HPLC法测定山楂降脂片中金丝桃苷和熊果酸含量-张秋梅

57第17卷 第2期 2015 年 2 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 17 No. 2 Feb .，2015山楂降脂片是由山楂提取物制成的中药制剂，具有降血脂、降血压、抗心肌缺血、增加冠脉流量等作用。

临床主要用于治疗高脂血症，亦可作为冠心病和高血压的辅助治疗[1-2]。

其主要成分有槲皮素、金丝桃苷、芦丁等黄酮类，熊果酸、山楂酸、齐墩果酸等三萜类[3]，其中金丝桃苷和熊果酸的含量较高[4]。

金丝桃苷具有显著的降血脂、降血压和降胆固醇等功效[5-6]；熊果酸具有抗高血脂、降血糖、阻止严重的高血压病情进展的作用[7-8]。

本文采用高效液相色谱法测定山楂降脂片中金丝桃苷和熊果酸的含量，为山楂降脂片的质量控制提供依据。

1 仪器与试剂1.1 仪器Agilent-1100型高效液相色谱仪；CP225D 型电子天平；UV-3010型紫外-可见分光光度计。

1.2 试药与试剂金丝桃苷对照品，购于中国药品生物制品检定所，批号：111521-201201；熊果酸对照品，购于中国药品生物制品检定所，批号：110742- 200704；山楂降脂片，由辽宁中医药大学附属医院制剂中心生产，批号为120516、120805、121119；流动相用甲醇、乙腈、磷酸为色谱纯，其他试剂和试药均为分析纯。

2 方法与结果2.1 色谱条件Accurasil-C 18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；流动相为乙腈-甲醇-0.5%磷酸（68∶12∶20）；检测波长280 nm；流速为1.0 mL/min；柱温30 ℃；进样量10 μL。

2.2 对照品溶液的制备精密称取金丝桃苷对照品6.3 mg 及熊果酸对照品61.2 mg，分别置于10 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。

再吸取上述两种溶液各5 mL，置100 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备取山楂降脂片10片，精密称定，研细，称取1.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

HPLC法测定山楂降脂片中金丝桃苷和熊果酸含量张秋梅（辽宁中医药大学附属医院，辽宁 沈阳 110032）摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定山楂降脂片中金丝桃苷和熊果酸含量的方法。

方法：采用Accurasil-C 18色谱柱，以乙腈-甲醇-0.5%磷酸（68∶12∶20）为流动相，检测波长为280 nm，流速为1.0 mL/min，柱温30 ℃。

结果：金丝桃苷和熊果酸的进样量分别在0.126~0.63、1.224~6.12 μg 范围内呈良好线性关系；回收率分别为99.70%、99.38%；RSD 分别为0.89%、1.21%。

结论：本方法简便、准确、灵敏度高，可作为山楂降脂片中金丝桃苷和熊果酸的含量测定方法。

关键词：高效液相色谱法；山楂降脂片；金丝桃苷；熊果酸；含量测定中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2015) 02- 0057- 03收稿日期：2014-07-09作者简介：张秋梅（1971-），女，辽宁沈阳人，副主任中药师，研究方向：中药质量分析。

Determination of Hyperin and Ursolic Acid in Shanzha Jiangzhi Tablets by HPLCZHANG Qiumei（Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional ChineseMedicine，Shenyang 110032，Liaoning，China）Abstract：Objective ：To establish the method for determination of hyperin and ursolic acid in ShanzhaJiangzhi Tablets by HPLC. Methods ：Chromatographic column was Accurasil-C 18. The mobile phase was acetonitrile-methano-0.5% phosphoric acid（68∶12∶20）and the detection wavelength was 280 nm with the flow rate of 1.0 mL/min. Column temperature was room temperature. Results ：Hyperin and ursolic acid had good linear relationship in the range of 0.126-0.63 μg and 1.224-6.12 μg with RSD 0.89% and 1.21%，respectively. Conclusion ：The method is simple and accurate with good sensitivity. It is a good method to determine hyperin and ursolic acid in Shanzha Jiangzhi Tablets.Key words：HPLC；Shanzha Jiangzhi Tablets；hyperin；ursolic acid；content determinationDOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2015.02.019 辽宁中医药大学学报 17卷2.4 系统适应性试验分别吸取供试品溶液、阴性对照品及金丝桃苷和熊果酸对照品溶液各10 μL，注入色谱仪，在上述色谱条件下测定，记录色谱图（见图1）。

比较各色谱图可以看出，对照品色谱峰的理论塔板数均大于3000，熊果酸和金丝桃苷具有良好的分离度，且与其邻峰的分离度均大于1.5，阴性无干扰，基线噪音小。

A.金丝桃苷对照品，B.熊果酸对照品，C.样品，D.阴性样品；1.金丝桃苷，2.熊果酸图1 HPLC色谱图2.5 线性关系的考察取金丝桃苷和熊果酸对照品溶液，进样量分别为4、8、12、16、20 μL，记录峰面积。

以金丝桃苷含量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=1 429.8X+50 826，r=0.999 8。

表明黄金丝桃苷含量在0.126~0.63 μg 范围内呈良好线性关系；以熊果酸含量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=3 016.9X+13 538，r=0.999 7。

表明黄熊果酸含量在1.224~6.12 μg范围内呈良好线性关系。

2.6 精密度试验取山楂降脂片（120516），按“2.3”项下供试品溶液方法制备，在上述色谱条件下连续进样6次，每针进样20 μL，测得相应峰面积，求得金丝桃苷和熊果酸的RSD分别为0.92%、1.57%。

表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验取同一供试品溶液，在室温下放置，分别于0、2、4、8、12、24 h在上述色谱条件下进样，测定。

金丝桃苷和熊果酸峰面积的RSD分别为1.05%、1.78%。

表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 重复性试验取同一批样品（120516）6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样，测得金丝桃苷、熊果酸的平均含量分别为0.26、4.63 mg/片；RSD分别为1.31%、1.72%。

表明该方法重复性良好。

2.9 加样回收率试验称取已知含量的山楂降脂片细粉6份，精密称定，每份约0.15 g。

分别准确加入金丝桃苷和熊果酸的对照品溶液适量，按“2.3 供试品溶液的制备”项下方法进行制备，即得供试液。

各进样20 μL，测定，记录色谱图，计算回收率。

金丝桃苷和熊果酸的平均回收率分别为99.70%、99.38%；RSD分别为0.89%、1.21%。

表明方法的准确度良好。

结果见表1。

表1 加样回收率试验结果成分样品含量（mg）加入量（mg）实测量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）金丝桃苷0.13250.13150.263399.599.700.890.13200.13150.2642100.60.13420.13150.264098.70.13530.13150.266499.60.13250.13150.2651100.90.13260.13150.262698.9熊果酸2.3163 2.3172 4.605798.899.38 1.212.3293 2.3172 4.597997.92.3074 2.3172 4.603899.12.3230 2.3172 4.6588100.82.3259 2.3172 4.6454100.12.3201 2.3172 4.628199.62.10 含量测定取3个不同批号（120516、120805、121119）的山楂降脂片，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下各进样20 μL，测定，记录色谱峰面积。

每批测3次。

按外标一点法计算出供试品中金丝桃苷和熊果酸的含量。

见表2。

表2 金丝桃苷和熊果酸含量测定（mg/片）批号金丝桃苷熊果酸成品中含量平均含量成品中含量平均含量1205160.26780.26494.63294.63210.2666 4.63200.2602 4.63121208050.29410.29265.15295.17210.2940 5.16200.2898 5.20121211190.26130.25714.96524.93500.2506 4.89550.2593 4.94433 讨论3.1 流动相的选择考察了不同比例的甲醇-水、乙腈-甲醇-0.1%5859第17卷 第2期 2015 年 2 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 17 No. 2 Feb .，2015壳聚糖中药膜的制备及其薄层色谱鉴别安艳辰1，付正英2，刘真淋1（1.天津中医药大学，天津 300193；2.武警后勤学院附属医院，天津 300162）摘 要：目的：制备壳聚糖中药膜并建立其薄层色谱鉴别方法。

方法：以壳聚糖为成膜载体，黄柏、黄芪、大黄、白及为主要成分，制备壳聚糖中药膜。

并采用薄层色谱法（TLC），对本制剂中的黄柏、黄芪、大黄进行鉴别研究，以其各自的有效成分及阴性对照品进行对照实验。