能发生变性。
3. 底物浓度实验结果显示，当底物浓度增加到一定程度后，酶活性趋于平稳，计算得到的Km值与文献值相近。
讨论与结论：通过本实验，我们验证了酶活性受pH值、温度和底物浓度的影响。
实验结果与理论预期相符，表明设计性实验是理解和掌握生物化学原理的有效手段。
同时，实验过程中可能出现的误差和问题也为我们提供了宝贵的学习和改进机会。
菠萝蛋白酶的提取纯化及化学修饰对其活性的影响
一、目的要求
1、掌握从原料物中提取活化分离菠萝蛋白酶的方法。
2、学习酶活力测定的方法。
3、了解某些因素对菠萝中菠萝蛋白酶热稳定性的影响。
4、掌握用聚乙二醇对菠萝蛋白酶进行化学修饰的原理。
5、比较修饰酶与未修饰酶的活力。
二、实验原理
1、本实验先从新鲜的菠萝汁中使用单宁沉淀法提取出菠萝蛋白酶，菠萝蛋白酶将酪蛋白水解产生酪氨酸，通过测定吸光度的变化，可以测得菠萝蛋白酶的活力。
2、以陶瓷层析结合超滤法纯化菠萝蛋白酶，吸附材料化学性质好，可用于柱层析。
3、温度恒定时,菠萝中菠萝蛋白的热失活遵循一级蜕变规律dE/dt=-Kd*t,失活半寿期是常数，可以用作衡公菠萝蛋白酶热稳定性的指标。
本实验应用动力学方法，以菠萝蛋白酶的热失活半衰期为热稳定性的指标，定量研究了梭酸盐和Ca2+,Zn2+士对菠萝中菠萝蛋白酶热稳定性的影响，以期找到一种高效、可行的增强菠萝蛋白酶热稳定性的方法。
4、修饰的菠萝蛋白酶对温度和pH值的稳定性均比天然酶有很大程度的提高。
菠萝蛋白酶是一种巯基蛋白酶,但它的稳定性较差,影响了它的应用。
此外,菠萝蛋白酶易受有关因素的影响而失活。
聚乙二醇(PEG) 为一种无毒且具亲水性的免疫惰性大分子，本实验采用聚乙二醇对菠萝蛋白酶进行修饰,提高了其对环境的稳定性,使其半衰期延长。
三、实验材料
（一）试剂和材料
1、新鲜菠萝(0.735kg)、0.1mg/ml牛血清蛋白
2、柠檬酸钠、单宁、0.1%EDTA溶液、1.5%氯化钠溶液、1%酪蛋白溶液、1mol/L 氢氧化钠溶液、0.05mol/L磷酸缓冲液、激活剂
3、Brolain试剂、牛血清白蛋白、0.1mol/L柠檬酸盐缓冲液、PEG活性酯。
（二）实验仪器
1、榨汁机；
2、离心机；
3、紫外可见分光光度计（1cm石英比色皿）；
4、恒温水浴锅（37℃）；
5、试管、试管架；
6、烧杯、容量瓶；
7、移液管；
四、试验方法
（一）从菠萝中提取菠萝蛋白酶
操作步骤：
将菠萝切碎→加柠檬酸钠，榨汁→菠萝汁→纱布过滤→澄清液→2000r/min，7min 离心→上清液→加Vc,0.2%单宁溶液搅拌15min,静置40min4200r/min,5min离心→沉淀物→加100ml0.1%EDTA溶液，200ml1.5%氯化钠液→4200r/min,5min离心→
酶复合物→加适量1.5%氯化钠溶液，4000r/min,7min离心→酶复合物沉淀→冻存备用
（二）菠萝蛋白酶活力的测定
1、取酶制品溶解于0.05mol/L磷酸缓冲液（PH7.0)至10ml,离心得上清液；
2、取5支试管，分别标号1、2、
3、
4、5，各加1ml溶液酶和0.9m激活剂；
3、另取5支试管，分别对应标号1、2、3、
4、5，各加1ml缓冲液和0.9ml激活剂；
4、将10支试管置于37℃水浴；
5、然后按下表操作
试管号 1 2 3 4 5 6 7 8
标准酪蛋
0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0
白
（0.1mg/mL）
待测酶蛋白
0 0 0 0 0 0 0 1.0
（mL）
磷酸缓冲液
1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0
（mL）
考马斯亮蓝
4 4 4 4 4 4 4 4
（mL）
通过测定不同试管中菠萝蛋白酶的吸光度A的值，进而确定酶活力的大小。
（三）聚乙二醇对菠萝蛋白酶的化学修饰
1.1修饰酶的制备
60gPEG6000溶于400mL干燥吡啶,加入1.01g琥珀酸酐后60℃保温2h,然后在60℃减压蒸馏除去溶剂。
加入苯直至残余物溶解,再加100mL冷己烷,4℃振荡2h 过滤,残渣溶于蒸馏水后透析。
PEG活性酯和菠萝蛋白酶按摩尔比50：1投料,加入到0.1molPL柠檬酸盐缓冲液中,4℃反应4h。
产物在pH4.6的柠檬酸缓冲液中透析,冻干后得到白色的PEG-菠萝蛋白酶(修饰酶)。
1.2 TNBS法测定修饰率
取1mL蛋白酶溶液(1mgPmL),加入1mL4 %的碳酸氢钠溶液,1mL10%的十二烷基磺酸钠溶液,20min 后加入1mL0.1%的TNBS 溶液,40℃保温2h ,用0.5mL 1mol/L 的盐酸终止反应。
325nm测光吸收值。
同样浓度蛋白酶溶液在修饰后与修饰前的光吸收值之比即为残留氨基率。
修饰率=1-残留氨基率
（四）某些因素对菠萝中菠萝蛋白酶热稳定性
1.1 菠萝蛋白酶热稳定性实验方法
新鲜菠萝榨汁100mL加人到55℃预保温的一定浓度梭酸盐溶液中，不同保温时间测定菠萝蛋白酶活力，按热失活遵循一级蜕变规律dE/dt=-Kd*t方法求出菠萝蛋白酶的半衰期。
1.2 有机羧酸盐对菠萝蛋白酶热稳定性的影响。
pH7.0时草酸钠对菠萝蛋白酶有明显稳定作用，100 mmol/l草酸钠使tl/2延长6倍，丁二酸、酒石酸甲钠也有一定的保护作用。
醋酸钠、柠檬酸钠、硼酸钠都有一定程度的保护作用，且浓度变化对保护作用的影响不大。
（五）结果与讨论
1、修饰率的测定
测定结果按下式进行计算:修饰率= 1 - 残留氨基率= 1
- 修饰后的光吸收值P修饰前的光吸收值= 1 - 0. 502P0. 887 =
0. 4340 = 43. 40 %
2、菠萝蛋白酶在提取分离和干燥过程中，酶的活性中心巯基易被氧化而使酶活性降低。
在提取过程中适当加入某些抗氧化剂，对阻止酶被氧化失活有良好作用。
作为菠萝蛋白酶活性保护剂，硫代硫酸钠与半胱氨酸组合使用，可获较好的效果。
3、维系酶分子三维构象的作用力包括:氢键、疏水相互作用、静电相互作用、范德华力，有些还包括共价二硫键，蛋白质分子不管是变性、还是增强稳定性，都是通过影响这些作用力来实现的。
但总的来看，氢键、疏水相互作用在增强酶的稳定性方面起着主要作用。
4、本实验通过用琥珀酸酐法活化后的PEG修饰菠萝蛋白酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量,并对其生化性质与混合酶和天然酶进行了对比研究。
所得到的修饰酶在对温度和pH值的稳定性上均比天然酶有一定程度的提高，这说明PEG分子对酶有一定的保护作用,推测这种作用应来自分子间的作用力。
参考文献:
1、赵武岭,吴玮,李藏铭,等. 果实菠萝蛋白酶的动力学研究[J ] . 中国
农业大学学报,1999 ,4(1) :11 - 13.
2、章佩芬,郭勇,罗焕敏. 菠萝蛋白酶的研究与应用进展[J ] . 华西药学
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3母敬郁,麦荫乔,李小梅,等. 甲基化聚乙二醇(5000) 修饰超氢化物
歧化酶的研究[J ] . J. N. Bethuneuniv. Med. ,SCL ,1995 ,2 (12) .
4、梁楚泗,李树瑜,杨政蓓. 毛花猕猴桃蛋白酶的提纯和性质[J ] . 植物
资源与环境,1999 ,8(3) :1 - 6.
（五）结果讨论
从上述结果可知菠萝蛋白酶的比活力较低，可能的原因有：
1、所加入的有机酸单宁的量对菠萝蛋白酶沉淀有的影响；
2、在实验中是否把单宁溶液弄混而导致菠萝蛋白酶很少沉淀析出；
3、菠萝蛋白酶对热不稳定，试验中温度的控制是否合理；
4、在活力测定的步骤中所加入的酪蛋白的量不足，导致结果偏低；
5、在活力的测定步骤中，设置了几个梯度，最后的结果中应该有至少两支试管中的溶液的吸光度的值相同，但本组实验没有得到这种结果。
6、活力测定中，由于操作不当，导致部分沉淀溶解在了上清液中，溶液微浑浊，对吸光度的测定有影响。
