小鼠胚胎冷冻方案

小鼠精子胚胎冻存保种
将活体品系保存于液氮中，减低活体保种的费用、表型丢失、繁育能力下降等风险。

做到随用随取的快捷操作方式。

胚胎冻存
方法：将超排后的雌鼠与目的雄鼠进行交配，第二天取2细胞进行慢速冷冻，存放于液氮中。

优势：慢速冷冻的胚胎复苏后成活率高（80%以上），且移植后的大小鼠怀孕率及产仔率高。

缺点：操作难度高，需要高昂的程序冷冻仪，操作时间达到6个小时。

精子冻存
方法：将雄鼠处死取出精子通过快速冷冻保存于液氮中
优势：操作速度快，精子保存量大。

缺点：复苏时需要进行体外受精，且受精率低（一般为15%-25%）。

NIH-3T3细胞使用说明书细胞基本信息产品货号YC-A013细胞名称NIH-3T3中文名称小鼠胚胎成纤维细胞细胞形态上皮样，贴壁细胞传代比例1:3~1:5培养体系90%DMEM+10%FBS源井细胞培养未加双抗，客户可视实际情况选择添加。

冻存液体系50%DMEM+40%FBS+10%DMSO特殊备注无细胞接收1)冻存细胞：如果是干冰运输的冻存细胞，收到后请立即转入液氮储存或短暂（24H)放至-80℃冰箱保存，或直接进行细胞复苏。

2)活细胞：如果是T25瓶活细胞运输，收到后用75%的酒精对T25瓶外表面进行消毒，之后放在5%CO2、37℃的细胞培养箱静置2h，静置后取出细胞瓶在显微镜下观察细胞贴壁情况和细胞汇合度，分别在200X和40X下各拍2个不同视野的细胞拍照记录。

如果汇合度达到80%以上的传代密度，可以进行传代操作，如果细胞汇合度没有达80%以上不够传代，可以将细胞瓶内的培养基吸出在50ml离心管中并标记该细胞专用培养基后备用，保留8-10ml继续培养至可传代。

注意：收到细胞后，活细胞首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否漏液、浑浊等现象。

冻存细胞若发现干冰已挥发完、冻存管瓶盖脱落、破损等异常情况，请务必拍照保留，并于收货24h内与我们联系（电话：400-688-9033；https://）。

细胞复苏1)准备工作：将完全培养液置37℃水浴锅预热30分钟，随后将冻存的细胞从液氮中取出，转移到-80℃冰箱，放置数分钟让残余液氮挥发；2)在超净台内用吸管吸取6-7mL完全培养液至15mL离心管中；3)将细胞从-80℃冰箱取出暂时放置于干冰里，复苏时稍稍甩动，去除残留的干冰和液氮，再迅速用镊子夹住盖子放入37℃水浴中快速晃动（注意：水不能没过盖子），使其在1分钟左右完全融化；4)在超净台内，用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，稍稍晾干。

用单道移液器将所有融化的细胞悬液转至提前准备好的完全培养液中，盖上盖子，1100rpm室温离心4分钟收集细胞；5)超净台内小心吸弃上清，用单道移液器吸取1mL新鲜完全培养液重悬细胞至单细胞悬液，再转移至装有4mL完全培养液的T25cm2培养瓶中，写上细胞名称、复苏日期、代次，放置37℃、5%CO2饱和湿度培养箱内培养。

不同载体冷冻小鼠胚胎的效果比较邵明清1，邵南齐2（1.临汾市第四人民医院，山西 临汾041000 ；2.郑州澍青医学院，河南 郑州450064 ） 近年来，玻璃化冷冻技术的飞速发展和广泛应用，已成为辅助生殖技术领域的焦点[1]。

玻璃化冷冻利用含高浓度防冻剂的冷冻液，通过急速降温，使细胞内外的成分同时玻璃化而避免了冰晶的形成，大大提高了冻融后细胞的存活率[2]。

影响胚胎冻存效果的关键因素是冷冻液的成分及冷冻载体.由于在冷冻液成分方面已经有很多学者做了大量研究，目前已有商品化的冷冻解冻液套装，由于各个实验室的条件不同，解冻后复苏率及囊胚率的结果相差很大。

冷冻载体有很多种，现在国内大多数生殖中心应用冷冻帽(Cryotop)、冷冻叶片(Cryoleaf)和冷冻环(Cryoloop )等玻璃化冷冻载体[3]。

本研究以昆明小鼠为研究对象，应用Cryoleaf、Cryotop 和自制半麦管（hemi-straw）冷冻载体开展胚胎玻璃化冷冻研究，旨在分析载体对冷冻效果的影响，进而为人类胚胎玻璃化冷冻技术的改进提供相关依据。

1　材料1.1 实验动物 昆明小白鼠购自郑州大学实验动物中心。

雌性小鼠 6～8 周龄，30只；雄性小鼠 10～12 周龄，15只。

适应性饲养1周，排除应激反应。

1.2 药物与试剂 孕马血清(PMSG)，宁波第二激素厂生产；人绒毛膜促性腺激素(HCG)，南京动物激素厂生产；培养液（受精液FM,卵裂液CM,囊胚培养液BM）及矿物油由COOK 公司生产；冷冻复苏液、血清白蛋白代用品（HSA）由COOK 公司生产。

摘 要：为了比较冷冻叶片（Cryoleaf）、冷冻帽（Cryotop）、自制半麦管（hemi-straw）三种冷冻载体的冻存效果，试验采用玻璃化冷冻方法冻存昆明小鼠8-cell 胚胎。

结果表明，Cryoleaf 组、Cryotop 组和hemi-straw 组胚胎复苏率分别为 92.3％、89.2％和 86.2％，三组比较差异不显著(P>0.05)。

小鼠胚胎冷冻保存条件研究张立苹;曹辉;刘西梅;毕延震;肖红卫;李莉;华再东;华文君【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2014(53)20【摘要】为探索在实验室条件下最佳的小鼠胚胎冷冻保存条件.对不同发育阶段小鼠胚胎按照同一个冷冻程序进行冷冻;两个不同的冷冻程序对同一个发育阶段的小鼠胚胎进行冷冻.结果表明,-7℃平衡10 min,然后以0.3℃/min的速率迅速降至-35℃,-35℃平衡5min后投入液氮中,此冷冻程序比较适合小鼠胚胎冷冻;冷冻保存对16细胞以上的小鼠胚胎影响较小.【总页数】3页(P4915-4916,4930)【作者】张立苹;曹辉;刘西梅;毕延震;肖红卫;李莉;华再东;华文君【作者单位】湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省胚胎工程与分子育种重点实验室,武汉430064;普莱柯生物工程股份有限公司,河南洛阳471000;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省胚胎工程与分子育种重点实验室,武汉430064;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省胚胎工程与分子育种重点实验室,武汉430064;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省胚胎工程与分子育种重点实验室,武汉430064;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省胚胎工程与分子育种重点实验室,武汉430064;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省胚胎工程与分子育种重点实验室,武汉430064;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/湖北省胚胎工程与分子育种重点实验室,武汉430064【正文语种】中文【中图分类】Q954.4【相关文献】1.小鼠和猪胚胎冷冻保存技术的研究进展 [J], 庄丽伟;许厚强;陈祥2.小鼠胚胎冷冻和重复冷冻的研究 [J], 冯勋伟;王新庄;李义书;王轶敏;牛晖3.C57-ras癌症转基因小鼠模型胚胎冷冻保种技术研究 [J], 左琴;刘甦苏;周舒雅;刘佐民;王金恒;范昌发4.FVB和EIIa-Cre小鼠胚胎冷冻保存研究 [J], 丁贤明;王芊芊;刘璐;陈瑜;傅军5.小鼠胚胎冷冻后线粒体损伤的研究 [J], 邓凯伟;王峰;王志刚;刘丑生;孟飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

OPS法对小鼠胚胎冷冻保存的研究的开题报告【题目】OPS法对小鼠胚胎冷冻保存的研究【摘要】随着科技的发展，胚胎冷冻保存已经成为了人类不孕不育治疗中的重要手段。

OPS（open pulled straw）法是一种新兴的胚胎冷冻保存法，其具有保存胚胎质量高、操作简便等优点。

本研究旨在探究OPS法对小鼠胚胎质量的影响以及最佳冻存条件的确定，为冷冻保存胚胎提供有力的理论基础。

【关键词】OPS法；小鼠胚胎；冷冻保存；胚胎质量【研究背景】胚胎冷冻保存作为一种广泛应用的技术，已经成为了不孕不育患者治疗的重要手段之一。

目前，冷冻保存胚胎主要采用液氮罐保存法和干燥保存法等方法，但这些方法具有一定的缺点，如质量波动大、操作繁琐等。

OPS法是一种新兴的冷冻保存方法，其具有操作简便、胚胎质量高等优点，在冷冻保存领域受到了广泛的关注。

【研究目的】本研究旨在探究OPS法对小鼠胚胎冷冻保存的影响，确定最佳冻存条件，为进一步开展该技术在实际操作中的应用提供参考。

【研究内容】1. 收集小鼠胚胎样本进行实验；2. 对小鼠胚胎进行OPS法冷冻保存；3. 对冻存小鼠胚胎进行质量评估；4. 分析OPS法对冻存小鼠胚胎质量的影响；5. 确定最佳冻存条件。

【研究方法】1. 采集小鼠胚胎样本，分为实验组和对照组，实验组采用OPS法进行冷冻保存，对照组采用传统的液氮罐保存法；2. 对冷冻后的小鼠胚胎进行质量评估，包括细胞活力、胚胎发育能力等指标；3. 对实验组和对照组的评估结果进行对比分析；4. 根据实验数据确定最佳冻存条件。

【预期结果】1. OPS法对小鼠胚胎的质量影响；2. 确定最佳冻存条件，为胚胎冷冻保存提供参考；3. 探究OPS法的应用前景及发展方向。

【研究意义】本研究旨在探究OPS法在小鼠胚胎冷冻保存中的应用，为其在临床实践中的推广提供理论支持。

通过研究可以为胚胎冷冻保存提供一种新的解决方案，提高其质量和成功率，有助于解决不孕不育患者的问题，对促进人类健康产生积极的社会效益。

不同冷冻方法对小鼠卵母细胞冻存的影响李娜;姚军【期刊名称】《长治医学院学报》【年(卷),期】2015(000)001【摘要】Objective:To explore the effects of different freezing methods on mouse oocyte survival rate and growth potential. Methods:Using vitrification technology,choose open carrier with enclosed carrier were cryopreserved with mouse cumulus-oocyte complex with cumulus cells (COC)or without cumulus cells (OD),after recovery,for in vitro fertilization and embryo culture.Results:The open carrier cryopreserved live egg number group 76.79%,slightly higher than the 72.98% enclosed carrier cryopreserved had no statistical significance(P >0.05);In two group of the COC group was significantly higher than that of DO group,the survival rate of eggs,statistically significant(P <0.05).The COC group of fertilization rate,blastocyst rate slightly higher than the DO,no statistical difference (P >0.05).Conclusion:(1)the enclosed carrier effectively avoids the potential pollution problems,but different carrier on eggs survival rate had no significant effect.(2)cumulus-cells in the vitrification freezing oocytes play a protective role,and for late-stage embryonic development has certain improvement.%目的：：探讨不同冷冻方法对小鼠卵母细胞存活率及其发育潜能的影响。