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HPLC同时测定食品中黄曲霉毒素B1_B2_G1_G2_冯靓

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[作者简介] 冯靓(1980-),女,学士,技师,主要从事理化检验研究。

【监测报告】HPLC同时测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2冯 靓,蔡增轩,谭 莹,王天娇,任一平(浙江省疾病预防控制中心,杭州 310009)[摘要] 目的:分析常见种类食物中黄曲霉毒素的含量,为建立食品中黄曲霉毒素的限量指标提供数据,并为大众的健康饮食提供参考。

方法:以黄曲霉毒素B1的平均含量为参考选择黄曲霉毒素含量较多的常见食物种类,使用高效液相色谱仪及荧光检测器分析食物中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量。

结果:花生酱中含有的黄曲霉毒素最多,平均为2 41 g/kg;大米中黄曲霉毒素的含量次之,平均为0 15 g/kg;花生中黄曲霉毒素的平均含量为0 04 g/kg。

结论:高效液相色谱法测定食物中黄曲霉毒素其重现性较好,而且可以一次分别测定出黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量,从结果看来尽管多数食品中均含有黄曲霉毒素,但是其含量均没有超过国家限量标准,其中花生酱中的黄曲霉毒素含量较高。

这些数据均可以为大众的健康饮食提供参考。

[关键词] 黄曲霉毒素;黄曲霉毒素B1;黄曲霉毒素B2;黄曲霉毒素G1;黄曲霉毒素G2;高效液相色谱仪[中图分类号] O657 7+2 [文献标识码] B [文章编号] 1004-8685(2007)03-0511-03Si m ultaneous detection of aflatoxin B1,B2,G1,G2in foods by HPLCFeng Liang,Cai Z eng x uan,Tan Y ing,W ang T i an jiao,Ren Yi p ing(Zhe jiang C enter f o r D isease Contro l and P reventi on,H angzhou310009,Chi na)[Abstract] O bjective:T o dete r m ine the aflatox i n(A F B1,B2,G1,G2)i n d ifferen t kinds o f food so as to prov ide the refer ences f o r gu i ding t he d i et for people M ethods:T hose food sa m ples w hose con tents o f AF B1,B2,G1,G2w ere mo re than o t hers w ere dete r m ined by H PLC R esults:The averag e A F in peanut butter w as2 41 g/kg T he average A F i n rice was0 15 g/kg, and t he average AF i n peanuts w as0 04 g/kg Conc l u sion:The repeatability of t he ana l y si s m ethod is good T he m ethod can be used to deter m i ne the content o f AF B1,AF B2,A F G1,AF G2respecti ve l y once ti m e and t hese da ta can gu i de the d i et o f peo p l e[K ey words] A fl a t ox i n;A F B1;AF B2;AF G1;AF G2;HPLC黄曲霉毒素(aflatox i n,AF)是迄今发现污染农产品毒素最强的一类生物毒素,也是强致癌物。

它是由黄曲霉菌(A sper g illus f l avus)和寄生曲霉菌(A parasiticus)等多种真菌产生的一类代谢产物,一群结构相似的化合物[1]。

最为常见的有A F B1、B2、G1、G2,其中A F B1的存在量与毒性都是最大的。

作为一种天然生物毒素,其广泛存在于粮油食品中,其中以花生、玉米和大米的污染最为严重[2]。

研究表明,人们食用这些被污染的食品后会导致急性中毒,引起肝坏死;慢性中毒则可引发人的肝癌、胃癌、肾癌或食道癌等严重的疾病[3~5]。

目前,我国只建立了对食品中AF B1的最高允许含量的标准,缺乏对食品中其他种类的黄曲霉毒素的限量规定。

国际社会对食品中黄曲霉毒素限量的要求也十分的严格。

1995年,世界卫生组织制定的食品中黄曲霉毒素最高允许浓度为15 g/kg。

美国联邦政府有关法律规定人类消费食品和奶牛饲料中的黄曲霉毒素含量(指A F B1+B2+G1+G2的总量)不能超过15 g/kg。

人类消费的牛奶中的AF总含量不能超过0 5 g/kg,其他动物饲料中的AF总含量不能超过300 g/kg。

而欧盟国家规定更加严格,要求人类生活消费品中的黄曲霉毒素B1的含量不能超过0 05 g/kg。

国际上的高标准不但对农产品的出口有一定的影响,而且对我们的检测方法也提出了更高的要求[6,7]。

对黄曲霉毒素检测的方法有薄层色谱法、免疫化学分析方法和高效液相色谱(HPLC)法。

薄层色谱法操作繁琐、污染大、定量差、耗时长;而酶联免疫法虽操作简单、灵敏度高,但特异性差;本文所采用的高效液相色谱(H PLC)法简单方便,灵敏度和特异性高,又能避免氯仿等有毒试剂的使用,故本次调查采用了高效液相色谱(HPLC)柱前衍生法。

对3大类共32种样品进行了采样检测,检测结果表明在所检测的样品中,花生酱的含量为最高,4种黄曲霉毒素(AF B1+B2+G1+G2)的总含量范围在0 29~4 94 g/kg,平均高于大米16 07倍,高于花生60 25倍。

1 材料与方法1 1 方法原理所测样品经过固定比率的有机溶剂萃取后,经R om er公司生产的M ycoSep#226净化柱去除杂质。

经过净化处理后的样品经浓缩干燥后,在弱酸条件下衍生,最后经过反相OD S柱分离,荧光检测器检测定量。

1 2 仪器与试剂美国Beck m an高效液相色谱仪、日本岛津荧光检测器、G o l d System工作站、超声波清洗机、离心机、电子天平、M ycoSep#226净化柱(R omer l abs)和实验室其他常用设备。

乙腈和正己烷(HPLC级,美国T ed i a公司)、三氟乙酸(美国T edia公司)、重蒸水;A F B1、B2、G1和G2标准品(美国sig m a公司)。

1 3 高效液相色谱条件色谱柱Sunfire C18,4 0mm 250mm;流动相A:乙腈,B:重蒸水,0~8m i n时A为20~27,10m i n时30,继续5m i n;流速1 0m l/m i n;荧光检测器(F I D)激发波长360n m、发射波长440n m;进样量20 ;l柱温30 ;数据运行时间15m i n。

1 4 样品处理1 4 1 提取 准确称取粉碎混匀样品20 0g(粮食样品过20目筛,花生过10目筛),加150m l(84乙腈+16水),摇匀,常温超声提取或摇床混匀30m i n后用快速定性滤纸过滤,收集滤液。

1 42 净化 移取8m l提取液至M y coSep#226净化柱的玻璃管中,缓慢推柱,得到净化液。

1 4 3 衍生 取2m l净化液至棕色具塞小瓶中,60 以下水浴以氮气柔和吹干,加入300 l衍生液(200 l正己烷和100 l三氟乙酸),混匀并注意用液体溶洗内壁,在40 烘干炉中衍生15m in。

室温下吹氮挥干后加200 l定容液(15乙腈+85水)定容,混匀后10000r/m i n离心5m i n,取上清液150 l备用。

2 回收率及重复性评价2 1 回收率在已知A F含量的20g大米样品中,分别加入10 0ng A F G1、AF B1标准品和5 0ng A F B2、A F G2标准品,按上述的处理方法提取、净化,测定A F含量,结果见表1。

由表1可见,平均回收率为84 5%,对于残留分析来说完全能够满足测定的要求。

表1 大米样品中加标回收率测定成分本底值(ng)加入量(ng)测定值(ng)回收率(%)平均回收率(%)AF G1******* 5AF B1881588AF G2044100AF B2548752 2 平行性任意选取一样品,取6份平行,按上述的处理方法提取、净化,测定AF含量,结果见表2。

由表2可见该法在实际操作时平行较好,测定结果可靠。

3 结果3 1 大米,花生及其制品的结果3 1 1 2005年10月至12月对本地区的花生及其制品进行质量分析 结果见表3。

表2 花生样品的平行性G1B1G2B2 1号样品测定值( g/kg)03 29801 3012号样品测定值( g/kg)03 26701 2513号样品测定值( g/kg)03 45801 1124号样品测定值( g/kg)02 99901 4035号样品测定值( g/kg)03 32001 2326号样品测定值( g/kg)03 11401 287标准偏差(%)00 16200 095相对标准偏差(%)05 0107 55表3 2005年大米、花生样品的分析结果G1( g/kg)B1( g/kg)G2( g/kg)B2( g/kg)AF总量( g/kg)花生酱1<0 05<0 05<0 050 680 68花生酱2<0 050 34<0 050 681 02花生酱3<0 053 28<0 051 314 59花生酱4<0 051 60<0 050 532 13花生酱5<0 052 98<0 050 993 97花生酱6<0 053 27<0 051 314 58花生酱7<0 053 30<0 051 644 94花生酱8<0 050 54<0 050 130 67花生酱9<0 05<0 05<0 051 221 22花生酱10<0 050 29<0 05<0 050 29大米1<0 05<0 05<0 05<0 050大米2<0 050 15<0 050 060 21大米3<0 050 20<0 05<0 050 2大米4<0 050 23<0 05<0 050 23大米5<0 05<0 05<0 05<0 050大米6<0 050 44<0 05<0 050 44大米7<0 05<0 05<0 05<0 050大米8<0 050 35<0 05<0 050 35大米9<0 05<0 05<0 05<0 050大米10<0 05<0 05<0 05<0 050大米11<0 050 15<0 05<0 050 15大米12<0 050 22<0 05<0 050 22花生1<0 07<0 07<0 070 110 11花生2<0 070 15<0 07<0 070 15花生3<0 07<0 07<0 07<0 070花生4<0 07<0 07<0 07<0 070花生5<0 070 17<0 07<0 070 17花生6<0 07<0 07<0 07<0 070花生7<0 10<0 10<0 10<0 100花生8<0 10<0 10<0 100 170花生9<0 10<0 10<0 10<0 100花生10<0 10<0 10<0 10<0 1003 1 2 对检测结果的分析及讨论 花生样品在H PLC分析中,4种黄曲霉毒素均能较好地分离出峰,其HPLC色谱图见图1。

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DB51T 1077-2010 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定高效液相色谱法.pdf

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ICSDB51备案号：28167-2010四川省质量技术监督局发布目 次前言 (II)1 范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 原理 (1)4 试剂和溶液 (1)5 仪器与设备 (1)6 试样制备 (2)7 分析步骤 (2)8 结果计算 (2)9 精密度 (3)附录A（资料性附录） (4)前 言本标准的附录A为资料性附录。

本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。

本标准由四川省饲料工作总站负责起草。

本标准起草人：柏凡、张静、李云、冯娅、甄阳光、赵立军。

饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了测饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量的高效液相色谱法(HPLC)。

本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及饲料原料的测定。

本标准中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检出限分别为2.0 µg/kg、0.8 µg/kg、2.5 µg/kg、1.5 µg/kg。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1 饲料采样GB/T20195 动物饲料试样的制备3 原理试样经乙腈-水提取，离心、过滤后，取滤液经过免疫亲和柱净化，浓缩，用高效液相色谱仪-柱后衍生-荧光检测器检测，外标法计算黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量。

4 试剂和溶液除特殊说明外，所有试剂均为分析纯，色谱用水符合GB/T6682一级用水的规定。

4.1 甲醇：分析纯、色谱纯。

4.2 氯化钠。

4.3 氯化钾。

4.4 磷酸氢二钠。

4.5 磷酸二氢钾。

4.6 甲醇-水（70+30）提取液：量取甲醇700 mL，加水300 mL，混匀。

4.7 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0 g氯化钠、1.44 g磷酸氢二钠、0.2 g磷酸二氢钾、0.2 g氯化钾，溶于1000 mL水，用盐酸或氢氧化钠溶液调pH7.4。

乳品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,M1的测定

乳品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,M1的测定

固相萃取-高效液相色谱法检测乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1迪马科技摘要：建立测定乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1含量的固相萃取-高效液相色谱方法。

样品经乙腈提取，ProElut AFT固相萃取柱净化，以正己烷和三氟乙酸衍生后，通过Diamonsil C18(2)色谱柱分离，流动相为水、乙腈和异丙醇，梯度洗脱，流速1 mL/min，荧光检测器检测，激发波长365 nm，发射波长435 nm，外标法定量。

结果表明5种黄曲霉毒素在0.01~5 μg/L范围内线性关系良好。

样品加标回收率在80%~100%之间，相对标准偏差1.58%~4.21%，方法检出限为牛奶：0.02~0.06 μg/kg，奶粉：0.04~0.12 μg/kg。

Determination of aflatoxins B1、B2、G1、G2、M1 in dairy products by solid phase extraction - high performance liquid chromatographic(SPE-HPLC) Abstract：To establish the method for determination of aflatoxins B1、B2、G1、G2、M1 in dairy products by solid phase extraction with high performance liquid chromatographic(SPE-HPLC). The samples were extracted with acetonitrile, then purified with ProElut AFT column, derived with hexane and trifluoroacetic acid, and separated on Diamonsil C18(2) column, mobile phase is water、acetonitrile and 2-propanol with a flow rate of 1 mL/min, detected by fluorescence detector, EX: 360nm、Em: 435nm, quantified by external standard method. The result indicated that the calibration curves showed good lineaarities for aflatoxins in the range of 0.01-5 μg/L. The spiked recoveries were in the range of 80%-100% with relative standard deviations of 1.58%-4.21%, the limits of determination were 0.02-0.06 μg/kg in milk and 0.04-0.12 μg/kg in milk powder.黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。

液质联用法同时测定中药饮片中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2与玉米赤霉烯酮的含量

液质联用法同时测定中药饮片中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2与玉米赤霉烯酮的含量

液质联用法同时测定中药饮片中黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2 与玉米赤霉烯酮的含量摘要：目的：建立同时测定中药饮片中黄曲霉毒素 B1 、B2 、G1 、G2与玉米赤霉烯酮的含量测定方法，提高检验效率。

方法：改进真菌毒素提取方法和优化液质色谱和质谱条件，可同时测定黄曲霉毒素 B1 、B2 、G1 、G2 和玉米赤霉烯酮。

结果：各成分均呈良好的线性关系 (R>0.999) ，方法的重复性均良好 (RSD<3%) ，精密度良好 (RSD<2%) ，样品在 24 小时内稳定性良好，回收率均在 85%~95% 。

结论：本方法提取效率高，分离效果好，准确度高，结果可靠。

关键词：黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、液质联用前言真菌毒素是真菌产生的次级代谢产物。

某些中药在种植、储存等过程中易产生一些真菌毒素，这些毒素对人体具有毒性，如黄曲霉毒素是一类天然存在的致癌物，是毒性极强的剧毒物质，玉米赤霉烯酮具有生殖发育毒性、免疫毒性、肝肾毒性、对内分泌系统有很大的影响，所以有必要加强相关真菌毒素的控制。

《广东省药品监督管理局中药饮片不符合药品标准尚不影响安全性、有效性的认定指导原则》中，中药饮片的水分或干燥失重超出标准规定限度的 20%~30% (含 30%) ，企业可以申请检验真菌毒素中的黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮项目，若检验结果同时符合以下标准时，可以被认定不影响中药饮片的安全性、有效性。

在药典四部真菌毒素测定通则中，两种毒素的提取与检验方法不同，随着指导原则的实施，样品的检验时间成本和耗材都会增加。

另外，真菌毒素在每次使用后必须对所有接触过期器皿和仪器进行灭活处理，分开检验增加了暴露和交叉污染的风险。

本方法的建立，可以同时快速便捷进行两类毒素定性定量测定，降低时间与耗材成本和环保压力，提高工作效率和经济效益。

1、材料与仪器1.1 仪器：电子天平：赛多利斯 CPA225D、液相色谱-质谱联用仪：岛津LC-20ADABSCIEX 3200Q TRAPLC/MS/MSSYSTEMS1.2 材料1.2.1 对照品：黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 G1、黄曲霉毒素 G2 标准混合溶液 (来源：PriboLab，批号：2A00D12，浓度：2.00、0.526、2.01、0.527μg/ml) ，玉米赤霉烯酮标准溶液 (来源：Bepure，批号：E0025859，浓度：100.2μg/ml) 。

HPLC同时测定食品中黄曲霉毒素B1_B2_G1_G2

HPLC同时测定食品中黄曲霉毒素B1_B2_G1_G2

[作者简介] 冯靓(1980-),女,学士,技师,主要从事理化检验研究。

监测报告HPLC同时测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2冯 靓,蔡增轩,谭 莹,王天娇,任一平(浙江省疾病预防控制中心,杭州 310009)[摘要] 目的:分析常见种类食物中黄曲霉毒素的含量,为建立食品中黄曲霉毒素的限量指标提供数据,并为大众的健康饮食提供参考。

方法:以黄曲霉毒素B1的平均含量为参考选择黄曲霉毒素含量较多的常见食物种类,使用高效液相色谱仪及荧光检测器分析食物中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量。

结果:花生酱中含有的黄曲霉毒素最多,平均为2 41 g/kg;大米中黄曲霉毒素的含量次之,平均为0 15 g/kg;花生中黄曲霉毒素的平均含量为0 04 g/kg。

结论:高效液相色谱法测定食物中黄曲霉毒素其重现性较好,而且可以一次分别测定出黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量,从结果看来尽管多数食品中均含有黄曲霉毒素,但是其含量均没有超过国家限量标准,其中花生酱中的黄曲霉毒素含量较高。

这些数据均可以为大众的健康饮食提供参考。

[关键词] 黄曲霉毒素;黄曲霉毒素B1;黄曲霉毒素B2;黄曲霉毒素G1;黄曲霉毒素G2;高效液相色谱仪[中图分类号] O657 7+2 [文献标识码] B [文章编号] 1004-8685(2007)03-0511-03Si m ultaneous detection of aflatoxin B1,B2,G1,G2in foods by HPLCFeng Liang,Cai Z eng x uan,Tan Y ing,W ang T i an jiao,Ren Yi p ing(Zhe jiang C enter f o r D isease Contro l and P reventi on,H angzhou310009,Chi na)[Abstract] O bjective:T o dete r m ine the aflatox i n(A F B1,B2,G1,G2)i n d ifferen t kinds o f food so as to prov ide the refer ences f o r gu i ding t he d i et for people M ethods:T hose food sa m ples w hose con tents o f AF B1,B2,G1,G2w ere mo re than o t hers w ere dete r m ined by H PLC R esults:The averag e A F in peanut butter w as2 41 g/kg T he average A F i n rice was0 15 g/kg, and t he average AF i n peanuts w as0 04 g/kg Conc l u sion:The repeatability of t he ana l y si s m ethod is good T he m ethod can be used to deter m i ne the content o f AF B1,AF B2,A F G1,AF G2respecti ve l y once ti m e and t hese da ta can gu i de the d i et o f peo p l e[K ey words] A fl a t ox i n;A F B1;AF B2;AF G1;AF G2;HPLC黄曲霉毒素(aflatox i n,AF)是迄今发现污染农产品毒素最强的一类生物毒素,也是强致癌物。