细胞化学染色表格整理

实验室做细胞常用的细胞固定与染色方法一、爬片前盖玻片处理方法对于悬浮培养的细胞，在进行各种染色前常需先制备成涂片。

为了保证细胞在长时间的染色过程中不从载玻片脱落，必须使其牢固贴附于载玻片上。

在载玻片上涂布一层有助于细胞黏附的物质是经常采用的方法之一。

能促进细胞黏附的物质主要有多聚赖氨酸、铬矾明胶等，这里介绍多聚赖氨酸的涂布方法。

1、将载玻片用玻璃专用洗涤剂(如Decon)浸泡5min，间或振荡。

2、用自来水冲洗5min。

3、以1％盐酸—70％乙醇溶液浸泡5min。

4、烤箱干燥(至此即可用于普通染色)。

5、多聚L-赖氨酸(1:10溶于去离子水)浸泡5min，振荡。

6、入60℃烤箱1 h，或室温过夜干燥(用于细胞化学、免疫细胞化学及原位杂交细胞化学)。

二、细胞固定常用方法固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去活性，防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能准确定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。

同时，固定还可使细胞的各部分易于着色，适于观察、长期保存和分析。

1.固定组织、细胞的基本原则：尽可能选用新鲜培养物；根据检测工具、对象、目的和要求选择固定剂和固定方法。

2.培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物，如双盖片悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料。

对双盖片悬滴培养物和悬液培养物来说，常通过离心收集细胞，PBS漂洗2～3次后，备固定制片；对盖片单层培养物来说，将盖片从培养器皿中取出后，PBS液漂洗2～3次，以洗去血清和附着于细胞表面的残渣，备固定用。

3.常用固定液：常用的固定液分两类，一类是以单一化学物质配成的固定液，称简单固定液。

主要有甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、丙酮、戊二醛、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞、氯化镉、四氧化锇(锇酸)。

另一类是用两种或两种以上化学物质配合成的固定液，称混合固定液。

血细胞化学染色简单记1.过氧化酶染色：检测过氧化酶。

胞质中无颗粒为阴性，出现细小颗粒分布稀疏为弱阳，出现密集粗大颗粒为强阳性。

强阳性（嗜酸性粒细胞）、弱阳或阴（单核粒细胞）、阴性（淋、红、巨、浆、嗜碱）；临床意义：辅助诊断急淋非急淋、鉴别急淋急粒。

注意：（1）过氧化物酶染色急性粒细胞白血病为阳性，急性淋巴细胞白血病是阴性。

（2）粒细胞中原始粒细胞是阴性，嗜碱性粒细胞是阴性。

2.过碘酸-雪夫反应：检测糖类物质。

胞质中出现紫红色颗粒、块状或弥漫状红色为阳性反应。

阳性（淋、粒、单、巨、血小板）（嗜酸特异颗粒间胞质为阳性、嗜碱粒细胞特异颗粒为阳性）阴性（分化差的原粒、幼红和红）。

临床意义：红白血病和骨髓异常增生综合征时幼红可呈阳性反应，良性贫血幼细胞多数为阴性。

戈谢细胞为强阳性，尼曼-匹克细胞呈阴性。

注意：（1）急性粒细胞白血病为阴性，急性淋巴细胞白血病是阳性。

（2）戈谢细胞为阳性，尼曼-匹克细胞为阴性。

3.碱性磷酸酶染色：只有中性粒细胞为阳性，临床意义碱性磷酸酶（NAP）的生理及病理增多减少。

注意：（1）慢性粒细胞白血病积分降低，类白血病积分升高。

4.氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色：阴性或弱阳（原粒、嗜酸）；阳性或强阳（早幼粒至成熟中幼粒、嗜碱）。

临床作用：急粒为阳性、急单和急淋为阴性。

注意：（1）该染色是粒细胞特异性染色。

5.α-醋酸萘酚酯酶染色：阴性或弱阳（粒系、淋巴系、红系）；阳性（单核系、巨核、血小板）注意：（1）所有抑制试验中只有单核细胞会受抑制，所有可以用来鉴别粒细胞白血病和单核细胞白血病。

6.醋酸AS-D萘酚酯酶染色：基本同与α-醋酸萘酚酯酶染色。

注意：（1）同α-醋酸萘酚酯酶染色。

血细胞化学染色要点1：过氧化酶染色（POX）（1）原理血细胞内的过氧化酶分解H2O2，释出初生态氧，使无色联苯胺氧化成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕黑色化合物，沉着于胞质内。

（2）结果判断阳性结果为胞质内出现棕黑色颗粒。

①（－），无颗粒。

②（±），颗粒细小、弥散分布。

③（＋），颗粒较粗、局灶分布。

④（＋＋），颗粒粗大、密集、分布较广，占胞质的1/2～2/3。

⑤（＋＋＋），颗粒粗大、成团块，几乎布满胞质。

⑥（＋＋＋＋），颗粒成团块状，充满胞质，并覆盖胞核。

（3）正常血细胞的染色反应1）粒细胞系统：原始粒细胞大多呈阴性反应，有的可出现少量蓝黑色颗粒。

自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均呈阳性反应，随细胞的成熟，阳性反应的程度逐渐增强。

中性分叶核粒细胞为强阳性反应，嗜酸性粒细胞阳性反应的程度最强，其阳性颗粒比中性粒细胞粗大，有折光性，嗜碱性粒细胞呈阴性反应。

2）单核细胞系统：原始单核细胞呈阴性反应，幼单核细胞和单核细胞呈弱阳性反应，阳性颗粒少而细小，弥散分布，有的也可呈阴性反应。

3）其他细胞：淋巴细胞、巨核细胞、血小板、幼红细胞、浆细胞和组织细胞均呈阴性反应。

有的吞噬细胞可呈阳性反应。

过氧化酶染色（POX）模式图（4）临床意义1）帮助鉴别急性白血病的类型：①急性粒细胞白血病时，白血病性原始粒细胞可呈阳性反应，阳性颗粒一般较多，较粗大，常呈局限性分布；急性淋巴细胞白血病时，原始淋巴细胞和幼淋巴细胞均呈阴性反应；急性单核细胞白血病时，白血病性原始单核细胞呈阴性反应，有时虽少数可呈弱阳性反应，但阳性颗粒少而细小，常弥散分布。

②小型原始粒细胞和原始淋巴细胞不易区别，如果小型原始细胞呈过氧化物酶阳性反应，可确定为小型原始粒细胞。

③急性早幼粒细胞白血病有时须与急性单核细胞白血病鉴别，如果白血病细胞呈过氧化物酶强阳性反应，应确定为急性早幼粒细胞白血病。

④急性单核细胞白血病有时须与组织细胞白血病或恶性组织细胞病鉴别，异常组织细胞的过氧化物酶呈阴性反应，而白血病性幼单核细胞和单核细胞呈弱阳性反应。

实验十二常用血细胞化学染色Cytochemistry stain for blood cells一、过氧化物酶染色染色原理粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有髓过氧化物酶(myeloperoxidase, POX或MPO),能将底物H202分解，产生新生态氧，新生态氧可氧化四甲基联苯胶成联苯胺蓝。

联苯胺蓝自我脱氢氧化形成棕色的四甲基苯酿二胺，后者与亚硝基铁氧化纳结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色颗粒，沉淀于细胞质内酶所在的部位。

试剂器材1．1%TMB(3,5,31,5f一四甲基联苯胶)乙醇溶液:0.1g TMB溶于100mL88%乙醇溶液中，置棕色瓶内，冰箱保存。

2．亚硝基铁氧化锅饱和溶液在少量蒸馏水中加入亚硝基铁氰晶体，至不再溶解为止，置棕色瓶内，冰箱保存。

3．1%过氧化氢溶液取30%H2021mL加入蒸馆水29mL。

4．稀过氧化氢溶液1%H2021滴，加10 mL蒸馏水稀释(新鲜配制)。

5．瑞氏(Wright)染色液。

6．新鲜涂片(骨髓或血片)、染色架、洗耳球、光学显微镜等。

操作步骤1．取0.1%TMB乙醇溶液1mL，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μL，溶液呈淡棕黄色，染色液应临用前配制。

2．在新鲜干燥的血片或骨髓涂片上，加0.1%TMB一亚硝基铁氰化钠饱和溶液0.5mL，放置lmin，再加稀H202溶液0.7mL，吹匀，染色6min。

3．自来水冲洗，待干，用瑞氏染液复染15~20 min。

4．自来水冲洗，待干，用油镜镜检。

注意事顶1．血涂片或骨髓涂片应新鲜制作，涂片应厚薄适宜。

2．TMB配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90%~95%乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而导致染色效果差。

3．H202需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。

涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示H202过浓。

若H202加于血片上不产生气泡，则示无效。

4．染色液pH应为5.5。

病理学技术特殊染色最总结均配图结缔组织染色法Mallory三色染色法蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞图表 A 染色，显示胶原纤维，A组排列规则. Masson三色染色法绿色：胶原纤维红色：肌纤维橘红色：红细胞图表 B Mssson三色法. 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维黑色：网状纤维绿色：弹性纤维淡黄色：肌肉、红细胞图表 D 间苯二酚法二、胶原纤维染色法. Van Gieson（）苦味酸-酸性品红法鲜红色：胶原纤维黄色：肌纤维、细胞质、红细胞蓝褐色：胞核图表 E 2.胶原纤维，Van Gieson.)苦味酸-酸性品红法图心肌梗塞 myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。

天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)红色：胶原纤维绿色：细胞核黄色：其他三、网状纤维染色Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维红色：胞核（核固红复染）黄棕色：胶原纤维淡红色：细胞质（红液复染）图表 F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法Gomori氏银氨液配制法图表 G Gomori氏银氨液配制法四、弹性纤维染色Gomori醛复红染色法*甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳图表 H 醛复红染色法五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法蓝绿色：弹性纤维红色：胶原纤维黄色：背景图表 I 间苯二酚法六、肌肉组织染色△横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨微紫色：粗弹性纤维（有时）紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌图表 K .磷钨酸苏木素染色液△早期心肌病变组织染色染色法（1974年）红色：缺氧心肌、红细胞黄色或黄棕色：正常心肌蓝色：细胞核图各组小鼠心肌组织Nagar-Olsen染色（光学显微镜, ×200）显示缺氧心肌染色法（1964年）绿色：其他组织七、糖类染色过碘酸-Schiff（PAS）染色法红色：糖原及其他PAS反应阳性物质蓝色：细胞核图表 L 7.胃贲门腺体胞浆呈PAS阳性八、黏液物质（黏多糖）染色阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）染色法（1956）红色：中性黏液物质蓝色：酸性黏液物质紫红色：混合性黏液物质图表 M 染色结肠粘膜图表 N .胃粘膜组织 AB-PAS染色 40×：2.爱先蓝（）法蓝色：唾液酸、弱硫酸化黏液物质、一般粘液红色：胞核不着色：强硫酸化黏液物质图表 O .爱先蓝（）染色液图表 P .爱先蓝法图表 Q .爱先蓝法—3、爱先蓝（）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色：非硫酸化酸性黏液物质红色：复染后的胞核九、黑色素染色黑色素银浸染色法黑色：黑色素及嗜银细胞颗粒红色：胶原纤维浅黄色：背景图表 R pigment in cells . malignant melanoma, Fontana-Masson stain.亚铁染色法暗绿色：黑色素浅绿或不着色：背景黄色：肌纤维和背景十、含铁血黄素染色Perls blue（普鲁士蓝）反应显示三价铁蓝色：含铁血黄素浅红色：其他组织图表 S 10.普鲁士蓝染色肝脏普鲁士蓝染色呈蓝色的含铁血黄素颗粒大量沉着在肝实质细胞和库普弗细胞内。

常见血液病及细胞化学染色简写1、IDA 缺铁性贫血2、MegA 巨幼细胞性贫血3、HA 溶血性贫血4、AA 再生障碍性贫血5、AAA 急性再生障碍性贫血6、CAA 慢性再生障碍性贫血7、PRCA 纯红细胞再生障碍性贫血8、SA 继发性贫血9、SBA 铁粒幼细胞性贫血10、RA 难治性贫血11、RAEB 原始细胞增多性难治性贫血12、RAEB-t 转变中原始细胞增多性难治性贫血13、PA 恶性贫血14、IA 感染性贫血15、SCA 镰状红细胞贫血16、HS 遗传性球形红细胞增多症17、HE 遗传性椭圆形红细胞增多症18、HST 遗传性口形红细胞增多症19、PNH 阵发性睡眠性血红蛋白尿症20、AL 急性白血病21、ALL 急性淋巴细胞性白血病22、ANLL 急性非淋巴细胞性白血病23、AML 急性髓细胞性白血病24、AGL 急性粒细胞性白血病25、AmoL 急性单核细胞性白血病26、AmmL 急性粒-单核细胞性白血病27、AmgKL(AmKBL) 急性巨核细胞性白血病28、APL 急性早幼粒细胞性白血病29、AEL 急性红白血病30、CML 慢性髓细胞性白血病（慢粒）31、CGL慢性单核细胞性白血病32、CmmL 慢性粒-单核细胞性白血病33、CLL 慢性淋巴细胞性白血病34、CmL-BC 慢性粒细胞性白血病急性变35、PCL 浆细胞白血病36、PLL 幼淋巴细胞性白血病37、MAL 混合性白血病38、HAL 低增生性白血病39、HCL 毛细胞白血病40、ATL 成人T细胞白血病41、CNSL 中枢神经系统白血病42、G-ALL 颗粒性急性淋巴细胞白血病43、H-ALL 手镜形急性淋巴细胞白血病44、T-ALL T细胞急性淋巴细胞白血病45、B-ALL B细胞急性淋巴细胞白血病46、C-ALL 普通型急性淋巴细胞白血病47、LSL 淋巴肉瘤白血病48、MH 恶性组织细胞病49、MDS 骨髓增生异常综合症50、MPD 慢性骨髓增殖性疾病51、MF 骨髓纤维化52、MM 多发性骨髓瘤53、ML 恶性淋巴瘤54、HD 霍奇金病55、NHL 非霍奇金淋巴瘤56、Chl 绿色瘤57、HX 组织细胞增生症X58、L-SD 勒雪病59、HSCD 韩-薛=柯病60、GD 高雪病61、N-PD 尼曼-匹克病62、SHH 海蓝组织细胞增多症63、AP 过敏性紫癜64、SLE 系统性红斑狼疮65、AG 粒细胞减少症66、PV 真性红细胞增多症67、ITP 原发性血小板减少性紫癜68、LR 类白血病反应69、lm 传染性单核细胞增多症70、Hm 脾功能亢进71、DIC 弥漫性血管内凝血72、POX 过氧化物酶染色73、SB(SBB) 苏丹黑B染色74、ALP 碱性磷酸酶染色75、NAP 中性粒细胞碱性磷酸酶染色76、ACP 酸性磷酸酶染色77、NAE 非特异性酯酶染色78、ANAE 酸性非特异性酯酶染色79、CE 特异性酯酶染色80、MPO 髓性过氧化物酶染色81、PPO 血小板过氧化物酶染色82、PAS 过碘酸席夫染色（糖原染色）83、NBT 硝基蓝四氮唑染色84、TaT 末端脱氧核苷酸转移酶85、UHT 尿水解试验。