实验一 坐骨神经腓肠肌标本的制备

简述制备坐骨神经腓肠肌标本的步骤
1、取材：从新鲜的成年能鼠死亡的腹部或颈部部分取出支配双腿的坐骨神经及其腓肠肌。

2、清理材料：洗去血清、脂肪、臀神经和肌纤维，只保留神经路径及肌肉纤维。

3、固定：将取出的神经和肌肉泡入4％氯化钠溶液中，浸泡数小时以固定神经肌肉。

4、浸泡：将固定的标本浸泡在硝酸甘油溶液中，以去除表面的脂肪和蛋白质。

5、染色：将固定好的材料放入硝酸胆红素油溶液中，以对不同组织标记其区分度。

6、切片：将显色的材料放入冷冻机中，以切成薄片状，并加以处理，使染色物能牢固地粘结在薄片上。

7、培养：将处理过的固定薄片置于玻片上，再加入培养基以促进细胞生长。

8、包埋：将培养的材料包埋于涂有胶或塑料的玻片上，以便对样本进行后续处理。

9、切片：将包埋的材料切成薄片，以便观察样本的形状和细胞特征。

10、观察：将薄片浸入染色剂中，并进行实时光学显微镜下的观察，观察样品的细胞结构及形态特征。

11、分析：利用扫描电镜或透射电镜观察样本的内部细微结构，以深入研究坐骨神经腓肠肌标本。

12、保存：将完成制备的腓肠肌标本用脱脂性液体物质覆盖起来，以便保存并达到常温下稳定性。

坐骨神经腓肠肌标本制备实验结论一、实验目的二、实验原理三、实验步骤四、实验结果五、实验结论一、实验目的本次实验的主要目的是通过坐骨神经腓肠肌标本制备，了解人体肌肉组织的结构和特点。

同时，通过对标本制备过程中各个步骤的操作，掌握标本制备技能和方法。

二、实验原理1. 坐骨神经腓肠肌标本制备原理坐骨神经腓肠肌标本制备是指将动物或人体组织切割成薄片并进行染色处理，使其能够在显微镜下观察。

在这个过程中，需要进行以下几个步骤：（1）取样：从动物或人体中取出需要观察的组织样品。

（2）固定：将组织样品放入固定液中进行固定处理。

（3）包埋：将固定后的组织样品放入包埋剂中进行包埋处理。

（4）切片：将包埋后的组织样品切成薄片。

（5）染色：将切片进行染色处理，使其能够在显微镜下观察。

2. 坐骨神经腓肠肌结构原理坐骨神经腓肠肌是人体下肢的一部分，由坐骨神经支配。

它主要由三个部分组成：大腿后侧的半膜状肌、半腱状肌和小腿后侧的胫长伸肌。

这三个部分都是由肌纤维束组成的，每个束内又包含有许多个单独的肌纤维。

三、实验步骤1. 取样：从动物或人体中取出需要观察的组织样品。

2. 固定：将组织样品放入10%福尔马林液中进行固定处理，固定时间为24小时。

3. 包埋：将固定后的组织样品放入包埋剂中进行包埋处理，包埋时间为48小时。

4. 切片：将包埋后的组织样品切成厚度为5微米左右的薄片。

5. 染色：将切片进行染色处理，常用染色方法有HE染色法和Masson染色法等。

本次实验采用HE染色法进行染色处理。

6. 封片：将染好色的切片放入玻璃片上，加上封片胶，用玻璃片盖住，使其能够在显微镜下观察。

四、实验结果经过以上步骤的操作，制备出了坐骨神经腓肠肌标本。

在显微镜下观察到了肌纤维束组成的三个部分：半膜状肌、半腱状肌和胫长伸肌。

每个束内又包含有许多个单独的肌纤维。

五、实验结论通过本次实验，我们了解到了坐骨神经腓肠肌标本制备的基本步骤和操作方法，并且通过观察标本结构，掌握了人体肌肉组织的结构和特点。

实验一 坐骨神经腓肠肌标本制备【实验目的】掌握坐骨神经腓肠肌标本的制备技术，为以后有关实验打下基础。

【实验原理】两栖类的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似， 而其离体组织所需的生活条件 比较简单，易于建立、控制和掌握。

因此在实验中常用蟾蜍或蛙的坐骨神经腓肠肌标本来观 察兴奋与兴奋性的一些规律以及骨骼肌的收缩特点等。

所以坐骨神经腓肠肌标本的制备是生 理实验的一项基本操作技术。

【实验对象】蟾蜍或蛙。

【实验材料】两栖类手术器械 1套(粗剪刀、组织剪、眼科剪、组织镊、眼科镊、金属探针、玻璃 分针、蛙板)、手术线、蛙尸缸、滴管、平皿、锌铜弓、任氏液。

【实验步骤】1． 破坏脑和脊髓取蟾蜍 1 只，用自来水冲洗干净。

左手握住蟾蜍，用拇指按压背部，食指按压头部 前端使其头部前俯，右手持金属探针在头前缘沿正中线向尾端触划，所触划到的头部后 端的凹陷处，即为枕骨大孔所在部位。

在此处将金属探针垂直刺入皮肤，有突破感后再 将金属探针折向前经枕骨大孔刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织；然后将金属探针回抽至 枕骨大孔处，转向后刺入脊椎管，反复提插捣毁脊髓。

此时如蟾蜍的四肢松软，呼吸运 动消失，表示脑和脊髓已完全破坏，否则应按上法再行捣毁。

2． 剪除躯干上部及内脏如图 1－1 所示，在骶髂关节位置用左手将蟾蜍提起，在骶髂关节水平以上 0.5～l 厘米处用粗剪刀剪断脊柱，然后将粗剪刀尖向下深入体腔沿躯干两侧剪开皮肤，使蟾蜍 头、上肢与内脏自然下垂，将其一并剪除弃去，仅留后肢、骶骨、脊柱及紧贴于脊柱两 侧的坐骨神经。

在整个剪除过程中注意勿损伤神经。

3． 剥皮左手用组织镊夹紧或用手直接捏住脊柱断端(注意：不要夹住或接触神经)，右手捏，将标本放在盛有任氏液 住其上的皮肤边缘，用力向下剥掉全部后肢皮肤（见图 1－2）的平皿中。

将手及用过的粗剪刀、组织镊等全部手术器械洗净，再进行下述步骤。

4． 分离两腿用镊子从背位夹住脊柱将标本提起，剪去向上突出的骶骨(注意勿损伤坐骨神经)，然后沿正中线用粗剪刀将脊柱分为两半，并从耻骨联合中央剪开两侧大腿，然后将分离的两条腿浸于盛有任氏液的平皿中备用。

实验1 坐骨神经腓肠肌标本制备【实验目的】掌握蛙类的捉拿和破坏脑脊髓的方法，掌握坐骨神经腓肠肌标本的制备技术、获得兴奋性良好的标本。

【实验原理】蟾蜍及蛙类的一些基本生命活动与哺乳动物相似，又因其离体组织在短时间内所需的生活条件简单，易于控制和掌握，因此在实验中常用蟾蜍或蛙的坐骨神经腓肠肌标本来观察兴奋和兴奋性、刺激与反应及肌肉收缩等基本生理现象。

因而制备坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验中必须掌握的一项基本技能。

【实验对象】蟾蜍或青蛙。

【实验用品】蛙类手术器械一套，（普通剪刀、手术剪刀、眼科剪、组织镊子、眼科镊子、探针、锌铜弓、玻璃分针、蛙板、玻璃板、蛙钉）任氏液、方瓷盘、培养皿、棉线、纱布、滴管等。

【实验步骤】1.破坏脑和脊髓取蟾蜍一只，用左手握住蟾蜍，食指按压头部前端，拇指按压背部，使头部前俯；右手持金属探针由头端沿中线向尾方划触、触及凹陷处即枕骨大孔的所在。

将探针由凹陷处垂直刺入2~3mm，刺破皮肤即入枕骨大孔，这时将探针尖端水平转向头方，向前探入颅腔内，然后向各方搅动探针，以捣毁脑组织。

脑组织捣毁后，将探针退出；再由枕骨大孔刺入，并水平转向尾方，与脊髓平行刺入椎管，来回抽动探针以彻底破坏脊髓。

当动物四肢肌肉的紧张性完全消失时，提示脑和脊髓完全破坏（见图2-1）。

2.剪除躯干上部及内脏在骶髂关节水平以上1～1.5cm处剪断脊柱。

左手握止蟾蜍后肢、用拇指压止骶骨，使蟾蜍头与内脏自然下垂，右手持普通剪刀（严禁用手术剪剪骨骼），沿脊柱两侧剪除一切内脏及头胸部，留下后肢、骶骨、脊柱以及紧贴于脊柱两侧的坐骨神经。

剪除过程中注意勿损伤坐骨神经。

3.剥皮左手握紧脊柱断端（注意不要握住或压迫神经），右手捏住其上的皮肤边缘、用力向下剥掉全部后肢的皮肤（图2-2 ）4.清洗把剥皮后的标本放在盛有任氏液的培养皿中。

将手及用过的剪刀、镊子等全部手术器械洗净，再继续下面步骤。

注意剥皮后的标本不能用自来水冲洗。

5.分离两腿用镊子夹住脊柱标本背面朝上，剪去向上突起的尾骨（注意勿损伤坐骨神经）。

第九章实验内容实验1 坐骨神经-腓肠肌标本的制备【实验目的】掌握制备坐骨神经-腓肠肌标本的操作技术，为此后有关的神经肌肉实验打下基础。

【实验原理】蛙或两栖类动物的一些基本生命活动及生理功能与温血动物近似，而且其离体组织需要的生活条件非常简单，易于控制和掌握。

因此在生理学实验中，坐骨神经-腓肠肌标本是研究神经肌肉生理最常用的对象，经常用来研究神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律、肌肉收缩的特点、兴奋性的周期性变化等。

【实验器材和药品】蛙类手术器械一套（金属探针1根，粗剪刀、眼科剪刀各1把，圆头镊子、眼科镊子各1把，玻璃分针2根），蛙板和玻璃板各1块，培养皿，滴管，废物缸、锌铜弓，丝线，棉花；任氏液。

【实验对象】蟾蜍或蛙。

【实验方法和步骤】1．破坏脑和脊髓（常用的有三种方法）(1) 俯式捣毁法：是最常用的方法。

以左手持蟾蜍，将其腹面朝向手心，前肢夹在食指和中指之间固定，后肢夹在无名指和小指之间固定，并用拇指按压蟾蜍头部使之下俯30~40度角；然后右手持金属探针沿蟾蜍头部的中线下划，可触及一凹陷处即为枕骨大孔（图9-lA）。

将探针从枕骨大孔垂直刺入1~1.5mm，再向前刺入颅腔，左右搅动（可感觉到探针与颅骨壁的碰击），破坏脑组织；再将探针退回至进针处，但不拔出而是转向后方刺入椎管，破坏脊髓。

(2) 仰式捣毁法：将蟾蜍仰卧于蛙板上，拉开下颌，右手持探针在颅底两眼之间向前下刺入颅腔，用探针在颅腔内向四周捣毁脑组织，然后将探针退至粘膜下，针尖向后平行刺入椎管内以破坏脊髓。

(3) 横断脊柱后捣毁法：左手持蟾蜍，右手持粗剪刀，在两腋窝稍下横断脊柱，然后在脊柱呈白色的脊髓断面处，向上插入探针破坏脑，再向下插入探针破坏脊髓。

以上方法破坏脑和脊髓成功后，蟾蜍出现四肢（尤其是后肢）瘫软，并常有尿失禁现象。

2．剪去躯干上部及内脏用粗剪刀在两侧腋部稍下（或在骶髂关节以上1.5 ~ 2cm处）剪断脊柱（图9- 1B），用左手握住蟾蜍后肢，拇指按压骶骨，使蟾蜍头部及内脏自然下垂；避开腰骶神经丛后，右手用粗剪刀沿脊柱两侧剪开腹壁，在耻骨联合处将躯干上部及内脏剪掉，弃入废物缸内。

生物实验报告姓名：班级：日期：同组者：实验序号：实验题目：坐骨神经-腓肠肌标本的制备实验目的：1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。

2．学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

实验原理：两栖类动物的离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。

因此在生理实验中常用蟾蜍的坐骨神经——腓肠肌标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激强度、刺激频率与肌肉收缩反应的一些规律以及骨骼肌的收缩特性等。

实验对象：蟾蜍实验器材：常规手术器械（粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊）蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线等。

实验方法及步骤：1、破坏脑脊髓部位枕骨大孔。

如果蟾蜍四肢松软，呼吸消失，表示脑脊髓已完全破坏，否则按上述方法再进行捣毁。

2、剪去躯干上部及内脏在骶髂关节前1 cm处用金冠剪（粗剪）剪断脊柱（可在下肢前端）。

沿脊柱切口向下剪开两侧腹部皮肤至耻骨处，将头、前肢、内脏及腹部软组织全部剪掉，放于污物盘，只保留下端脊柱和下肢。

在腹侧脊柱两旁可看到腰骶神经丛。

注意切勿触及或损伤坐骨神经。

3、剥后肢皮肤左手持镊子夹住脊髓断端，右手捏住断端边缘，剥掉全部后肢皮肤。

将标本放于盛有任氏液的培养皿内，将手和手术器械洗净。

4、分离两腿用金冠剪剪去尾骨杆（骶骨），沿脊椎中线将脊柱剪开，再沿耻骨联合正中央剪开两侧大腿，使两腿完全分离（切勿伤及神经），将两腿浸于任氏液中。

5、游离坐骨神经取一后肢，腹面向上（背位），固定于蛙板上，沿脊柱侧用玻璃分针轻轻勾起坐骨神经，逐一剪去神经分支至股端。

用金冠剪剪断脊柱，只保留一小段椎骨片与坐骨神经相连。

将标本改为背面向上（腹位）固定，用镊子提起梨状肌，剪断，用玻璃分针将坐骨神经小心勾至背部。

再沿坐骨神经沟（半膜肌和股二头肌的肌间缝）分离坐骨神经。

用镊子夹住与神经相连的脊椎骨，提起神经，用眼科剪将神经分支及结缔组织膜顺序剪断，将神经一直游离到腘窝处。

6、游离腓肠肌用镊子夹住脊椎骨，将神经搭在腓肠肌上，用剪刀将膝关节周围的大腿肌肉完全剪除，用金冠剪将膝关节上方的股骨刮干净，暴露骨股并在距膝关节上1 cm处剪断，分离腓肠肌的跟腱，用线结扎，然后自跟腱的附着点剪断，提起跟腱，将腓肠肌分离至膝关节处，将小腿其余部分剪掉。

生物实验报告姓名：班级：日期：同组者：实验序号：实验题目：坐骨神经-腓肠肌标本的制备实验目的：1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。

2．学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

实验原理：两栖类动物的离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。

因此在生理实验中常用蟾蜍的坐骨神经——腓肠肌标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激强度、刺激频率与肌肉收缩反应的一些规律以及骨骼肌的收缩特性等。

实验对象：蟾蜍实验器材：常规手术器械（粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊）蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线等。

实验方法及步骤：1、破坏脑脊髓部位枕骨大孔。

如果蟾蜍四肢松软，呼吸消失，表示脑脊髓已完全破坏，否则按上述方法再进行捣毁。

2、剪去躯干上部及内脏在骶髂关节前1 cm处用金冠剪（粗剪）剪断脊柱（可在下肢前端）。

沿脊柱切口向下剪开两侧腹部皮肤至耻骨处，将头、前肢、内脏及腹部软组织全部剪掉，放于污物盘，只保留下端脊柱和下肢。

在腹侧脊柱两旁可看到腰骶神经丛。

注意切勿触及或损伤坐骨神经。

3、剥后肢皮肤左手持镊子夹住脊髓断端，右手捏住断端边缘，剥掉全部后肢皮肤。

将标本放于盛有任氏液的培养皿内，将手和手术器械洗净。

4、分离两腿用金冠剪剪去尾骨杆（骶骨），沿脊椎中线将脊柱剪开，再沿耻骨联合正中央剪开两侧大腿，使两腿完全分离（切勿伤及神经），将两腿浸于任氏液中。

5、游离坐骨神经取一后肢，腹面向上（背位），固定于蛙板上，沿脊柱侧用玻璃分针轻轻勾起坐骨神经，逐一剪去神经分支至股端。

用金冠剪剪断脊柱，只保留一小段椎骨片与坐骨神经相连。

将标本改为背面向上（腹位）固定，用镊子提起梨状肌，剪断，用玻璃分针将坐骨神经小心勾至背部。

再沿坐骨神经沟（半膜肌和股二头肌的肌间缝）分离坐骨神经。

用镊子夹住与神经相连的脊椎骨，提起神经，用眼科剪将神经分支及结缔组织膜顺序剪断，将神经一直游离到腘窝处。

6、游离腓肠肌用镊子夹住脊椎骨，将神经搭在腓肠肌上，用剪刀将膝关节周围的大腿肌肉完全剪除，用金冠剪将膝关节上方的股骨刮干净，暴露骨股并在距膝关节上1 cm处剪断，分离腓肠肌的跟腱，用线结扎，然后自跟腱的附着点剪断，提起跟腱，将腓肠肌分离至膝关节处，将小腿其余部分剪掉。

坐骨神经腓肠肌标本得制备与神经干动作电位得观察与传导速度得测定一、实验目得:1.学习蛙类动物双毁髓得实验方法、2。

学习并掌握坐骨神经—腓肠肌标本得制备方法。

3.观察蛙坐骨神经干复合动作电位得基本波形,并了解其产生得原理。

4.学习蛙与蟾蜍离体神经干上神经冲动传导速度得方法与原理、二、实验材料:1.实验对象:蟾蜍2、实验器材:常规手术器械(粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊)蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线、PC机、信号采集处理系统、神经屏蔽盒等。

三、实验原理:神经干在受到有效刺激以后可以产生复合动作电位,标志着神经发生兴奋。

如果在离体神经干得一段施加刺激,从另一端引导传来得神兴奋冲动,可以记录出双相电位,加入在引导得两个电极之间将神经干麻醉或损伤,阻断其兴奋传导能力,这时候记录出得动作电位就成为单相电位、神经细胞得动作电位就是以全或无得方式产生得。

但就是,复合动作电位得幅值在一定刺激强度下就是随刺激强度得增加而增大得。

如果在远离刺激点得不同距离处分别引导离体神经干动作电位,两引导点之间得距离为m,在两引导点分别引导出得动作电位得时相差为ｓ。

即可按照公式ｖ=m/s来计算出兴奋得传导速度、蛙类得坐骨神经干属于混合性神经,其中包含有粗细不等得各种纤维,其直径一般为3-29um,其中直径最粗得有髓纤维为A类纤维,传导速度在正常室温下为35－4０ m/ｓ。

神经每兴奋一次极其在兴奋以后得回复过程中,其兴奋性都要经历一次周期性得变化,其全过程依次包括绝对不应期、相对不应期、超常期与低常期４个时期。

为了测定坐骨神经在发生一次兴奋以后兴奋性所发生得周期性变化,首先要给神经施加一个条件性刺激引起神经兴奋,然后在前一兴奋及其恢复过程不同时相再施加一个测试性刺激,用于检查神经得兴奋阈值与所引起得动作电位得幅度,以判定神经兴奋性得变化。

四、实验方法及步骤:1、坐骨神经干标本制备(1) 破坏脑与脊髓:取蛙一只,用自来水冲洗干净,左手持蛙,用食指下压其吻部,拇指按压在其骶髂关节下方,使其头尽量前俯,右手持探针沿两眼之间中线向后方轻划,至触及头颈部正中得凹陷处,即为枕骨大孔得位置。

坐骨神经—腓肠肌标本制备一、实验目得要求1、学习蛙类动物单毁髓与双毁髓得方法。

2、学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及腓肠肌标本得制备方法、3、了解电刺激得极性法则。

二、实验原理１、蛙或蟾蜍等两栖类动物得一些基本生命活动与生理功能与温血动物相似,而其离体组织生活条件易于掌握,在任氏液得浸润下,神经肌肉标本可较长时间保持生理活性、因此,在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉得兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等、２、细胞得静息膜电位为外正内负,电刺激可改变可兴奋细胞得膜电位差、膜电位减小时,细胞去极化,细胞兴奋;膜电位增大时,细胞超极化,细胞兴奋性被抑制、蘸有任氏液得锌铜弓接触活组织时,可产生沿锌片—活组织—铜片流向得电流对细胞产生刺激效应。

三、实验材料与仪器1、实验材料:牛蛙2、实验器材:手术剪、手术镊、手术刀、眼科剪、眼科镊、毁髓针、蛙板、固定针、滴管、培养皿、玻璃分针锌铜弓、污物缸、粗棉线、任氏液四、实验步骤1、洗净实验动物→毁髓→剥制后肢→分离坐骨神经→游离腓肠肌→游离股骨头→标本检验→电刺激极性法则得验证２、双毁髓一只手握住牛蛙,使其背部向上、用拇指压住牛蛙背部,食指按压其头部前端,另一只手持毁髓针,由两眼之间沿中线向下触划,触及凹陷处即为枕骨大孔。

将毁髓针垂直刺入枕骨大孔。

将针尖向前刺入颅腔内搅动,此时为单毁髓;将毁髓针退回枕骨大孔,针尖转向后方,与脊椎平行刺入椎管内捣毁脊髓,完成双毁髓。

3、坐骨神经－腓肠肌标本制备（1）剥制后肢标本:轻提双毁髓蛙,自背面耻骨联合上方约1公分处横向剪断脊柱。

轻轻托起后肢,瞧清坐骨神经位置,沿脊柱两侧横向切口剪断体壁,去除断口以上肢体与内脏放入污物缸。

剥去后肢皮肤后放入任氏液中备用。

（2）分离两后肢:用粗剪刀纵向剪开脊柱,并剪断两后肢相连得肌肉,一只用于剥制标本,一只放入任氏液中保存。

（3）分离坐骨神经:将后肢标本脊柱端腹面向上,趾端向外侧用蛙钉将标本固定在蛙板上。

实验指导（节录自：哈尔滨医科大学生理学(高职高专类)实验讲义）实验一 坐骨神经腓肠肌标本制备[目的] 学会制备神经肌肉标本的方法[原理] 蟾蜍或蛙的一些基本生命活与温血动物相近似，而且离体组织所需要的生活条件比较简单，容易控制，所以可用蛙的坐骨神经腓肠肌标本来观察神经冲动、兴奋性、兴奋过程及肌肉的收缩特点等等。

[用品]蛙或蟾蜍、蛙类实验用品。

[步骤]1、破坏脑和脊髓取蟾蜍（或蛙）一只，用水冲活干净。

用左手握住蟾蜍（背部朝上）食指压住头部前端，使头前倾。

可见头部背面正中线上有一凹陷处（即枕骨大孔所在部位）。

右手持探针尖在此处垂直刺入1—2mm，再将探针放平，针尖转向头部，经枕骨大孔将探针刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织；而后将探针退出枕骨大孔，使针尖向后刺入椎管，捣毁脊髓。

如动物四肢松软，表明脑、脊髓已完全破坏。

2、切断脊柱 用左手捏住蛙腰部，右手持粗剪刀，在肩关节稍下方处将剪刀的一刃插入脊柱前方，剪断脊柱。

3、剪除上半身及内脏右手用粗剪刀沿腹壁左右侧向后剪去，此时蛙体上半身和大部分内脏便一同垂向下方）。

在耻骨联合处将腹壁和脏器一并去掉，只保留双腿和与之相连的腹后壁及脊柱，切勿切断。

4、去皮 左手捏住脊柱（不要触及神经），右手捏住其上的皮扶边缘，向下翻转剥掉全部后肢的皮肤。

将标本放在盛有任氏液的培养器中。

5、分离两腿 将手和用过的器械洗净后，捏住脊柱使背面朝上，使尾骨突出于背侧。

平放剪刀剪去尾骨（切勿损伤坐骨神经）。

然后从耻骨联合中央脊柱正中线用粗剪刀剪开，使左右两腿完全分开。

将标本浸入盛有任氏液的培养皿中（在制备过程中应随时滴加任氏液湿润标本）。

6、分离坐骨神经将标本用大头针固定于蛙板上，用玻璃分针将股骨背侧股二头肌和半腰肌拉开，暴露并分离坐骨神经。

用粗剪刀剪下一小段与坐骨神经相连的脊住，将此脊柱轻轻提起，逐一剪去坐骨神经的分支。

在膝关节周围剪掉全部大腿肌肉，并用刀将股骨刮干净，然后在股骨中部剪断，去上段，保留与膝关节相连的一段股骨备用。