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Ningxia Medical UniversityThesis for Application of Master’s DegreeEstrogen and Estrogen Receptor Were Associated with OocytesMaturationStudent’s Name: Li YiranSupervisor：Li Jichun/Chen ZijiangAssistant Supervisor: Ri-cheng ChianSubject Category: MedicineMajor: Gynaecology &ObstetricsSpecialty: ReproductionSchool: Clinical MedicineCompletion Date: 2013.04宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。
除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。
对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。
本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。
论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。
本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。
可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。
（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日雌激素及其受体与卵母细胞成熟的相关性摘要目的通过测定取卵日人血清及卵泡液内雌二醇水平、卵丘细胞雌激素-β受体-β受体mRNA的表达量的关系和卵mRNA的表达，探讨卵泡液雌激素浓度与卵丘细胞E2母细胞成熟与卵丘细胞-β受体mRNA的表达量的相关性；通过观察雌激素G蛋白偶联受体GPR30在小鼠卵母细胞上的表达定位和不同时期的表达量以及体内成熟和体外成熟的卵母细胞表达量的比较，探讨GPR30对小鼠卵母细胞成熟调控作用和对卵母细胞体内、体外成熟调控作用的差异。
2024卵泡刺激素（FSH）的检测及其临床意义（促）卵泡激素（FSH）是垂体前叶嗜碱性细胞分泌的一种激素，成分为糖蛋白，主要作用为促进卵泡成熟。
促卵泡激素可促进卵泡颗粒层细胞增生分化，并促进整个卵巢长大。
而其作用于睾丸曲细精管则可促进精子形成。
促卵泡激素在人体内呈脉冲式分泌，女性随月经周期而改变。
检测血清中促卵泡激素（一文解读I抗缪勒氏管激素（AMH）的8大临床应用）对了解垂体内分泌功能，间接了解下丘脑及卵巢的功能状态、预测排卵时间、不孕和内分泌疾病的诊断治疗都有重要的意义。
1检测方法FSH检测一般采用化学发光免疫测定（CHIA）法和电化学发光免疫测定（EC1IA）法。
1.1 C11A法1.1.1 原理采用连续两步酶免法（"夹心法"）测定。
将样本和包被有山羊抗小鼠-小鼠抗人FSH 复合物的顺磁性微粒和含蛋白质的"TRIS"缓冲液添加至反应管中。
样本中FSH首先与固相上固定的小鼠抗人FSH抗体相结合。
结合在固相上的复合物置于磁场内被吸附住，而未结合的物质被冲洗除去。
随后,添加标记了碱性磷酸酶（A1P）（A1P.1DH异常翻倍升高，原因并不是你想的那么简单!）的山羊抗人FSH抗体，它与之前结合在微粒上的FSH相结合。
进行第二次分离与清洗，除去未结合的物质。
将化学发光底物添加到反应管中，它在A1P（中性粒细胞碱性磷酸酶染色的临床意义）的作用下迅速发光，所产生光的量与样本中FSH的浓度成正比，通过多点校准曲线确定样本中FSH的量。
试剂与操作方法参照试剂说明书。
1.1.2 注意事项1.12.1 标本类型及稳定性：血清或肝素抗凝血浆作为检测样本。
样本在2~8可保存14小时；在-20。
C可保存6个月，避免反复冻融。
1.12.2 结果报告：在介于检测下限和最高定标品值之间的分析范围内，可进行样本的定量测定。
若样本含量低于测定下限，以小于该值表示结果;若样本含量高于最高定标品值，则以大于该值表示结果。
2024年统编版选修3生物上册月考试卷796考试试卷考试范围：全部知识点；考试时间：120分钟学校：______ 姓名：______ 班级：______ 考号：______总分栏一、选择题(共7题，共14分)1、下列关于植物组织培养和动物细胞培养的叙述，正确的是A. 都需要无菌的条件B. 都从单个细胞开始C. 都使用液体培养基D. 都能实现细胞的全能性2、下列关于动物细胞工程的叙述正确的是（）A. 接触抑制的细胞经分散后继续培养，细胞将不再增殖B. 动物细胞培养选用的培养材料大多是胚胎或幼龄动物的组织C. 经选择性培养基筛选出来的杂交瘤细胞即可直接生产特定的单克隆抗体D. 常在培养基中添加一定种类和数量的抗生素以防止培养的细胞被病毒感染3、下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是A. 因动物细胞具有接触抑制特性，可在培养瓶壁上出现多层细胞B. 原代培养过程中大多数细胞的基因型会发生改变C. 二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的D. 培养液中加入抗生素以防培养过程的污染4、下列有关哺乳动物胚胎发育和胚胎工程的叙述，正确的是（）A. 克隆羊、试管羊、转基因羊的繁殖方式都是有性生殖B. 胚胎干细胞在饲养层细胞上培养可维持只增殖不分化状态C. 受精时防止多精入卵的两屏障是顶体反应和卵细胞膜反应D. 滋养层细胞在囊胚期已发育成胎膜和胎盘并可用于性别鉴定5、植物体细胞杂交技术在培育植物新品种等方面具有独特的优势。
下列有关该技术的叙述正确的是（）A. 获得原生质体的过程可在低渗溶液中进行B. 各含两个染色体组的两个体细胞融合后，得到的仍为二倍体细胞C. 该技术获得的杂种植株均能表现出双亲所有的性状D. 该技术的优势是可以克服远缘杂交不亲和的障碍6、动物细胞培养是动物克隆的基础，如图所示，a、b、c表示现代生物工程技术，①、②、③分别表示其结果，请据图回答，下列说法错误的是（）A. 若a是动物体细胞核移植技术，①为克隆动物，该技术可体现动物细胞核全能性B. 若b是体外受精技术，②的产生属于有性生殖，该技术可实现良种家畜大量繁殖C. 若c是胚胎分割技术，③中来自同一胚胎的子代具有相同的遗传物质D. ①②③中的受体（代孕母体）均需激素处理，以达到超数排卵和同期发情的目的7、2018年3月，我国科学家宣布首次利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，精准地将人亨廷顿舞蹈症基因插入猪成纤维细胞中，成功培育出亨廷顿舞蹈症的模型猪，为治疗人类神经细胞功能退行性疾病提供了理想的动物模型。
卵泡不会破怎么回事，吃什么可以排卵？卵泡不会破怎么回事，吃什么可以排卵？卵泡不会破怎么回事，吃什么可以排卵？H-n正常排卵周期中，卵泡生长到成熟后，在LH作用下，卵泡壁变薄，卵泡内压力增加，会将卵子裹着周围的卵丘细胞和卵泡液，从破口排出，排卵就完成了。
卵泡不破裂也是不孕的病因之一。
（卵泡不会破怎么回事，吃什么可以排卵？）未破裂卵泡黄素化综合征(LUFS) 是指卵泡成熟达到18mm以上直径，LH或hCG峰值出现，但卵泡不“破裂”，卵子不能排出，而在卵泡里黄素化萎缩了。
LUFS患者的卵泡能分泌相应的雌、孕激素，基础体温呈双相，子宫内膜呈分泌期改变，具有规律的月经周期，所以在临床表现上难与正常排卵区分。
据目前的文献统计，LUFS在育龄妇女中发生率为5％～10％，而在不孕妇女中约占25％。
临床观察发现，LUFS在子宫内膜异位症、高泌乳素血症和垂体性闭经患者中比较常见，在克罗米芬诱导排卵的周期中，约有35%发生卵泡持续生长而不破裂的现象，另外在盆腔粘连，特别是发生在卵巢周围的炎性粘连包裹，也是导致LUFS的原因之一。
LUFS的患者即使应用大剂量人绒毛膜促性腺激素(HCG5000～10000IU)肌肉注射，卵泡仍然可能不破裂，最终形成卵巢滤泡囊肿，有时需要等待数月才能完全消失。
原始卵泡是储存雌性哺乳动物卵子的基本生殖功能单位近年来的研究表明干细胞可以诱导发育成为成熟的雌性生殖细胞以及卵巢存在原始卵泡库更新现象。
然而，这两者均涉及到同一个问题，即原始卵泡的形成与发育机制。
众多的研究者对原始卵泡的形成及发育过程展开了广泛的探索，学者们发现原始卵泡的形成及发育过程需要各类生长因子或者激素或者部分信号通路产生的影响。
欧联法认证的DHEAAMH多营养生长因子是由三大生长系统构成的，许多研究结果证实DHEAAMH参与调节的初级卵泡、次级卵泡的颗粒细胞增殖和分化活动是有帮助的。
研究证实，它能促进颗粒细胞增殖分化，在卵泡发育过程中起着重要的调节作用，DHEAAMH能是一种很强的促细胞修复因子，促进颗粒细胞的分裂、增生和分化及卵母细胞的成熟，DHEAAMH补充在增加了女性外周血雌激素水平的同时降低了孕激素水平。
生物技术进展２０１６年㊀第６卷㊀第３期㊀２１９~２２３ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ㊀ＩＳＳＮ２０９５￣２３４１研究论文Ａｒｔｉｃｌｅｓ㊀收稿日期:２０１６￣０３￣１０ꎻ接受日期:２０１６￣０４￣０４㊀作者简介:刘晓航ꎬ中级工程师ꎬ主要从事生物制品的技术研究ꎮＴｅｌ:０１０￣６８７２７１２７ꎮＥ￣ｍａｉｌ:ｌｉｕｘｉａｏｈａｎｇ５１８＠ｓｏｈｕ.ｃｏｍ重组人长效促卵泡激素ＦＳＨ￣ＣＴＰ的纯化工艺研究及鉴定刘晓航ꎬ㊀高丽婷北京双鹭药业股份有限公司ꎬ北京１００１４３摘㊀要:为了获得高纯度的重组人长效促卵泡激素ＦＳＨ￣ＣＴＰꎬ收集表达ＦＳＨ￣ＣＴＰ的ＣＨＯ细胞培养上清ꎬ经过染料亲和层析㊁ＤＥＡＥ阴离子交换层析以及疏水层析三步层析制备ꎬ所得样品进行分子量㊁等电点测定和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定ꎬ雌性大鼠卵巢增重法测定体内生物活性ꎮ结果显示:经３步纯化所得样品纯度可达９８％以上ꎬ表观分子量约为４７ｋＤａꎬＭＡＬＤＩ￣ＴＯＦ￣ＭＳ测得结果为３５.２ｋＤａꎬ等电点４.０~２.８ꎬＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果呈阳性ꎬ测活结果表明ꎬＦＳＨ￣ＣＴＰ的活性比重组人卵泡刺激素明显偏高ꎮ纯化所得样品纯度良好ꎬ为该药物的进一步研究打下了基础ꎮ关键词:不孕不育症ꎻＦＳＨ￣ＣＴＰꎻ分离纯化ꎻ雌性大鼠卵巢增重法ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.２０９５￣２３４１.２０１６.０３.１２ＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＡｐｐｒａｉｓａｌｏｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＰｒｏｃｅｓｓｏｆＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＨｕｍａｎＬｏｎｇ￣ａｃｔｉｎｇＦｏｌｌｉｃｌｅＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇＨｏｒｍｏｎｅ㊀ＬＩＵＸｉａｏ￣ｈａｎｇꎬＧＡＯＬｉ￣ｔｉｎｇＢｅｉｊｉｎｇＳＬＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏ.Ｌｔｄ.ꎬＢｅｉｊｉｎｇ１００１４３ꎬＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ:Ｔｏｏｂｔａｉｎｈｉｇｈｐｕｒｉｔｙｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｌｏｎｇ￣ａｃｔｉｎｇｆｏｌｌｉｃｌｅｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅＦＳＨ￣ＣＴＰꎬｔｈｅｓｔｕｄｙｃｏｌｌｅｃｔｅｄｔｈｅＣＨＯｃｅｌｌｓｃｕｌｔｕｒｅｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｃｏｎｔａｉｎｅｄＦＳＨ￣ＣＴＰꎬｔｈｅｎｉｔｗａｓｐｕｒｉｅｄｂｙｄｙｅａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙꎬＤＥＡＥａｎｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ.Ｗｅｄｅｔｅｃｔｅｄｔｈｅｐｕｒｉｅｄｓａｍｐｌｅｓｂｙｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔꎬｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｐｏｉｎｔꎬｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｖｉｔｒｏ(ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ)ａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｖｉｖｏ(ｏｖａｒｉａｎｗｅｉｇｈｔｇａｉｎｉｎｆｅｍａｌｅｒａｔｓｌａｗ).Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ:ＴｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆＦＳＨ￣ＣＴＰｐｒｏｔｅｉｎｃｏｕｌｄｒｅａｃｈ９８％ａｆｔｅｒｔｈｒｅｅｓｔｅｐｔｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬｔｈｅａｐｐａｒｅｎｔｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｗａｓａｂｏｕｔ４７ｋＤａꎬＭＡＬＤＩ￣ＴＯＦ￣ＭＳｒｅｓｕｌｔｗａｓ３５.２ｋＤａ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｐｏｉｎｔｗａｓ４.０~２.８.ＡｎｄｗｅｐｒｏｖｉｄｅｄｔｈｅＦＳＨ￣ＣＴＰａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｆｏｌｌｉｃｌｅｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒｍｏｎｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｂｙＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓ.ＴｈｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＦＳＨ￣ＣＴＰｗａｓｈｉｇｈ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｃｏｕｌｄｌａｙｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｄｒｕｇ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙꎻＦＳＨ￣ＣＴＰꎻｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎꎻｏｖａｒｉａｎｗｅｉｇｈｔｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｆｅｍａｌｅｒａｔ㊀㊀不孕不育症是影响人类健康幸福的重大疾病ꎮ据不完全统计ꎬ在我国育龄夫妇中ꎬ不孕不育率达１０％ꎮ卵泡刺激素(ｆｏｌｌｉｃｌｅｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｈｏｒ￣ｍｏｎｅꎬＦＳＨ)是一种异源二聚体糖蛋白类促性腺激素[１]ꎬ是目前市场上常见的用于治疗不孕不育症的主要药物之一ꎮ但是由于其生物半衰期较短ꎬ患者需要在一个治疗周期内连续两周每天注射１~２针市售ＦＳＨ制剂ꎬ患者依从性较差ꎮ因此开发长效ＦＳＨ制剂成为本领域的研究热点ꎮＦＳＨ￣ＣＴＰꎬ即ＣｏｒｉｆｏｌｌｉｔｒｏｐｉｎＡｌｆａꎬ２０１０年由Ｍｅｒｃｋ公司开发上市[２]ꎮ通过基因重组技术ꎬ人绒毛膜促性腺激素(ｈｕｍａｎＣｈｏｒｉｏｎｉｃＧｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎꎬｈＣＧ)β亚基的羧基末端肽(ｃａｒｂｏｘｙｌｔｅｒｍｉｎａｌｐｅｐｔｉｄｅꎬＣＴＰ)序列与ＦＳＨβ亚基ｃＤＮＡ３ᶄ端相融合ꎬ与ＦＳＨα亚基ｃＤＮＡ共同转染ＣＨＯ细胞ꎬ二者共表达形成二聚体分泌至胞外ꎬ即为ＦＳＨ￣ＣＴＰꎮ成熟ＦＳＨ￣ＣＴＰ的α㊁β亚基分别由９２个和１３９个氨基酸组成ꎬ两条链通过非共价键结合形成异二聚体[３ꎬ４]ꎮ其中α亚基有２个Ｎ￣连接糖基化位点:α￣５２和α￣７８ꎬβ亚基有２个Ｎ￣连接. All Rights Reserved.糖基化位点:β￣７㊁β￣２４ꎬ及４个均位于ＣＴＰ部分的Ｏ￣连接糖基化位点:β￣１１５㊁β￣１２１㊁β￣１２６和β￣１３２[５]ꎮ由于ＣＴＰ序列的引入ꎬＦＳＨ￣ＣＴＰ的体内半衰期较重组人卵泡刺激素(ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＦＳＨꎬｒｈＦＳＨ)明显延长ꎬ体内生物活性也大大提高ꎮ注射一针推荐剂量的ＦＳＨ￣ＣＴＰ可以代替连续７ｄ每天注射ｒｈＦＳＨꎮ目前国内还没有长效ＦＳＨ产品上市ꎬ国内研究也主要集中在ＦＳＨ品种上面ꎬ对长效ＦＳＨ的报道很少ꎬ因此长效ＦＳＨ药物的开发是目前研究的重点和难点ꎮ刘志勇等[６]用染料Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ为亲和层析介质进行纯化得到ＦＳＨ的活性收率达８０％ꎮｒｈＦＳＨ中存在唾液酸ꎬ等电点为４.０~５.５ꎬ采用阴离子交换层析可实现ｒｈＦＳＨ的纯化ꎮ长效ＦＳＨ和ｒｈＦＳＨ的结构相似ꎬ可以参考ＦＳＨ的纯化方法ꎮ为了推进该产品的国产化ꎬ本实验室前期构建了表达ＦＳＨ￣ＣＴＰ的ＣＨＯ工程细胞ꎬ并初步研究了其发酵工艺ꎮ本研究通过３步层析法对细胞培养上清进行分离纯化ꎬ并对所测的样品进行初步鉴定ꎬ以期为长效ＦＳＨ药物的开发提供参考ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀实验材料１.１.１㊀仪器㊀层析柱(上海锦华层析设备厂)㊁紫外检测仪(北京宾达英创科技有限公司)㊁ＡＫＴＡＰｕｒｉｆｉｅｒ９００(ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ)㊁酶标仪(ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ)㊁电泳仪(北京市六一仪器厂)等ꎮ１.１.２㊀主要试剂㊀ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭ６ＦａｓｔＦｌｏｗ㊁ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ购自美国ＧＥ公司ꎻＢｕｔｙｌ￣６５０Ｍ购自日本ＴＯＳＯＨ公司ꎻ低分子量蛋白Ｍａｒｋｅｒ㊁预染低分子量蛋白Ｍａｒｋｅｒ购自北京索莱宝科技公司ꎻ鼠抗人ＦＳＨα抗体㊁辣根过氧化物酶标记的鼠抗人ＦＳＨβ抗体㊁辣根过氧化物酶标记兔抗鼠ＩｇＧ抗体购自美国ＵＳＢ公司ꎻｒＨＣＧ注射液购自ＭｅｒｃｋＳｅｒｏｎｏ公司ꎻｒｈＦＳＨ国际标准品购自中国食品药品检定研究院ꎻｒｈＦＳＨ注射液由北京双鹭药业提供ꎻ其余试剂均为国产分析纯ꎮＦＳＨ￣ＣＴＰ细胞发酵液７Ｌ艾贝泰生物反应器发酵获得ꎬ由北京双鹭药业股份有限公司提供ꎮ１.１.３㊀实验动物㊀日龄１９~２３ｄꎬ体重３５~５０ｇꎬ同一来源的雌性ＳＤ大鼠ꎬ健康合格ꎬ由中国军事医学科学院提供ꎮ１.２㊀实验方法１.２.１㊀ＦＳＨ￣ＣＴＰ的分离纯化㊀①染料亲和层析ꎮＦＳＨ￣ＣＴＰ发酵液下罐收获５Ｌꎬ经８０００ｒ/ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ后ꎬ再经０.２２μｍ微孔滤膜过滤ꎮ将样品上样至已经用缓冲液２０ｍｍｏｌ/ＬＰＢ(ｐＨ７.４)平衡好的ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭ６ＦａｓｔＦｌｏｗ染料亲和层析柱ꎬ用含一定浓度ＮａＣｌ的２０ｍｍｏｌ/ＬＰＢ(ｐＨ７.４)缓冲液洗脱目的蛋白ꎬ收集洗脱峰[７]ꎮ②ＤＥＡＥ阴离子交换层析ꎮ将ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭ６ＦａｓｔＦｌｏｗ染料亲和层析柱洗脱的样品进行脱盐ꎬ调节样品的电导和平衡缓冲液一致ꎬ上样至用缓冲液２０ｍｍｏｌ/ＬＰＢ(ｐＨ７.４)平衡好的ＤＥＡＥ阴离子交换柱ꎬ用ＮａＣｌ溶液洗脱ꎬ收集洗脱峰ꎮ③Ｂｕｔｙｌ￣６５０Ｍ疏水层析ꎮＤＥＡＥ阴离子交换收集的样品中补加ＮａＣｌ调节电导ꎬ上样至用缓冲液２.０ｍｏｌ/ＬＮａＣｌ￣２０ｍｍｏｌ/ＬＰＢ(ｐＨ７.４)平衡好的Ｂｕｔｙｌ￣６５０Ｍ疏水层析柱ꎬ以２０ｍｍｏｌ/ＬＰＢ(ｐＨ７.４)缓冲液进行洗脱ꎬ收集洗脱峰ꎮ所得样品进行ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ纯度分析ꎮ④蛋白回收率测定ꎮ采用Ｅｌｉｓａ双抗体夹心法ꎬ一抗为鼠抗人ＦＳＨα抗体ꎬ二抗为辣根过氧化物酶标记的鼠抗人ＦＳＨβ抗体ꎬ标准品采用ＦＳＨ￣ＣＴＰ经凯氏定氮法含量标定的纯品ꎬ经一抗包被㊁封闭㊁加样㊁二抗孵育㊁显色和终止ꎬ在４５０ｎｍ处比色ꎬ根据标准曲线计算纯化过程中每步的蛋白含量ꎬ结合体积计算每步回收率ꎮ１.２.２㊀ＦＳＨ￣ＣＴＰ的鉴定㊀①表观分子量及等电点测定ꎮ表观分子量测定和等电点测定按照«中国药典»第三部进行[８ꎬ９]ꎮ②ＭＡＬＤＩ￣ＴＯＦ￣ＭＳ测定分子量ꎮ样品制备:将ＦＳＨ￣ＣＴＰ样品用水透析过夜ꎬ并浓缩至约２ｍｇ/ｍＬꎮ样品移交清华生物医学测试中心蛋白化学平台进行分子量测定ꎮ③ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定ꎮ样品进行ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ(胶浓度为１２％)分析后ꎬ用半干法进行电转移至硝酸纤维素膜上ꎻ用３％小牛血清进行封闭ꎻ加入一抗鼠抗人ＦＳＨα抗体２μｇ/ｍＬꎬ室温下孵育２ｈꎻ弃掉一抗ꎬ洗膜３次ꎻ加入稀释５０００倍的辣根过氧化酶标记的兔抗鼠二抗ꎬ室温孵育２ｈꎻ弃掉二抗ꎬ洗膜３次ꎻ用邻苯二胺显色液显色ꎻ待出０２２生物技术进展ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ. All Rights Reserved.现棕黄色时ꎬ加入２ｍｏｌ/ＬＨ２ＳＯ４终止反应ꎮ④体内生物活性检测ꎮ将ｒＨＣＧ注射液溶于ｐＨ７.２１ｍｇ/ｍＬ的牛血清白蛋白生理盐水溶液中ꎬ配成含ＨＣＧ２６.６ＩＵ/ｍＬ的溶媒ꎬ备用ꎮ用溶媒将ｒｈＦＳＨ标准品稀释为３.０ＩＵ/ｍＬ㊁１.５ＩＵ/ｍＬ和０.７５ＩＵ/ｍＬ３个剂量组ꎬ分别记为ＳＨ㊁ＳＭ㊁ＳＬꎻ将ｒｈＦＳＨ对照及ＦＳＨ￣ＣＴＰ３个样品按估计效价１３０００ＩＵ/ｍｇ稀释为３.０ＩＵ/ｍＬ㊁１.５ＩＵ/ｍＬ㊁０.７５ＩＵ/ｍＬ３个剂量组ꎬ分别记为ＴＨ㊁ＴＭ㊁ＴＬꎮ取大鼠１２０只ꎬ随机分为１５组ꎬ每组８只ꎮ于每天同一时间ꎬ给每组大鼠颈部皮下注射ꎬ分别给予一种剂量的溶液０.５ｍＬꎬ每日一次ꎬ连续３ｄꎮ于最后一次给药２４ｈ后处死大鼠ꎬ解剖ꎬ摘取双侧卵巢ꎬ剥离附着组织ꎬ卵巢称重ꎮ以卵巢重为反应值ꎬ按量反应平行线３.３法计算效价ꎬＦＬ％应<４５％ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀纯度分析纯度分析结果如图１所示ꎮ经软件纯度扫描分析ꎬＢｌｕｅ柱洗脱液的纯度为６４％ꎬ说明染料亲和层析能够特异吸附ＦＳＨ￣ＣＴＰ蛋白ꎬ纯化效果明显ꎬ去除大部分的杂蛋白ꎬ回收率高ꎬ可作为样品捕获ꎻ唾液酸含量高低影响样品的等电点ꎬＦＳＨ￣ＣＴＰ等电点低于ＦＳＨꎬ也属于酸性蛋白ꎬ可选用阴离子交换层析分离ꎬＤＥＡＥ柱流穿液的纯度为７４％ꎬ可进一步去除部分杂蛋白ꎻＢｕｔｙｌ￣６５０Ｍ柱洗脱液电泳显示无明显杂带ꎬ去除了蛋白的解离亚基ꎬ电泳纯度可认为是１００％ꎮ图１㊀样品纯化的检测结果Ｆｉｇ.１㊀ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＦＳＨ￣ＣＴＰｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ.Ｍ:蛋白Ｍａｒｋｅｒꎻ１:细胞培养上清ꎻ２:Ｂｌｕｅ层析洗脱液ꎻ３:ＤＥＡＥ层析流穿液ꎻ４:Ｂｕｔｙｌ￣６５０Ｍ层析洗脱液２.２㊀回收率分析按１.２.１中的纯化方法得到ＦＳＨ￣ＣＴＰ３批样品分别记为样品１㊁样品２和样品３ꎮ３批样品的回收率如表１ꎮ对比３批的实验结果ꎬ目的蛋白表达量稳定ꎬ目的蛋白的回收率为２０％左右ꎬ验证此工艺可行ꎬ可为工艺的生产放大提供依据ꎮ表１㊀ＦＳＨ￣ＣＴＰ样品的回收率Ｔａｂｌｅ１㊀ＴｈｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓｏｆＦＳＨ￣ＣＴＰ.ＦＳＨ￣ＣＴＰ样品表达量(ｍｇ/Ｌ)染料亲和层析回收率ＣａｐｔｏＡｄｈｅｒｅ层析回收率Ｂｕｔｙｌ￣６５０Ｍ疏水层析回收率总回收率样品１１１３.０７４％６９％４３％２２.０％样品２１２６.０７２％７０％４１％２０.７％样品３１０６.５７８％６５％３９％１９.８％２.３㊀分子量测定表观分子量测定结果如图２所示ꎮ软件分子量扫面分析ꎬＦＳＨ￣ＣＴＰ样品１的分子量为４７.２ｋＤａꎬ样品２的分子量为４６.９ｋＤａꎬ样品３的分子量为４７.１ｋＤａꎬＦＳＨ￣ＣＴＰ完整蛋白的分子量与文献报道４７ｋＤａ相当ꎮ２.４㊀ＭＡＬＤＩ￣ＴＯＦ￣ＭＳ测定分子量ＦＳＨ￣ＣＴＰ的分子量为３５.２ｋＤａꎬ其中α亚基为１４ｋＤａꎮ据文献报道ꎬＦＳＨ的α亚基分子量为１４ｋＤａꎬＦＳＨ￣ＣＴＰ的α亚基与ＦＳＨ相同ꎬ因此该结果与文献报道相符ꎮ而文献报道ＦＳＨ￣ＣＴＰ的分子量约为３８ｋＤａ[１０]ꎬ该结果比文献报道的分子量略微偏小ꎬ可能是由于糖基脱落或糖基化程度偏小所致[１１]ꎮ２.５㊀等电点测定如图３所示ꎬＦＳＨ￣ＣＴＰ３批等电点为４.０~２.８ꎬ而文献报道ｒｈＦＳＨ的等电点为５.０~４.０[１２]ꎮ由于ＦＳＨ￣ＣＴＰ比ｒｈＦＳＨ多了４个糖基化位点ꎬ糖１２２刘晓航ꎬ等:重组人长效促卵泡激素ＦＳＨ￣ＣＴＰ的纯化工艺研究及鉴定. All Rights Reserved.基化程度比ｒｈＦＳＨ高ꎬ应比ｒｈＦＳＨ偏酸ꎮ上述结果与理论相符ꎮ图２㊀ＦＳＨ￣ＣＴＰ样品１２％电泳结果Ｆｉｇ.２㊀ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＦＳＨ￣ＣＴＰｂｙ１２％ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ.Ｍ:蛋白Ｍａｒｋｅｒꎻ１:样品１ꎻ２:样１亚基ꎻ３:样品２ꎻ４:样品２亚基ꎻ５:样品３ꎻ６:样品３亚基图３㊀等电聚焦结果Ｆｉｇ.３㊀Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｆｏｃｕｓｉｎｇ.Ｍ:蛋白Ｍａｒｋｅｒꎻ１:ＦＳＨ￣ＣＴＰ２０１４０２１２批ꎻ２:ＦＳＨ￣ＣＴＰ２０１４０４０１批ꎻ３:ＦＳＨ￣ＣＴＰ２０１４０５１６批２.６㊀ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定如图４(彩图见图版三)所示ꎬＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果显阳性ꎬ显色反应刚好出现在４３.０ｋＤａ左右位置ꎬ说明ＦＳＨ￣ＣＴＰ可以和抗ＦＳＨα抗体特异性结合ꎮ图４㊀免疫印迹结果Ｆｉｇ.４㊀ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ.Ｍ:蛋白Ｍａｒｋｅｒꎻ１:ＦＳＨ￣ＣＴＰ样品１ꎻ２:ＦＳＨ￣ＣＴＰ样品２ꎻ３:ＦＳＨ￣ＣＴＰ样品３(彩图见图版三)２.７㊀体内生物活性分析所有数据ＳＰＳＳ软件ꎬ进行方差齐性检验ꎬ结果表明各组间方差齐性满足方差分析的前提条件ꎻ利用Ｏｎｅ￣ｗａｙＡＮＯＶＡ(单因素ＡＮＯＶＡ)分别对高㊁中㊁低剂量组进行方差分析:高㊁中㊁低剂量组结果一致ꎬ标准品和对照品无显著差异ꎬ实验组与标准品和对照品差异显著ꎮ体内测活结果如表２所示:通过对卵巢重量进行对比发现ꎬ同等剂量下接受ＦＳＨ￣ＣＴＰ注射的大鼠卵巢重量明显比ｒｈＦＳＨ要高ꎮ按照量反应平行线３.３法计算效价ꎬ结果如下:ｒｈＦＳＨ对照:１３５０６ＩＵ/ｍｇＦＬ＝２０.３％ꎻＦＳＨ￣ＣＴＰ样品１:２３１４９ＩＵ/ｍｇＦＬ＝２２.３６％ꎻＦＳＨ￣ＣＴＰ样品２:３５４５０ＩＵ/ｍｇＦＬ＝３２.８０％ꎻＦＳＨ￣ＣＴＰ样品３:２３２５５ＩＵ/ｍｇＦＬ＝３６.２１％ꎮ根据活性测定结果显示ꎬｒｈＦＳＨ注射液的活性与市售Ｇｏｎａｌ￣ｆ相当ꎬＦＳＨ￣ＣＴＰ的活性约是ｒｈＦＳＨ的２~４倍ꎬ与文献报道相同ꎮ表２㊀３批样品的活性测定Ｔａｂｌｅ２㊀ＴｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｒｅｅｂａｔｃｈｏｆＦＳＨ￣ＣＴＰ.卵巢重(ｍｇ)ｒＦＳＨ标准品ｒｈＦＳＨ对照品ＦＳＨ￣ＣＴＰ样品１ＦＳＨ￣ＣＴＰ样品２ＦＳＨ￣ＣＴＰ样品３ＳＨ/ＴＨ８４ʃ１０９０ʃ１１１３０ʃ２３∗∗１３０ʃ１８∗∗９９ʃ１２∗ＳＭ/ＴＭ６２ʃ１０６２ʃ６１０１ʃ１５∗∗１０８ʃ１８∗∗７７ʃ１６∗ＳＬ/ＴＬ５６ʃ８４６ʃ８６７ʃ１３∗∗７７ʃ１２∗∗６４ʃ８∗㊀注:表中数据为平均值ʃ标准差ꎬ同行数据后的∗表示与标准品相比在Ｐ<０.０５水平上差异显著ꎬ∗∗表示在Ｐ<０.０１水平上差异显著ꎮ２２２生物技术进展ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ. All Rights Reserved.３ 讨论近年来ꎬ由于不孕症发病率不断提高ꎬＦＳＨ作为不孕症治疗的必需药物之一成为研究的热点ꎮ而由于ＦＳＨ的半衰期较短ꎬ开发单次用药即可在人体内长期维持血药浓度在阈值窗内的长效ＦＳＨ药物一直是本领域的研究热点ꎮ目前国内已有关于长效ＦＳＨ药物的相关报道和专利ꎬ但大部分都停留在实验室研究阶段ꎬ还没有药物上市ꎮ本研究以目前唯一一个上市的长效ＦＳＨ药物ＦＳＨ￣ＣＴＰ为研究对象ꎬ对表达该蛋白的ＣＨＯ细胞培养上清进行纯化ꎬ并对获得蛋白进行了初步鉴定ꎬ为其进一步研究奠定了基础ꎮＦＳＨ￣ＣＴＰ属于糖蛋白激素类药物ꎮ文献报道关于ＦＳＨ的纯化大部分使用染料亲和层析法ꎮ本研究选择使用ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭ６ＦａｓｔＦｌｏｗ对目的蛋白进行纯化ꎬ分辨率高ꎬ效果明显ꎮ离子交换层析法也是分离糖蛋白激素的主要方法ꎬ大部分糖蛋白在中性ｐＨ条件下带负电ꎬ可以与阴离子交换剂很好的结合ꎬ利用糖基表面的电荷差异可以获得很高的分离度和回收率ꎮ本研究采用ＤＥＡＥ阴离子交换层析对ＦＳＨ￣ＣＴＰ进行纯化ꎬ效果较好ꎮ疏水层析也广泛应用于糖蛋白的分离纯化ꎮ本研究采用Ｂｕｔｙｌ￣６５０Ｍ疏水层析法对目的蛋白进行纯化ꎬ所得样品纯度较高ꎮ通过ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭ６ＦａｓｔＦｌｏｗ染料亲和层析㊁ＤＥＡＥ阴离子交换层析和Ｂｕｔｙｌ￣６５０Ｍ疏水层析三步层析ꎬ样品的纯度可达９８％以上ꎬ且回收率约为２０％ꎮ目前获得长效ＦＳＨ分子的方法主要是通过改变ＦＳＨ分子本身ꎬ如通过增加ＦＳＨ的分子量以减少肾小球滤过ꎬ或引入额外的糖基化位点来增加分子量[２]ꎮ总体来说ꎬ长效ＦＳＨ分子的设计主要包括增加糖基化位点和与ＩｇＧＦｃ片段相融合ꎮ苏州康宁杰瑞生物科技有限公司设计了类似上述ＦＳＨ￣Ｆｃ融合蛋白的ＦＳＨ类似物ꎬＦＳＨ￣Ｆｃ/Ｆｃ在大鼠体内的半衰期为３０~４０ｈꎬ约是ｒｈＦＳＨ的３倍[１３]ꎮ本实验室将ｈＣＧβ亚基ＣＴＰ序列Ｃ末端的氨基酸与ＦＳＨβ亚基Ｃ末端相融合ꎬ通过对所得ＦＳＨ￣ＣＴＰ进行初步鉴定ꎬ其分子量与文献报道相符ꎬ等电点与理论相符合ꎬＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析结果为阳性ꎮ通过雌性大鼠卵巢增重法测定其体内生物活性ꎬ发现ＦＳＨ￣ＣＴＰ的活性约是ｒｈＦＳＨ的２~４倍ꎬ与文献报道相符ꎬ具有很好的临床应用前景ꎮ参㊀考㊀文㊀献[１]㊀曹敏ꎬ王俊玲ꎬ吴彦卓ꎬ等.重组人卵泡刺激素的研究进展[Ｊ].药物生物技术ꎬ２０１４ꎬ１:８６－９０.[２]㊀ＦａｒｅｓＦＡꎬＳｕｇａｎｕｍａＮꎬＮｉｓｈｉｍｏｒｉＫꎬｅｔａｌ..Ｄｅｓｉｇｎｏｆａｌｏｎｇ￣ａｃｔｉｎｇｆｏｌｌｉｔｒｏｐｉｎａｇｏｎｉｓｔｂｙｆｕｓｉｎｇｔｈｅＣ￣ｔｅｒｍｉｎａｌｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅｃｈｏｒｉｏｎｉｃｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎｂｅｔａｓｕｂｕｎｉｔｔｏｔｈｅｆｏｌｌｉｔｒｏｐｉｎｂｅｔａｓｕｂｕｎｉｔ[Ｊ].Ｐｒｏｃ.Ｎａｔｌ.Ａｃａｄ.Ｓｃｉ.ＵＳＡꎬ１９９２ꎬ８９(１０):４３０４－４３０８.[３]㊀ＦａｕｓｅｒＢꎬＭａｎｎａｅｒｔｓＢꎬＤｅｖｒｏｅｙＰꎬｅｔａｌ..Ａｄｖａｎｃｅｓｉｎｒｅ￣ｃｏｍｂｉｎａｎｔＤＮＡｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ:ｃｏｒｉ￣ｆｏｌｌｉｔｒｏｐｉｎａｌｆａꎬａｈｙｂｒｉｄｍｏｌ￣ｅｃｕｌｅｗｉｔｈｓｕｓｔａｉｎｅｄｆｏｌｌｉｃｌｅ￣ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｒｅｄｕｃｅｄｉｎ￣ｊｅｃｔｉｏｎｆｒｅｑｕｅｎｃｙ[Ｊ].ＨｕｍａｎＲｅｐｒｏｄ.Ｕｐｄａｔｅꎬ２００９ꎬ１５(３):３０９－３２１.[４]㊀ＳｅｙｈａｎＡꎬＡｔａＢ.Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｃｏｒｉｆｏｌｌｉｔｒｏｐｉｎａｌｆａｉｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｏ￣ｖａｒｉａｎｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｆｏｒＩＶＦｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈＧｎＲＨａｎｔａｇｏｎｉｓｔ[Ｊ].Ｉｎｔ.Ｊ.ＷｏｍｅｎＨｅａｌｔｈꎬ２０１１ꎬ３:２４３.[５]㊀ＲｏｍｂａｕｔｓＬꎬＴａｌｍｏｒＡ.Ｃｏｒｉｆｏｌｌｉｔｒｏｐｉｎａｌｆａｆｏｒｆｅｍａｌｅｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ[Ｊ].ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎ.Ｂｉｏｌ.Ｔｈｅｒ.ꎬ２０１２ꎬ１２(１):１０７－１１２. [６]㊀刘志勇ꎬ王启要ꎬ黄雁ꎬ等.采用染料亲和层析的方法纯化卵泡刺激素[Ｊ].江西科学ꎬ２００４ꎬ２２(１):１１－１４. [７]㊀杨凡ꎬ黄虎ꎬ李屹晨ꎬ等.新型长效重组促卵泡素的纯化和性质及药代动力学研究[Ｊ].中国生物工程杂志ꎬ２０１４ꎬ３４(２):４５－５１.[８]㊀国家药典委员会.中国药典第三部２０１０版[Ｍ].北京:中国医药科技出版社ꎬ２０１０.[９]㊀沈舒.重组人促卵泡激素检定用标准物质的研究[Ｄ].北京:中国药品生物制品检定所ꎬ硕士学位论文ꎬ２００９. [１０]㊀孔毅ꎬ吴梧桐ꎬ吴如金.蛋白质分子量测定方法比较研究[Ｊ].分析仪器ꎬ２００３ꎬ(２):４４－４７.[１１]㊀阎哲ꎬ黄骏雄.糖蛋白激素的不均一性及其色谱分离纯化研究的进展[Ｊ].化学进展ꎬ１９９９ꎬ１９(２):１６３－１７２. [１２]㊀陈宁.重组人促卵泡激素的质量研究[Ｄ].长春:吉林大学ꎬ硕士学位论文ꎬ２００８.[１３]㊀苏州康宁杰瑞生物科技有限公司.一种ＦＳＨ融合蛋白及其制备方法和用途[Ｐ].中国２０１２１０４７６６６５.０ꎬ２０１４.３２２刘晓航ꎬ等:重组人长效促卵泡激素ＦＳＨ￣ＣＴＰ的纯化工艺研究及鉴定. All Rights Reserved.。
㊃２０６㊀㊃ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ）２０２１，４０（３）文章编号：１６７２－７６０６（２０２１）０３－０２０６－０３来曲唑联合小剂量尿促性素促排卵方案对夫精人工授精不孕患者临床妊娠及活产率的影响张婷１，２，李艳丽２１．信阳市中心医院妇产科，河南信阳４６４０００；２．罗山县人民医院生殖医学科，河南罗山４６４２００摘㊀要： 目的 探讨来曲唑联合小剂量尿促性素促排卵方案对夫精人工授精（ＡＩＨ）不孕患者临床妊娠及活产率的影响㊂ 方法 将２０１７年３月至２０１９年１０月于某医院采取来曲唑促排卵方案的３４例ＡＩＨ不孕患者纳入对照组，另将同期采取来曲唑联合小剂量尿促性素促排卵方案治疗的３３例ＡＩＨ不孕患者纳入观察组㊂比较两组患者人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）日优势卵泡数㊁子宫内膜厚度；随访至术后３０ｄ，比较两组患者临床妊娠率㊁流产率，并随访至分娩后，比较两组活产率㊂ 结果 观察组患者ＨＣＧ日优势卵泡数㊁子宫内膜厚度高于对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；观察组患者临床妊娠率㊁活产率（８５．２９％㊁８９．６６％）高于对照组（６０．６１％㊁５０．００％），流产率（５．８８％）低于对照组（２７．２７％），差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）㊂ 结论 对ＡＩＨ不孕患者采取来曲唑联合小剂量尿促性素促排卵方案，可提高患者ＨＣＧ日优势卵泡数与子宫内膜厚度，提高患者临床妊娠率与活产率，降低流产发生率㊂关键词：不孕；夫精人工授精；尿促性素；来曲唑；活产率中图分类号：Ｒ７１１．６㊀㊀㊀㊀㊀㊀文献标志码：Ａ㊀收稿日期：２０２１⁃０２⁃２８㊀作者简介：张婷（１９７１⁃），女，副主任医师㊂研究方向：生殖医学㊂㊀Ｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｏｖｕｌａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｔｉｏｎｐｒｏｇｒａｍｏｆｌｅｔｒｏｚｏｌｅｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｌｏｗ⁃ｄｏｓｅｍｅｎｏｔｒｏｐｈｉｎｏｎｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｅｇｎａｎｃｙａｎｄｌｉｖｅｂｉｒｔｈｒａｔｅｉｎｉｎｆｅｒｔｉｌｅｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｒｔｉｆｉｃｉａｌｉｎｓｅｍｉｎａｔｉｏｎｂｙｈｕｓｂａｎｄＺＨＡＮＧＴｉｎｇ１ ２ ＬＩＹａｎｌｉ２１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓａｎｄＧｙｎｅｃｏｌｏｇｙ ＸｉｎｙａｎｇＣｅｎｔｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ Ｘｉｎｙａｎｇ４６４０００ Ｃｈｉｎａ ２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉｎｅ ＬｕｏｓｈａｎＰｅｏｐｌｅᶄｓＨｏｓｐｉｔａｌ Ｌｕｏｓｈａｎ４６４２００ ＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｏｖｕｌａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｔｉｏｎｐｒｏｇｒａｍｏｆｌｅｔｒｏｚｏｌｅｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｌｏｗ⁃ｄｏｓｅｍｅｎｏｔｒｏｐｈｉｎｏｎｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｅｇｎａｎｃｙａｎｄｌｉｖｅｂｉｒｔｈｒａｔｅｉｎｉｎｆｅｒｔｉｌｅｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｒｔｉｆｉｃｉａｌｉｎｓｅｍｉｎａｔｉｏｎｂｙｈｕｓｂａｎｄ ＡＩＨ ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ３４ＡＩＨｉｎｆｅｒｔｉｌｅｐａｔｉｅｎｔｓｗｈｏｒｅｃｅｉｖｅｄｔｈｅｏｖｕｌａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｔｉｏｎｐｒｏｇｒａｍｏｆｌｅｔｒｏｚｏｌｅｉｎａｈｏｓｐｉｔａｌｆｒｏｍＭａｒｃｈ２０１７ｔｏＯｃｔｏｂｅｒ２０１９ｗｅｒｅｉｎｃｌｕｄｅｄｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ ３３ｃａｓｅｓｏｆＡＩＨｉｎｆｅｒｔｉｌｅｐａｔｉｅｎｔｓｗｈｏｒｅｃｅｉｖｅｄｔｈｅｏｖｕｌａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｔｉｏｎｐｒｏｇｒａｍｏｆｌｅｔｒｏｚｏｌｅｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｌｏｗ⁃ｄｏｓｅｍｅｎｏｔｒｏｐｈｉｎａｔｔｈｅｓａｍｅｐｅｒｉｏｄｗｅｒｅｉｎｃｌｕｄｅｄｉｎｔｈｅｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｄｏｍｉｎａｎｔｆｏｌｌｉｃｌｅｓｐｅｒｄａｙｏｆｈｕｍａｎｃｈｏｒｉｏｎｉｃｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ ＨＣＧ ａｎｄｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｉｎｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄ ｆｏｌｌｏｗｅｄｕｐｔｏ３０ｄａｙｓａｆｔｅｒｓｕｒｇｅｒｙ ｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｅｇｎａｎｃｙｒａｔｅａｎｄａｂｏｒｔｉｏｎｒａｔｅｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｉｎｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓ ａｎｄｆｏｌｌｏｗｅｄｔｏｔｈｅｅｎｄｏｆｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｈｅｌｉｖｅｂｉｒｔｈｒａｔｅｗａｓｃｏｍｐａｒｅｄｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ＴｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｄｏｍｉｎａｎｔｆｏｌｌｉｃｌｅｓｉｎｔｈｅｄａｙｏｆＨＣＧａｎｄｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｉｎｔｈｅｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ Ｐ＜０．０５ ｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｅｇｎａｎｃｙｒａｔｅａｎｄｌｉｖｅｂｉｒｔｈｒａｔｅｏｆｔｈｅｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ ８５．２９％ ８９．６６％ ｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ ６０．６１％ ５０．００％ ａｎｄｔｈｅａｂｏｒｔｉｏｎｒａｔｅ ５．８８％ ｗａｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ ２７．２７％ ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ Ｐ＜０．０５ ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅｏｖｕｌａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｔｉｏｎｐｒｏｇｒａｍｏｆｌｅｔｒｏｚｏｌｅｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｌｏｗ⁃ｄｏｓｅｍｅｎｏｔｒｏｐｈｉｎｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＡＩＨｃａｎｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｄｏｍｉｎａｎｔｆｏｌｌｉｃｌｅｓｐｅｒｄａｙｏｆＨＣＧａｎｄｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｉｒｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｅｇｎａｎｃｙｒａｔｅａｎｄｌｉｖｅｂｉｒｔｈｒａｔｅ ａｎｄｒｅｄｕｃｅｔｈｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅｏｆａｂｏｒｔｉｏｎ．２０２１，４０（３）河南大学学报（医学版）㊃２０７㊀㊃Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌｉｎｓｅｍｉｎａｔｉｏｎｂｙｈｕｓｂａｎｄ ｍｅｎｏｔｒｏｐｈｉｎ ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ ｌｉｖｅｂｉｒｔｈｒａｔｅ㊀㊀不孕患者中约１５％ ３７％为不明原因不孕，与女方排卵㊁输卵管及男方精液质量等并无关系，而同居１年以上并未怀孕［１］㊂夫精人工授精（ａｒｔｉｆｉｃｉａｌｉｎｓｅｍｉｎａｔｉｏｎｂｙｈｕｓｂａｎｄ，ＡＩＨ）在临床上广泛应用于不孕治疗中，对不明原因不孕㊁排卵障碍㊁精液异常等均效果显著，且费用较低㊁无创伤，与自然受孕过程相近㊂文献［２］指出，通过促排卵方案进行治疗，可提高ＡＩＨ成功率㊂来曲唑为非甾体类芳香化酶抑制剂，可结合Ｐ４５０芳香化酶中铁原子，抑制其活性，对雌激素生物合成起到抑制作用㊂尿促性素提取自绝经期妇女，可刺激卵泡内细胞发育，维持黄体功能［３］㊂鉴于此，本研究就来曲唑联合小剂量尿促性素促排卵方案对夫精人工授精不孕患者临床妊娠及活产率的影响作回顾性分析㊂１㊀资料与方法１．１㊀一般资料本研究设计符合医学伦理委员会要求㊂将２０１７年３月至２０１９年１０月于我院采取来曲唑促排卵方案的３４例ＡＩＨ不孕患者纳入对照组，另将同期采取来曲唑联合小剂量尿促性素促排卵方案治疗的３３例ＡＩＨ不孕患者纳入观察组㊂观察组：年龄２４ ３８岁，平均年龄（２８．３６ʃ２．７８）岁；不孕年限２ ７ａ，平均年限（３．８９ʃ１．０４）ａ；体质指数１８．７ ２６．５ｋｇ／ｍ２，平均体质指数（２２．１３ʃ１．０８）ｋｇ／ｍ２㊂对照组：年龄２５ ３７岁，平均年龄（２８．４１ʃ２．８５）岁；不孕年限２ ８ａ，平均年限（３．９２ʃ１．０９）ａ；体质指数１９ ２５．８ｋｇ／ｍ２，平均体质指数（２２．１８ʃ１．１２）ｋｇ／ｍ２㊂两组一般资料有可比性（Ｐ＞０．０５）㊂１．２㊀入选标准纳入标准：①符合‘不孕不育诊疗流程手册“中相关诊断标准［４］；②均行ＡＩＨ；③输卵管造影显示未见输卵管阻塞；④治疗期间定期门诊接受检查，且随访资料完善㊂排除标准：①合并高泌乳素血症㊁甲状腺功能异常等；②存在排卵异常；③男方精液常规不符合ＡＩＨ指征；④合并宫腔粘连㊁子宫畸形等疾病或有手术史；⑤卵巢储备功能下降或合并子宫内膜异位症㊂１．３㊀方法两组患者均在促排卵后２４ ３６ｈ检查超声㊂若无排卵，即行ＡＩＨ：嘱患者取截石位，将宫颈㊁阴道使用脱脂消毒棉球清洗后，向子宫腔内轻缓注入抽取的精液，术后仰卧３０ｍｉｎ㊂１．３．１㊀对照组促排卵方案：于月经第３ ５ｄ，予以来曲唑（江苏恒瑞医药，生产批号：２０１６１２０８／２０１９０５２１，规格：２．５ｍｇ）２．５ ５ｍｇ口服，１次／ｄ，连续服用５ｄ；当２个优势卵泡直径均不低于１７ｍｍ或１个优势卵泡直径不低于１８ｍｍ，且尿促黄体生成素达峰值或优势卵泡雌二醇不低于８００ｐｍｏｌ／Ｌ时，予以５０００ １００００Ｕ的人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）肌肉注射１次，以促卵泡排出（当日即为ＨＣＧ日）㊂１．３．２㊀观察组促排卵方案：于月经第３ ５ｄ，予以来曲唑２．５ｍｇ口服，隔日予以尿促性素（丽珠集团丽珠制药厂，生产批号：２０１７０２１３／２０１９０４０８，规格：７５Ｕ）７５Ｕ肌肉注射，后续剂量根据卵泡发育情况进行调整；ＨＣＧ使用同对照组㊂１．４㊀评价指标①在ＨＣＧ日，使用Ｂ型超声诊断仪（型号：ＷＥＤ⁃９６１８Ｃ，深圳市威尔德医疗电子，粤械注准２０１６２０６０１５４）检测患者优势卵泡数㊁子宫内膜厚度㊂②随访至ＡＩＨ后３０ｄ，使用Ｂ型超声诊断仪检查患者临床妊娠㊁流产情况，临床妊娠率为临床妊娠例数占总例数的百分比；随访至新生儿出生，记录活产情况，活产率为活产例数占总妊娠例数的百分比㊂１．５㊀统计学方法采用ＳＰＳＳ２３．０软件进行数据处理，计量资料以 ｘʃｓ表示，两组间比较采用独立样本ｔ检验，组内比较采用配对ｔ检验；计数资料用百分比表示，采用χ２检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义㊂２㊀结果２．１㊀ＨＣＧ日临床指标观察组患者ＨＣＧ日优势卵泡数㊁子宫内膜厚度高于对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）㊂见表１㊂表１㊀两组ＨＣＧ日临床指标比较（ ｘʃｓ）组别ＨＣＧ日优势卵泡数／个ＨＣＧ日子宫内膜厚度／ｍｍ观察组（ｎ＝３４）１．４９ʃ０．２１１０．２５ʃ１．９４对照组（ｎ＝３３）１．０２ʃ０．１５９．１２ʃ１．７２ｔ１０．５１４２．５２０Ｐ＜０．００１０．０１４２．２㊀妊娠㊁活产率观察组患者临床妊娠率高于对照组，流产率低于对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）㊂见表２㊂观察组活产率为８９．６６％（２６／２９），对照组为５０．００％㊃２０８㊀㊃ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ）２０２１，４０（３）（１０／２０），组间比较，差异有统计学意义（χ２＝９．５５０，Ｐ＝０．００２）㊂表２㊀两组妊娠㊁活产率比较［ｎ（％）］组别临床妊娠流产观察组（ｎ＝３４）２９（８５．２９）２（５．８８）对照组（ｎ＝３３）２０（６０．６１）９（２７．２７）χ２５．１９５５．５８４Ｐ０．０２３０．０１８３㊀讨论ＡＩＨ主要用于自身排卵正常的不孕症患者，可在自然周期进行㊂也可在药物促排卵周期进行，可将丈夫精液中向前运动的精子，通过体外洗涤，与白细胞㊁异常精子㊁死精子等进行分离，并经非性交的方法将其注入子宫腔内，使女方受孕［５］㊂文献［６］指出，促排卵周期的妊娠率显著高于自然周期㊂临床促排卵药物较多，包括克罗米芬㊁促卵泡素㊁促性腺激素等，促进卵子排出，完成精子与卵子的结合㊂来曲唑主要用于雌激素依赖性疾病的治疗，为苄三唑类衍生物，能对雌激素的产生起到阻断作用，抑制下丘脑垂体性腺轴受雌激素的负反馈作用，刺激卵泡发育［７］㊂另外，来曲唑具有较高选择性，不会对其他甾体激素生物的合成造成影响，且该药物半衰期短，主要通过羟基代谢产物途径被清除，对机体各靶器官无毒性，安全性高［８］㊂本研究结果显示，观察组患者ＨＣＧ日优势卵泡数㊁子宫内膜厚度高于对照组，对ＡＩＨ不孕患者采取来曲唑联合小剂量尿促性素促排卵方案，可提高患者ＨＣＧ日优势卵泡数与子宫内膜厚度㊂尿促性素属于促卵泡激素类似物，主要包含黄体生成素与卵泡刺激素两种成分，主要以卵巢作为靶器官，可调节卵巢生殖与内分泌功能，增强卵泡内细胞的发育㊁增殖，促使卵泡膜细胞产生雄激素，并通过提高芳香化酶活性，使雄激素向雌激素转化［９⁃１０］㊂本研究中，观察组患者临床妊娠率㊁活产率高于对照组，流产率低于对照组，说明对ＡＩＨ不孕患者采取来曲唑联合小剂量尿促性素促排卵方案，可提高患者临床妊娠率与活产率，降低流产发生率㊂由于来曲唑具有抗雌激素作用，单用仅能刺激单个卵细胞发育，且活产率相对较低，考虑主要是由于优势卵泡数相对较少原因所致［１１］㊂而联合小剂量尿促性素应用，可适当使卵泡数及子宫内膜厚度增加，提高患者雌激素水平，利于临床妊娠率提高［１２］㊂但临床使用时应予以小剂量使用，并定期测定体内激素水平与子宫内膜厚度，避免引起多胎妊娠㊁卵巢过度刺激综合征等并发症的发生㊂综上所述，对ＡＩＨ不孕患者采取来曲唑联合小剂量尿促性素促排卵方案，可提高患者ＨＣＧ日优势卵泡数与子宫内膜厚度，提高患者临床妊娠率与活产率，降低流产发生率㊂参考文献：［１］杨一华，王秀霞，张松英，等．不明原因不孕症诊断与治疗中国专家共识［Ｊ］．生殖医学杂志，２０１９，２８（９）：９８４⁃９９２．［２］史樱．来曲唑联合低剂量高纯度尿促性素治疗多囊卵巢综合征耐克罗米芬无排卵不孕患者的疗效观察［Ｊ］．河北医学，２０１７，２３（１２）：１９７４⁃１９７８．［３］张婷，李颖，王佩红，等．来曲唑联合ＨＭＧ治疗不同体质量指数ＰＣＯＳ不孕患者的促排卵效果及妊娠结局分析［Ｊ］．海南医学，２０１９，３０（１５）：１９５０⁃１９５３．［４］江苏省中西医学会生殖医学分会．不孕不育诊疗流程手册［Ｍ］．南京：南京大学出版社，２０１０：４７⁃５１．［５］陈华，王慧春，郭永新．夫精宫腔内人工授精临床妊娠率及其影响因素［Ｊ］．中国生育健康杂志，２０１８，２９（３）：２５８⁃２６１．［６］闫娅妮．来曲唑联合小剂量尿促性素在不明原因不孕患者行夫精宫腔内人工授精中的临床疗效［Ｊ］．中国优生与遗传杂志，２０１９，２７（２）：２４７⁃２５０．［７］刘静．来曲唑联合二甲双胍对ＰＣＯＳ不孕症患者血清性激素水平的影响及促排卵效果观察［Ｊ］．中国全科医学，２０１８，２１（１）：２１４⁃２１６．［８］管荷琴，吴为玲．阿司匹林分别联合来曲唑及枸橼酸氯米芬治疗多囊卵巢不孕的疗效㊁性激素水平变化及妊娠率比较［Ｊ］．中国妇幼保健，２０２０，３５（１８）：３４５９⁃３４６１．［９］徐冰，刘志爽，翟璇．暖宫孕子胶囊联合尿促性素治疗排卵障碍性不孕症的临床研究［Ｊ］．现代药物与临床，２０２０，３５（２）：３２６⁃３２９．［１０］纪冬梅，邹薇薇，邓晓红，等．尿促性素促排卵在卵巢功能正常的不孕患者首次行ＩＶＦ⁃ＥＴ助孕中的价值［Ｊ］．安徽医学，２０２０，４１（５）：５０１⁃５０４．［１１］黄丽，刘小林．３种不同剂量来曲唑分别联合枸橼酸氯米芬对ＰＣＯＳ不孕患者性激素和内膜的影响［Ｊ］．中国性科学，２０１９，２８（９）：１１３⁃１１７．［１２］王燕，王春莲，员相冰，等．来曲唑与尿促性素在多囊卵巢综合征不孕患者促排卵中的应用［Ｊ］．医学研究杂志，２０１７，４６（８）：１６０⁃１６３．［责任编辑㊀时㊀红］。
人卵泡液hCG水平与卵母细胞成熟及早期胚胎发育的关系张丽丽;王海英;张仁礼;梁洁玲;刘彩霞;周艳;闻安民【摘要】目的：探讨控制性卵巢刺激周期中，取卵日卵泡液hCG水平与获卵数、卵母细胞成熟率、胚胎发育和妊娠结局的关系。
方法分析2012~2013年间进行的311个IVF/ICSI-ET周期，化学发光法检测取卵日卵泡液hCG值，并根据hCG值进行分组，比较各组获卵数、卵母细胞成熟率、受精率、卵裂率、可利用胚胎率和临床妊娠率的差异。
结果在IVF/ICSI-ET治疗周期中，取卵日hCG水平14~21 nmol/L组卵母细胞成熟率和受精率显著高于其它各组（P<0.05），获卵数、卵裂率、可利用胚胎率以及临床妊娠率与其它各组相比较高，但不存在显著差异（P>0.05）。
取卵日hCG水平>21 nmol/L组卵母细胞成熟率和受精率显著低于其它各组（P<0.05），可利用胚胎率和临床妊娠率与其它各组相比较低，但不存在显著差异（P>0.05）。
结论取卵日卵泡液hCG水平与卵母细胞成熟率、受精能力、胚胎发育潜能和最终的临床结局相关，取卵日卵泡液hCG水平过高可能不利于卵母细胞成熟和胚胎发育。
%Objective To explore the correlation of human chorionic gonadotrophin (hCG) level in the follicular fluid on oocyte retrieval day with the number of oocytes retrieved, maturation rate, embryonic development, and pregnancy outcome in controlled ovarian stimulation cycles. Methods The data of 311 IVF/ICSI-ET cycles from 2012 to 2013 was analyzed and stratified according to hCG level in follicular fluid on oocyte retrieval day (<7 nmol/L, 7-14 nmol/L, 14-21 nmol/L,and >21 nmol/L) determined with chemiluminesence method. The number of oocytes retrieved, oocyte maturation rate, fertilization rate, cleavage rate, available embryo rate and pregnancy rate were compared betweenthe groups. Results In the IVF/ICSI-ET cycles, the cycles with hCG level of 14-21 nmol/L in the follicular fluid on the day of oocyte retrieval had significantly higher oocyte maturation rate and fertilization rate than those in the other 3 groups (P<0.05), but the number of oocytes retrieved, cleavage rate, available embryo rate and pregnancy rate, though slightly higher, showed no significant difference from the other 3 groups (P>0.05). In the group with hCG level >21 nmol/L, the oocyte maturation rate and fertilization rate were significantly lower than those in the other 3 groups (P<0.05), and the available embryo rate and pregnancy rate were slightly lower without significant differences from the other 3 groups (P>0.05). Conclusion Follicular fluid hCG level on the day of oocyte retrieval is associated with oocyte maturation, fertilization, embryonic development potential, and IVF outcome. An excessively high follicular fluid hCG level on the day of oocyte retrieval may have negative effects on oocyte maturation and embryo development.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2014(000)002【总页数】5页(P260-264)【关键词】卵泡液;hCG;体外受精;胚胎发育;妊娠结局【作者】张丽丽;王海英;张仁礼;梁洁玲;刘彩霞;周艳;闻安民【作者单位】南方医科大学，广东广州 510515; 广东省人民医院//广东省医学科学院生殖医学科，广东广州 510080;广东省人民医院//广东省医学科学院生殖医学科，广东广州 510080;广东省人民医院//广东省医学科学院生殖医学科，广东广州 510080;广东省人民医院//广东省医学科学院生殖医学科，广东广州510080;广东省人民医院//广东省医学科学院生殖医学科，广东广州 510080;广东省人民医院//广东省医学科学院生殖医学科，广东广州 510080;广东省人民医院//广东省医学科学院生殖医学科，广东广州 510080【正文语种】中文卵泡液为卵母细胞的发育提供了微环境，其成分包括血液透过血卵屏障的血浆成分，颗粒细胞和泡膜细胞的分泌产物等。
・生殖医学・高纯度尿促性素和普通尿促性素促排卵效果陈新娜 乔杰 何方方 王树玉 王颖【摘要】 目的 比较高纯度尿促性素(human m eno pausal g onadotr opin,hM G)和国产普通hM G在接受诱发排卵后行宫腔内人工授精或指导同房治疗的患者中的效果和安全性。
方法 2004年7月至2005年3月在3个生殖中心选择符合条件的219例不育妇女进行随机分组促排卵治疗,高纯度hM G组108例,普通hM G组111例。
观察主要疗效指标排卵率;次要疗效指标临床妊娠率、破裂卵泡数目、注射hM G日血清E2峰浓度、药物应用时间和药物总剂量;安全性评价指标不良事件发生率。
结果 普通hM G和高纯度hM G排卵率分别为93.0%(93/100)和91.0%(91/100),临床妊娠率为12.4%(12/100)和20.0%(20/100),破裂卵泡数目为(1.5±1.4)个和(1.2±0.9)个,血E2峰浓度为(896.5±911.9)pmol/L和(699.0±618.5)pmo l/L,用药时间为(11.6±3.7)d和(11.6±4.1)d,用药剂量为(1147.5±46.8)IU和(1280.6±646.0)IU,两者疗效及安全性评价指标的比较,差异无显著性(P>0.05)。
结论 高纯度hM G的促排卵治疗和国产普通hM G一样有效而安全。
【关键词】 人尿促性素;促排卵;宫腔内人工授精Eff icacy of highly purif ied hMG and ordinary hMG among Chinese women undergoing ovarian induc-tion CH EN X inna,Q I A O J ie,H E F angf ang,et al.Rep r od uctiv e M edical Center,P ek ing Univer-sity T hird H osp ital,Beij ing100083,China【Abstract】 Objective T o co mpar e the efficacy and safety o f highly pur ified hM G and or dinaryhM G amo ng Chinese wo men under g oing o var ian inductio n in intrauter ine inseminatio n(I U I)or timedinter course(T I). Methods Betw een July2004and M arch2005,infert ile female subjects w ere re-cr uited at3R epr oduct ive M edical Center s in China.A to tal o f219w omen wer e ra ndomized into tw ogr o ups(108in highly purified hM G,111in o rdinar y hM G)fo r o var ian induction.T he pr imar y effi-ca cy var iable w as the o vula tio n ra te and t he secondar y efficacy v ariables included t he clinical preg nan-cy r ate,the num ber of ov ulated follicles,serum co ncentr atio n of est radio l on the day of hCG injec-tio n,the dur atio n of stimulation and the to tal do se of o rdinary hM G used.T he main safet y parame-ters w ere the incidence of adv erse events(A E). Results N o sig nificant differences w er e fo und be-tw een the or dina ry hM G and hig hly pur ified hM G gr oup in the o vula tio n r ate(93.0%v ersus91.0%),the clinical pr egnancy rate(12.0%v ersus20.0%),the number o f o vulated fo llicles(1.5±1.4ver sus 1.2±0.9),serum concentr ation o f estr adiol on t he da y of hCG inject ion(816.5±911.9pmol/L v ersus699.0±618.5pmo l/L),the durat ion of stimulatio n(11.6±3.7ver sus11.6±4.1d)a nd the to tal do se o f o rdinar y hM G used(1147.5±468.3ver sus1280.6±646.0I U).N o dif-ferences wer e seen in t he main safety par ameter s(P>0.05). Conclusion highly purified hM G isas effectiv e and safe as or dinar y hM G in o var ian induction.【Key words】 Human m eno pausal go nadot ro pin;Ov arian inductio n;I nt rauter ine inseminatio n作者单位:100083 北京,北京大学第三医院生殖医学中心(陈新娜、乔杰、王颖);北京协和医院生殖中心(何方方);北京妇产医院生殖中心(王树玉)责任作者:乔杰20世纪60年代人尿促性素(hM G)产品问世以来,就开始广泛用于人类不孕症的治疗。
长方案促排卵过程中血清LH低于正常值时补充LH对助孕结局的影响李巍巍;许晓燕;高瑞峰;赵华;王兴玲;孙丽君;管一春;娄华【摘要】目的探讨在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期长方案促排卵过程中晚卵泡期血清促黄体生成素(LH)低于正常值时,补充基因重组人黄体生成素(r hLH)或人绝经期尿促性腺激素(HMG)对IVF-ET助孕结局的影响.方法采用回顾性分析,选择因女方输卵管因素行IVF-ET助孕的患者529例,所有患者均采用标准长方案,单用基因重组促卵泡激素(rFSH)促排卵.根据年龄、晚卵泡期血清LH、是否补充外源性LH将所有患者分成6组:＜35岁的A组血清LH＞1.2 mU/mL,单用rFSH促排46例,B组血清LH＜1.2 mU/mL,补充r hLH 52例,C组血清LH＜1.2 mU/mL,补充HMG 257例;≥35岁的D组血清LH＞1.2 mU/mL,单用rFSH促排34例,E组血清LH＜1.2 mU/mL,补充r-hLH 41例,F组血清LH＜1.2 mU/mL,补充HMG 99例.结果＜35岁的3组患者之间和≥35岁的3组患者之间在年龄、不孕年限、BMI,基础FSH、LH、E2水平,Gn使用天数、Gn用量,HCG日LH、P水平,HCG日内膜厚度及获卵数等方面差异均无统计学意义(均P＞0.05).B组及E组rFSH总量分别高于C组及F组,差异有统计学意义(均P＜0.05);B组及F组E2水平及2PN受精率分别明显高于A组及D组,差异有统计学意义(均P＜0.05);A、B、C组之间优质胚胎率及妊娠率比较差异无统计学意义(均P＞0.05);E组优质胚胎率及妊娠率明显高于D组,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论口服避孕药降调长方案晚卵泡期血LH值＜1.2 mU/mL时,适量添加r-hLH可以改善卵子质量,提高受精率,改善妊娠结局,尤其是明显提高≥35岁患者的临床妊娠率、受精率及优胚率.【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2015(044)003【总页数】5页(P334-338)【关键词】体外受精-胚胎移植;长方案;黄体生成素;妊娠率【作者】李巍巍;许晓燕;高瑞峰;赵华;王兴玲;孙丽君;管一春;娄华【作者单位】郑州大学第三附属医院生殖中心,郑州 450052;郑州大学第三附属医院生殖中心,郑州 450052;郑州大学第三附属医院生殖中心,郑州 450052;华中科技大学同济医学院附属同济医院生殖中心,武汉430030;郑州大学第三附属医院生殖中心,郑州 450052;郑州大学第三附属医院生殖中心,郑州 450052;郑州大学第三附属医院生殖中心,郑州 450052;郑州大学第三附属医院生殖中心,郑州 450052【正文语种】中文【中图分类】R169.49正常值时，补充基因重组人黄体生成素（r-hLH）或人绝经期尿促性腺激素（HMG）对IVF-ET助孕结局的影响。
