液相色谱定性

液相色谱仪检定方法及注意事项 摘要：本文对液相色谱仪检定方法及检定中出现的问题，结合自己的工作经验进行了探讨。

关键词：液相色谱仪 检定1、概述液相色谱仪因分离效率高；应用范围广；分析速度快；样品用量少；灵敏度高等特点，在送药、食品、环境、材料等领域有了广泛的应用，成为各类研究室、实验室极为重要的仪器设备。

本文依据JJG705-2002《液相色谱仪》检定规程，以紫外—可见光检测器为例，结合实际工作对主要检定项目泵流量、柱箱温度、基线噪声、基线漂移、最小检测浓度、定性定量重复性的检定及检定中的注意事项说几点看法。

2、检定方法按规程要求设定流量、启动仪器，待压力稳定后在规定时间内收集流动相，同时用秒表计时，出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，在天平上称重，重复测量3次，则流量设定值误差SS 和流量稳定性误差SR ，公式如下： %100/)(⨯-=-S S S F F m F S%100/)(min ⨯-=--m S F F x Fma S 式中：F m -F m =（W 2-W 1）/（e t ·t ），流量实测值，ml/min ； W 2-容量瓶+流动相的质量，g ；W 1-容量瓶的质量，g ；e 1-实验温度下流动相的密度,g/cm 3；t-收集流动相的时间，min ；min /，ml F m 值同一组测量的算术平均--； Fs 流量设定值，ml/min ；Fmax-同一组测量中流量最大值，ml/min ；Fmin-同一组测量中流量最小值，ml/min ；2.2注意事项2.2.1收集流相和计时由一个人完成，减少计时误差；因甲醇容易挥发，收集时用封口胶密封容量瓶瓶口，收集完一瓶后立刻称量，收集的流动相在换算成体积后保留小数点后三位，最后结果保留小数点后一位。

2.2.2如果实际流速低于设定值，清洗或更换单向阀，过滤头；如果流速过高，检查流速补偿和压缩补偿调节是否失灵，如果流量不稳，检查泵头内是否聚集气泡，打开放空阀，让泵在高流速下运行，排除报泡；检查泵头是否松动，拧紧泵头固定螺丝，检查输液管路漏液或部分堵塞，需逐段管路进行排除。

第三部分定量基础知识1定性方法色谱峰的定性鉴别通过保留值(通常是保留时间)进行定性需要指定保留时间误差范围（时间窗、时间带）在相同的分析条件下保留时间相同并不肯定是同样的组份保留时间不同肯定不是同样的组份2定性确证仅仅通过保留时间并不能完全确证该物质通过加入标准物确认通过改变色谱条件确认光谱和质谱信息也可以作为进一步确证手段其他仪器方法确证3定量分析的基本要求需要有纯物质作标准被定量组分峰要与其它峰达到基线分离符合定性参数要求选择合适的定量方法45定量分析基本公式C i = f i A i C i = f i H i在某些条件限定下，被测组分的浓度与检测器的响应值成正比的关系。

（蒸发光散射检测器浓度与峰面积不成线性，分别取对数后成线性）C i ：组分浓度,f i : 响应因子，与组分的物理化学性质和检测器的性质有关A i ：组分响应面积H i ：组分响应高度实际修饰公式：Y=aX+b常用定量方法面积归一化外标法内标法标准加入法67面积归一化法公式：%100%×=∑AiAiCi 特点：1.无需做校正，简便，快速2.进样量不严格要求3.要求所有组分都流出并且被检测到4.要求所有组分的响应因子相当不能作为准确定量的方法，仅在特定情况下使用8外标法浓度C 1C 4C 3C 2浓度面积A 1A 2A 3A 4C 1C 2C 3C 4A 1A 2A 3A 4峰面积标准曲线9外标法特点：1.不需所有峰都流出或被检测到，只对目标组分作校正2.需要标准样品3.进样量必须准确4.仪器必须有良好的稳定性是实验室最常用的定量方法，定量结果准确f i ——i 组分工作曲线的斜率ii i A f C =1010单点校正法当被测试样中各组分浓度变化范围不大时，可不必绘制多点的标准曲线，而用单点校正法（比较法）。

配制一个和被测组分含量接近的标准溶液，定量进样，根据被测组分和外标组分峰面积比或峰高比计算被测组分的含量。

色谱定性分析原理
色谱定性分析是一种常用的分析方法，它可以用来确定样品中化合物的种类和数量。

其原理基于溶液中不同组分在固定相上的分配和吸附特性不同。

在色谱定性分析中，通常会使用色谱柱和移动相。

色谱柱是由固定相填充的管状结构，而移动相是溶解样品的液体。

当样品溶液被注射到色谱柱上时，各种化合物会因其在固定相上的亲和性不同而被分离。

较亲和于固定相的化合物会在色谱柱上停留时间更长，而较不亲和于固定相的化合物则会被迅速洗脱。

接下来，为了分析移动相中的化合物，会将柱上的化合物转移到检测器上进行检测。

常见的检测器包括紫外-可见吸收光谱仪和质谱仪等。

这些检测器可以通过检测样品中化合物的吸收光谱或质量谱图，来确定其种类。

此外，色谱定性分析还可以利用不同化合物的保留指数进行定性分析。

保留指数是通过对已知化合物进行色谱分析，测量其停留时间与某个参考标准物质的停留时间之间的比值得到的。

这样，对比样品中未知化合物的保留指数和已知化合物的保留指数，就可以确定未知化合物的种类。

总而言之，色谱定性分析利用化合物在固定相上的不同亲和性以及其中的分离和检测技术，能够确定样品中化合物的种类，并为定量分析提供依据。

液相色谱仪国标液相色谱仪是一种常用的分析仪器，用于物质的定性和定量分析。

为了保证液相色谱仪的质量和性能，我国制定了一系列国家标准，涵盖了液相色谱仪的术语和定义、技术要求、测试方法、检验规则等方面。

一、以下是一些关于液相色谱仪国家标准的概述：1. 术语和定义：国家标准对液相色谱仪的相关术语和定义进行了规定，如高效液相色谱仪、液相色谱仪、色谱柱、检测器等，为液相色谱仪的生产、使用和检验提供了统一的术语基础。

2. 技术要求：国家标准对液相色谱仪的主要技术性能指标进行了规定，包括仪器的准确度、重复性、稳定性、分辨率、峰宽等。

这些技术要求为液相色谱仪的设计、生产和检验提供了依据。

3. 测试方法：国家标准规定了液相色谱仪性能的测试方法，包括仪器的校准、重复性、稳定性、分辨率、峰宽等性能指标的测试。

这些测试方法保证了液相色谱仪性能的准确性和可靠性。

4. 检验规则：国家标准对液相色谱仪的检验规则进行了规定，包括检验的项目、方法、仪器设备、试验条件等。

这些检验规则保证了液相色谱仪的质量符合国家标准的要求。

5. 包装、标志、运输和贮存：国家标准对液相色谱仪的包装、标志、运输和贮存进行了规定，保证了液相色谱仪在运输和贮存过程中的安全性和稳定性。

二、具体到国家标准的内容，可以参考以下几个方面：1. GB/T 15341-2008《高效液相色谱仪》：这是高效液相色谱仪的国家标准，规定了高效液相色谱仪的术语和定义、技术要求、测试方法、检验规则以及包装、标志、运输和贮存要求。

2. GB/T 13610-2008《液相色谱仪》：这是液相色谱仪的国家标准，主要规定了液相色谱仪的分类、技术要求、测试方法、检验规则以及包装、标志、运输和贮存要求。

3. GB/T 12777-2019《液相色谱仪性能测试方法》：这个标准主要规定了液相色谱仪性能的测试方法，包括仪器的校准、重复性、稳定性、分辨率、峰宽等性能指标的测试方法。

4. GB/T 18627.1-2002《实验室仪器设备自动化液相色谱仪第1部分：通用要求》：这是关于自动化液相色谱仪的国家标准，规定了自动化液相色谱仪的术语和定义、技术要求、测试方法、检验规则等。

高效液相色谱法测定萘乙酸的含量一、实验目的1、学习高效液相色谱仪的操作。

2、了解高效液相色谱法测定萘乙酸的基本原理。

3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。

二、实验原理将已配制的浓度不同的萘乙酸标准溶液进入色谱系统。

如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间t R和峰高A后，可直接用t R定性，用峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定未知浓度萘乙酸的含量。

三、仪器和试剂1、Agilent 1100高效液相色谱仪。

2、色谱柱：Zorbax C8，5µm，250×4.6mm，20μL定样环。

3、流动相：H2O和CH3OH4、萘乙酸标准溶液：精密称取萘乙酸标准品制成浓度(mg/L)分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、2、5、8、10、15、20 mg/L的对照品溶液，放入冰箱备用。

5、未知物萘乙酸6、平头微量注射器。

四、实验步骤1、开机(1) 检查流动相、废液瓶和色谱柱；(2) 打开打印机和计算机的电源；(3) 自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符）；(4) 打开工作站。

2、编辑方法(1) 选择“Method”菜单，然后“EDIT METHOD”依屏幕提示进入以下设定：(a）泵对话框：设定泵的流速：1.0mL/min；H2O和CH3OH线性梯度洗脱：H2O 0 min：10%；1 min：20%；3 min：30%；4 min：30%；(b）检测器对话框：设定波长337 nm。

(2) 单击“Method”菜单，选中“Save Method As…”，输入方法名，单击OK。

(3) 从“Run Control”菜单中选择“Sample Info…”选项，输入操作者名称，在“Data file”中选择“Manual”或“Prefix”。

(4) 单击Ok，等仪器Ready，基线平稳。

一、引言液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种高效、灵敏、选择性强的分离分析方法，广泛应用于医药、化工、环保、食品等领域。

本次实训旨在通过实验操作，使学生掌握液相色谱的基本原理、仪器构造、操作技术以及数据处理方法，提高学生的实验技能和理论水平。

二、实验目的1. 掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法。

2. 了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术。

3. 熟悉液相色谱数据处理方法，提高数据分析能力。

三、实验原理高效液相色谱法（HPLC）是一种基于液-液分配原理的色谱分离技术。

样品溶液在流动相的作用下，经过固定相时，各组分在固定相与流动相之间发生不同的分配、吸附、交换等作用，从而实现分离。

通过检测器对分离后的组分进行检测，即可得到各组分的含量。

HPLC系统主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器和记录仪等部分组成。

储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液通过进样器注入色谱柱，在色谱柱中，样品中的各组分与固定相发生相互作用，实现分离。

分离后的组分依次进入检测器，检测器将信号传输至记录仪，得到色谱图。

四、实验仪器与试剂1. 仪器：高效液相色谱仪、色谱柱、流动相瓶、样品瓶、进样器、检测器、记录仪等。

2. 试剂：流动相、固定相、样品溶液、标准品等。

五、实验步骤1. 系统准备：检查仪器各部件是否正常，设置流动相比例，调整流速等。

2. 样品前处理：根据实验要求，对样品进行适当的前处理，如提取、纯化、浓缩等。

3. 样品进样：将处理后的样品溶液通过进样器注入色谱柱。

4. 色谱分析：启动仪器，使流动相携带样品通过色谱柱，分离各组分。

5. 检测与记录：检测器将分离后的组分信号传输至记录仪，得到色谱图。

6. 数据处理：对色谱图进行峰面积积分、峰高计算等处理，得到各组分的含量。

六、实验结果与分析1. 定性分析：通过比较实验样品与标准品的色谱图，判断样品中各组分的种类。

第二章色谱定性分析定性分析就是要确定样品中的一些未知组分是什么物质，在色谱分析中就是要确定色谱图中一些未知的色谱峰是什么物质。

色谱分析中的定性主要是依据特征性不是很强的保留值，这需要和已知的标准物质的保留值进行比对。

由于即使保留值完全相同的两个峰，也可能是不同的物质，因此在最终准确确定色谱图中某个峰是什么物质时还需要一些辅助技术。

下面将介绍色谱分析中常用的一些定性方法。

第一节利用保留值定性在色谱分析中利用保留值定性是最基本的定性方法，其基本依据是：两个相同的物质在相同的色谱条件下应该有相同的保留值。

但是，相反的结论却不成立，即在相同的色谱条件下，具有相同的保留值的两个物质不一定是同一个物质。

这就使得使用保留值定性时必须十分慎重。

由于影响保留值的因素———色谱中的固定相和流动相在气相色谱和液相色谱中不完全相同，因此用保留值定性的方法在气相色谱和液相色谱中也不尽相同，下面就分别介绍气相色谱和液相色谱中用保留值定性的方法。

一、气相色谱中用保留值定性的方法!"利用已知物直接对照进行定性分析利用已知物直接对照法定性是一种最简单的定性方法，在具有已知标准物质的情况下常使用这一方法。

将未知物和已知标准物在同一根色谱柱上，用相同的色谱操作条件进行分析，作出色谱图后进行对照比较。

如图#$#$!中将未知试样（%）与已知标准物质（&）在同样色谱条件下得到的色谱图直接进行比较，可以推测未知样品中峰#可能是甲醇，峰’可能是乙醇，峰(可能是正丙醇，峰)可能是正丁醇，峰*可能是正戊醇。

当然，以上的推测只是初步的，如要得到准确的结论，有时还需要进一步的确认。

在利用已知纯物质直接对照进行定性时是利用保留时间（!）直接比较，这时要求载气的流速，载气的温度和柱温度一定要恒定。

载气流速+）改变，从而对定性结果产生影的微小波动，载气温度和柱温度的微小变化，都会使保留值（!+）定性，虽可避免载气流速变化的影响，但实际使用是很困难的，因为保响。

专属性方法包括液相色谱法液相色谱法（Liquid Chromatography, LC）是一种分离和分析化合物的方法。

它是通过液态流动相将混合物中的化合物分离成单个组分的方法。

液相色谱法可以用于定性和定量分析有机和无机物质。

它在化学、生物化学、药学、环境科学等领域中广泛应用。

液相色谱法的原理是将待分析的混合物通过一个固定相填充的管柱，然后用一种流动相将混合物分离成单个组分。

固定相通常是一种多孔的固体，如硅胶或高性能液相色谱柱。

流动相是一种溶解有机或无机成分的溶剂。

当混合物通过柱时，它们会与固定相发生作用，不同的成分会以不同的速率通过固定相，从而实现分离。

液相色谱法有很多不同的变体，常见的包括高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）、气相色谱法（Gas Chromatography, GC）和液相色谱质谱联用法（Liquid Chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS）等。

其中，HPLC是最常用的液相色谱技术之一，它可以通过增加柱子长度、改变固定相和流动相等参数来提高分离效果。

液相色谱法的应用非常广泛。

在化学领域，它可以用来分离和分析有机物和高分子化合物，如药物、天然产物、蛋白质和多肽。

在环境科学中，它可以用来检测水中的有机和无机污染物。

在生物医学研究中，液相色谱法可以用于药代动力学研究、体内药物分布分析和药物代谢产物的筛选等。

液相色谱法的优点包括分离效果好、分析速度快、样品准备简单、分析范围广等。

然而，它也存在一些限制，如柱塞泄漏、高背压、固定相失效等问题。

为了解决这些问题，人们不断改进液相色谱法的仪器和方法，并提出了各种技术和策略。

总之，液相色谱法是一种非常重要的分析方法，它在各个领域中发挥着重要的作用。

随着科学技术的不断发展，我们可以预期液相色谱法将在未来得到更广泛的应用和发展。

高效液相色谱定性分析方法随着现代工业技术的不断革新和进步，高效液相色谱作为一种非常高效的研究色谱的方法被我国工业基地广泛的应用。

高效液相色谱仪更是作为分离小分子气体等有机化合物的必备仪器，同时高效液相色谱仪凭借它的高效性、高灵敏性、高分辨率性能够适应许多种的分离条件，采用固定相和流动相对有机化合物进行充分的处理。

因此对高效液相色谱定性分析对现代的工业进步和发展有着显著的作用，同时也加强了我国对医学、食品以及化工领域的渗透。

标签：高效液相色谱；定性分析；方法研究在工业上进行高效液相色谱分析的过程中，控制人员一般会对未知组进行定性的分析，对已知组进行定量的分析。

本文就是对高效液相色谱定性分析方法进行的简单的论述和分析，争取能够通过对高效液相色谱定性分析的过程方法能够对高效液相色谱使用的领域范围内的工作有一定的帮助。

高效液相色谱定性分析方法对高沸点不易挥发、受热不易被分解以及分子量大的有机化合物的分析有着非常显著的效果，对工业农业的有机化合物有了基础性的分析。

一、高效液相色谱定性分析的主要方法和技术1.利用保留值定性的方法高效液相色谱中的利用保留值定性分析的方法是所有定性分析方法中最基本的方法，他就是合理的应用了色谱的一些基本知识对有机化合物进行的效果反应来得出有机化合物应该具有的性质。

在高效液相色谱中，两个相同的物质在同一个色谱中应该具有相同的保留值，因此在高效液相色谱中的定性分析中就能够充分的应用这个原理，对未知物质采用相同的色谱进行简单的判定该物质的成分和性质，同时相同的物质成分下色谱上的形成的未知峰保留值也是一样的，这样就可以初步的对未知的有机化合物进行判定。

在此基础上适当的改变高效液相色谱的流动相来判断未知有机化合物的基本性质，在流动相不断变换的过程中，一旦发现两个保留值峰值相同的地方，我们就可以简单的判断这是这种未知有机化合物具有相同的性质。

虽然高效液相色谱的保留值定性分析方法可以判别相同的物理性质，但是不能够保证两种具有相同保留值峰值的有机化合物是同一种物质，因此在实际应用中高效液相色谱利用保留值定性分析的方法虽然简单非常具有操作性，但是适用范围也比较窄，不能够适应更多的未知有机化合物的性质判定。

液相色谱峰的定位通常是通过保留时间来确定的。

在相同的色谱条件下，待测成分的保留时间与对照品的保留时间应无显著性差异。

如果改变流动相组成或更换色谱柱的种类，待测成分的保留时间仍与对照品的保留时间一致，可进一步证实待测成分与对照品为同一化合物。

当待测成分无对照品时，可以样品中的另一成分或在样品中加入另一已知成分作为参比物，采用相对保留时间作为定性或定位的方法。

此外，光谱相似度也可以用于辅助定性分析。

全波长扫描紫外-可见光区光谱图提供了一些有价值的定性信息。

待测成分的光谱与对照品的光谱的相似度可用于辅助定性分析。

二极管阵列检测器开启一定波长范围的扫描功能时，可以获得更多的信息，包括色谱信号、时间、波长的三维色谱光谱图，既可用于辅助定性分析，还可用于峰纯度分析。