【推荐】非结核分枝杆菌的菌种鉴定方法

非结核性分枝杆菌病应该做哪些检查？*导读：本文向您详细介非结核性分枝杆菌病应该做哪些检查，常用的非结核性分枝杆菌病检查项目有哪些。

以及非结核性分枝杆菌病如何诊断鉴别，非结核性分枝杆菌病易混淆疾病等方面内容。

*非结核性分枝杆菌病常见检查：常见检查：胸部平片、真菌组织病理学、皮肤试验*一、检查1、细菌学检查对疑为NTM肺病患者可取痰液涂片作抗酸染色、痰液培养、支气管灌洗标本培养。

如抗酸染色阳性，应培养后鉴定。

如2～3次培养为同一种NTM，即可诊断。

对NTM脑膜炎、血源性播散性NTM患者可进行脑脊液、血液或骨髓培养。

污染是常见的，尤其是痰标本。

即使用自来水冲洗支气管镜或培养皿也可以产生污染而导致假阳性。

因此，明确诊断必须根据高度怀疑的临床症状和可信的微生物学检查。

2、分子生物学检查选用NTM的16S-23 SrDNA基因间隔区序列(IGS)的PCR-限制性片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)分析，作NTM菌种鉴定，比形态学、生物化学常规方法鉴定更准确、快速与简便。

3、病理学检查对皮肤软组织NTM感染、NTM淋巴结炎可进行活组织病理检查。

在确保活组织无外源性污染的前提下，病变部位组织NTM培养阳性，即可做出NTM病的诊断。

4、Mantoux皮肤试验结核分枝杆菌与NTM有共同抗原，虽然PPD皮试可产生交叉反应，但仍有区别之处。

取结核分枝杆菌的PPD-T与NTM的PPD-NTM同时进行皮肤试验，NTM患者对PPD-T硬结直径一般不超过15mm。

如PPD-NTM皮试硬结直径比PPD-T皮试大5mm或25%以上，即可认为是NTM感染。

5、影像检查 X线胸片上病变多见于右上肺，显示浸润、空洞、结节、纤维干酪和广泛纤维收缩等多种病变。

空洞发生率高达80%，呈单发或多发。

*以上是对于非结核性分枝杆菌病应该做哪些检查方面内容的相关叙述，下面再来看看非结核性分枝杆菌病应该如何鉴别诊断，非结核性分枝杆菌病易混淆疾病。

非结核分枝杆菌(nontuberculous Mycobacteria, NTM)系指除了结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌外的一大类分枝杆菌的总称。

NTM种类繁多,迄今已发现160余种,通常采用Runyon分类法(NTM在试管内的生长温度、速度、菌落形态和色素产生与光反应关系)将NTM分为光产色菌、暗产色菌、不产色菌及快速生长分枝杆菌4组[1]。

NTM广泛存在于自然环境中,主要通过水和土壤传播,极少数为致病菌,多数为条件致病菌,人通过环境接触感染NTM而患病[2-3]。

近期的研究显示,NTM的分离率由4.3%(1979年统计)上升至11.1%(2000年统计),再到21.0%(2010年统计)[4],这反映出我国的NTM病患者呈明显增多趋势。

NTM病与结核病的临床表现相似,多表现为全身中毒症状和局部损害,主要累及肺、淋巴结、皮肤及免疫受损患者,若能及时鉴定出菌种甚至亚种,可减少误诊,进而降低因误诊导致的不良后果[2,5]。

不同种类NTM感染采用的治疗方案亦不同,因此,明确NTM 是否感染及鉴定出准确的亚种是拟定最佳诊疗方案的关键。

NTM的实验室检测方法主要是传统细菌学检测和分子生物学检测,传统检测方法(培养基培养后辅以生化试验)因简单、试剂价格合理且易于推广而被沿用至今,但其耗时长、阳性率低、污染大且缺乏可重复性,不能准确、及时地为临床诊断提供参考[6]。

随着分子生物学技术的迅速发展,利用NTM同源DNA序列中的特异性可以鉴定其菌种甚至亚种,这为临床诊DNA测序鉴定非结核分枝杆菌的研究进展陈培幸韶关学院医学院,广东韶关512005[摘要]非结核分枝杆菌(NTM)感染的患者数量逐年增加,同时,NTM新的亚种不断被发现,这导致其检测鉴定难度也随之增加。

迄今发现的菌种已有160余种,而传统检测方法(培养基培养后辅以生化试验)不能准确、及时地为临床诊断提供参考。

随着分子生物学技术的迅速发展,利用NTM同源DNA序列中的特异性(如16S核糖体DNA、核糖体蛋白S1、转录间区序列1、热休克蛋白65、rpo B等)可以快速鉴定菌种。

DNA测序鉴定非结核分枝杆菌的研究进展1. 引言1.1 背景介绍非结核分枝杆菌是一种常见的细菌，是导致一些肺部感染的主要病原体之一。

由于非结核分枝杆菌的增殖速度较慢，疾病的发展进程也较缓慢，因此经常导致诊断和治疗上的困难。

传统的检测方法包括培养和荧光染色技术，然而这些方法存在耗时长、操作复杂、准确性不高等缺点。

随着DNA测序技术的快速发展，研究人员开始将其应用于非结核分枝杆菌的鉴定和诊断。

DNA测序技术可以准确快速地鉴定非结核分枝杆菌的种类和亚种，有望解决传统方法的局限性。

DNA测序技术还可以帮助研究人员了解非结核分枝杆菌的耐药性、毒力和传播途径，为疾病的控制和预防提供重要的参考。

开展DNA测序技术在非结核分枝杆菌研究中的应用具有重要的意义和价值。

1.2 研究意义研究意义：非结核分枝杆菌是导致结核病以外的各种疾病的病原体，其种类繁多且耐药性强，给公共卫生和临床诊断治疗带来了很大挑战。

传统的分枝杆菌鉴定方法繁琐且耗时，往往不能满足快速、准确的检测需求。

而DNA测序技术的出现为非结核分枝杆菌的快速鉴定提供了新的可能性，具有高度的准确性和灵敏度。

通过对非结核分枝杆菌基因组进行测序分析，可以更准确地确定其种属和毒力基因，为疾病的防控和治疗提供重要的依据。

深入研究DNA测序技术在非结核分枝杆菌鉴定中的应用及其优势与局限性，对于提高疾病的早期诊断和治疗效果具有重要的意义。

本文旨在系统总结目前相关研究进展，分析影响因素，并展望未来研究的发展方向，以期为该领域的进一步探索提供参考。

2. 正文2.1 DNA测序技术在非结核分枝杆菌鉴定中的应用DNA测序技术已经成为非结核分枝杆菌鉴定领域中一种非常有效的工具。

通过DNA测序技术，可以准确地确定非结核分枝杆菌的物种和亚型。

在传统方法中，分枝杆菌的鉴定主要依赖于生化试剂盒检测和细菌培养，这些方法存在着较高的误差率和耗时较长的缺点。

而DNA测序技术则可以准确且快速地对非结核分枝杆菌进行鉴定，提高了鉴定的准确性和效率。

非结核分枝杆菌病诊断与处理详细讲解非结核分枝杆菌病（Non-Tuberculosis Mycobacterium，简称NTM），是由非结核分枝杆菌引起的一类感染性疾病。

与结核病不同，NTM病往往在免疫功能低下的个体中发生。

NTM病病程相对较长，症状多样，通常不会自愈。

如果不及时进行诊断和治疗，将对患者的健康产生严重影响。

本文将详细讲解NTM病的诊断与处理。

一、诊断NTM病的诊断主要依靠以下几个方面：病史调查、临床表现分析、实验室检查以及影像学检查等。

1. 病史调查：患者的个人病史对于NTM病的诊断非常重要。

医生需要了解患者的基本信息、既往病史以及可能的风险因素，例如是否有免疫功能低下等。

2. 临床表现分析：NTM病的临床表现多样，常见的症状包括咳嗽、咳痰、乏力、发热等。

这些症状不容忽视，特别是对于长期咳嗽伴有咳痰的患者。

医生需要结合患者的具体表现来判断是否需要进行NTM病的进一步检查。

3. 实验室检查：实验室检查是确定NTM病诊断的重要手段之一。

目前常见的实验室检查方法有痰液培养、DNA检测、中和试验等。

其中痰液培养是最常用的检查方法，可以通过培养痰液样本中的分枝杆菌来确定是否感染NTM。

此外，DNA检测和中和试验也可以用来确认NTM病的诊断。

4. 影像学检查：影像学检查在NTM病的诊断中起到重要的辅助作用。

常见的影像学检查方法有X线胸片、胸部CT等。

NTM病在影像学上通常表现为肺部或其他器官的结节、空洞、磨玻璃样阴影等。

医生可以通过影像学检查来确定病变的范围和程度，为进一步治疗提供依据。

二、处理NTM病的处理主要包括药物治疗、免疫调节治疗以及手术治疗等。

具体处理方案应根据患者的具体情况来制定。

1. 药物治疗：药物治疗是NTM病的主要治疗方法。

常用的抗生素有环丙沙星、利福平、乙胺丁醇、吡嗪酮等。

治疗方案应根据病原菌的类型、感染部位、药敏试验结果以及患者的肝肾功能等因素来确定。

药物治疗一般需要长期进行，通常持续数月甚至数年。

.172-微F物与感染Journal ofMicrobss and I n fctons#June25,2020,15(6)：172-178http："i .cddoi：10.6969/j.issn.16736184.2020.06.006•论著•非结核分枝杆菌肺病临床分离株的菌种鉴定及临床特征分析张宇晔，侯东妮，王苏珍,周春妹，宋元林,李华茵复旦大学附属中山医院呼吸与危重症医学科，上海200032摘要:为探究非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)肺病临床分离株的菌种分布及临床特征，对2017年5月一2018年10月就诊于复旦大学附属中山医院的90例NTM肺病患者的样本进行分析*采用快速全自动分枝杆菌培养和药物敏感检测系统(BACTEC MGIT960System)或改良罗氏培养法对90例患者的采集样本进行培养，利用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)进行菌种鉴定，并回顾性分析所收集的90例患者的临床资料。

结果NTM菌种鉴定为9种，其中慢速生长分枝杆菌65例，以胞内分枝杆菌(54.4%,49/90)占多数;快速生长分枝杆菌25例，以脓肿分枝杆菌(22.2%,20/90)占多数*90例患者中确诊67例、疑似23例*确诊患者中少见菌种所占比例较低(6.0%s26.1%,P=0.016)。

确诊与疑似患者在临床表现方面未见显著差异，但确诊患者有抗NTM治疗史的比例显著高于疑似患者(85.1%qs 4.6%,P<0.001)*确诊患者中，快速生长NTM肺病患者既往抗结核治疗史的比例显著高于慢速生长组(52.9%qs24.0%,P=0.036)*本研究结果为NTM肺病的临床诊治提供了数据参考*关键词:非结核分枝杆菌;肺病;基质辅助激光解析电离飞行时间质谱;菌种鉴定;临床特征中图分类号：R378.91文献标识码：AIdentification and clinical analysis of nontuberculous mycobacteria lung diseaseZHANG Yuye,HOU Dongni,WANG Suzhen,ZHOU Chunmei,SONG Yuanlin,LIHuayinDepartment of Respiratory and Critical Care Medicine,Zhongshan Hospital,Fudan University,Shanghai200032,ChinaAbstract：To analyzethestrain distribution and clinical characteristics of nontuberculous mycobacteria(NTM)lung diseasein Shanghai a total of90samples from patients with NTM lung diseasefrom ZhongshanHospital FudanUniversityfrom May2017to October2018were cultured by rapid automated mycobacterialcultureanddrugsensitivedetectionsystem(BACTEC MGIT960System)ormodifiedRocheculture method and identified by matrxc assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry基金项目：上海市重中之重临床重点学科建设项目(2017ZZ02016)，上海市公共卫生三年行动计划重点学科建设项目(15GWZK0102)通信作者:李华茵Correspondence to：LI Huayin E-mail：************************.cn张宇晔，等：非结核分枝杆菌肺病临床分离株的菌种鉴定及临床特征分析・173・(MALDI-TOF MS".The clinical data of patients were retrospectively collected.NTM stiains wereidentified as9species .65cases were slow-growth NTM,most of which were Mycobacterium intracellulare(54.4%,49/90) ；25cases were rapid-growth NTM,most of which were Mycobacterium abscessus(22.2%,20/90).67cases were confirmed,23were suspected.The proportion of rare NTM in the confirmed patientswas lower(6.0%s26.1%,P=0.016).There was no significant dfference in clinical manifestations betweenconfirmed and suspected patients#butthe proportion of confirmed patients with anti-NTMtreatment history was sign辻icantly higher than that of suspected patients(85.1%s4.3%,P<0.001). Amongtheconfirmedpatients,theproportionofpatientswithrapid-growth NTM lung disease who hadprevious anti-tuberculosis treatment was significantly higher than that of the slow-growth group(52.9%Qs24.0%,P=0.036).The results of this study provide a data reference for the clinical diagnosis and treatmentofNTMlungdisease.Keywords:Nontuberculous mycobacteria+Lung disease；Matrix assisted laser desorption/ionization time offlightma s spectrometry+Strainidentification+Clinicalcharacteristics非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria, NTM）是指分枝杆菌属中除结核分枝杆菌复合群（mycobacterium tuberculosis complex,MTBC）及麻风分枝杆菌以外其他分枝杆菌的统称，广泛存在于环境中，可造成人类的机会性感染：1]o NTM主要侵犯患者肺部，也常累及淋巴结、骨骼、关节、皮肤、软组织等，严重时还可引起全身播散性疾病2*近年来，受气候、环境、检测手段、人口老龄化、免疫抑制宿主增多等因素影响，全球NTM感染呈快速增多趋势临床上，NTM的早期诊断较为困难5,参照《2012年中国非结核分枝杆菌病诊断与治疗专家共识》（以下简称《中国专家共识》）2, NTM肺病的诊断需结合临床症状、影像学标准及分枝杆菌培养结果*本研究纳入了确诊与疑似NTM肺病患者共90例，利用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption/ ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS）对临床分离的NTM菌株进行菌种鉴定，并回顾性分析NTM肺病的菌种分布及其临床特征,以期为NTM肺病的诊治提供参考。

非结核分枝杆菌相关实验室检查及其结
果解读
非结核分枝杆菌是对人体有害的一种细菌，它能够引起许多严重的健康问题，因此它的检测和监测是至关重要的。

为此，实验室检查是一种有效的方法，可以帮助确定非结核分枝杆菌的存在，以及它们对人体的影响程度。

非结核分枝杆菌的实验室检查主要包括细菌培养、分子诊断和肝功能测定等多种检查方法。

细菌培养是一种常用的诊断方法，其目的是在适宜的环境中培养非结核分枝杆菌，以及确定其致病能力。

分子诊断是一种快速、准确、可靠的检测方法，可以确定非结核分枝杆菌的存在，并进一步分析其基因组特征。

肝功能测定是用于评估慢性非结核分枝杆菌感染的一种方法，其主要依据是检测患者血清中的肝功能指标，如谷丙转氨酶、谷草转氨酶等。

实验室检查结果的解读取决于非结核分枝杆菌的类型和数量，以及患者的病情。

如果实验室检查结果显示非结核分枝杆菌的存在，则应根据细菌培养结果确定其种类和数量，了解其致病能力，并进一步检测患者的肝功能等指标，以综合判断患者的病情。

如果实验室检查结果不显示非结核分枝杆菌的存在，则可能是由于患者未感染非结核分枝杆菌，或者患者已经感染，但是细菌量太少，无法被检测出来。

总之，非结核分枝杆菌的实验室检查是一种有效的检测方法，可以帮助确定其存在，以及它们对人体的影响程度。

实验室检查结果的解读取决于非结核分枝杆菌的类型和数量，以及患者的病情，因此应
根据实验室检查结果合理判断患者的病情，采取有效的治疗措施。