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冷冻卵子技术戴致远12307130175简介冷冻卵子，又称雪藏卵子，即取母体健康时的卵子冷冻，阻止卵子随人体衰老，待想生育时取出冷冻的卵子使用即可。
冷冻卵子的技术本身并不成熟，即使可以冷冻、复苏、形成受精卵，胚胎。
主要方式保存卵子有两种方式。
慢速冷冻法，即把卵子储存在脱水的溶液中，然后用电脑系统让它慢慢冷冻起来，最后封存在超冷的液化氮中。
[3]另一种是玻璃化冷冻法，即把卵子放进高浓度渗透液中，然后立即储存到液氮中。
冷冻卵子保存后，待想生育时取出冷冻的卵子，解冻后即可进行体外受精最终获得胚胎。
流程(原理)01试管婴儿登记、体检：我们国家的生殖中心只允许为做试管婴儿的妇女冷冻卵子，如果有多余的卵子，且夫妻双方都同意，也可以进行捐赠。
冷冻卵子之前需要进行相关的身体检查。
02打排卵针、取卵：如果要想取卵，首先要在促性腺激素促卵发育后，给女性打促卵泡成熟的针。
大约36小时后，医生会在B超引导下，经过阴道穿到卵巢内，把卵泡的卵泡液吸出来。
通过B超可以看到，一团透明的像水晶球一样的物质就是卵泡，卵泡中孕育着成熟的卵子。
取卵手术通常不超过10分钟。
03卵泡液送至实验室：医生把卵泡液吸出来至试管中，迅速通过窗口传递到实验室中的显微镜下。
冻卵的过程全部在实验室里进行操作。
卵子很娇气，怕光、怕冷、怕热，所以整个取卵过程，必须在暗环境下迅速完成。
04提取出卵母细胞：卵子细胞悬浮在卵泡液中，实验室的技术人员首先会在显微镜下，把卵泡液中的卵子细胞分离出来。
05卵子脱水：实验室的工作人员把卵子放进高度浓缩的脱水冷冻保护溶液中进行脱水。
06迅速放入有液氮的专用容器中：脱水后的卵子立即投入液氮中，此种方式称之为玻璃化冷冻。
07转移：此时的液氮容器无法永久保存，还需转移至液氮罐中。
08放入液氮罐中：卵子被转移至零下198℃的液氮罐中长期保存，每一份卵子都有相应的编号，便于日后使用。
09使用时进行复温：若干时间后，当妇女需要使用卵子时，专业技术人员从液化氮中取出卵子，复温，用溶液清除掉卵子所用的化学物质。
胚胎冷冻保存技术摘要; 胚胎冷冻保存技术可使胚胎移植不受时间地点的限制，从而达到提高胚胎移植效率的目的。
研究和优化胚胎冷冻保存技术对胚胎工程的发展有重要的意义。
关键词：胚胎冷冻保存为便于长途运输和随时供移植使用，将那些６～７日龄已有２０～３０个细胞的新鲜活胚胎（或分割后的半胚胎、１／４胎）在－１９６℃的超低温下冷冻贮存就是胚胎冷冻保存技术。
这是在冷冻精子的技术基础上进一步发展起来的一项新技术。
目前用冷冻胚胎移植的成功率约为鲜胚胎的７０％～８０％，胚胎冷冻保存技术可使胚胎移植不受时间地点的限制，从而达到提高胚胎移植效率的目的。
现有的胚胎冷冻保存方法有四种：一、常规冷冻法常规冷冻法：也叫慢速冷冻法、逐步降温法。
将采集到的胚胎用培养液洗涤后置入有不同冷冻保护剂(甘油或二甲亚枫(DMSO)等)浓度的三种冷冻液中(冷冻液浓度由低到高，最终浓度1．4M)，每种冷冻液中平衡5分钟，然后将胚胎和冷冻液装入细管中封口、标记，放入冷冻仪中进行冷冻。
冷冻速率先以1～3~C／分下降至-6～-7℃，在此温度诱发结晶，平衡10分钟，然后，以0．3℃／分的速率降温至-35～_38℃，之后投入液氮中保存。
胚胎解冻后，需按胚胎进入冷冻液时的相反浓度，即从高到低浓度脱除冷冻保护剂，每步5分钟，最后置入含20％血清的PBS保护液中洗涤3次，彻底脱除冷冻保护剂。
或者将解冻后的胚胎放入0．5M(或1．0M)的蔗糖溶液中平衡10分钟，再用上述PBS液洗涤3次。
二、一步冷冻法一步冷冻法：也叫一步细管法。
该方法是由慢速冷冻法改进而来，细管内的冷冻液和蔗糖液是分开的，因此，在细管内用蔗糖液可一步脱除甘油抗冻剂，从而利于在生产中推广应用。
三、程序冷冻法程序冷冻法主要采用低浓度冻结保存剂梯度脱水,经程序冷冻仪缓慢降温。
主要操作步骤包括:将细胞顺序放入一系列逐渐增加保存剂浓度的溶液中梯度脱水,置入程序冷冻仪快速降温至-6℃植冰(人工诱导冰晶形成),然后程序冷冻仪缓慢降温至-30℃~-80℃后液氮贮存。
动物繁殖基础课程教学大纲第一部分大纲说明一、本课程的性质和任务本课程是中央广播电视大学“一村一名大学生计划”高等专科养殖类各专业的专业基础课。
其主要任务是使学生通过对本课程的学习，掌握畜禽生殖生理的基础理论知识、主要繁殖技术及其繁殖管理方法，为专业课的学习打下基础。
二、本课程的教学基本要求繁殖是动物生产过程中的关键环节。
现代繁殖技术是提高畜禽繁殖力的主要手段，也是改进畜禽品质、提高其生产性能的必要措施，是增加畜牧业生产经济效益的重要途径。
此外，繁殖控制技术的进展和应用也为现代集约化畜牧业解决了一系列生产组织、计划管理方面的问题。
作为研究畜禽繁殖的学科，动物繁殖基础主要内容包括生殖激素、公母畜的生殖生理、人工授精技术、受精、妊娠与分娩、繁殖控制技术与胚胎工程、繁殖力等内容。
教学基本要求包括掌握畜禽生殖生理的普遍规律及其种属特征，掌握和运用这些规律指导畜禽的繁殖实践；了解现代繁殖技术的理论基础和操作技术及其繁殖管理方法。
三、本课程的教学方法和教学形式由于本课程是一门紧密联系生产实际的学科，理论和实践技能都不能偏废。
学习过程中应以文字教材为基础，掌握动物繁殖学中的基本概念和基本理论；结合观看录像教材（电视课），以进一步了解、掌握现代繁殖技术的操作和要求。
在实验和教学实习中多观察、多了解，并通过实际操作掌握主要的繁殖技术操作。
四、课程教学要求的层次本课程按“了解”、“掌握”、“重点掌握”三个层次对学生的学习进行要求。
考核难度及题量的梯度对应于教学要求的三个层次，未作具体要求的教学内容不作考核要求。
五、学时分配本课程总学时为90学时，5学分，其中录像教材（电视课）17学时，课程学习指导录像课2学时，实验课15学时，另安排一周教学实习，具体学时分配如下：章次教学内容总学时分配录像教材（电视课）学时分配绪论1学时0.5学时第一章家畜的生殖器官3学时0学时第二章生殖激素4学时1学时第三章母畜生殖生理6学时 2.5学时第四章公畜生殖生理6学时 2.5学时第五章人工授精技术6学时2学时第六章受精、妊娠与分娩8学时4学时第七章繁殖控制技术与胚胎工程8学时 3.5学时第八章繁殖力3学时1学时实验与实习45学时课程学习指导2学时合计90学时18学时第二部分教学内容和教学要求绪论(1学时)●教学内容动物繁殖的目的、任务和要求，同其它学科的关系，动物繁殖科学进展概况。
卵母细胞和胚胎玻璃化解冻方法用途：本品用于卵母细胞和胚胎的玻璃化解冻配套。
安全解冻配套：1.1瓶4ml解冻液（TS）2.1瓶1.5ml稀释液(DS)3.1瓶1.5ml 冲洗液(WS)4.1个25mm 的培养皿(用于解冻液)5.1个6孔生殖板使用说明准备：*用载体和生殖板将解冻液放到37℃的培养箱里加温—将所有解冻液倒入生殖板里。
*用微细管吸取DS,WS1和WS2各300ul，放进培养皿。
注意：用巴斯德管吸取一个大小合适的卵母细胞（直径：140um）或者胚胎(直径：140-180um)解冻：1.迅速地将载体顶放进解冻液中，浸泡1分钟。
（图一）2.用巴斯德管吸取卵母细胞（胚胎），轻轻地将其放入DS底部，浸泡3分钟。
（图二）3.用巴斯德管吸起卵母细胞（胚胎），轻轻地将其放入WS1 底部，浸泡5分钟。
（图三）4.用巴斯德管吸起卵母细胞（胚胎），轻轻地将其放入WS2 顶部，当卵母细胞（胚胎）自动沉到底部的时候，重新再重复这一步骤。
（图四）5.将卵母细胞（胚胎）转移到装有合适培养液的培养皿中。
放进37℃的培养箱中完成恢复。
注意：卵母细胞要放置2小时，胚胎则要3小时。
质量控制测试：每一批安全解冻配套都得到以下测试：*溶液：UPS不孕不育无菌测试（SAL 10-3）LAL拉尔内毒素测试小老鼠胚胎试验（一个细胞）保存方法：*保存于4-8℃*在标签所示有效日期前，本品性质稳定。
成分：*血清替代补充*基本培养基M-199 内含的HEPES*蔗糖参考文件（此部分请看原件）.玻璃化第一部分：所需材料*玻璃化配套No.0 基础液（BS）：1.5ml x1 (只用于卵母细胞玻璃化冷冻)No.1 稀释液（ES）: 1.5ml x1No.2 玻璃化溶液（VS）: 1.5ml x2*冷冻管x4, 建议每个冷冻管最多储存3个卵母细胞或者3个胚胎*复制板x2: 6孔*冷却架(蓝盒液氮，型号：VT-CLB)*巴斯德管（型号：MT-150）*显微镜（关掉加热板）*秒表或计算器（带计算功能）*液氮（消毒过滤功能，聚四氟乙烯滤膜过滤）*镊子*显微针x2: 2-20ul, 100-1000 ul*罐子*储存罐注意：使用的巴斯德管大小要与卵母细胞或胚胎大小合适。
2022女性生育力保存技术（全文）随着全球生育力呈现出明显下降的趋势，中国的生育力下降也已经成为比较严重的社会问题。
女性肿瘤患者的一些相关治疗，例如化疗、盆腔放疗、造血干细胞移植、涉及卵巢的手术治疗都可能对生育力造成显著的损伤。
而非肿瘤疾病，主要涉及顽性免疫性疾病、需造血干细胞移植的良性血液性疾病、早发性卵巢功能不全（prematureovarian insufficiency , POI）相关疾病,虽然只占女性生育力保存需求的8%~19% ,但仍然值得我们关注。
目前女性生育力保存相关技术主要涉及胚胎冷冻、卵子冷冻、卵巢组织冷冻及相关衍生技术如卵母细胞体外成熟、卵泡培养等。
1胚胎冷冻及卵子冷冻冻融胚胎移植技术已存在30余年，目前冻融胚胎移植与新鲜胚胎移植妊娠率无明显差别，是已婚育龄女性进行生育力保存的有效方法。
根据国内外生育力保存指南建议，卵母细胞冷冻保存和胚胎冷冻保存一样，都是生育力保存的一线治疗方案，主要针对无配偶的未婚女性。
在我国，胚胎冷冻和卵子冷冻均是以玻璃化为主流的冷冻方法，已经基本代替了程序冷冻法。
对于安全性，从目前的研究随访结果来看，冻融胚胎移植周期除文献报道可能出现新生儿体重高于新鲜胚胎移植外，围产期母儿并发症及新生儿出生缺陷并没有明显的增加。
根据《冷冻胚胎保存时限的中国专家共识》，胚胎冷冻6年内不影响妊娠结局，但尚无足够证据证实胚胎冷冻保存时间超过6年对冻融胚胎移植安全性有影响。
目前也无证据表明长期保存玻璃化冷冻卵子存在安全性问题。
女性卵子冷冻时的年龄与活产率密切相关，35岁以下女性冷冻卵子的活产率随着冷冻卵子数的增多而持续增高，大于35岁女性冷冻卵子累计到20枚其活产率将不再增加。
2卵巢组织冷冻卵巢组织冷冻适用于青春期前的儿童或需紧急生育力保存的患者。
对于已接受化疗的患者，相较于胚胎冷冻与卵子冷冻而言，更推荐选择卵巢组织冷冻，其原因是化疗对于分裂活跃的细胞具有更加明显的毒性作用，而对始基卵泡相对不敏感。
