免疫组化与原位杂交双标记技术在鼻咽癌诊断中的应用

原位杂交技术及其在肿瘤学中的应用随着生物技术的不断进步和发展，人们对各种疾病的研究也越来越深入。

在肿瘤学领域中，原位杂交技术是一项重要的分子生物学技术，广泛应用于肿瘤的诊断、预后评估和治疗方案的制定等方面。

本文介绍原位杂交技术的原理、方法和在肿瘤学中的应用。

一、原位杂交技术的原理原位杂交技术是一种利用特定核酸探针标记的技术，能够在组织切片中定位和检测含有相应序列的核酸。

其中探针可以是DNA 或RNA，它们可以与被检测样本中互补的核酸序列结合，形成双链的杂交复合物。

在特定条件下，可以用放射性标记、荧光标记等物质标记探针，在显微镜下直接观察到杂交物的存在。

探针的标记能够直接观察，从而可以检测到被检测样本中特定核酸序列的分布情况和含量。

二、原位杂交技术的方法原位杂交技术主要有两类方法：放射性原位杂交（radioactive in situ hybridization，RISH）和非放射性原位杂交（non-radioactive in situ hybridization，NISH）。

RISH的探针使用放射性标记，可以通过显微放射自显影探测到探针的存在。

NISH使用非放射性标记，如荧光标记、酶标记等，可以通过显微镜下荧光显色、色素显色或发光检测等方法观察探针的存在。

原位杂交技术的步骤主要包括以下几个方面：（1）样品制备。

将组织样品固定在载玻片上，割成薄片，不同的组织要采用不同的制片方法。

（2）探针标记。

以目的核酸序列为模板，使用DNA或RNA 合成技术制备标记探针。

（3）杂交反应。

将标记探针加入组织切片上，结合后进行洗脱，使未结合的探针清除掉。

（4）染色。

对杂交反应结果进行染色处理，观察探针的标记情况。

三、原位杂交技术在肿瘤学中的应用原位杂交技术在肿瘤学中已经广泛应用。

例如，原位杂交技术可用于识别某些致癌基因的表达情况，以及在肿瘤细胞中表达特异性蛋白质的情况。

近年来，原位杂交技术也用于检测肿瘤标志物，例如乳腺癌的HER2/neu标志物、前列腺癌的PSA标志物、鳞状细胞癌的p16INK4标志物等。

免疫组化和原位杂交检测结果概述说明1. 引言1.1 概述本文旨在对免疫组化和原位杂交检测结果进行综合概述和解释。

免疫组化和原位杂交是两种常用的生物学实验技术，用于检测细胞或组织中特定蛋白质或核酸的表达情况。

通过对这两种技术的原理、方法、应用领域以及实验步骤和注意事项的介绍，可以使读者更好地理解并合理应用这些检测结果。

1.2 文章结构本文分为五个主要部分：引言、免疫组化检测结果、原位杂交检测结果、免疫组化与原位杂交比较分析以及结论。

在引言部分，我们将简要介绍本文的目的和文章结构，提供一个整体的框架来帮助读者理解后续内容。

1.3 目的本文旨在全面说明和讨论免疫组化和原位杂交检测结果，并对它们之间的异同进行比较分析。

通过了解免疫组化和原位杂交技术的基本原理、应用领域以及实验步骤等方面信息，读者可以更好地理解和解释这些检测结果，从而能够更科学地进行相关研究工作。

此外，我们将通过案例分析和发展趋势的讨论，对免疫组化和原位杂交技术在未来的应用进行展望，并提供一些建议。

2. 免疫组化检测结果：2.1 原理和方法：免疫组化是一种常用的实验技术，通过特异性抗体对目标分子进行检测。

该技术基于免疫学原理，利用抗体与相应的抗原结合来定位和可视化感兴趣的蛋白质或分子。

在免疫组化实验中，首先需要选择合适的抗体，该抗体可以是单克隆或多克隆抗体，并且需要与所需检测的目标分子有高度的特异性和亲和力。

然后，在样本处理过程中，对组织或细胞进行固定、包埋等步骤以保持其形态结构，并消除内源性酶活性。

接下来，将样本切片后进行染色处理，通常采用荧光标记物或酶标记物进行可视化显示。

最后，使用显微镜观察并记录结果。

2.2 应用领域：免疫组化技术广泛应用于生物医学研究领域。

它在肿瘤学、神经科学、器官发育等领域起着重要作用。

例如，在肿瘤学中，通过免疫组化可以检测肿瘤组织中的细胞分子标记，从而对肿瘤类型、分级和预后进行鉴定。

在神经科学领域，免疫组化可以帮助研究人员探索神经元的分布、表达和功能。

全自动免疫组化仪在EBER原位杂交中的应用体会陈永钦;郑宇辉;杨映红【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2015(031)012【总页数】2页(P1428-1429)【关键词】全自动免疫组化仪;原位杂交;EBER【作者】陈永钦;郑宇辉;杨映红【作者单位】福建医科大学附属协和医院病理科,福州350001;福建医科大学附属协和医院病理科,福州350001;福建医科大学附属协和医院病理科,福州350001【正文语种】中文【中图分类】R-331临床上普遍采用免疫组化法来检测EB病毒，但免疫组化检测操作步骤繁琐，易受环境及人为因素的影响且结果不稳定等。

随着科学技术的发展，各大中型医院病理科的仪器设备自动化程度越来越高，并且伴随医院规模的扩大，病理工作量不断增长，传统的手工操作已经逐步被全自动化仪器取代。

目前全自动免疫组化仪主要应用于常规免疫组化工作，而原位杂交方面的应用尚未普及。

福建医科大学附属协和医院病理科自2013年引进BenchMark全自动免疫组化仪，并进行EBER原位杂交检测，工作中取得了良好的效果，现将应用体会介绍如下。

1.1 仪器与设备 BenchMark ULTRA全自动免疫组化仪(美国Ventana公司)。

1.2 试剂 Ventana公司的EZ(脱蜡清洗缓冲液)、LCS(封盖清洗缓冲液)、ReactionBuffer(清洗缓冲液)、CC2(细胞前处理清洗缓冲液)、ISH-Protease3(清洗用蛋白酶)、INFORM EBER Probe(探针)、iVIEW Blue Detection(蓝染试剂)、ISH Red Counterstain(复染试剂)。

1.3 方法首先编辑程序并保存:Deparaffinization(脱蜡)→CellConditioning(Mild)(细胞前处理)→Ventana Protease(ISH-Protease3，Incubation Time:20 min)(蛋白酶)→Inform EBER(EBER探针)→Counterstain(Red StainⅡ，Incubation Time:4 min)(红染)。

免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌罗俭权;曾秀英;吕镜雄;陈春梅;程思锐;冯天斌【摘要】目的探析鼻咽癌诊断中检测EB病毒更为快速及更灵敏的方法.方法选择2014年4月至2016年8月广东省四会市人民医院收治的36例鼻咽癌患者,分别采用EB病毒一抗、地高辛标记的寡核苷酸EBER探针进行免疫组化和原位杂交双重标记染色,检测鼻咽癌细胞中EB病毒的表达情况.结果免疫组化后的阳性细胞的胞膜表现为红色,原位杂交后的阳性细胞胞核表现为蓝黑色,而双阳性细胞的核与膜呈蓝红色,不仅对比鲜明而且背景非常清晰,双染成功后细胞及组织结构表现完整.结论 EBER原位杂交双标记技术检测EB病毒主要是检测病毒基因,具有极高的特异性和灵敏度,比免疫组化方法更灵敏、快速,可以帮助临床进行鼻咽癌的分期诊断及判断治疗效果.【期刊名称】《实用检验医师杂志》【年(卷),期】2017(009)002【总页数】3页(P77-79)【关键词】鼻咽癌;病理诊断;双标记原位杂交;免疫组化【作者】罗俭权;曾秀英;吕镜雄;陈春梅;程思锐;冯天斌【作者单位】526200 广东肇庆,广东省四会市人民医院;526200 广东肇庆,广东省四会市人民医院;526200 广东肇庆,广东省四会市人民医院;526200 广东肇庆,广东省四会市人民医院;526200 广东肇庆,广东省四会市人民医院;526200 广东肇庆,广东省四会市人民医院【正文语种】中文鼻咽癌是一种在我国南方地区（如广州等）发病率非常高的恶性肿瘤，占鼻咽部恶性肿瘤的97%［1］。

鼻咽癌的治疗除手术外，中医药治疗对于提高患者的生存率有很好的作用［2］。

鼻咽癌又分为鳞状细胞癌和非角化鳞癌；非角化鳞癌又分为混合型癌、圆形细胞癌（未分化型癌）及梭形细胞癌（分化型非角化鳞癌）［3-4］。

我国南方地区发生的鼻咽癌95%属于非角化鳞癌。

鼻咽癌确诊前需活检病理诊断，应用较多的指标是细胞角蛋白（CK）免疫组化染色。

双色荧光原位杂交检测放疗后鼻咽癌患者外周血淋巴细胞染色体畸变徐永忠;郑斯英;朱巍;高锦声;赵经涌【摘要】目的:评价辐射诱发的染色体畸变作为癌患风险评估指标的可行性.方法:应用双色荧光原位杂交(FISH)技术检测10例放疗后及6例放疗前鼻咽癌患者外周血淋巴细胞染色体畸变并与常规法比较.结果:放疗后1～10年,鼻咽癌患者淋巴细胞染色体易位率、双着丝粒体率仍显著高于放疗前对照组的相应数值(P<0.001).患者的易位率约为双着丝粒体率的3.5倍,照后3年以上患者染色体易位率与照后小于3年患者的易位率之间差别无显著性(P>0.1),而照后3年以上患者染色体双着丝粒体率显著低于照后小于3年患者的双着丝粒体率(P<0.001).结论:稳定性染色体畸变(易位)在照后相当长时间(10年)仍可保持较高百分率,有望成为癌患风险评估的生物标志.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2001(013)001【总页数】4页(P13-16)【关键词】荧光原位杂交;放射治疗;染色体畸变【作者】徐永忠;郑斯英;朱巍;高锦声;赵经涌【作者单位】苏州医学院放射医学系;苏州医学院放射医学系;苏州医学院放射医学系;苏州医学院生物学教研室;苏州医学院放射医学系【正文语种】中文【中图分类】Q345.1放疗是肿瘤治疗的主要方法之一,特别是鼻咽癌病人多以放射治疗为主。

随着癌症治疗方法的提高,病人存活时间的延长,放疗后二次原发癌问题开始变得日益突出,成为临床放射治疗学和医疗照射防护的重要课题。

近年来,国内外不断有报道放疗后诱发二次原发癌的事例1。

由于放疗可以诱发染色体畸变,因此,人们认为诱发的染色体畸变可能与二次原发癌的发生有关,染色体畸变,特别是稳定性染色体畸变分析,可成为癌患风险评估的生物标志2。

本文用双色荧光原位杂交检测鼻咽癌病人放疗后外周血淋巴细胞染色体畸变并与常规染色体分析作一比较。

1.1 检测对象 10例接受放疗的鼻咽癌患者均来自苏州市癌症康复中心,患者基本情况见表1:男性5例,女性5例,年龄平均49岁(范围37～60岁),照射总剂量平均为72.0 Gy(范围69.7～78.0 Gy)。

免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察1. 引言1.1 背景鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，其病因尚不完全清楚。

已有研究表明埃波斯坦-巴尔病毒（EB病毒）可能与鼻咽癌的发展密切相关。

EB病毒是一种常见的人类病毒，感染后可引起多种疾病，包括淋巴瘤和鼻咽癌等。

检测EB病毒在鼻咽癌中的存在对于该疾病的诊断和治疗具有重要意义。

当前，免疫组化技术和原位杂交技术被广泛应用于肿瘤诊断和研究中。

免疫组化技术可以通过检测特定抗原的表达水平来判断肿瘤的类型和分级，而原位杂交技术则可以检测病毒的核酸序列，从而确定病毒的存在。

双标记技术结合了免疫组化和原位杂交技术的优势，可以同时检测抗原和核酸，提高了诊断的准确性和可靠性。

本研究旨在通过免疫组化和原位杂交双标记技术检测EB病毒在鼻咽癌中的存在，探讨其在鼻咽癌诊断中的应用以及对该疾病的诊断和治疗的意义。

通过对免疫组化与原位杂交双标记技术的应用效果进行观察和分析，为鼻咽癌的早期诊断和治疗提供更准确的依据。

1.2 研究目的本研究的目的是探讨免疫组化与原位杂交双标记技术在诊断鼻咽癌中的应用效果。

鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，而EB病毒被认为是导致鼻咽癌发生的一个重要因素。

通过检测EB病毒在鼻咽组织中的存在情况，可以帮助早期诊断和治疗鼻咽癌。

免疫组化技术是一种通过特定抗体与靶分子结合的技术，可以帮助我们检测出EB病毒在组织中的表达情况。

而原位杂交技术则可以帮助我们检测出EB病毒的基因组在组织中的存在情况。

将两种技术结合起来进行双标记，不仅可以提高对EB病毒的检测灵敏度和准确性，同时也可以更加直观地观察病毒在组织中的分布情况。

通过本研究，我们旨在验证免疫组化与原位杂交双标记技术在鼻咽癌诊断中的准确性和可靠性，为临床提供更好的诊断方法，帮助医生更早地发现和治疗鼻咽癌，提高患者的生存率和生活质量。

1.3 意义鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，其发病率逐年增加，给患者的生活质量和健康造成了严重威胁。

原位杂交免疫组化学
原位杂交和免疫组化是两种在组织学和病理学中常用的分子生物学技术，它们都能够在细胞或组织的自然环境中定位特定生物大分子。

原位杂交：
-该技术主要用于检测组织切片中DNA或RNA分子的存在与分布。

通过设计并标记一段与目标核酸序列互补的寡核苷酸探针，在组织切片上进行杂交反应。

当探针与靶标分子结合后，可以通过显色或者荧光信号来观察目标核酸的位置。

免疫组化：
-免疫组化则主要用来定位蛋白质等抗原物质。

它利用抗体与抗原特异性结合的原理，将能识别特定蛋白质的抗体标记上可见的示踪物（如酶、荧光素、金属离子或放射性同位素），然后让这些标记抗体与组织切片上的抗原发生特异性结合，通过显色反应显示出目标蛋白在组织中的位置和分布。

联合应用：
-在病毒学和其他领域研究中，有时会将原位杂交与免疫组化结合起来，即同时在同一组织切片上进行ISH和IHC实验。

这样可以
同时检测病毒基因及其编码的蛋白质产物在细胞内的表达及分布情况，从而获得更为全面深入的生物学信息。

这种技术称为“双标记”或“多标记”技术，有助于揭示病毒感染过程、宿主响应机制以及病原体与细胞相互作用的复杂关系。

细胞生物学中的免疫组化和原位杂交技术细胞生物学是研究细胞结构、功能和特性的学科，其中免疫组化和原位杂交技术是重要的实验手段和研究工具。

本文将介绍免疫组化和原位杂交技术的原理、应用以及未来的发展方向。

一、免疫组化技术免疫组化技术是通过特异性抗体与目标分子结合来检测细胞内或组织内的特定蛋白质的方法。

免疫组化技术的原理是利用抗体与抗原之间的亲和性，通过特异性结合实现对蛋白质的检测和定位。

1. 原理免疫组化技术主要包括以下步骤：取材、固定、切片、抗原恢复、阻断、抗体标记、显色和观察。

首先，将需要检测的组织固定并制作切片。

然后，对切片进行抗原恢复处理，以破坏固定过程中引起的抗原和抗体的交联反应。

接下来，进行阻断步骤，防止非特异性抗体的结合。

随后，使用特异性抗体标记目标蛋白质。

最后，通过显色反应观察标记的抗体的位置和数量。

2. 应用免疫组化技术在细胞生物学领域有多种应用。

它可以用于检测特定蛋白质的存在和定位，从而研究细胞内各种生物分子的分布。

此外，免疫组化技术还可以用于诊断疾病，例如通过检测肿瘤标志物的表达来判断肿瘤的类型和分级。

此外，免疫组化技术还能够评估细胞的增殖、分化和凋亡等生理过程。

二、原位杂交技术原位杂交技术是通过标记的探针与靶RNA或DNA结合，从而在组织或细胞水平上检测靶分子的方法。

原位杂交技术可以提供靶RNA和DNA的空间分布和细胞定位信息。

1. 原理原位杂交技术主要包括以下步骤：制备探针、固定组织、加氢解固、杂交反应、洗涤和检测。

首先，制备标记的探针，通常使用放射性同位素或荧光标记。

然后，将组织固定，以防止RNA或DNA降解。

接着，进行加氢解固步骤，以使靶分子的结构恢复。

随后，进行杂交反应，将探针与靶RNA或DNA结合。

最后，通过洗涤和检测步骤，确定探针的结合位置和数量。

2. 应用原位杂交技术在细胞生物学和遗传学领域有广泛的应用。

它可以用于研究基因表达和功能的调控机制，例如通过检测特定RNA的存在来研究基因的转录水平。

免疫组化临床应用实例免疫组化技术作为一种重要的病理检测手段，已在临床中得到广泛应用。

本文将从几个实际的临床案例出发，介绍免疫组化技术在癌症诊断、预后判断以及治疗指导中的应用。

病例一：乳腺癌患者的ER、PR与HER2表达检测一位45岁女性患者因发现乳腺结节就诊于医院。

通过免疫组化技术检测患者乳腺肿瘤组织中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）以及人类表皮生长因子受体2（HER2）的表达情况。

检测结果显示该患者的乳腺癌组织中ER、PR双阳性，HER2阴性，这意味着患者对内分泌治疗敏感，不需要接受靶向HER2治疗，从而为患者的治疗方案提供了重要依据。

病例二：肺腺癌患者的ALK融合基因检测一位60岁男性患者因胸闷、咳嗽症状就诊于医院，CT检查提示可能患有肺癌。

通过免疫组化技术检测患者肺腺癌组织中的ALK融合基因。

结果显示该患者ALK基因呈阳性表达，表明患者可获益于ALK 抑制剂的靶向治疗。

基于这一结果，医生为该患者制定了个性化的治疗方案，明显提高了患者的生存率。

病例三：黑色素瘤患者的PD-L1表达检测一位50岁女性患者因发现皮肤上黑色素瘤病变而就诊于医院。

通过免疫组化技术检测患者黑色素瘤组织中PD-L1的表达情况。

结果显示该患者黑色素瘤组织PD-L1高表达，提示患者可能对免疫检查点抑制剂治疗敏感。

医生根据检测结果为患者选择了PD-1抑制剂治疗方案，取得了明显的疗效。

综上所述，免疫组化技术在临床肿瘤诊断、预后评估以及治疗指导中具有重要作用，通过检测特定蛋白的表达情况，为医生制定个性化的治疗方案提供了有力支持。

随着免疫组化技术的不断发展和完善，相信它将在未来的临床实践中发挥越来越重要的作用，造福更多患者。

p53、EGFR、p16在鼻咽癌中表达的意义欧阳清;唐加步;赖文秀;姚运红;卢义生【摘要】目的:观察鼻咽癌组织和鼻咽粘膜慢性炎组织中p53、EGFR、p16蛋白的表达情况,探讨它们在鼻咽癌发生发展中的作用.方法:采用免疫组化SP法检测51例鼻咽癌、27例鼻咽粘膜慢性炎组织中p53、EGFR、p16蛋白的表达.结果:鼻咽癌组织中p53、EGFR的阳性率高于鼻咽粘膜慢性炎组织(P＜0.05),p16的阳性率低于鼻咽粘膜慢性炎组织(P＜0.05),鼻咽癌组织中p53的表达强弱与年龄、性别、分型、临床分期、淋巴结转移无关(P＞0.05).结论:p53、EGFR蛋白高表达及p16蛋白低表达可能参与鼻咽癌的发生,但p53表达强弱和患者性别、年龄、病理分型、临床分期、淋巴结转移无关.【期刊名称】《赣南医学院学报》【年(卷),期】2017(037)006【总页数】4页(P892-895)【关键词】鼻咽癌;p53;EGFR;p16【作者】欧阳清;唐加步;赖文秀;姚运红;卢义生【作者单位】东莞市东城医院病理科;广东医科大学东莞校区病理学系;广东医科大学东莞校区病理学系;广东医科大学东莞校区病理学系;东莞市人民医院病理科,广东东莞523000【正文语种】中文【中图分类】R739.63鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是我国南方常见的恶性肿瘤之一，然而，由于其临床表现和生物学行为导致不易被早期发现，就诊时往往已达中晚期，这类患者治疗的效果不理想，5年生存率仅25%～50%，因此，探讨鼻咽癌发生发展的机制，有重大的意义。

p16基因是重要的抑癌基因，参与细胞周期调控，与多种肿瘤的发生、发展有关，在头颈部鳞状细胞癌中失活[1]。

EGFR是一种广泛表达的跨膜糖蛋白，EGFR可激活、启动一系列级联式的信号传导通路，促进基因转录、细胞分裂和细胞周期进程及新生血管生成[2-3]。

p53基因将DNA损害的修复、细胞周期停滞和细胞凋亡联接在一起，当细胞DNA损伤时，p53活化，引起细胞周期G1期停滞和诱导DNA修复基因表达，进行修复[4]。