蛙坐骨神经–腓肠肌标本制备

生理学实验1 蛙坐骨神经腓肠肌标本的制备一、目的和原理蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动与温血动物近似，但其离体组织所需的生活条件比较简单，且易于控制，因此在生理学实验中常用其离体组织或器官作为实验标本。

例如：蛙或蟾蜍的坐骨神经腓肠肌标本，可用来观察和研究兴奋性、兴奋过程、刺激引起兴奋的条件、兴奋在神经-肌接头处的传递、肌肉收缩的特点等多种生理现象，所以，制备坐骨神经-腓肠肌标本，是生理学实验的一项基本操作技术。

本实验的目的是：学习并掌握制备坐骨神经-腓肠肌标本的方法，为以后的神经肌肉实验打下基础。

二、实验对象蛙或蟾蜍三、器材和用品蛙板、蛙针、蛙钉、剪刀（2把）、镊子（2把）、玻璃针、锌铜弓、培养皿、滴管、棉线、棉球、尸体盘（以上用品合称蛙类解剖器械一套）及任氏液。

四、方法与步骤1．破坏脑脊髓选一活泼健壮的蛙或蟾蜍，用清水冲洗干净。

左手握蛙，用食指下压吻端，拇指按压背部，使头前俯；右手持蛙针由吻端沿正中线向尾端触划，所触到的凹陷处即是枕骨大孔所在部位。

将蛙针由此垂直刺入皮下，再将针尖折向前方，经枕骨大孔进入颅腔，左右搅动捣毁脑组织（图1-1）。

然后将蛙针退出至刺入点皮下，再将针尖向后插入椎管捣毁脊髓。

图1-12．剪除前部躯干及内脏在骶髂关节以上1厘米处用粗剪刀剪断脊柱，并将前部躯干及所有内脏一并剪去，仅保留一段腰骶部脊柱和后肢。

在所留脊柱的腹侧两旁可看到坐骨神经丛。

剪下的部分置于尸体盘内。

3．剥皮左手捏住脊柱断端，右手捏住断端边缘的皮肤，向下剥掉后肢的全部皮肤，标本置于盛有任氏液的培养皿中待用，皮肤弃去。

洗净双手和器械，以免蛙或蟾蜍皮肤的分泌物损害神经和肌肉。

4．分离两后肢将下肢标本腹侧向上用蛙钉固定于蛙板上，用玻璃针沿脊柱两侧分离两条坐骨神经；在两条坐骨神经下各穿一线，于靠近脊柱处将其分别结扎，并在扎线与脊柱之间剪断神经；左手用结扎线提起坐骨神经，右手持剪刀或玻璃针向下游离，直至坐骨神经出盆腔处；将游离的两条坐骨神经分别置于两侧大腿的肌肉上。

实验名称：坐骨神经—腓肠肌标本的制备一、实验目的学习坐骨神经—腓肠肌标本的制备方法，掌握基本操作技术。

二、实验原理1、牛蛙作为实验动物的优势容易饲养，产量丰富价格便宜，性价比高。

蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与哺乳动物相似，如神经的生物电活动、肌肉收缩等。

牛蛙是哺乳动物的理想替代品。

牛蛙的离体组织所需的生活条件比较简单，易于控制和掌握。

在任氏液的浸润下神经肌肉标本可较长时间保持生理活性。

2、使用锌铜弓检验标本活性的原理锌铜弓是把一根锌棒和一根铜棒一端焊在一起，另一端分开。

锌的金属电势比铜低，形成一定的电势差（就相当于有电压）。

细胞的静息膜电位为外正内负，电刺激可改变可兴奋细胞的膜电位差。

膜电位减小时，细胞去极化。

细胞兴奋，膜电位增大时，细胞超极化，细胞兴奋性被抑制。

当用锌铜弓接触标本时，可产生沿锌片—活组织—铜片流向的电流对细胞产生刺激效应。

引起标本局部去极化，引发动作电位，肌肉收缩。

三、实验器材1、实验动物：牛蛙。

2、实验器材：任氏液，蛙类手术器械一套，大头针，锌铜弓。

四、实验流程和步骤1、实验流程洗干净实验动物→毁髓→剥制后肢→分离两后肢→分离坐骨神经→游离腓肠肌→分离股骨头→标本检验2、实验方法与步骤（1）毁髓：一只手握住牛蛙，使其背部向上。

用拇指压住牛蛙背部，食指压其头部前端，另一只手持毁髓。

用解剖针从蛙的枕骨大孔（把头抬起来时凹陷的部位或者脊柱与头骨的中心点）插入向前搅动后再向后搅动，直至毁髓成功（蛙的四肢自然下垂，瘫软无力）。

（2）剥制后肢标本：轻提双毁髓蛙，自背面耻骨联合上方约 1 公分处用粗剪刀横向剪断脊柱。

轻轻托起后肢，看清坐骨神经位置。

沿脊柱两侧横向切口剪断体壁、去除断口以上肢体和内脏放入污物缸。

剥去后肢皮肤后放入任氏液中备用。

（3）分离两后肢：用粗剪刀纵向剪开脊柱，并剪断两后肢相连的肌肉。

一只用于剥制标本，另一只放入任氏液中保存。

（4）分离坐骨神经、将后肢二标本脊柱端腹面向上、趾端向外侧用蛙钉将标本固定在蛙板上。

坐骨神经-腓肠肌标本制备骨骼肌单收缩及其总和以及Powerlab实验系统的使用二、实验目的：1. 学习蛙类动物单毁髓与双毁髓方法，并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

2. 了解电刺激的极性法则和方法，学习肌肉收缩的记录方法。

3. 观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系、骨骼肌的单收缩过程和肌肉收缩的总和以及强直收缩现象, 了解肌肉收缩过程的时相变化以及刺激频率对骨骼肌收缩形式的影响。

三、实验原理：腓肠肌由许多肌纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。

当刺激强度过小时，不引起肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。

而能引起肌肉发生收缩反应的最小刺激强度，为阈刺激。

当全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。

这时，即使再增大刺激强度，肌肉收缩的力量也不再随之加大，该刺激强度为最适刺激强度。

肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速的收缩反应，称为单收缩。

单收缩一般要经历潜伏期、收缩期和舒张期三个过程。

当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，则出现多个收缩反应的叠加，叫做强直收缩。

当后一收缩发生在前一收缩的舒张期，即发生不完全强直收缩；当后一收缩发生在前一收缩的收缩期，各自的收缩则完全融合，肌肉出现持续的收缩状态，即产生完全强直收缩。

四、实验材料：青蛙五、实验步骤：1. 制备坐骨神经-腓肠肌标本：1) 洗干净实验动物2) 双毁髓，剥制后肢，分离两后肢3) 分离坐骨神经4) 游离腓肠肌5) 分离股骨头6) 标本检验7) 电刺激极性法则的验证2. 连接实验装置：将换能器的输出线接至RM6240生理记录装置的2通道，电刺激信号接至肌槽的电极上。

然后把制备好的坐骨神经-腓肠肌标本股骨固定在肌槽上。

将固定肌肉的棉线另一端接在张力换能器上，保持适度松紧，将坐骨神经搭在肌槽的电极上。

3. 设置通道放大器和刺激器：1) 打开PowerLab电源，检查USB线连接2) 打开Chart5中文版3) 设置通道数为24) 设置通道2-桥式放大器：量程5mV,低通10Hz，调零5) 设置刺激器：刺激方式选脉冲，脉冲数1，手动方式，量程10V,振幅100mV,标记通道1，频率1Hz,持续时间1mS,4. 开始测试：1) 打开刺激器面板和点右下角”开始“按钮2) 点右上角调节采样速度（“走纸速度”）3) 菜单打开设置刺激器的脉冲数2个或5个，重新打开刺激器面板4) 调节走纸速度为400六、实验结果：图1. 蛙坐骨神经—腓肠肌标本图（二）坐骨神经-腓肠肌标本在Powerlab实验系统中所记录下的数据1.通过不断调整刺激强度，使肌肉收缩的幅度适中，记录单收缩的曲线（图2-1 ）。

一、实验背景牛蛙作为一种两栖动物，因其独特的生理结构和生活习性，成为生理心理学实验研究的理想动物模型。

牛蛙的坐骨神经腓肠肌标本制备实验，是生理心理学实验中常见的实验之一。

本实验旨在通过观察不同强度和频率的刺激对牛蛙腓肠肌收缩的影响，探讨神经肌肉兴奋传导的原理。

二、实验原理1. 神经肌肉兴奋传导原理神经肌肉兴奋传导是指神经纤维上的动作电位通过神经肌肉接点传递到肌肉细胞膜，使肌肉细胞产生收缩的过程。

在神经肌肉兴奋传导过程中，坐骨神经作为传入神经，将神经冲动传递到腓肠肌细胞膜上的受体，引起肌肉细胞的兴奋和收缩。

2. 刺激与肌肉收缩的关系肌肉收缩是肌肉细胞对神经冲动的反应。

在实验中，通过给予不同强度和频率的刺激，观察腓肠肌的收缩情况，可以分析刺激与肌肉收缩之间的关系。

3. 牛蛙坐骨神经腓肠肌标本制备原理牛蛙坐骨神经腓肠肌标本制备实验，主要利用牛蛙坐骨神经与腓肠肌之间的解剖关系。

坐骨神经作为传入神经，将神经冲动传递到腓肠肌细胞膜上的受体，引起肌肉细胞的兴奋和收缩。

通过制备坐骨神经腓肠肌标本，可以直观地观察刺激与肌肉收缩之间的关系。

4. 不同强度和频率刺激对肌肉收缩的影响（1）刺激强度：刺激强度是指给予神经肌肉接点的电流强度。

在一定范围内，刺激强度与肌肉收缩幅度呈正相关。

当刺激强度低于阈值时，肌肉不产生收缩；当刺激强度超过阈值时，肌肉收缩幅度随着刺激强度的增加而增大。

（2）刺激频率：刺激频率是指单位时间内给予神经肌肉接点的刺激次数。

在一定范围内，刺激频率与肌肉收缩频率呈正相关。

当刺激频率低于一定值时，肌肉不产生收缩；当刺激频率超过一定值时，肌肉收缩频率随着刺激频率的增加而增大。

三、实验方法1. 标本制备（1）处死牛蛙，迅速取出坐骨神经和腓肠肌。

（2）将坐骨神经和腓肠肌放入生理盐水中，以保持标本的新鲜度。

（3）用手术刀将坐骨神经和腓肠肌分离，暴露出腓肠肌细胞膜。

2. 刺激与观察（1）将坐骨神经连接到刺激器上，腓肠肌连接到肌电图记录仪上。

实验二-坐骨神经标本—腓肠肌标本的制备一、实验目的：1.学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。

2.学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本及腓肠肌的制备方法。

3.了解电刺激的极性法则。

二、实验原理：1、牛蛙作为实验动物的优势：离体实验是动物生理学主要的实验方法之一。

两栖动物是冷血动物，其基本生理机能与温血动物近似，而其离体组织器官维持活性所需要的条件比较简单，因此它常被选为生理学实验提供离体组织或器官的实验动物。

蟾蜍或青蛙坐骨神经—腓肠肌在任氏液中可维持生理活性数小时，在其基础上还可进一步制作神经干标本、腓肠肌标本，可用于研究肌肉收缩的特性，神经和肌肉的兴奋性、传导性，刺激与反应的关系，神经肌肉接头活动等生理活动及相关机制，甚至还可以用于药物筛选如抗疲劳药物的模型。

其中牛蛙人工养殖成本低产出率高，相对蟾蜍要更安全。

因此，本次实验选择牛蛙作为实验对象。

2、锌铜弓刺激检测标本活性的原理：锌铜弓在溶液中沾湿以后，锌的表面电离出正离子，里面形成负离子；而铜的表面电离出负离子,里面形成正离子。

当用锌铜弓接触活组织时，电流便沿着锌一活组织→铜的方向流动而产生刺激效应。

所以锌相当于正极,面铜相当于负极发挥刺激作用；当断开时，则发生相反的效应。

锌的金属电势比铜低，形成一定的电势差（就相当于有电压），锌铜弓是把一根锌棒和一根铜棒一端焊在一起，另一段分开，则接触样本（例如神经干）时，会引起样本局部去极化，引发动作电位。

三、实验器材：牛蛙，常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针)，蜡盘，蛙板（木质或硬泡沫塑料），玻璃板，固定针，锌铜弓，培养皿或不锈钢盘，污物缸，滴管，纱布，粗棉线，任氏液。

四、实验流程和步骤：1.牛蛙的双毁髓一手握住牛蛙，背部向上。

用拇指压住牛蛙的背部，食指按压其头部前端，使头端向下低垂；另一手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后触划，当触及两耳中间的凹陷处（此处与两眼的连线成等边三角形）时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。

第1篇一、实验目的1. 学习蛙的解剖结构，掌握青蛙坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。

2. 了解神经和肌肉的兴奋、兴奋性，刺激与反应的规律和肌肉收缩的特征。

3. 掌握蛙心灌流实验方法，观察心脏活动的影响因素。

二、实验原理1. 蛙的坐骨神经-腓肠肌标本制备：蛙的坐骨神经和腓肠肌在生理条件下具有兴奋性和传导性，通过制备坐骨神经-腓肠肌标本，可以观察神经和肌肉的兴奋、兴奋性，刺激与反应的规律和肌肉收缩的特征。

2. 蛙心灌流实验：离体心脏灌流实验是研究心脏生理功能的重要方法，通过改变灌流液的成分，可以观察其对心脏活动的影响，了解心脏的正常节律性活动。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：青蛙、任氏液、生理盐水、剪刀、手术剪、眼科镊、金属探针、玻璃分针、蛙板、蛙钉、细线、培养皿、滴管、电子刺激器、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、套管夹、65%NaCl、2%CaCl2、1%KCl、1:10000肾上腺素、1:10000乙酰胆碱、3%乳酸。

2. 实验仪器：蛙类解剖台、显微镜、电生理实验系统、刺激器、数据采集系统、蛙心灌流装置。

四、实验方法与步骤1. 蛙的坐骨神经-腓肠肌标本制备：（1）取青蛙一只，用生理盐水冲洗干净，左手握住蛙，使其背部向上。

（2）用眼科镊和剪刀在青蛙的坐骨神经和腓肠肌处剪开，分离出坐骨神经和腓肠肌。

（3）将坐骨神经和腓肠肌置于任氏液中，用玻璃分针轻轻拨动腓肠肌，观察肌肉收缩情况。

2. 蛙心灌流实验：（1）将青蛙的左心耳和左肺静脉用细线结扎，然后剪断，使心脏与体循环分离。

（2）将心脏置于蛙心灌流装置中，连接计算机采集系统和刺激器。

（3）将灌流液（任氏液）通过灌流装置注入心脏，观察心脏搏动情况。

（4）改变灌流液的成分，如加入肾上腺素、乙酰胆碱、乳酸等，观察心脏活动的影响。

五、实验结果与分析1. 蛙的坐骨神经-腓肠肌标本制备成功，腓肠肌在刺激下产生明显的收缩反应。

2. 蛙心灌流实验成功，心脏在灌流液的作用下保持节律性搏动。

实验1 蛙坐骨神经––––腓肠肌标本制备、分析探讨刺激频率对肌肉收缩的影响【课程名称】【实验名称】【实验性质】【器材】蟾蜍或蛙；任氏液；二道生理记录仪、双脉冲刺激器、肌槽、常规手术器械、玻璃分针、毁髓针、锌铜弓、解剖盘、烧杯、滴灌、任氏液等。

【实验目的】1.学习坐骨神经–腓肠肌标本的制备方法。

2.分析探讨刺激频率对肌肉收缩的影响。

【实验原理】刺激坐骨神经能引起腓肠肌产生收缩。

在其他条件不变情况下，不断增大刺激频率可引起肌肉收缩形式发生改变。

若刺激频率较小，两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩和舒张所持续的时间（即单收缩）时，肌肉收缩表现为一连串的单收缩；若增大刺激频率，使两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩的收缩期时间，而小于单收缩时，肌肉呈现不完全强直收缩；若继续增加刺激频率，使两次刺激间隔时间小于一次肌肉收缩的收缩期时间，肌肉则表现出完全强直收缩。

【实验步骤】1、双毁髓：左手握蟾蜍，背部向上。

用食指按压其头部前端，拇指压住躯干的背部，使头向前俯；右手持毁髓针，由两眼之间中线向后方划触，触及两耳后腺之间的凹陷处即是枕骨大孔的位置。

将毁髓针由凹陷处垂直刺入枕骨大孔，然后针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，以毁脑组织。

再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。

脊髓彻底捣毁时，可看到蟾蜍后肢突然蹬直，然后瘫软，此时的动物为双毁髓动物。

2、剥制后肢标本：左手持手术镊提起两前肢之间背部的皮肤，右手持手术剪横向剪断皮肤，然后往后肢方向撕剥皮肤。

剪开腹壁肌肉，用手术镊提起内脏，翻向头部，在看清支配后肢的脊神经发出部位后，于其前方剪断脊柱。

3、分离两后肢：将去皮的后肢腹面向上置于解剖盘上，右手持金冠剪纵向剪开脊柱，再剪开耻骨联合，使两后肢完全分离。

4、分离坐骨神经：将一侧后肢的脊柱端腹面向上，用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经，股部沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的裂缝，找出坐骨神经，剪断盖在上方的梨状肌，完全暴露坐骨神经，剪去支配腓肠肌之外的分支，再剪去脊柱及肌肉，只保留坐骨神经发出部位的一小块脊柱骨。