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坐骨神经腓肠肌标本制备实验结论一、实验目的二、实验原理三、实验步骤四、实验结果五、实验结论一、实验目的本次实验的主要目的是通过坐骨神经腓肠肌标本制备，了解人体肌肉组织的结构和特点。
同时，通过对标本制备过程中各个步骤的操作，掌握标本制备技能和方法。
二、实验原理1. 坐骨神经腓肠肌标本制备原理坐骨神经腓肠肌标本制备是指将动物或人体组织切割成薄片并进行染色处理，使其能够在显微镜下观察。
在这个过程中，需要进行以下几个步骤：（1）取样：从动物或人体中取出需要观察的组织样品。
（2）固定：将组织样品放入固定液中进行固定处理。
（3）包埋：将固定后的组织样品放入包埋剂中进行包埋处理。
（4）切片：将包埋后的组织样品切成薄片。
（5）染色：将切片进行染色处理，使其能够在显微镜下观察。
2. 坐骨神经腓肠肌结构原理坐骨神经腓肠肌是人体下肢的一部分，由坐骨神经支配。
它主要由三个部分组成：大腿后侧的半膜状肌、半腱状肌和小腿后侧的胫长伸肌。
这三个部分都是由肌纤维束组成的，每个束内又包含有许多个单独的肌纤维。
三、实验步骤1. 取样：从动物或人体中取出需要观察的组织样品。
2. 固定：将组织样品放入10%福尔马林液中进行固定处理，固定时间为24小时。
3. 包埋：将固定后的组织样品放入包埋剂中进行包埋处理，包埋时间为48小时。
4. 切片：将包埋后的组织样品切成厚度为5微米左右的薄片。
5. 染色：将切片进行染色处理，常用染色方法有HE染色法和Masson染色法等。
本次实验采用HE染色法进行染色处理。
6. 封片：将染好色的切片放入玻璃片上，加上封片胶，用玻璃片盖住，使其能够在显微镜下观察。
四、实验结果经过以上步骤的操作，制备出了坐骨神经腓肠肌标本。
在显微镜下观察到了肌纤维束组成的三个部分：半膜状肌、半腱状肌和胫长伸肌。
每个束内又包含有许多个单独的肌纤维。
五、实验结论通过本次实验，我们了解到了坐骨神经腓肠肌标本制备的基本步骤和操作方法，并且通过观察标本结构，掌握了人体肌肉组织的结构和特点。
生物实验报告-坐骨神经腓肠肌标本制备
本实验旨在通过制备坐骨神经腓肠肌标本的过程，掌握基础的组织学实验技能，同时加深对神经肌肉解剖结构的理解。
材料与方法：
材料：成年大鼠标本、无水乙醇、石蜡、光学显微镜、麻醉手套、组织取样器、组织取样盒、理化试管架等。
1.准备标本
用麻醉手套将成年大鼠净化神经集中于坐骨神经下1-2厘米范围内，然后将腓肠肌标本从骨骼中取出。
2.固定标本
将取出的腓肠肌标本置于10%的无水乙醇中固定24小时；
3.去水
从10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%到80%的无水乙醇渐次去除，每步时间为1小时；
4.透明
将固定去水的腓肠肌标本分别置于50%敌敌畏-乙醇溶液、70% 敌敌畏-乙醇溶液和100% 敌敌畏透明液溶液中，每步时间为2小时，至标本彻底透明。
5.包埋
取出已透明的腓肠肌标本，置于石蜡组织取样盒中，根据实验需求，选择合适的包埋方向。
6.取薄片
将石蜡包埋的腓肠肌标本取出，用微型切片机切制厚度为5微米的切片，将切片拉直后在干净的水晶片上展开。
7.染色与制成玻片
用哈里斯血液染色将切片染色，脱色后洗净水片后，在水晶片上滴几滴覆盖剂，然后用平凡玻片将组织接口反过来盖住薄片，压紧即可。
实验成果：
经过制备和染色后，我们取得了成年大鼠坐骨神经腓肠肌的标本，通过光学显微镜的观察与检测，我们发现该标本包含完整的腓肠肌结构及肌纤维分离范围。
切片上清晰可见腓肠肌内有明显的核团和细胞质呈透明状，同时染色后肌纤维呈现出红色，血管呈现出蓝色，系统性地展示了腓肠肌肌纤维和血管位置的分布情况。
结论与意义：。
实验1 蛙坐骨神经––––腓肠肌标本制备、分析探讨刺激频率对肌肉收缩的影响【课程名称】【实验名称】【实验性质】【器材】蟾蜍或蛙；任氏液；二道生理记录仪、双脉冲刺激器、肌槽、常规手术器械、玻璃分针、毁髓针、锌铜弓、解剖盘、烧杯、滴灌、任氏液等。
【实验目的】1.学习坐骨神经–腓肠肌标本的制备方法。
2.分析探讨刺激频率对肌肉收缩的影响。
【实验原理】刺激坐骨神经能引起腓肠肌产生收缩。
在其他条件不变情况下，不断增大刺激频率可引起肌肉收缩形式发生改变。
若刺激频率较小，两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩和舒张所持续的时间（即单收缩）时，肌肉收缩表现为一连串的单收缩；若增大刺激频率，使两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩的收缩期时间，而小于单收缩时，肌肉呈现不完全强直收缩；若继续增加刺激频率，使两次刺激间隔时间小于一次肌肉收缩的收缩期时间，肌肉则表现出完全强直收缩。
【实验步骤】1、双毁髓：左手握蟾蜍，背部向上。
用食指按压其头部前端，拇指压住躯干的背部，使头向前俯；右手持毁髓针，由两眼之间中线向后方划触，触及两耳后腺之间的凹陷处即是枕骨大孔的位置。
将毁髓针由凹陷处垂直刺入枕骨大孔，然后针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，以毁脑组织。
再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。
脊髓彻底捣毁时，可看到蟾蜍后肢突然蹬直，然后瘫软，此时的动物为双毁髓动物。
2、剥制后肢标本：左手持手术镊提起两前肢之间背部的皮肤，右手持手术剪横向剪断皮肤，然后往后肢方向撕剥皮肤。
剪开腹壁肌肉，用手术镊提起内脏，翻向头部，在看清支配后肢的脊神经发出部位后，于其前方剪断脊柱。
3、分离两后肢：将去皮的后肢腹面向上置于解剖盘上，右手持金冠剪纵向剪开脊柱，再剪开耻骨联合，使两后肢完全分离。
4、分离坐骨神经：将一侧后肢的脊柱端腹面向上，用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经，股部沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的裂缝，找出坐骨神经，剪断盖在上方的梨状肌，完全暴露坐骨神经，剪去支配腓肠肌之外的分支，再剪去脊柱及肌肉，只保留坐骨神经发出部位的一小块脊柱骨。
实验1 坐骨神经-腓肠肌标本的制备
一、实验目的
1. 学习蛙类动物双毁髓的实验方法
2. 学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法
3. 通过本实验熟悉刺激、兴奋、兴奋性和可兴奋组织的概念。
二、实验原理
蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性。
因此，常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。
三、实验器材
蟾蜍或蛙、常用手术器械（手术剪、手术镊、用术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针），蛙板，蛙钉，锌铜弓，培养皿，滴管，纱布，线，任氏液
四、实验步骤
1. 制备双毁髓蟾蜍（毁脑和脊髓）
取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。
左手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓。
彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉，此时的动物为双毁髓动物。
如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新毁髓。
2. 剥制后肢标本
剪除上肢和内脏在骶髂关节上0.5-1.0cm处用粗剪刀剪断脊柱。
用镊子夹住后端脊柱，以剪刀沿脊柱两侧剪除所有内脏及头胸部，留下后肢、骶骨、后端脊柱及紧贴于脊柱两侧的坐骨神经。
剥皮左手用镊子或直接用手捏住脊柱断端（注意不要压迫神经），右手捏住断端边缘皮肤，向下剥去全部后肢皮肤，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。
将手和用过的器械洗净后再进行以下步骤。
3. 分离两后肢
将去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上，脊柱端在左侧，左手固定标本的股部两侧肌肉，右手持手术刀，于耻骨联合处向下按压刀刃，切开耻骨联合。
然后用手托起标本，用金冠剪剪开两后肢相连的肌肉组织，并纵向剪开脊柱(尾杆骨留在一侧)，使两后肢完全分离。
将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。
4. 分离坐骨神经
将一侧后肢的脊柱端腹面向上，趾端向外侧翻转，使其足底向上，用固定针将标本固定在蛙板上。
用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经。
股部沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的肌缝，找出坐骨神经。
坐骨神经基部(即与脊神经相接的部位)，背部有一梨状肌盖住神经，用玻璃分针轻轻挑起肌肉，便可看清下面穿行的坐骨神经。
剪断(或用玻璃分针扯断)梨状肌，完全暴露坐骨神经与其相连的脊神经。
再用玻璃分针轻轻挑起神经，自前向后剪去支配腓肠肌之外的神经分支，将坐骨神经分离至腘窝处。
取下脊柱端的固定针，保留神经发出部位的一小块脊柱骨，用金冠剪剪去其余部分脊柱骨及肌肉。
用手术镊轻轻提起连有神经的脊柱骨片，将神经移离开股骨。
5. 分离股骨头
沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，再用金冠剪自膝关节向前刮干净股骨上的肌肉，保留1 cm股骨头并剪断股骨。
提起腓肠肌上的扎线，剪去膝关节下部的后肢，仅保留腓肠肌与股骨的联系。
6. 游离腓肠肌
用手术镊(尖头镊)在腓肠肌跟腱下面穿线，并用结线扎紧。
提起结线，游离腓肠肌。
7. 检验标本
用手术镊轻轻提起标本的脊柱骨片，使神经离开玻璃板。
再用任氏液蘸湿的锌铜弓，将其两极接触神经，如腓肠肌发生迅速收缩，则表示标本机能正常。
提起腓肠肌上的结扎线，
不使神经受到牵拉，轻轻将标本放入任氏液中保存。
稳定15-20min后即可进行实验。
此标本可以用于神经干兴奋的传导、神经—肌肉接点的传递以及骨骼肌的收缩等实验研究。
五．注意事项
1. 已剥离皮肤的组织避免接触皮肤毒液或其他不洁物。
2. 分离神经时，一定要用玻璃分针，不能随便用刀、剪进行操作。
3. 不能过分牵拉神经，以免造成损伤。
4. 标本制备过程中经常用任氏液湿润标本。
5. 避免用手指或金属器械接触或夹持标本的神经肌肉部分。
思考题
1.剥去皮肤的后肢，能用自来水冲洗吗？为什么？
2.金属器械碰压，触及或损伤神经及腓肠肌，可能引起哪些不良后果？
3.如何保持标本的机能正常？。
