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流式细胞术的基础和临床应用流式细胞术是一种在单个细胞水平上进行多参数快速测定的技术，它利用流体力学原理和荧光化学技术，对细胞进行快速、准确地分析和分类。
流式细胞术具有高速度、高精度和高分辨率的特点，因此在生物学、医学和生物技术等领域得到了广泛应用。
流式细胞术的基础包括细胞物理特性、荧光化学特性以及现代光学、计算机和电子技术的应用。
细胞物理特性是指细胞的大小、形状、粒度等物理性质，这些性质可以通过流式细胞术进行测量。
荧光化学特性是指利用荧光物质标记抗体或核酸等分子，对细胞进行标记和染色，然后通过流式细胞术进行检测。
现代光学技术、计算机技术和电子技术的应用则使得流式细胞术能够实现多参数、高精度和高分辨率的检测。
在临床应用方面，流式细胞术被广泛应用于淋巴细胞亚群分析、功能性T淋巴细胞亚群分析、肿瘤免疫分析等方面。
淋巴细胞亚群分析是流式细胞术最常用的检测项目之一，通过对淋巴细胞亚群的检测和分析，可以了解机体的免疫状态和疾病发病机制，对于免疫相关性疾病的诊断和治疗具有重要意义。
功能性T淋巴细胞亚群分析则可以进一步了解T淋巴细胞的免疫功能和分化特点，对于肿瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病等的治疗和预后评估具有指导作用。
肿瘤免疫分析则通过流式细胞术检测肿瘤细胞表面的抗原和抗体，了解肿瘤细胞的免疫逃逸机制和免疫应答情况，为肿瘤的免疫治疗提供依据。
此外，流式细胞术还被应用于干细胞研究、基因表达分析、药物筛选和毒理学研究等领域。
例如，通过对干细胞的表面标志物进行检测和分析，可以了解干细胞的特性和分化能力；通过对基因表达谱的检测和分析，可以了解基因的表达水平和调控机制，为疾病治疗和药物研发提供依据。
总之，流式细胞术作为一种强大的细胞分析工具，其基础包括细胞物理特性、荧光化学特性以及现代光学、计算机和电子技术的应用。
在临床应用方面，流式细胞术已经成为医学研究和诊断中不可或缺的工具之一，其应用范围涵盖了淋巴细胞亚群分析、功能性T淋巴细胞亚群分析、肿瘤免疫分析等多个方面。
流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床背景流式细胞术检测T、B、NK淋巴细胞亚群已较为广泛的应用于儿科临床许多疾病涉及儿童相应免疫功能异常临床工作中更有效的理解和应用流式细胞术以评估儿童的免疫状况，指导疾病的诊断、治疗还缺乏系统的学习材料尤其是临床一线的儿科医务工作者对流式细胞术的临床应用更有待进一步加强认识和学习。
检测对象原则：免疫功能受损者均应常规评估淋巴细胞亚群免疫功能包括：免疫防御功能免疫自稳和耐受功能免疫监视功能免疫防御功能受损易发生感染反复感染严重感染多种病原与特殊病原感染常规治疗效果不佳的感染除了宿主免疫防御受损容易造成上述少见感染状况之外，感染本身也可造成继发性免疫防御受损，因此免疫评估应注意原发和继发两方面的问题。
免疫自稳和耐受功能受损过敏性疾病：并非所有这类患者都需要进行淋巴细胞亚群的检测。
对于一些严重的过敏患者应考虑淋巴细胞亚群的检测。
①婴幼儿时期全身严重湿疹样表现。
②嗜酸性粒细胞显著增多③血清IgE水平明显增高（IgE>1000IU/L）④伴有反复、严重感染的患者自身免疫和自身炎症性疾病①存在难以控制的自身免疫反应情况及出现明显的自身免疫性淋巴增殖情况②合并反复感染的患者③存在自身炎症反应④长期免疫抑制药物、生物制剂使用前后免疫监视功能受损主要引起肿瘤血液系统肿瘤：儿童时期最为多见的是血液系统肿瘤其他肿瘤及实体瘤：其他系统肿瘤患者也应酌情进行淋巴细胞亚群的检测，既可能存在原发性淋巴细胞亚群的异常，也可能出现继发性改变，尤其是进行各种化疗时，淋巴细胞亚群大多会受到影响其他特殊情况血常规中淋巴细胞明显异常家族成员中有免疫缺陷病史长期使用免疫抑制剂者基本数据判断应进行绝对计数和相对数的判别相对数的三个基本公式[公式a] CD3+%+CD19+%+CD16/56+%=100%±5%[公式b] CD4+%+CD8+%=CD3%[公式c] CD4+/CD8+比值>1绝对计数的判断绝对数标准不同仪器和年龄段及人群存在差别。
流式细胞术在临床检验中的应用流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种可对单细胞悬液进行快速定性、定量分析和分选的技术。
它不仅可以对细胞表面抗原进行检测，也能对细胞内部的生物大分子进行检测，能够在细胞水平上对相关疾病进行诊断和病程监测。
因此在临床医学及科学研究中发挥着非常重要的作用。
随着技术水平的不断提高及完善，FCM得到了更为广泛的应用。
目前，FCM在临床检验方面主要应用于血液学、免疫学、肿瘤、等临床医学和基础医学研究领域，具有检测样品快速、准确以及灵敏度性高等特点，为临床检验提供了一种强有力的手段和全新的医学视角，是临床检验工作中重要的一种研究工具。
FCM主要由液流系统、光学系统、电子系统组成。
其主要基本原理是将待测样本染色后制成单细胞悬液放入样品管中，通过气体的压力使样品进入鞘液，鞘液与样品之间会形成一定的压力，当压力达到一定程度后，在鞘液的带动下，单细胞悬浮样品会形成单细胞柱状经过激光聚焦区，样品柱与激光束垂直，由于样品经特异性染料处理，因此在激光激发下会产生特定波长的荧光。
流式细胞仪中的光学系统收集到荧光信号后进行信号处理，再经过计算机系统对这些数字信号收集、储存，以一维直方图或二维点阵图及数据表或三维图形显示出来，然后做出统计分析从而获得所需要的检测结果。
1．FCM在血液学中的应用FCM主要通过对外周血细胞和骨髓细胞表面抗原和DNA的检测分析对各种血液病如白血病、淋巴瘤等血液系统疾病的分型、诊断、治疗及预后判断均有重要作用。
血细胞在白细胞系、红细胞系、巨核细胞系、血小板及非造血细胞均有不同的分化抗原表达，分布在细胞质、细胞膜中。
血液肿瘤细胞的特征是丧失了正常细胞的系类专一性和分化阶段的规律性，运用FCM将具有系列特异性并涵盖不同分化阶段的单克隆体作为分子探针来检测血液肿瘤细胞的内外抗原，可以反映其本质上与正常造血细胞的差异。
由于不同的血细胞系统都有其特有的表面抗原，FCM通过采用各种血细胞表面分化抗原特异的单克隆抗体，借助于各种不同的荧光染料（FITC、PE）可同时检测一个单细胞的不同参数，根据所测的参数结果来判断出该血细胞的属性。
流式细胞仪淋巴亚群在肿瘤化疗后患者中的应用摘要目的对流式细胞仪淋巴亚群在肿瘤化疗后患者中的应用价值进行分析研究。
方法60例肿瘤化疗患者作為观察组（化疗后无缓解29例、化疗后完全缓解31例），60例健康体检者作为对照组。
采用流式细胞技术分析观察组患者化疗前后的淋巴细胞亚群的变化特征，并与对照组进行对比。
结果观察组化疗前及化疗后无缓解CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD3-CD16+CD56+均明显低于对照组，差异均具有统计学意义（P＜0.05）；观察组化疗后无缓解CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD3-CD16+CD56+与本组化疗前比较差异均无统计学意义（P>0.05），但从数据可看出免疫功能有进一步恶化的趋势；观察组化疗后完全缓解CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD3-CD16+CD56+与本组化疗前及化疗后无缓解比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）。
结论肿瘤患者细胞免疫功能衰退，化疗完全缓解后可改善肿瘤患者机体的免疫功能。
关键词流式细胞技术；淋巴亚群；肿瘤化疗后流式细胞仪是一种新型高科技仪器，其中包含了激光、计算机、单克隆抗体、光电测量、细胞荧光化学以及电子物理技术。
流式细胞技术在临床医学当中应用非常广泛，被应用于肿瘤学、免疫学、血液学、微生物检测、器官移植等等[1，2]。
本组研究以本院肿瘤化疗患者为研究对象，对流式细胞仪淋巴亚群在肿瘤化疗后患者中的应用价值进行分析研究，现做如下汇报。
1 资料与方法1. 1 一般资料本研究事先获得患者知情同意，研究开展时间为2015年4月～2016年12月，抽取本院60肿瘤患者作为观察组，所有患者均经手术、内窥镜、病理学检查证实，其中胃癌15例，原发性肝癌12例，结肠癌9例，乳腺癌11例，肺癌6例，食管癌5例，淋巴瘤2例；排除并发免疫性疾病患者，所有患者接受4个周期以上化疗（化疗后无缓解29例、化疗后完全缓解31例）；其中男23例，女37例；年龄35～72岁，平均年龄（58.2±6.5）岁。
淋巴细胞亚群流式
淋巴细胞亚群流式是一种通过流式细胞术检测淋巴细胞亚群的方法。
流式细胞术是一种用于分析细胞特性和功能的生物技术，通过将单个细胞与特异性抗体结合，对细胞表面和内部标记物进行定量和定性分析。
在淋巴细胞亚群流式中，通过使用特异性抗体标记不同的淋巴细胞亚群，如T细胞、B细胞、NK细胞等，然后利用流式细胞仪对标记后的细胞进行快速分析和计数。
这种方法可以获得淋巴细胞亚群的相对百分比和绝对值，从而评估机体的免疫状态。
淋巴细胞亚群流式在临床诊治中发挥了重要作用。
例如，在白血病诊断和治疗中，通过监测异常淋巴细胞亚群及绝对计数结果，可以为临床初步判断信息提供依据。
同时，在诊疗阶段，更为明确的白血病分型及MRD监测有助于为治疗方案选择、临床疗效分析、预后判断、复发监测等方面提供更加精准的医学决策支持。
此外，在免疫重建过程中，多参数流式细胞术结果对于及时评价患者的细胞免疫功能，指导免疫抑制剂等药品的使用种类和剂量等方面均具有重要价值。
需要注意的是，临床检测都有标准化的检测方案，可以直接上机调用建立好的内置模板，使用比较方便。
流式细胞术（flow cytometry）是一种广泛应用于生物医学领域的技术，它通过检测细胞表面和内部分子的存在和数量，从而可以对细胞进行高度特异性的分析和分类。
在临床诊断、生物医学研究以及药物开发等方面都有着重要的应用。
其中，流式细胞术检测淋巴细胞亚群，可以帮助我们更好地了解免疫系统的功能状态，对于免疫相关疾病的诊断和治疗具有重要意义。
本文将从原理和注意事项两个方面，深入探讨流式细胞术检测淋巴细胞亚群的相关知识。
**一、流式细胞术检测淋巴细胞亚群的原理**1. 标本处理流式细胞术检测淋巴细胞亚群的首要步骤是标本处理。
通常情况下，我们会收集外周血进行检测。
在实际操作中，需要抗凝剂进行处理，避免血液凝固，从而保证细胞的完整性。
2. 抗体染色标本处理完成后，接下来是抗体染色。
我们会选择特定的单克隆或多克隆抗体，将其与待检测的淋巴细胞结合。
这些抗体会携带着荧光标记，通过激光的激发，可以将淋巴细胞亚群进行精准识别。
3. 流式细胞分析染色完成后，样本会被注入到流式细胞仪中，通过激光的激发和散射光的检测，可以将不同淋巴细胞亚群进行高效、高速的分析。
在这一步骤中，流式细胞仪会根据荧光信号的强度和特异性来对淋巴细胞进行分类和计数。
4. 数据分析通过计算机对流式细胞仪获取的数据进行分析和解读，我们可以得到淋巴细胞亚群的比例、数量和表达特征等信息，从而更好地了解免疫系统的状态和功能。
**二、流式细胞术检测淋巴细胞亚群的注意事项**1. 样本保存在进行流式细胞术之前，我们需要认真保存样本，避免细胞的损伤和变性。
通常情况下，标本需要在4摄氏度下保存，并尽快进行检测，避免细胞的失活和降解。
2. 抗体选择在进行抗体染色时，需要根据实际情况选择合适的抗体，保证其对于待检测的淋巴细胞具有高度的特异性和亲和性。
还需要注意避免抗体的交叉反应，以免对结果的准确性造成影响。
3. 仪器校准流式细胞仪作为检测设备，需要定期进行校准和质控。
・５０・垦竖垫墼堕堂垄查！！！！生！旦箜！！鲞箜！塑丛』！坐！！型！』竺！！！型垫！！！ｙ堕：！！：垒坠！・临床研究・流式细胞术检测体液Ｔ淋巴细胞亚群的临床应用莫扬１，许小东２（华中科技大学同济医学院附属裹樊医院检验科，湖北襄樊４４１０２１；２．卫生部北京医院流式细胞仪室１００７３０）【摘要】目的探讨胸水、腹水、肺泡灌洗液Ｔ淋巴细胞亚群的榆测方法及临床价值。
方法采用流式细胞术检测良、恶性疾病患者的５０例胸水、４６例腹水、４７例肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中Ｔ淋巴细胞亚群的水平并分组进行比较。
结果１）胸水：结核性胸膜炎组胸水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（２７．３６±６．４１）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６７．９８±７．４１）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为２．６０±０．６４，肺部恶性肿瘤组胸水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６７．９７士４．２０）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３７．６１±４．８０）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为０．４７－４－０．１０，与结核性胸膜炎组比较，恶性组Ｔｈ、Ｔｈ／Ｔｓ比值显著Ｆ降（Ｐ＜０．０１）而Ｔｓ显著升高（Ｐ＜０．０１）；２）肺泡灌洗液：肺良性疾病组肺泡灌洗液Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（４４．５４－４－９．５６）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（４９．２８－＋４－１２．８８）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为１．１３±０．２９，肺部恶性肿瘤组肺泡灌洗液Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６５．１１±７．７７）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３４．５７±６．６５）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为０．５４－４－０．１９，与良性病变组比较，恶性组Ｔｈ卜．降（Ｐ＜ｏ．０５），Ｔｈ／Ｔｓ比值显著卜．降（Ｐ＜０．０１），而Ｔｓ显著升高（Ｐ＜０．０１）。
３）腹水：结核性腹膜炎组腹水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３３．１１±３．３４）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（６６．６９±３．７８）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为２．０３士０．２８，恶性组腹水Ｔｓ细胞占Ｔ淋巴细胞的（５６．６４±９．３４）％、Ｔｈ细胞占Ｔ淋巴细胞的（３５．８６士３．３０）％、Ｔｈ／Ｔｓ比值为０．６５±０．１０，与结核性腹膜炎组比较，恶性组Ｔｈ、Ｔｈ／Ｔｓ比值显著Ｆ降（Ｐ＜０．０１），而Ｔｓ显著升高（Ｐ＜ｏ．０１）。
结论胸腹水、肺泡灌洗液Ｔ淋巴细胞亚群检测可用于分析性质并有助于评估患者局部免疫功能状态。
【关键词】支气管肺泡灌洗液；流式细胞术；Ｔ淋巴细胞哑群中图分类号：Ｒ４４６．６１文献标识码：Ａ文章编号：１６７３—４１３０（２０１０）０１—００５０—０２ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｉｎｆｌｕｉｄｏｆｔｈｅｐａｔｉｅｎｔｓｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙＭＯＹａｎｋｌ，ＸＵＸｉａｏ－ｄｏｎｇ２（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＡｆＪ’ｉｌｉａｔｅｄｘｉａｎｇＪａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴＤ竹ｇＪｉＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏｌｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉａｎｇｆａｎ，Ｈｕｂｅｉ４４１０２１，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｆｌｏｗｅｙｔｏｍｅｔｒｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓｉｎｂｏｄｙｆｌｕｉｄｏｆｔｈｅｐａ—ｔｉｅｎｔｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＩｎｏｖｄｅｒｔｏｇｅｔＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｂｙ３－ｃｏｌｏｕｒｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｕｔｉｌｉｚｉｎｇＳＳＣ／ＣＤ３Ｐｅｒｃｐａｎｔｉｂｏｄｙ，４７ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄａｎｄ５０ｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｅｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ１）ＴｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（６７．９８±７．４１）％，Ｔｓ（２７．３６士６．４１）％ａｎｄＴｈ／Ｔｓ（２．６０±０．６４）ｉｎＢＡＩ。
Ｆｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ。
ａｎｄｔｈｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆＴｈｉｓ（３７．６１士４．８）％，Ｔｓ（６７．９７±４．２０）％，ａｎｄＴｈ／Ｔｓ（０．４７士０．１０）ｉｎＢＡＬＦｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ。
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Ｆ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ；Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｕｂｓｅｔｓ恶性浆膜腔积液确诊的金标准是在积液巾找到肿瘤细胞。
然而在临床上，常有高度怀疑为恶性积液但未能找到肿瘤细胞的情况，从而影响到诊断的最终判断。
笔者通过对患者胸水、腹水、肺泡灌洗液Ｔ淋巴细胞亚群的分析判断其性质，为临床恶性积液的诊断提供了一种检测指标，现报道如下。
资料与方法１．标本来源病例为２００６年６月至２００７年１２月在襄樊市巾心医院及卫生部北京医院呼吸科、消化科、肿瘤科住院治疗的相应疾病患者。
１）胸水来源：肺癌２０例（均经病理最终证实），年龄３１～６９岁，男１７例，女３例。
组织学分型：鳞癌１４例。
腺癌４例，小细胞癌２例；结核性胸膜炎３０例，年龄２６～６８岁，男１８例，女１２例。
刷检见结核杆菌（抗酸染色阳性）确诊。
２）肺泡灌洗液来源：肺癌组２５例（男１５例、女１０例），均经病理证实，年龄３９～７１岁；肺部良性疾病组２２例（男１５例、女７例），年龄２８～７０岁，其中肺结核８例、肺炎ｌｌ例、肺结节病３旦堕焦墅垦堂壅查垫！！芏！旦箜！！查箜！塑迪』逊丛笪：』竺坚型垫！！：∑堕！！！№！例。
３）腹水来源：２８例，平均年龄４８岁，其中肝癌１０例、胃癌１１例，结肠癌５例，卵巢癌２例，均经病理最终证实。
２．仪器试剂采用美国ＢＤＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ流式细胞仪，ＣＤ４ＦＩＴＣ／ＣＤ８ＰＥ／ＣＤ３ＰｅｒＣＰ■色荧光抗体及同型对照、红细胞裂解液、荧光校准微球均购自ＢＤ公司。
３．方法１）样晶的制备：肺泡灌洗液经尼龙布过滤去掉杂质和痰液，胸水腹水以肝素抗凝采集，标本以１５００ｒ／ｒａｉｎ离心５ｍｉｎ，弃上清液，ＰＢＳ洗涤。
计数并调节细胞数为２×１０６／ｍＬ／管，加入ｃＤ４ＦＩＴＣ／ＣＤ８ＰＥ／ＣＤ３ＰｅｒＣＰ荧光抗体２０弘Ｌ，窀温避光孵育２０ｍｉｎ，加１：９配制的红细胞裂解液２ｍＩ。
，避光１０ｍｉｎ，１５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃上清液，ＰＢＳ缓冲液２ｍＩ．离心洗涤，０．５ｍＬＰＢＳ缓冲液重悬细胞。
同时另一管做同型对照。
２）流式细胞仪测定：以荧光微球ｃａｌｉｂｒｉｔｅ３－ｃｏｌｏｕｒ校准仪器光路使其分辨率达到最佳工作状态，采用ｃｅｌｌｑｕｅｓｔＰｒｏ软件获取与分析数据。
调节电压、阈值、补偿使细胞在图中分布在合适的位置，在ＦＳＣ／ＳＳＣ图中圈出淋巴细胞群为（Ｒ１），ＳＳＣ／ＣＤ３图中以ＣＤ３＋细胞群圈『Ｊ（Ｒ２）以排除巨噬细胞、碎片及其他成分的干扰，建立ＣＤ４／ＣＤ３、ＣＤ８／ＣＤ３散点图并设置为显示Ｇ３＝ＲＩ×Ｒ２门内的细胞，获取细胞总数１００００个，根据Ｉ司型对照设十字门分析Ｔｈ（ＣＤ３＋ＣＤ４＋）和Ｔｓ（ＣＤ３＋ＣＤ８＋）的表达情况。
同时计算出Ｔｈ／Ｔｓ比值。
３）统计分析：两组数据统计以孑－４－＿ｓ表示，应用Ｅｘｃｅｌ统计软件进行统计学分析，两组间比较采用￡检验，Ｐ＜ｏ．０５为差异有统计学意义。
结果１．结核性胸膜炎与肺癌患者胸水Ｔ淋巴细胞亚群比较，见表１。
肺癌组与结核性胸膜炎组相比Ｔｈ显著减少（Ｐ＜０．０１），Ｔｓ显著增高（Ｐ＜０．０１），Ｔｈ／Ｔｓ比值显著减低（Ｐ＜０．０１）。
表１胸水Ｔ淋巴细胞亚群在结核胸膜炎及肺炎患者的表达注：与结核性胸膜炎组比较。
