视黄酸核受体α的siRNA重组腺病毒构建及干扰效果初步鉴定

核转录因子TR3小干扰RNA载体的构建及其效果鉴定王新兴;郭东升;冯红;战锐;钱令嘉【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2008(19)2【摘要】目的:构建核孤儿受体TR3的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,并进行沉默效果测定.方法:根据TR3 mRNA序列和载体psiSTRIKE的粘性末端,设计合成TR3的干扰RNA序列,退火后克隆至psiSTRIKE,经测序鉴定后用阳离子脂质体将重组子和TR3高表达载体TR3-pcDNA共转染至HEK293细胞中.以Western blotting检测干扰后HEK293细胞内TR3表达的变化.结果:Western blotting检测结果证实构建的TR3 siRNA表达重组载体可显著抑制HEK293细胞内TR3的高表达.结论:构建了核孤儿受体TR3 siRNA真核表达载体.【总页数】3页(P188-190)【作者】王新兴;郭东升;冯红;战锐;钱令嘉【作者单位】卫生学环境医学研究所,应激医学实验室,天津,300050;华北煤炭医学院,预防医学系,河北,唐山,063000;卫生学环境医学研究所,应激医学实验室,天津,300050;卫生学环境医学研究所,应激医学实验室,天津,300050;卫生学环境医学研究所,应激医学实验室,天津,300050【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.Smad2小干扰RNA载体的构建及其沉默效应的鉴定 [J], 熊志红;李仁德;朱琰2.含PR结构域的锌指蛋白5特异性小干扰RNA载体构建及干扰效果评价 [J], 丁琼琼;张彬彬;张亚平;杨海杰;王磊;冯志伟3.Ku70基因RNA干扰载体的构建及干扰效果鉴定 [J], 张妍;张文颖;杜建新;周玲4.肿瘤睾丸抗原CT45-5基因小干扰RNA表达载体的构建及干扰效果鉴定 [J], 柯波;林宇翔;绳纪坡;于芳;罗维;马祖兴;胡宝成5.盘基网柄菌尿囊酸酶基因RNA干扰载体的构建及干扰效果鉴定 [J], 刘伟;张树任;陈能星;侯连生因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

LRIG3基因特异性siRNA腺病毒表达载体的构建与鉴定袁晓奕;包世新;杨为民;叶章群【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(039)001【摘要】目的构建并鉴定针对LRIG3 基因的小干扰RNA(LRIG3-siRNA)腺病毒表达载体,为膀胱癌基因治疗的研究提供有效的实验工具.方法设计可形成小发夹结构的LRIG3-siRNA模板cDNA 序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pSilencer-U6neo,构建LRIG3-siRNA表达质粒pSilencer-LRIG3.鉴定正确后,将pSilencer-LRIG3转染至HEK293细胞,包装成复制缺陷型腺病毒pAd-LRIG3.大量扩增pAd-LRIG3,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度.pAd-LRIG3 感染人膀胱癌细胞T24,RT-PCR法检测LRIG3 mRNA的表达.结果酶切分析、测序鉴定表明pSilencer-LRIG3构建成功,PCR分析表明pAd-LRIG3含有LRIG3-siRNA 序列.pAd-LRIG3可抑制LRIG3 mRNA的表达.结论含有LRIG3-siRNA 的重组腺病毒构建成功,且具有抑制LRIG3基因mRNA 表达的功能.【总页数】4页(P18-21)【作者】袁晓奕;包世新;杨为民;叶章群【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科,武汉,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科,武汉,430030【正文语种】中文【中图分类】R737.14;R349.8【相关文献】1.mTOR特异性siRNA重组表达载体的构建及鉴定 [J], 张才成;陈静;陈唐勇;章登珊;郑晓丰;李俊明2.Cdc2/cdk1和survivin特异性siRNA真核表达载体的设计、构建和鉴定 [J], 朱俊;袁玉林;彭涛;陈树;黄铄;李双3.特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因SiRNA表达载体的构建、鉴定及对高糖状态下INS-1细胞周期的影响 [J], 梁华晟;薛耀明;钟宇华4.Bcl-xl和IGF-1受体特异性siRNA真核表达载体的设计、构建及鉴定 [J], 游兴松;王蕾;李卓先;方文敏;袁玉林5.猪甘油三酯脂酶基因(ATGL)特异性siRNA表达载体的构建及鉴定 [J], 单体中;任阳;伍婷;汪以真因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠HSG基因重组腺病毒载体的构建及鉴定郭晖;王占伟;郝文炯;赵巍;沈冰【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2013(0)6【摘要】目的构建大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)的腺病毒载体,观察其在转染大鼠C6胶质瘤细胞后的表达.方法由前期构建的pGM-T-rHSG质粒中酶切rHSG基因片段,亚克隆入 pShuttle-CMV-EGFP重组穿梭载体中,而后与腺病毒骨架质粒pAdxsi酶切连接,经过抗性筛选及酶切鉴定得到阳性的pAdxsi-GFP-rHSG重组质粒；pAdxsi-GFP-rHSG质粒经PacI线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒,进行PCR鉴定和PCR产物测序鉴定,Westem-blot法检测C6胶质瘤细胞转染rHSG后的表达效果.结果酶切鉴定证实rHSG基因正确插入穿梭载体pShuttle-CMV-EGFP,收获病毒后的PCR及测序鉴定pAdxsi-GFP-rHSG重组成功,并能在C6胶质瘤细胞内高效表达.结论成功构建出了介导大鼠增殖抑制基因的腺病毒载体pAdxsi-GFP-rHSG,能在C6胶质瘤细胞内高效表达.%Objective To construct a recombinant adenovirs encoding rat hyperplasia suppressor gene (rHSG) and to investigate the the expression of it on rat C6 brain glioma cells.Methods The rHSG gene was extracted by enzymaticcuting the used pGM-T-rHSG and was identified in previous experiment.It was subcloned in the pShuttle-CMV-EGFP plasmid.The rHSG gene was transferred from pShuttle-rHSG to pAdxsi viral DNA by double enzymatcuting obtaining the recombinant plasmid pAdxsi-GFP-rHSG.The recombinant pAdxsi-GFP-rHSG was selected by kansmycin resistanc andrestriction endonuclease; After linearized by Pac Ⅰ,the recombinant adenovirus DNA pAdxsi-GFP-rHSG was transfected into 293 cells for packaging and amplification.Adxsi-GFP-rHSG was further identified by PCR analysis and PCR products sequencing analysis.The expression was detected by Western-blot analyses with rat C6 brain glioma.Results Restriction enzyme digestion confirmed that rHSG gene was correctly inserted into pShuttle-CMV-EGFP.After being packaged in 293 cells,the recombinant adenovirus Adxsi-GFP-rHSG was identified by PCR analysis and DNA sequencing analysis.The cells transfected with Adxsi-GFP-rHSG resulted in positive expressing the rHSG protein.Conclusion Recombinant adenovirus encoding rat hyperplasia suppressor gene (rHSG) Adxsi-GFP-rHSG was successfully constructed.The expression on rat C5 brain glioma cells was more effective.It wil be helpful to use it in the research of the role rHSG specific therapy in the spongioblastoma tissue.【总页数】5页(P679-682,封3)【作者】郭晖;王占伟;郝文炯;赵巍;沈冰【作者单位】宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学总医院神经外科,银川750004;宁夏医科大学总医院神经外科,银川750004;郑州市第七人民医院神经外科,郑州450016;延安大学附属医院神经外科,延安716000;宁夏医科大学医学科学技术研究中心,银川750004;宁夏医科大学总医院神经外科,银川750004【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.大鼠ZnT1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 胡英明;梅晰凡;宋长威;李谌2.大鼠TP73基因重组腺病毒载体构建及鉴定 [J], 黄玲玲;张云云;王滨;张瑞;万鹤鸣;洪侃3.大鼠神经母细胞特异性转移因子基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 袁静;葛坚;俞建雄;4.大鼠神经母细胞特异性转移因子基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 袁静;葛坚;俞建雄5.大鼠Otos基因重组腺病毒载体的构建和鉴定 [J], 卓贤露;姜振东;魏运军;鲁立;张学渊;袁伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

可抑制I型胶原表达的siRNA重组腺病毒的构建姚咏嫦;周嘉安;陈晓峰【期刊名称】《华南理工大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(000)012【摘要】As compared with the stem cells from other sources, synovium-derived mesenchymal stem cells (SMSCs)are of higher proliferative and chondrogenic ability.However,SMSCs express Collagen I inherently, which may impair the overall quality of the regenerated counterpart.In order to solve this problem,first,shRNA against Collagen I was designed and constructed in the adenoviral vector.Next,linear recombinant adenoviral vector was generated by the digestion with enzyme PacI and was used to transfect 293 cells for package.Then,the titration of recombinant adenovirus was determined,and the corresponding amplification and purification were performed to obtain recombinant adenovirus with high titration.Moreover,fibroblasts and osteoblasts were respectively infected by the recombinant adenovirus,and fluorescence microscopy was adopted to detect the transfection efficiency.Fi-nally,real-time quantitative PCR experiments were carried out to verify the targeting effect ofsiRNA.Experimental results show that the packaged recombinant adenoviruses are of high transfection efficiency and can successfully en-code siRNA against Collagen I.%滑膜间质干细胞（SMSCs）与其他来源的间质干细胞相比，具有更强的生长能力和更大的软骨分化潜力。

视黄酸受体α在肿瘤中的研究进展任红岳;黄桂丽;沈东炎【摘要】视黄酸受体(RAR)家族成员包括RAR与视黄酸X受体两大类,它们由3种不同的基因α、β、y编码,由此形成不同的受体亚型.与其他受体一样,RARα参与调控细胞分化、增殖、凋亡以及胚胎发育、视觉形成、骨骼形成、新陈代谢、造血等许多关键的生命活动过程,并且RARα的异常表达具有肿瘤相关性和组织差异性.现就RARα在肿瘤中的研究情况进行综述.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2015(012)033【总页数】4页(P52-55)【关键词】视黄酸受体α;肿瘤;核受体;视黄酸受体家族【作者】任红岳;黄桂丽;沈东炎【作者单位】厦门大学医学院,福建厦门361003;厦门大学生命科学院,福建厦门361003;厦门大学附属第一医院生物样本库,福建厦门361003【正文语种】中文【中图分类】R73自20世纪70年代发现视黄酸受体（retinoic acid receptor，RAR）以来，其参与肿瘤发生、发展的作用及其分子机制受到广泛关注。

研究表明，多种RAR在正常组织和肿瘤组织中的表达水平存在明显差异[1-2]，这意味着RAR在肿瘤的进程中起着重要的作用。

RARα作为RAR家族的成员，分布极广，在不同肿瘤组织中差异性表达，可以扮演癌基因或抑癌基因的角色，与其靶基因相互作用参与肿瘤的生长、转移、耐药等过程[3-4]。

1.1 RARα结构RARα基因位于染色体17q11.2，属于类固醇/甲状腺激素核内受体超家族成员，具有核受体的一般结构，包括A、B、C、D、E、F六个区域[5]。

其中A、B区有着不同的长度与次序，可以识别相应的共活化因子与转录因子，并且包含配体非依赖性的转录激活域AF-1；C区为高度保守的DNA结合结构域；D区是可变的绞链区；E区为配体结合区，包括配体依赖性转录激活域AF-2；F区的具体功能尚未确定。

1.2 RARα功能RARα参与调控细胞分化、增殖、凋亡以及胚胎发育、视觉形成、骨骼形成、新陈代谢、造血等许多关键的生命活动过程。

小鼠NR4A1基因小分子干扰RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定薛凯;李梅;刁飞扬;凌静;崔毓桂;刘嘉茵【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2009(22)2【摘要】目的:构建表达小鼠NR4A1基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺病毒载体. 方法:根据siRNA靶序列设计并合成2条互补的64 bp寡核苷酸.pShuttle-H1穿梭质粒经BglⅡ、HindⅢ双酶切后,与退火的寡核苷酸进行连接,构建穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA.PmeⅠ酶切pShuttle-H1-siRNA, 然后分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组.PacⅠ酶切线性化重组质粒pAdEasy-H1-siRNA后转染AD-293细胞进行病毒包装和扩增.Western blot检测NR4A1基因的表达. 结果:穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA经双酶切和测序证实构建成功,进一步构建了表达小鼠NR4A1基因的siRNA重组腺病毒载体,重组腺病毒AdH1-siRNA/NR4A1感染小鼠睾丸间质细胞瘤细胞(MLTC-1)后显著抑制目的蛋白表达(抑制率为70%～90%). 结论:成功构建了表达小鼠NR4A1基因的siRNA重组腺病毒载体AdH1-siRNA/NR4A1,并在MLTC-1中验证其抑制NR4A1蛋白表达,为进一步研究NR4A1基因在多囊卵巢综合征(PCOS)中的作用奠定了基础.【总页数】6页(P115-119,后插1)【作者】薛凯;李梅;刁飞扬;凌静;崔毓桂;刘嘉茵【作者单位】南京医科大学第一附属医院临床生殖医学中心,江苏南京,210029;南京医科大学第一附属医院临床生殖医学中心,江苏南京,210029;南京医科大学第一附属医院临床生殖医学中心,江苏南京,210029;南京医科大学第一附属医院临床生殖医学中心,江苏南京,210029;南京医科大学第一附属医院临床生殖医学中心,江苏南京,210029;南京医科大学第一附属医院临床生殖医学中心,江苏南京,210029【正文语种】中文【中图分类】R784【相关文献】1.小鼠Hsp27基因siRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定 [J], 刘金娟;崔毓桂;马翔;刘嘉茵2.小鼠树突状细胞相关C型凝集素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 夏迪;钱倩;刘志成;谭鸣鸣;丁媛;苏欣;孙文逵;施毅3.人SET基因小分子干扰RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定 [J], 许波群;李瑛;薛凯;李梅;马翔;刁飞扬;崔毓桂;刘嘉茵4.小鼠Calb_2基因重组腺病毒载体的构建与鉴定 [J], 王菁;罗建;刘珊;代晓南;高莉;高超;刘嘉茵;崔毓桂5.小鼠CD200基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 王琼;陈冬梅;王立斌;魏军;李玉奎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

hTERT核心启动子调控的hNIS重组腺病毒的构建与鉴定张俊;王爱东;申咏梅;石怡珍;崔学军;刘增礼;欧阳松应【期刊名称】《中国免疫学杂志》【年(卷),期】2008(024)006【摘要】目的:构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子调控的人钠碘转运体(hNIS)基因重组腺病毒,并初步鉴定.方法:将hTERT核心启动子从hTERT/pcDNA3.1(+)质粒中切出,亚克隆至含全长hNIS cDNA序列的质粒载体FL*-hNIS/pcDNA3,应用限制性内切酶将hTERT-hNIS片段切出后连入穿梭质粒载体pAdTrack,应用AdEasy系统构建出重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS.同时,构建CMV启动子调控的hNIS重组腺病毒Ad-CMV-hNIS作为阳性对照.应用RT-PCR 方法验证hTERT在转染肿瘤细胞中的转录活性.结果:成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS、Ad-CMV-hNIS并经PCR验证正确.RT-PCR证实hNIScDNA能从Ad-hTERT-hNIS转染的细胞中扩增出来.结论:成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-KNIS;hTERT核心启动子在转染的肺癌A549细胞中具有转录活性.为下一步的碘治疗实验提供了实验依据.【总页数】5页(P549-553)【作者】张俊;王爱东;申咏梅;石怡珍;崔学军;刘增礼;欧阳松应【作者单位】江苏省泰州市人民医院核医学科;苏州大学附属第二医院核医学科,苏州,215004;苏州大学附属第二医院核医学科,苏州,215004;苏州大学附属第二医院核医学科,苏州,215004;苏州大学附属第二医院核医学科,苏州,215004;苏州大学附属第二医院核医学科,苏州,215004;中国科学院生物物理研究所,北京,100101【正文语种】中文【中图分类】R392.11【相关文献】1.hTERT启动子调控的PUMA重组腺病毒的构建与鉴定 [J], 王冬;周琦;李雨聪2.hTERT启动子调控的SEA-CD80基因共表达重组腺病毒载体的构建及在不同肿瘤细胞中的表达鉴定 [J], 司少艳;刘俊丽;王晓菲;谭小青;宋淑军3.hTERT核心启动子驱动的条件复制型腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 倪芳;鲁茁壮;瞿成奎;胡泽斌;王立生;汪思应4.hTERT启动子引导hNIS基因重组腺病毒介导放射性核素的裸鼠显像 [J], 赵兴业;李玮;谭建;王澎;李宁5.修饰hTERT核心启动子靶向转录FCY1的重组腺病毒的构建及鉴定 [J], 滑玮;辛晓燕;苏明权;李立文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710814258.9(22)申请日 2017.09.11(71)申请人 南方医科大学地址 510515 广东省广州市广州大道北1838号南方医科大学(72)发明人 李婷婷　罗升学　王文敬　黎诚耀　(74)专利代理机构 广州粤高专利商标代理有限公司 44102代理人 邓义华　廖苑滨(51)Int.Cl.C12N 15/66(2006.01)C12N 15/861(2006.01)A61K 39/12(2006.01)A61P 31/12(2006.01)(54)发明名称一种基于重组腺病毒的表达载体及其构建方法(57)摘要本发明公开了一种制备腺病毒表达载体的方法，所述方法包括：以野生型腺病毒AdC6的基因组为基础，通过基因组直接克隆方法，删除E1编码区和E3编码区，在E1删除区插入I-Ceu I和PI-Sce I酶切位点，同时以人源腺病毒Ad5的ORF6替换AdC6的ORF6，提高了在人源肾胚细胞(293A)中包装重组病毒的成功率和包装出重组病毒的滴度,获得复制缺陷性的重组腺病毒表达载体。

本发明通过直接分子克隆的方法，构建大片段质粒，方法简单，已操作，可以用于任何大片段载体的构建；本发明通过几次克隆连接可以构建完成腺病毒表达载体，步骤简单；本发明删除E1、E3区和替换Ad5 ORF6，都可以用通过PCR扩增DNA片段的过程中能够完成删除和替换；本发明在细菌水平筛选阳性克隆更加容易、快捷，而且缩短了腺病毒载体构建时间。

权利要求书2页 说明书8页序列表22页 附图5页CN 107574175 A 2018.01.12C N 107574175A1.一种制备重组腺病毒表达载体的方法，其特征在于，所述方法包括：以野生型腺病毒AdC6的基因组为基础，通过基因组直接克隆方法，删除E1编码区和E3编码区，在E1删除区插入I-Ceu I和PI-Sce I酶切位点，同时以人血清型腺病毒Ad5的E4 ORF6替换AdC6的E4 ORF6，获得复制缺陷型的重组腺病毒表达载体。

视黄酸和α-干扰素对带有视黄酸反应元件的LUC报告基因表达的调控作用张乾勇;糜漫天;程天民;韦娜【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2002(24)3【摘要】目的探讨视黄酸 (Retinoicacid ,RA)通过视黄酸反应元件 (RARE)调控外源基因表达的可行性。

方法构建带有视黄酸受体β(RARβ)基因增强子区域RARE的荧光素酶 (Luciferase ,LUC)报告基因表达载体 ,应用脂质体包裹RARE TK LUC和RARE3 TK LUC质粒 ,并转染HL 60细胞 ,48h后 ,用RA和 /或α 干扰素(IFNα)处理不同时间 ,用LUC报告基因检测试剂盒分析LUC报告基因活性。

结果经RA处理不同时间后 ,RARE TK LUC和RARE3 TK LUC质粒转染细胞的LUC相对活性分别较未经处理的转染细胞增加 12～ 3 8和 2 0～ 85倍 ;单用IFNα处理转染细胞 ,对LUC的表达无明显的诱导作用;IFNα和RA联合处理 48、72h ,LUC 相对活性比单用RA处理增加 60 %～ 70 %。

结论RA可调控带有RARE的LUC报告基因的表达。

【总页数】3页(P249-251)【关键词】视黄酸;α-干扰素;视黄酸反应元件;荧光素酶报告基因;LUC;调控作用【作者】张乾勇;糜漫天;程天民;韦娜【作者单位】第三军医大学预防医学系营养与食品卫生学教研室;第三军医大学预防医学系防原医学教研室,全军复合伤研究所【正文语种】中文【中图分类】R392.11;Q786【相关文献】1.缺氧、复氧条件下低氧反应元件(HRE)对心肌细胞转染hVEGF165基因表达的调控作用 [J], 董红燕;张中明;闫英群2.干扰素刺激反应元件Ⅰ/Ⅱ在维甲酸诱导基因G表达调控中的作用 [J], 楼叶江;潘晓蓉;贾培敏;张长林;许桂平;李冬;童建华3.低氧反应元件对缺血心肌转染人血管内皮生长因子165基因表达的调控作用 [J], 董红燕;姜波;张中明;王伟;张宜乾;徐夏红4.受缺氧反应元件调控的荧光素酶报告基因在缺氧肿瘤细胞内的表达活性研究 [J], 沈晓娣;张萍;应磊;葛盛芳;钱关祥5.视黄酸刺激RARE调控荧光素酶报告基因表达系统的构建与应用 [J], 袁源;陈亚琼因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。