微生物的分离与计数

实验五微生物的分离、接种及培养法一目的要求1.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。

2.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。

二实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

常用的分离方法有： 1) 平板划线分离法；2）稀释平板分离法。

在食品发酵工业中，通过微生物的分离、纯化，选育优良的微生物菌种，以提高产品的质量和产量；在食品卫生管理方面，需要进行微生物检测，必须将微生物单一分离出来，加以鉴别和研究。

土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。

因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。

微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。

三实验材料1.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样品。

2.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼脂培养基（斜面、平板）。

3.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。

四实验内容与步骤（一）微生物的分离技术1. 平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个菌落，从而达到分离的目的。

具体方法如下：倒制平板→制备含菌样品稀释液→划线→倒置适温培养→观察记录（1)倒制平板：将固体培养基熔化→冷却至 50-55℃→注入培养皿内 15ml（无菌操作）→旋匀→静置凝固→即成平板→在皿盖边贴标。

（2)含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌悬液即可，能直接划线的样品（如体液、黏液、污水等），可省去这操作。

（3)划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸入培养皿，轻轻划线（切勿把平板表面划破）。

然后将培养皿倒置放入恒温培养箱37℃，培养24-48 小时，观察平板上出现的现象，注意菌落的形状，并做记录。

第1篇一、实验目的1. 理解土壤稀释法的原理和应用。

2. 掌握土壤稀释法的实验操作步骤。

3. 通过实验，学习如何分离和计数土壤中的微生物。

4. 分析土壤微生物的种类和数量。

二、实验原理土壤稀释法是一种常用的微生物分离和计数方法。

该方法的原理是将土壤样品进行一系列倍比稀释，然后涂布于培养基表面，经过培养后，土壤中的单个微生物细胞或孢子在培养基上形成菌落，从而可以分离和计数微生物。

三、实验材料1. 土壤样品：采集自实验基地，新鲜、无污染。

2. 营养琼脂培养基：用于培养微生物。

3. 稀释液：无菌水或生理盐水。

4. 移液器：用于准确吸取稀释液。

5. 平板计数器：用于计数菌落。

6. 灭菌器械：酒精灯、无菌操作台、镊子等。

四、实验步骤1. 样品处理：取土壤样品10g，加入90mL无菌水，充分振荡混匀，制成土壤悬液。

2. 稀释：取1mL土壤悬液加入9mL无菌水中，制成10^-1稀释液；取1mL10^-1稀释液加入9mL无菌水中，制成10^-2稀释液；以此类推，制成10^-3、10^-4、10^-5稀释液。

3. 涂布：取10^-3、10^-4、10^-5稀释液各0.1mL，分别涂布于三个营养琼脂培养基平板上。

4. 培养与观察：将涂布好的平板倒置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察菌落生长情况。

5. 计数：用平板计数器计数每个平板上的菌落数，记录结果。

6. 结果分析：根据菌落数，计算土壤样品中的微生物数量。

五、实验结果与分析1. 实验结果经过24小时培养，三个平板上的菌落数分别为：A平板30个，B平板50个，C平板80个。

2. 结果分析根据实验结果，土壤样品中的微生物数量约为30×10^4个/g。

六、实验讨论1. 实验过程中，土壤悬液的制备和稀释操作要尽量减少污染，确保实验结果的准确性。

2. 在涂布过程中，要确保稀释液均匀涂布于培养基表面，避免菌落聚集。

3. 培养过程中，要注意温度、湿度等条件，确保菌落正常生长。

【精品】微生物的分离、培养与计数微生物是一类非常微小的生物体，它们在自然界中广泛分布。

它们既能在有机物中繁殖生长，又能利用无机物产生生物化学反应。

因此，微生物对于生态系统的生物转化和元素缓冲都有重要的作用。

对于微生物的分离与培养，目前有许多方法，本文将介绍其中比较常用的几种方法。

一、分离方法1. 稀释法稀释法是微生物分离中最基本的方法之一。

它的原理是将微生物溶液稀释到一定程度，然后在培养基表面或培养液中进行培养，使微生物单独分散生长。

稀释法分为限量和非限量两种。

限量稀释方法一般用于微生物数量较少时，非限量稀释方法用于微生物数量较多时。

稀释法的优点是简单易行，适用于各种微生物。

2. 均质法均质法是利用机械或化学方法将微生物样品分散均匀，再用无菌铁筒将分散液加压强制穿过小孔的方法从而达到单菌分离的方法。

此方法适用于样品微生物量极少，且可用于多种不同菌种的分离。

3. 筛选法筛选法是通过不同的生理特性采用选择性培养基进行筛选，将目标微生物与其他微生物分开的方法。

常用的选择性培养基有青霉素和红值耐药素互补剂选择性培养基、大肠菌属选择性培养基等。

二、培养方法1. 常规培养法常规培养法是指最常见的培养方法，即将单菌接种于培养基上，使其在适宜的温度、ph值和营养成分下繁殖生长。

常用温度为30℃-37℃，ph值为7.0-7.5，营养成分包括碳源、氮源、微量元素和水等。

常规培养法简单易行，易于操作，适用于多数菌种。

原位培养法是将微生物直接培养在其生长环境中的方法，常常用于难培养的微生物，如土壤和水样中的微生物。

原位培养法优点是能够筛选到多种不同菌种，但需要时间较长且操作难度较高。

3. 微生物选育基培养法微生物选育基培养法是利用各种选育基，促进菌落分化，从而达到不同菌株、菌类或产物的选育的方法。

微生物选育基培养法的优点是快速、准确、可靠，但其缺点是培养基较复杂，操作相对费时。

三、计数方法1. 直接计数法直接计数法是指在一定容积中直接计数目标微生物的数量。

微生物计数方法微生物计数是许多领域中重要的分析方法，包括环境科学、食品科学、医学和生物技术。

正确的计数方法能够准确地估计样品中微生物的数量，对于研究和工业应用都是至关重要的。

下面将介绍几种常用的微生物计数方法。

血细胞计数器法是一种使用显微镜进行微生物计数的经典方法。

该方法使用血细胞计数器对微生物样品进行计数，每个格子中的微生物数量被计算出来，然后进行统计分析。

此方法的优点是准确性高，但是耗时长，操作繁琐，需要熟练的操作人员。

流式细胞术是一种使用流式细胞仪进行微生物计数的现代方法。

该方法将微生物样品通过流式细胞仪进行计数和分析，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。

此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，但是设备成本高，维护成本也较高。

自动细胞计数器法是一种使用自动细胞计数仪进行微生物计数的现代方法。

该方法使用自动细胞计数仪对微生物样品进行计数，能够快速准确地测定样品中的微生物数量和种类。

此方法的优点是速度快、精度高、可自动化操作，而且设备相对较为经济实惠，易于推广应用。

平板计数法是一种常用的细菌计数方法。

该方法将微生物样品涂布在平板上，培养后计算菌落数量，从而得出样品中的细菌数量。

此方法的优点是简单易行、成本低，但是结果受培养条件和操作者技能水平的影响，准确性相对较低。

不同的微生物计数方法具有不同的优缺点，应根据具体的研究目标和实际情况选择合适的方法。

为了提高计数的准确性，需要注意样品的采集、保存、制备和处理等方面的问题，确保样品的质量和代表性。

微生物的分离与计数是微生物学中重要的实验技术之一。

通过分离和计数，我们可以获得微生物群体的相关信息，如种类、数量、生长状况等，对于微生物学研究、应用以及工业生产等领域都具有重要的意义。

选择合适的培养基：根据目标微生物的种类和生长需求，选择适合的培养基。

培养基应具有营养丰富、透明度高、易于观察等特点。

制备样品：从目标环境中采集样品，如土壤、水、食品等，并进行预处理，以去除不需要的杂质和大型生物。

微生物检验的基本内容微生物检验是一种通过对样本中的微生物进行分离、培养和鉴定的方法，用于检测和确认样本中是否存在微生物，并确定其种类和数量。

微生物检验在医学、食品安全、环境保护等领域具有重要的应用价值。

本文将介绍微生物检验的基本内容，包括样本采集、分离培养、鉴定和计数等步骤。

一、样本采集微生物检验的第一步是采集样本。

样本可以是各种物质，如食品、水、空气、土壤、人体组织和体液等。

采集样本时需要注意保持样本的无菌状态，避免外界的污染。

常用的采样方法包括直接刮取、吸取、冲洗和切割等。

二、分离培养分离培养是微生物检验的核心步骤，目的是将样本中的微生物分离出来，并使其在培养基上生长成单独的菌落。

分离培养可以采用液体培养和固体培养两种方法。

液体培养适用于检测微生物总数和特定菌群的数量，而固体培养适用于分离和鉴定不同种类的微生物。

分离培养的关键是选择适当的培养基和培养条件。

培养基应包含必需的营养物质，如碳源、氮源、无机盐和水分等，以满足微生物生长的需要。

培养条件包括温度、pH值、氧气浓度和湿度等，不同微生物对这些条件的要求各不相同。

因此，在进行分离培养时需要根据待检测微生物的特性来选择适当的培养基和培养条件。

三、鉴定鉴定是确定分离出的微生物种类的过程。

鉴定微生物可以从形态学、生理生化特性、生长习性和分子生物学等方面进行。

形态学鉴定是通过观察微生物的形状、大小、颜色和结构等特征来判断其种类。

生理生化特性鉴定是通过检测微生物对不同营养物质的利用、产物的生成和酶的活性等来判断其代谢特征。

生长习性鉴定是通过观察微生物的生长速度、温度范围和耐受性等来判断其生态特征。

分子生物学鉴定是通过检测微生物的DNA或RNA序列来判断其遗传关系和亲缘关系。

鉴定微生物的方法有很多种，如显微镜观察、生化试验、培养基特性和PCR等。

根据待鉴定微生物的特点和需要，可以选择适当的方法进行鉴定。

鉴定的结果应与已知的微生物参考库进行对比，以确定待鉴定微生物的种类和名称。

微生物纯种的分离方法自然界中的微生物总是杂居在一起，即使一粒土或一滴水中也生存着多种微生物。

要研究其中的某一种微生物，首先必须将它分离出来。

下面介绍几种纯种微生物的分离方法。

平板划线分离将已经熔化的培养基倒入培养皿中制成平板，用接种环沾取少量待分离的材料，在培养基表面平行或分区划线(图5-5)，然后，将培养皿放入恒温箱里培养。

在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。

液体稀释法将待分离的样品经过大量稀释后，取稀释液均匀地涂布在培养皿中的培养基表面，培养后就可能得到单个菌落。

利用选择培养基进行分离不同的微生物对不同的试剂、染料、抗生素等具有不同的抵抗能力，利用这些特点可配制出适合某种微生物生长而限制其他微生物生长的选择培养基。

用这种培养基来培养微生物就可以达到纯种分离的目的。

菌丝尖端切割这种方法适于丝状真菌。

用无菌的解剖刀切取位于菌落边缘的菌丝的尖端，将它们移到合适的培养基上培养后，就能得到新菌落三、细菌的分离与计数（一）背景知识介绍1.细菌的分离与纯化自然界的细菌总是以杂居的方式存在，如土壤、水、空气等都分布着种类繁多的细菌。

我们如何知道这些杂居的细菌是哪种细菌呢？这就需要将这些带菌的材料中混杂的细菌，经过稀释，使其分散成单个存在的菌体，在固体培养基平板上，长成肉眼可见并具有一定特征的菌落。

这些菌落分离出来，进行纯培养。

所谓纯培养即在一个培养物中，所有的细菌都是由一个细菌分裂繁殖而产生的后代。

这种获得单一菌株纯培养的的方法称为细菌的分离。

常用的分离方法有稀释法和划线法。

（二）课题提出：我们的身体和周围的环境有大量的细菌，细菌与我们的生活和健康密切相关。

但是，自然存在的细菌都混杂在一起，我们要想研究和了解各种细菌的形态结构和功能，就要对其进行分离纯化，才能进行深入的研究。

如对一些致病菌的研究，食品卫生的研究，微生物工业的研究等。

在研究过程中，有时需要调查和检测细菌密度，则需要统计细菌的数量。