浓缩血小板的制备白膜法、富浆法

手工分离浓缩血小板(PC)的制备Ⅰ.富含血小板血浆(PRP)法分离制备血小板法（富浆法）先将全血经轻离心，分离制备富含血小板血浆，之后将富含血小板血浆重离心，移去上层血浆，下层沉淀即为浓缩血小板。

在第二次重离心制备浓缩血小板前，可将第一次轻离心获得的富含血小板血浆进行白细胞过滤处理。

具体操作如下：1.采血2.轻离心成分分离制得红细胞、富含血小板血浆。

建议离心条件：温度：22℃±2℃，加速：9 r/min，减速：3 r/min，200ml袋离心力为478g，400ml袋离心力为850g，离心时间为8分钟。

（贺利氏离心机）轻离心,使红细胞（RBC）、白细胞（WBC）沉淀，上层血浆的大部分血小板（PLT）尚未沉淀，分离此血浆即为富含血小板血浆，约含全血中70%的PLT（根据调节离心机的离心力和时间有所不同）。

3.重离心富含血小板血浆。

第二次离心：温度：22℃±2℃，加速：9 r/min，减速：3 r/min，离心力2988g，离心时间为10分钟。

浓缩血小板1个单位留浆20－25ml，2个单位留浆30－45ml。

4.挤去上层贫血小板血浆, 再回部分贫血小板血浆置血小板内, 形成血小板悬液，静置1.5-2h；8h内制备必须完毕。

5.血小板悬液振荡保存，等待检测报告,不合格剔除。

6.根据需求选择合格血小板悬液进行汇集过滤。

7.开放式6h内输完。

8.密闭式振荡保存（无菌接驳，血小板贮存袋，细菌监测）。

富浆法的特点：PRP-PC质量不稳定，WBC残留量高，输洼安全性差，反复输注常会诱发血小板输注无效。

Ⅱ.白膜(BC)法分离制备血小板法全血首先经重离心后分离白膜层，将白膜层再经轻离心后，去除红细胞和白细胞，即得浓缩血小板。

具体操作如下：1.采血2.成分分离并制备白膜得少白红细胞（白细胞去除率约85 %）、血浆、白膜。

建议离心条件：温度：22℃±2℃，400ml袋离心力转速2515转/2100g，离心时间为14分钟。

浓缩血小板悬液的三种制备方法比较作者：杨世明张勇萍杨枨林费红毅【关键词】制备方法关键词:制备方法;检测比较;血小板悬液0引言浓缩血小板悬液（PC）在白血病、再障等血小板减少的出血及外科手术中均有显著的止血作用，而PC中血小板数量的多少和质量的高低又是影响临床输注效果的重要因素.为探讨PC的最佳制备方法和条件，我们对二次离心法、白膜回浆法和机器单采法三种方法制备的PC细胞参数进行了检测比较.1材料和方法1.1供血者选择按国家卫生部规定标准，对献血员进行体格检查和ALT，HAV，HBV，HCV，HIV及RPR等化验检测均合格，5d内未服阿斯匹林等影响血小板功能的药物，静脉血管良好，血小板计数在150×109・L-1以上者.1.2器材设备图门产LSG-04R型大容量低温离心机，超净台，分浆夹，F-800型血细胞分析仪（日本产），CPD保养液三联血袋，规格为400mL.1.3制备方法①二次离心法:采集全血400mL按文献［1］规程进行分离制备;②白膜回浆法:采集与受血者ABO血型相同的全血400mL，置低温离心机，在22℃以3500r・min-1离心10min，在超净台内分出血浆至1号袋，保留80～100mL血浆，白膜层分至2号袋，静置30～40min后，在22℃以1400r・min-1离心6min后，将白膜层以上部分分出约60mL呈浑浊状的血浆，即为白膜回浆法制备的1U浓缩血小板悬液;③机器单采法:由西安市中心血站制备.1.4检测方法及指标血小板、红细胞、白细胞计数，均用F-800型血细胞分析仪进行测定.血小板回收率=（PC中血小板数/制备前血小板总数）×100%;PC中血小板数=血小板计数/L÷1000×容量（mL）. 2结果用F-800型血细胞分析仪，对三种不同方法制备的浓缩血小板悬液细胞参数检测，结果见表1.表1三种方法制备浓缩血小板悬液的检测结果（略）3讨论二次离心法制备浓缩血小板悬液的优点是简单易行，缺点是PC中血小板数量少，而WBC含量较多.PC中混入过多的WBC不利于血小板的贮存，另外血小板的贮存质量也与制备过程中血小板的损伤程度有关.PC中混入过多的WBC可使患者产生白细胞凝集素或HLA抗体而影响输注效果，一般认为PC中WBC<106才能有效地防止同种免疫，本文二次离心法制备的PC中WBC计数达6.98×109・L-1，输注后仍有产生免疫的可能.机器单采法制备血小板的优点是能够获得高质量的血小板制品，可从单个供体采集到浓度高、纯度好、体积小、无聚集的8～10个单位的血小板制品［2］，但由于其设备昂贵，在基础医院目前还难以普及.近年来已采用白膜回浆法制备PC，该法的优点是简便易行，血小板获得量较多，制备过程中血小板损伤小，最终PC中混入的WBC数量较少，只要掌握好离心条件，克服制备过程中的各种影响因素，可得到符合质量控制标准的血小板数量，在无机器单采条件的单位可以使用白膜回浆法制备浓缩血小板制品，以便获得较为满意的输注效果.参考文献:［1］肖星甫.输血技术手册［M］.成都:四川科学技术出版社，1992:180-182.［2］何慧平.血细胞分离机采集血小板的初步探讨［J］.临床输血与检验，1999;1（2）:30-31.。

去白细胞混合浓缩血小板（LDPPCs）的制备及应用安全性分析目的：观察并分析去白细胞混合浓缩血小板（LDPPCs）的制备及其应用安全性。

方法：采用白膜法将浓缩血小板（PCs）制备出来后，将上清液转移至专用的血小板保存袋。

接着采用血小板用滤除白细胞过滤器进行直接过滤。

应用血小板的分布宽度（P-LCR）、平均体积（MPV）、白细胞与红细胞的残余量、血小板计数等指标对过滤前后血小板的质量变化进行评价。

并比较LDPPCs与细胞分离机分离出来的单采血小板之间的黏附率及PAC-1。

随机选取20例需要输注血小板的患者，分为对照组与实验组，对照组患者每次输注1个治疗量的单采血小板，实验组则每次输注1个治疗量的LDPPCs，对输注前、及术后24小时患者体内的血小板计数进行检测，并将血小板的回收率与CCI计算出来。

结果：血小板的P-LCR及pH值在混合前后相比，无明显差异，不具备无统计学意义（P>0.05），而血小板的容量与计数，MPV，红、白细胞残余量混合前后对比具有显著差异，具备统计学意义（P＜0.05）。

LDPPCs与单采血小板的黏附率与PAC-1均在正常范围内。

对照组与实验组患者输注前后的血小板计数、血小板回收率以及输后的CCI差异不明显（P>0.05）。

结论：应用白细胞过滤及无菌连接两种技术制备的LDPPCs，其各项质量指标均达到国家规定的标准，临床输注安全，疗效可靠，可作为单采血小板的有益补充。

标签：去白细胞；混合浓缩血小板；制备；安全性目前，我国在预防与治疗因血小板功能不良或数目减少造成的出血性疾病时，大多采用向患者输注血小板制剂的手段。

在利用全血制备手工的PCs时，由于1个治疗量需要输注多人份，而且混入了过多的白细胞，临床上正逐渐减少此种方法的使用[1]。

本文在应用白细胞过滤及无菌连接两种技术的基础上，去除多人份的PCs中的白细胞后，制备出了去白细胞混合浓缩血小板。

现将操作经过报道如下。

浅谈手工浓缩血小板的汇集滤白及深低温保存摘要】目的：探讨血小板输注治疗各种原因因血小板减少或功能障碍引起出血。

方法：目前，临床应用的血小板主要有单采血小板和手工浓缩浓缩血小板，由于单采血小板的捐献不能满足临床需求，所以手工分离浓缩血小板已逐渐成为临床血小板供应的重要组成部分。

结果；利用普通无偿献血者捐献的全血手工分离浓缩血小板，可使全血中的血小板得到充分利用。

结论：本站采用血小板专用滤器以每14u为一个治疗量，制备汇集滤白混合血小板用于临床，取得了很好的临床效果【关键词】浓缩血小板深低温保存【中图分类号】R457 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）12-0072-01血小板输注是治疗各种原因因血小板减少或功能障碍引起出血的有效治疗手段。

目前，临床应用的血小板主要有单采血小板和手工浓缩浓缩血小板，由于单采血小板的捐献不能满足临床需求，所以手工分离浓缩血小板已逐渐成为临床血小板供应的重要组成部分，利用普通无偿献血者捐献的全血手工分离浓缩血小板，可使全血中的血小板得到充分利用，避免资源浪费，还可减少悬浮红细胞保存过程中白细胞-血小板微聚物的形成，降低受血者发生血管栓塞的危险，减少非溶血性反应的发生。

手工浓缩血小板多人份输注容易引起同种免疫反应而导致输注无效，其主要原因为HLA抗体引起，其次为HPA抗体，去除手工浓缩血小板中的白细胞就可减少输血反应和最大限度地避免同种免疫的发生。

我站采用血小板专用滤器以每14u为一个治疗量，制备汇集滤白混合血小板用于临床，同时制备冰冻汇集滤白混合血小板，储存备用，用于急诊和手术出血患者，取得了很好的临床效果，现将方法报告如下：1 材料与方法1.1材料采集于五联袋6小时内22±2℃保存的全血400ml；血小板汇集滤除白细胞输血器：南京双威生物医学科技有限公司提供；二甲基亚砜（DMSO）：广东新普公司提供。

1.2仪器设备 Cyrofuge6000i大容量冷冻离心机（德国）血小板保存箱；速冻冰箱；海尔 -80℃超低温冰箱；冰冻解冻箱；kjx-lA/CD-DR解冻箱（苏州医用仪器厂）血球计数仪；希斯美康XT-1800i血球计数仪(日本)1.3浓缩血小板的制备：采用富浆法。

去白细胞混合浓缩血小板的制备和质量控制1 范围本标准规定了去白细胞混合浓缩血小板的制备、质量控制、标识、标签、储存、运输要求。

本标准适用于去白细胞混合浓缩血小板的制备和质量控制。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB 18467 献血者健康检查要求GB 18469 全血及成分血质量要求WS/T 203-2001 输血医学常用术语WS 399 血液储存要求WS/T 400 血液运输要求WS/T 550 全血及成分血质量监测指南3 术语和定义WS/T 203-2001界定的以及下列术语和定义适用于本文件。

3.1制备血小板的起始全血whole blood qualified for platelet concentrates preparation符合制备浓缩血小板成分血质量要求的全血。

3.2浓缩血小板 platelet concentrates以单人份全血制备、质量达到规定要求的血小板悬液。

3.3白膜层 buffy coat layer全血经重离心后，自上而下分成明显可见的血浆部分和细胞部分，在上层血浆与下层红细胞之间形成的肉眼可见的灰白色细胞混合层，其主要包括比重在1.030～1.092之间的血小板、淋巴细胞、早幼粒细胞、单核细胞、网织红细胞、粒细胞、晚幼粒细胞、嗜碱性粒细胞和中性粒细胞等有形细胞成分。

3.4白膜 buffy coat将白膜层单独分离制备而成的成分血。

3.5白膜法 buffy coat method重离心全血，分离含适量血浆的白膜，再经轻离心分离出浓缩血小板的制备方法。

3.6富血小板血浆法 platelet-rich plasma method轻离心全血，自上而下分成富含血小板血浆和红细胞两部分，留取富含血小板血浆，重离心分出上层血浆，获得下层浓缩血小板的制备方法。

两种方法制备浓缩血小板的质量指标对比徐翠玲;杨剑;彭世球;苗燕平;李莹【摘要】目的比较和评估两种不同方法制备浓缩血小板的质量.方法回顾性对比分析手工富浆法、仪器白膜法分离制备浓缩血小板的各项关键质量指标,包括血小板含量、容量及红细胞混入量等,分析不同制备方法对浓缩血小板质量的影响.结果两种方法制备的肉眼外观质量合格的浓缩血小板其容量、血小板含量及红细胞混入量差异不具统计学意义(P>0.05).结论手工富浆法和仪器白膜法两种方法制备的浓缩血小板质量无明显差异,用仪器白膜法替代手工富浆法对浓缩血小板质量无明显影响.【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2017(035)006【总页数】3页(P880-881,904)【关键词】浓缩血小板;仪器白膜法;血小板含量;红细胞混入量【作者】徐翠玲;杨剑;彭世球;苗燕平;李莹【作者单位】江西省血液中心,江西南昌 330052;江西省肿瘤医院,江西南昌330029;江西省血液中心,江西南昌 330052;江西省血液中心,江西南昌 330052;江西省血液中心,江西南昌 330052【正文语种】中文【中图分类】R457.1+2近年来，浓缩血小板的应用越来越广泛，而随着自动化技术的不断更新，血液成分分离机在其制备中的应用越来越广泛。

使用血液成分分离机制备浓缩血小板具有程序化、标准化和信息化的特点，而手工制备浓缩血小板无以上优势，不符合成分制备的发展趋势[1-10]。

针对以上情况，我们对手工和仪器制备浓缩血小板的质量进行了比较分析，评估使用仪器替代手工制备浓缩血小板后，对其产品质量的影响。

现将评估情况报告如下。

1 材料与方法1.1 样本来源本血液中心2017年1月至7月无偿献血者所献全血制备的浓缩血小板。

1.2 仪器与耗材全血成分分离仪LMB SEPAMATIC-SLⅢ（深圳普特公司），大容量低温离心机Cryorfuge 6000i（美国热电公司），Q-400 五联袋（山东威高）。