金黄色葡萄球菌检验

一、实验目的通过本次实验，掌握金黄色葡萄球菌的分离、培养和鉴定方法，了解其生物学特性，为临床诊断和治疗提供依据。

二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌标准菌株2. 培养基：普通琼脂、血琼脂、Baird-Parker培养基、营养肉汤3. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、移液器、试管、培养皿等4. 实验试剂：革兰氏染色液、碱性复红液、氯化钠、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甲基红等三、实验方法1. 菌株分离与纯化（1）将金黄色葡萄球菌标准菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。

（2）取培养好的肉汤，用无菌移液器吸取适量接种于普通琼脂平板，37℃培养24小时。

（3）挑取单菌落，接种于血琼脂平板，37℃培养24小时。

（4）挑取单菌落，接种于Baird-Parker培养基平板，37℃培养24小时。

2. 鉴定试验（1）革兰氏染色：取纯化后的金黄色葡萄球菌，进行革兰氏染色，观察菌体形态。

（2）生化试验：进行触酶实验、葡萄糖发酵实验、麦芽糖发酵实验、乳糖发酵实验、蔗糖发酵实验、甲基红反应、VP反应等，以确定金黄色葡萄球菌的生化特性。

（3）溶血试验：观察金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的溶血情况。

（4）过氧化氢酶试验：观察金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上的过氧化氢酶反应。

四、实验结果1. 菌株分离与纯化在普通琼脂平板、血琼脂平板和Baird-Parker培养基平板上均分离出金黄色葡萄球菌，菌落呈圆形、凸起、表面光滑、湿润、不透明，产生黄色脂溶性色素。

2. 革兰氏染色金黄色葡萄球菌革兰氏染色阳性，呈球形，排列成葡萄串状。

3. 生化试验金黄色葡萄球菌触酶实验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、产酸不产气，甲基红反应阳性，VP反应阴性。

4. 溶血试验金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生溶血环。

5. 过氧化氢酶试验金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上产生黑色沉淀。

五、实验结论根据实验结果，分离出的金黄色葡萄球菌符合金黄色葡萄球菌的生物学特性，可以确认为金黄色葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌检测实验报告一、实验目的金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌，能够引起多种感染性疾病。

本次实验的目的是通过一系列的检测方法，准确检测出样本中是否存在金黄色葡萄球菌，并确定其数量和特性，为食品安全、临床诊断和环境卫生等领域提供可靠的检测依据。

二、实验原理金黄色葡萄球菌具有一些独特的生物学特性和生化反应，可通过以下几种方法进行检测：1、血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌能够产生血浆凝固酶，使血浆发生凝固。

2、甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇产酸。

3、革兰氏染色：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。

三、实验材料1、样本：食品样本（如乳制品、肉类）、临床样本（如脓液、血液）等。

2、培养基和试剂：血琼脂平板甘露醇氯化钠琼脂培养基兔血浆革兰氏染色液生理盐水3、仪器设备：恒温培养箱显微镜无菌接种环、移液管等四、实验步骤1、样本处理食品样本：称取一定量的样品，加入适量生理盐水进行均质处理，制成稀释液。

临床样本：直接进行涂片或适当稀释。

2、增菌培养将处理后的样本接种于 75%氯化钠肉汤中，置于 36±1℃恒温培养箱中培养 18 24 小时。

3、分离培养从增菌培养物中分别划线接种于血琼脂平板和甘露醇氯化钠琼脂培养基上，于 36±1℃培养 18 24 小时。

4、形态观察观察血琼脂平板上的菌落形态，金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，周围有明显的透明溶血圈。

观察甘露醇氯化钠琼脂培养基上的菌落，金黄色葡萄球菌能使培养基变黄。

5、革兰氏染色挑取可疑菌落进行革兰氏染色，在显微镜下观察，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。

6、血浆凝固酶试验取兔血浆与可疑菌落混合，置于 36±1℃培养箱中观察，若血浆发生凝固，则为阳性。

7、甘露醇发酵试验接种可疑菌落于甘露醇氯化钠琼脂培养基中，观察是否产酸。

五、实验结果1、形态观察在血琼脂平板上观察到金黄色、周围有透明溶血圈的菌落。

在甘露醇氯化钠琼脂培养基上观察到变黄的菌落。

金黄色葡萄球菌的测定1 卫生学意义金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。

2 检验方法2.1 术语与定义金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。

显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。

是常见的引起食物中毒的致病菌。

常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。

2.2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：（1）恒温培养箱：36℃±1℃。

（2）冰箱：2℃～5℃。

（3）恒温水浴箱：37℃～65℃。

（4）天平：感量0.1g。

（5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。

（6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。

（7）无菌培养皿：直径90mm。

（8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。

2.3 培养基和试剂（1）7.5%氯化钠肉汤1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4；2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。

（2）B－P琼脂平板1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.22）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。

3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。

分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。

临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL摇匀后倾注平板。

培养基应是致密不透明的。

使用前在冰箱储存不得超过48h。

金黄色葡萄球菌肺炎的检查金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，可以引起多种感染，其中包括金黄色葡萄球菌肺炎。

金黄色葡萄球菌肺炎是一种严重的肺部感染，会给患者的健康带来危害。

在临床上，及早诊断金黄色葡萄球菌肺炎至关重要，而检查是确诊这种感染的关键步骤之一。

临床症状金黄色葡萄球菌肺炎的临床表现多样，患者可能出现以下症状：•发热•咳嗽•咳痰•胸痛•呼吸困难•胸部 X 光检查有异常表现如果患者出现以上症状，尤其是在有金黄色葡萄球菌感染风险的情况下，应及时进行检查以明确诊断。

检查方法1. 血液标本检查通过抽取患者的血液标本进行实验室检查，可以检测出金黄色葡萄球菌的存在。

一般情况下，金黄色葡萄球菌会在血液中产生感染相关的标志物，比如 C 反应蛋白和白细胞计数增高等。

2. 咳痰标本检查金黄色葡萄球菌肺炎患者常常伴有咳嗽和咳痰，通过检测患者的咳痰标本，可以确定是否存在金黄色葡萄球菌的感染。

实验室会对咳痰标本进行培养和鉴定，以确定感染的病原体。

3. 气管镜检查在严重病例下，可以通过气管镜检查，直接观察患者的肺部情况。

医生会通过气管镜进入气管和肺部，对肺部病变进行观察和取样，以确诊金黄色葡萄球菌肺炎。

4. 胸部 X 光检查胸部 X 光检查是金黄色葡萄球菌肺炎的重要诊断手段之一。

通过 X 光片可以观察肺部是否存在感染病变，比如肺实变、肺不张等。

结合临床表现和其他检查结果，有助于确诊金黄色葡萄球菌肺炎。

结语金黄色葡萄球菌肺炎是一种严重的感染疾病，及早诊断和治疗对患者的健康至关重要。

通过上述检查方法，可以帮助医生明确金黄色葡萄球菌肺炎的诊断，从而制定有效的治疗方案。

建议患者在出现肺部感染症状时及时就医，并根据医生建议进行相应检查，以获得及时有效的治疗。

金黄色葡萄球菌检验原理
金黄色葡萄球菌检验的原理是通过培养和鉴定来确定细菌是否为金黄色葡萄球菌。

具体步骤如下：
1. 培养：将样本在含有富含营养物质的培养基上进行培养。

金黄色葡萄球菌在常见的琼脂培养基上能够快速生长并形成典型的黄色菌落。

2. 鉴定：通过一系列的生化反应和特征性实验来确认细菌的身份。

金黄色葡萄球菌一般具有以下特征：
- 革兰氏染色：呈阳性，即菌体呈紫色。

- 非运动性：无鞭毛或鞭毛不活跃。

- 产生黄色色素：金黄色葡萄球菌能够产生一种特殊的黄色色素，使得菌落呈现金黄色。

3. 确认：通过进一步的检测，如凝胶酶试验和DNA鉴定等，来进一步确认菌株是否为金黄色葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌是一种常见的致病菌，可以引起多种感染，如皮肤感染、呼吸道感染和食物中毒等。

通过对其进行准确快速的检验可以帮助医生进行针对性治疗和控制传播。

金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界中，同时也是人体皮肤和黏膜的正常微生物。

金黄色葡萄球菌也是人体病原微生物中的一种，并且可以引起一系列的感染疾病，包括皮肤感染、肺炎、败血症等严重疾病。

及时、准确地检测金黄色葡萄球菌对于预防和控制与该菌相关的疾病具有重要意义。

金黄色葡萄球菌的检验技术主要包括细菌培养、生化鉴定、药敏试验等，下面将对这些技术进行介绍。

一、细菌培养1. 培养基金黄色葡萄球菌主要可在营养琼脂、大豆肉汤琼脂、牛肉心脏培养基等细菌培养基上生长。

营养琼脂是最常用的培养基，可用于对金黄色葡萄球菌的初步筛查。

2. 培养条件金黄色葡萄球菌在37°C下培养24-48小时，产生充分的菌落。

3. 形态特征金黄色葡萄球菌在琼脂培养基上可形成金黄色的圆形菌落，直径一般在1-2mm左右。

二、生化鉴定1. 皮肤试验皮肤试验是金黄色葡萄球菌的特异性鉴定方法之一，又称为凝集素试验。

通过皮肤试验，可以判断金黄色葡萄球菌是否具有产生凝集素的能力。

2. 协和试验协和试验又称凝集酶试验，是用于检测金黄色葡萄球菌产生凝集酶的一种生化试验。

该试验通过将金黄色葡萄球菌的培养液加入到含有凝集酶专一底物的试管中，观察底物被溶解的情况，用于判断金黄色葡萄球菌是否产生凝集酶。

3. 床旋试验床旋试验又称为巯基甲酸盐试验，是一种利用巯基甲酸盐来检测金黄色葡萄球菌的特异性试验。

通过观察琼脂培养基上金黄色葡萄球菌菌落周围出现的红色环的形成情况，判断金黄色葡萄球菌是否产生巯基甲酸盐酶。

4. 溶血酶试验溶血酶试验是一种通过检测金黄色葡萄球菌产生的溶血酶来鉴定其特性的生化试验。

溶血酶试验主要有两种方法：血凝素试验和牛血红蛋白试验。

这两种方法都是通过观察金黄色葡萄球菌对红细胞造成的溶血现象来判断其产生的溶血酶。

三、药敏试验药敏试验是检测金黄色葡萄球菌对抗生素的敏感性的一种方法。

金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，它是引起人体多种感染的病原菌之一。

金黄色葡萄球菌检验技术是通过分离、培养和鉴定来检测和确定金黄色葡萄球菌的存在与类型。

以下是金黄色葡萄球菌检验技术的介绍及分析。

金黄色葡萄球菌的分离是检验的第一步。

样品通常是从患者的伤口、分泌物或体液中获取的，也可以从环境中收集。

分离可以通过将样品涂抹到适当的察尔染色的琼脂平板上，然后进行培养和鉴定来完成。

金黄色葡萄球菌会在琼脂平板上形成金黄色的菌落。

培养是金黄色葡萄球菌检验的关键步骤。

常用的培养基包括牛肉蛋白胨琼脂、亚洲互联网的Tag：脑心制剂琼脂、亚洲互联网的Tag：镜光菌属琼脂等。

金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性球菌，它可以在各种营养富集培养基中生长，但最好使用富含血液、蛋白质和碳水化合物的培养基。

培养的时间通常为24小时，金黄色葡萄球菌菌落会呈现金黄色且凸起。

鉴定是确认金黄色葡萄球菌的类型的步骤。

鉴定方法包括形态学观察、生化试验和分子生物学方法。

形态学观察是通过显微镜观察菌落和细胞形态来判断。

金黄色葡萄球菌是圆形或椭圆形的，常呈簇状分布。

生化试验可以通过检测金黄色葡萄球菌对特定底物的代谢能力来进行鉴定。

一些常用的测试包括氧化酶试验、半乳糖发酵试验等。

分子生物学方法可以通过检测特定基因或DNA序列来鉴定金黄色葡萄球菌。

金黄色葡萄球菌检验技术的分析主要集中在以下几个方面。

金黄色葡萄球菌的检验可以帮助医生确定感染的病原菌，从而指导合理的治疗方案。

金黄色葡萄球菌是耐药菌中的重要成员，对多种抗生素具有耐药性，因此及早检测和鉴定金黄色葡萄球菌可以避免无效的药物治疗。

金黄色葡萄球菌还可以引起食物中毒和医院相关感染等，检验技术的应用可以有助于减少相关疾病的发生。

金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的致病菌，广泛存在于环境中和人体的皮肤黏膜上。

它是一种革兰氏阳性球菌，通过空气、飞沫、直接接触等途径传播。

金黄色葡萄球菌引起的感染包括皮肤感染、呼吸道感染、骨髓炎、心内膜炎等，严重时还可以导致败血症和中毒性休克。

为了诊断金黄色葡萄球菌感染，需要进行相关的检验技术。

以下是金黄色葡萄球菌检验的常用技术介绍及分析：1. 细菌培养：将样品（如血液、脓液、分泌物等）接种到适当的培养基上，利用培养器将细菌培养在适当的温度和湿度下。

金黄色葡萄球菌能够在常规寒温培养基上生长，并产生特征性的金黄色色素。

2. 葡萄糖发酵试验：用含葡萄糖的培养基培养金黄色葡萄球菌，通过观察培养基的酸碱指示剂变化，如果培养基变为黄色，则说明金黄色葡萄球菌能够发酵葡萄糖产生酸。

3. 凝固酶试验：用凝固酶试剂与金黄色葡萄球菌接触，在一定时间内观察是否发生凝固反应。

凝固酶是金黄色葡萄球菌特有的酶，可以将凝血蛋白原转化为凝血蛋白，从而导致液体凝固。

4. 硝酸盐还原试验：将含有硝酸盐的培养基与金黄色葡萄球菌接触，观察是否产生还原反应。

正常情况下，金黄色葡萄球菌可以将硝酸盐还原为亚硝酸盐和硝酸，导致培养基变为红色。

5. 蛋白酶试验：用含有牛血清蛋白的培养基培养金黄色葡萄球菌，观察是否溶解蛋白质。

金黄色葡萄球菌能够产生多种蛋白酶，可以分解牛血清蛋白，形成溶解区。

通过以上的检验技术，可以初步判断金黄色葡萄球菌的存在和性质。

这些检验方法并不是专门针对金黄色葡萄球菌的，也不能确定金黄色葡萄球菌的毒力和抗药性等重要特征。

要做进一步的分析和确认，需要使用专门的分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）和基因测序等。

金黄色葡萄球菌检测方法1.纸片法目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。

采用快速测试片检测具有显著的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。

技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。

技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。

此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。

但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。

使目视效果下降，导致计数偏低。

2.免疫学方法各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。

抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。

金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。

在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。

目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。

免疫学方法包括下面两个部分：（1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。

按照现行的国标方法，金黄色葡萄球菌检测方法分为第一法定性检验、第二法平板计数法（适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品），以及第三法M P N 计数法（适用于金黄色葡萄球菌含量较低的食品）。

第一法定性检验过程包括样品处理、样品增菌、平板分离划线、初步鉴定、确证鉴定这5个步骤，整个流程全部完成至少需要5天时间。

第二法平板计数法包括5个步骤——样品稀释、样品接种涂布、典型菌和可疑菌计数、鉴定试验、结果计算，整个流程全部完成至少需要4天时间。

第三法M P N 计数法同样包括5个步骤，即样品稀释、样品增菌、平板分离划线、鉴定试验、查MPN 表确认结果，整个流程全部完成至少需要5天时间。

以下将对金黄色葡萄球菌的检测流程进行简单介绍，并对难点、注意事项进行梳理和讲解。

1 第一法：金黄色葡萄球菌定性1.1 样品处理固态和半固态样品：称取25g样品至盛有225mL 7.5%氯化钠肉汤中，充分混匀。

液体样品：吸取25m L 样品至盛有225m L 7.5%氯化钠肉汤的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，振荡混匀。

1.2 样品增菌将上述样品匀液置于金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析□ 李留洋 锐德检测技术（天津）有限公司重的感染。

该菌对营养的要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧。

容易受金黄色葡萄球菌污染的食品主要为乳制品、蛋及蛋制品、各类熟肉制品，其次是含有乳类的冷冻食品等，因此对于该菌的检验也被确定为食品致病性菌种检验中的重要项目。

图1 样品处理36±1℃的恒温培养箱中培养18~24h 。

1.3 平板分离划线该步骤是整个金黄色葡萄球菌检测环节中最重要的步骤之一，因为平板划线分离的效果决定了可疑菌落的判定和选择。

平板划线选择三分法或四分法则分离效果较好，更容易出现单菌落平板。

1.4 初步鉴定分离的培养基选用B a i r d -Pa r k e r 平板（B P 平板）和血平板。

结果显示，金黄色葡萄球菌在B a i r d -Pa r k e r 平板上呈圆形，表面光滑、凸起、湿润，菌落直径为2~3m m ，颜色呈灰黑色至黑色、有光泽，常有浅色（非白色）边缘，周围绕以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带，当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感；有时可见到不分解脂肪的菌株——除没有不透明圈和清晰带外，其他外观基本相同；从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落，其颜色常较典型菌落略浅，且外观可能较为粗糙，质地较干燥。