黄曲霉毒素M1检测

乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定—双流向酶联免疫法20 原理利用酶联免疫竞争原理，样品中残留的黄曲霉毒素M1与定量特异性酶标抗体反应，多余的游离酶标抗体则与酶标板内的包被抗原结合，通过流淌洗涤，加入酶显色底物显色后，与标准点比较定性。

21 试剂和材料除非另有规定，本办法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

21.1 双流向酶联免疫试剂盒，2℃～7℃保存。

21.1.1 黄曲霉毒素M1系列标准溶液。

21.1.2 酶联免疫试剂颗粒(含特异性酶标抗体)。

21.1.2.1 抗黄曲霉毒素M1抗体。

警告：不应破损，否则立刻销毁。

21.1.2.2 酶结合物。

21.1.3 酶显色底物。

22 仪器和设备 22.1 样品试管，带有密封盖，内置酶联免疫试剂颗粒(21.1.2)。

22.2 移液器(管)，450 uL±50 uL。

22.3 酶联免疫检测加热器，40℃±5℃。

22.4 双流向酶联免疫检测读数仪。

23 分析步骤 23.1 加热器(22.3)预热到45℃±5℃,并起码保持15 min。

23.2 液体试样或乳粉试样恢复后振摇混匀，移取450uL至样品试管(22.1)中，充分振摇，使其中的酶联免疫试剂颗粒(21.1.2)彻低溶解。

23.3 将样品试管(22.1)和酶联免疫检测试剂盒(21.1)同时置于预热过的加热器内保温，保温时光5 min～6 min。

使试样中的黄曲霉毒素M1和酶联免疫试剂颗粒中的酶标志黄曲霉毒素M1抗体结合。

23.4 将样品试管内的所有内容物倒入试剂盒(21.1)的样品池中，样品将流经“结果显示窗口”向绿色的激活环流去。

23.5 当激活环的绿色开头消逝变为白色时，立刻用力按下激活环按键。

23.6 试剂盒(21.1)继续放置在加热器(22.3)中保温保持4min,使显色反应完成。

23.7 将试剂盒从加热器中取岀水平放置，立刻举行检测结果判读，结果判读应在lmin 内完成。

酶联免疫法定量检测黄曲霉毒素M1摘要Helica aflatoxin M1 assay kit（编号：961AFLM01M）竞争酶联免疫分析法定量检测牛奶、奶粉、奶酪和加工食品中的黄曲霉毒素M1。

试剂盒中包含有酶联免疫试验所需的所有试剂，包括标准溶液。

试剂盒足够进行96次检测（包括标准）。

定量检测需要微孔板酶标仪。

样品处理：鲜奶………………………………………….……不需要处理奶粉………………………………………….……还原成液态奶奶酪、加工食品…………………………………甲醇水溶液提取试验时间：样品制备（以10个样品为例）鲜奶………………………………………………….…不需要处理奶粉………………………………………….…….……约10分钟奶酪、加工食品…………………………………………约30分钟检测时间……………………………………………………约3小时（与样品数量无关）检测限：5ppt回收率：80 - 100%1. 用途Helica Aflatoxin M1 assay kit是竞争酶联免疫分析法定量检测牛奶、奶粉、奶酪和加工食品中的黄曲霉毒素M1。

2. 概要黄曲霉毒素是主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。

黄曲霉毒素是一种强烈的致癌物，而且是曲霉菌等菌类的高毒代物，而黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的代谢物，当奶牛被饲养被污染的饲料后，黄曲霉毒素B1通过羟基化作用转化成黄曲霉毒素M1，进而污染牛奶。

黄曲霉毒素M1结构稳定，在牛奶加工过程中甚至是巴氏消毒都无法将其去除，直至最后被人体摄入。

大多数政府机构都对人体和动物可摄入的黄曲霉毒素量有严格的法规限制。

很多国家已经对牛奶和乳制品中的黄曲霉毒素M1含量有了限量标准。

在欧盟，牛奶和奶粉中的黄曲霉毒素M1含量被限制在0.05 mg/L 或50ppt。

Helica Aflatoxin M1 assay kit检测试剂盒则能够提供快速而准确的分析。

食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素M族的测定1 范围本标准规定了食品中黄曲霉毒素M1和M2（以下简称AFT M1和AFT M2）的测定方法。

本标准第一法为液相色谱-质谱联用法，适用于乳、乳制品和特殊膳食用食品中AFT M1和AFT M2的测定。

本标准第二法为免疫亲和层析净化高效液相色谱法，适用于乳、乳制品和特殊膳食用食品中AFT M1和AFT M2的测定。

本标准第三法为试纸条法，适用于生鲜乳中AFT M1的测定。

第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法2 原理试样中的AFT M1和AFT M2用水和乙腈的混合溶液提取，上清液的浓缩液用磷酸盐缓冲液稀释后，经免疫亲和柱净化，去除脂肪、蛋白质、色素及碳水化合物等干扰物质。

净化液经液相色谱分离，串联质谱检测，同位素内标法定量。

3 试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂3.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。

3.1.2 甲醇（CH3OH）：色谱纯。

3.1.3 醋酸铵（CH3COONH4）。

3.1.4 氯化钠（NaCl）。

3.1.5 磷酸氢二钠（Na2HPO4）。

3.1.6 磷酸二氢钾（KH2PO4）。

3.1.7 氯化钾（KCl）。

3.1.8 浓盐酸（HCl）。

3.1.9 氮气（N2）：纯度≥ 99.9 %。

3.1.10 石油醚（C2H2n+2）：沸程为30-60℃3.2 试剂配制3.2.1 5 mmol/L醋酸铵水溶液：称取0.39 g醋酸铵，溶于1000 mL水中。

3.2.2 乙腈-水溶液（25+75）：取250 mL乙腈加入750 mL水。

3.2.3 乙腈-甲醇溶液（50+50）：取500 mL乙腈加入500 mL甲醇。

3.2.4 磷酸盐缓冲溶液（以下简称PBS）：称取8.00 g氯化钠，1.20 g磷酸氢二钠（或2.92 g十二水磷酸氢二钠），0.20 g磷酸二氢钾，0.20 g氯化钾，用900 mL水溶解，用盐酸调节pH值至7.4，再加水至1000 mL。

《基于荧光适配体传感器快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法及应用研究》篇一一、引言食品安全问题一直备受社会关注。

其中，黄曲霉毒素M1作为液态奶中的主要污染物之一，具有强烈的致癌性，对人体健康造成极大威胁。

因此，开发一种快速、准确、高效的黄曲霉毒素M1检测方法，对于保障食品质量和安全具有重要意义。

本文提出了一种基于荧光适配体传感器的快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法，并对其应用进行了深入研究。

二、方法概述该方法利用荧光适配体传感器技术，通过特异性识别黄曲霉毒素M1，实现快速、灵敏的检测。

具体步骤包括：样品前处理、荧光适配体传感器制备、荧光检测及数据分析。

（一）样品前处理液态奶样品经过适当稀释后，采用固相萃取法进行净化，以去除样品中的杂质和干扰物质，提高检测的准确性和可靠性。

（二）荧光适配体传感器制备荧光适配体传感器采用生物工程方法制备，包括DNA或RNA适配体的合成、荧光基团的标记及传感器的组装等步骤。

制备好的传感器具有高特异性、高灵敏度和良好的稳定性。

（三）荧光检测及数据分析将处理后的样品与荧光适配体传感器混合，通过荧光检测仪器进行荧光强度检测。

根据荧光强度的变化，结合标准曲线，可快速计算出样品中黄曲霉毒素M1的含量。

三、实验结果（一）方法性能评价通过对比国家标准方法，本文所提方法在检测液态奶中黄曲霉毒素M1时，具有更高的灵敏度和更低的检测限。

此外，该方法操作简便、快速，适合大规模样品的检测。

（二）实际样品检测为验证本文所提方法的实际应用效果，我们对市售液态奶进行了检测。

结果显示，部分样品中黄曲霉毒素M1含量超标，为食品安全监管提供了有力支持。

四、应用研究（一）食品安全监管本文所提方法可广泛应用于液态奶及其他乳制品中黄曲霉毒素M1的快速检测，有助于食品安全监管部门及时发现和处理问题产品，保障消费者权益。

（二）食品安全风险评估通过大量样品的检测和分析，可对食品中黄曲霉毒素M1的污染状况进行评估，为制定科学的食品安全风险评估提供依据。

黄曲霉毒素M1检测卡【简介】黄曲霉毒素是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液，动物饲料相关的产品中。

黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。

牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。

GB 2761-2001中规定：乳及乳制品中黄曲霉毒素M1的最大允许限量为1μg/kg，即1ppb。

本检测卡适用于液态奶和奶粉的检测，检测限为1μg/kg【精密度】同时使用本产品和黄曲霉毒素 M1 ELISA 检测试剂盒对 300 份样品包括 161 份阴性样本和 139 份阳性样本进行检测，检测结果表明，本产品与黄曲霉毒素 M1 ELISA 检测试剂盒的结果符合率为 98％。

【样品处理】奶粉1、取2g奶粉到锥形瓶中，再加入50℃左右去离子水到10ml（还原牛奶）。

2、震荡3min，使充分溶解。

3、2ml样品，用冷冻离心机（4000RPM ，10℃）离心10min去除脂肪（如没有冷冻离心机，可将样品先冷却到10℃，再离心）。

4、后用移液器彻底去除上层奶油。

5、下层脱脂牛奶与纯净水1:6稀释用于检测。

奶样（1）取1 mL新鲜的牛奶（含脂牛奶）样本置于2ml离心管中，降温至10℃以下4000 r/min离心10分钟后，弃去上层脂肪（约四分之三），剩余四分之一奶样与纯净水1:6（1份奶样+5份纯净水）互溶，互溶后刻度刚好为总体积1ml。

用力震荡1min，使充分溶解后为备用待检液；（2）脱脂牛奶待检液配法，脱脂牛奶与纯净水1:6（1份脱脂牛奶+5份纯净水）互溶，用力震荡1min，使充分溶解后为脱脂牛奶备用待检液；【检测步骤及结果判断】检测前请仔细阅读使用说明书，检测应在室温下进行。

检测步骤为：（1）将铝箔袋沿切口部位撕开，取出检测卡放于平整的台面上，并做好标记；（2）用吸管吸取待检样品溶液，垂直加入2~3滴于加样孔中（注：样本中不要带入气泡），反应3~5min 判断结果。

黄曲霉毒素M1酶联免疫测试1．概述REA GEN ™黄曲霉毒素M1酶联免疫反应测试盒可用于检测乳酪，牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1的残留。

黄曲霉毒素M1是黄曲霉素素B1羟基化的产物。

黄曲霉毒素已被确认是最常见的致癌物。

该试剂盒特点包括：样品无需前处理提取，可直接用于检测。

应用于牛奶检测时有高灵敏度（0.005ng/g或ppb）低检测限（0.005ng/g或ppb）。

高重现性。

2．试剂盒原理REA GEN ™黄曲霉毒素M1酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，相关的抗体已经包被于微孔板上。

药物分析时，样品加入微孔孵育，洗板后加入酶标记物，若样品残留有黄曲霉M1就会竞争包被抗体，抑制HRP酶标与包被抗体结合，加入TMB后显色反应，颜色显色强度与样品中靶毒素的含量成反比。

3.试剂盒组成部分和储存内容物规格保存条件黄曲霉毒素M1包被板(Aflatoxin M1 Plate) 96孔板（12×8 孔）2-8℃黄曲霉毒素M1标准品(Standards)：0ng/ml阴性质控(Negative control)0.005ng/mL0.015ng/mL0.03 ng/mL0.09ng/mL0.27ng/mL回收用10ng/ml(Spiking，可选) 1.8mL1.8mL1.8mL1.8mL1.8mL1.8mL1.8ml2-8℃HRP-酶标记物(HRP-Conjugate) 12mL2-8℃20×浓缩洗液(Wash Solution) 28mL终止液(Stop Buffer) 14mLTMB底物(TMB Substrate) 12mL10x PBS缓冲液（可选）25mL10x 牛奶提取液（可选）5mL本试剂盒应当在2-8℃的温度下储存，有效期为一年。

如果一个月内不使用试剂盒，黄霉素毒素M1标准品和HRP-酶标应置于-20℃或者冷冻保藏。

4.样品检测下限检测物质检测下限（ng/g）牛奶0.005奶粉0.005（按1:10稀释成液体奶）乳酪0.05酸奶0.015.交叉反应数据药物交叉反应率（%）黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1) 100黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1) 46黄曲霉毒素B2(Aflatoxin B2) 35黄曲霉毒素M2(Aflatoxin M2) 29黄曲霉毒素G1(Aflatoxin G1) 27黄曲霉毒素G2(Aflatoxin G2) 66．未提供的设备或材料1)酶标仪(450nm)2)微量加样器(10、20、100和1000μL各一支)3)多道枪：50-300μL4)黄曲霉M1清洗试剂（可选）7.注意事项实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。

黄曲霉毒素M1快速检测卡(胶体金法)说明书【产品名称】产品名称：黄曲霉毒素M1快速检测卡(胶体金法)英文名称：Aflatoxin M1 Rapid Test Card (Colloidal Gold)【产品简介】黄曲霉毒素是一类丝状真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）产生的具有很强致癌性的有毒代谢产物，黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物, 主要存在于乳及乳制品中。

本产品用于快速检测纯牛奶和婴幼儿配方奶粉中的黄曲霉毒素M1残留，整个检测过程只需要20分钟左右，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构的快速筛查。

【包装规格】5次/盒。

【产品组成】黄曲霉毒素M1快速检测卡（5条）；1mL刻度吸管（5支）；奶粉取样勺（1支）；提取瓶（内含黄曲霉毒素M1提取液4mL，5瓶）。

【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。

【检出限】本产品检测方法对纯牛奶黄曲霉毒素M1的检出限为0.5μg/kg，对婴幼儿配方奶粉（以粉末计）黄曲霉毒素M1的检出限为0.5μg/kg。

根据《食品真菌毒素限量GB2761-2011》规定，液态乳黄曲霉毒素M1检出限量为0.5μg/kg，婴幼儿配方乳粉（以粉末计）黄曲霉毒素M1检出限量为0.5μg/kg。

【使用方法】1、纯牛奶检测：用吸管吸取2mL纯牛奶（吸管刻度线处为1mL，连续吸取两次），加入提取瓶中，盖紧瓶盖后振荡混匀；奶粉检测：用取样勺量取1平勺奶粉（约0.4g），加入提取瓶中，盖紧瓶盖后振荡混匀。

2、将提取瓶放在热水（60-70℃）中水浴5分钟，取出待检。

3、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用吸管从提取瓶中吸取样品，垂直滴加3滴（约100μL）于检测卡加样孔（S孔）中。

4、室温环境计时10分钟，根据示意图判定结果。

【结果判定】阴性（-）：T线显色比C线深或一样深，均表示样品中黄曲霉毒素M1浓度低于检出限。

阳性（+）：T线显色比C线明显变浅或T线不显色，表示样品中黄曲霉毒素M1浓度等于或高于检出限。

黄曲霉毒素M1操作规程一、样品的前处理将适量的液态奶于12000r/min下离心10min,取下层奶样直接检测即可。

二、溶液的配制1、标品稀释液：用去离子水将AFM1浓缩标品稀释液按1：3体积比进行稀释，即1份AFM1浓缩标品稀释液加3份去离子水。

用于提取样本的稀释，标品稀释液在4℃环境可保存一个月。

2、洗涤工作液：用去离子水将浓缩洗涤液（10×）按1:9体积比进行稀释，即1份浓缩洗涤液（10×）加9份去离子水。

用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月3、6个不同浓度的标准液：取6个1.5ml离心管，标为1到6号，分别加入995μl,400μl, 400μl,400μl, 400μl, 400μl标品稀释液,按照下表配制标准品。

如取5μl高浓度黄曲霉毒素M1标准品（810ppb）加入1号管，与995μl标品稀释液混匀，制备成4.05ppb黄曲霉毒素M1标准液。

取200μl配好的4.05ppb黄曲霉毒素M1标准液，加入2号管，与400μl标品稀释液混匀，制备成1.35ppb黄曲霉毒素M1标准液。

取200μl配好的1.35ppb黄曲霉毒素M1标准液，加入3号管，与400μl标品稀释液混匀，制备成0.45ppb黄曲霉毒素M1标准液。

依次稀释，制备成1.35ppb、0.45ppb、0.15ppb、0.05ppb、0ppb的标准液，（见下表）。

标准品现配现用。

配制好的标准液请在一周内用完（4℃存放）。

三、检测步骤1.、测前须知：（1）、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20~25℃）。

（2）、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。

（3）、黄曲霉毒素M1可致癌，应戴手套操作。

2、操作步骤：（1）、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20~25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均需摇匀。

（2）、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2~8℃。

检测原理黄曲霉毒素M1检测试剂盒应用直接竞争酶联免疫吸附原理。

（1）样品提取液或黄曲霉M1标准品100ul与酶联偶合物200ul，混合后取100ul，（2）加入到抗体包被的微孔中等待1小时，（3）洗板去除未参加抗原-抗体反应的黄曲霉毒素M1,（4）将底物100ul加入到微孔中，等待20分钟，颜色变为蓝色，颜色的深浅与黄曲霉毒素M1的含量成反比，（5）加入终止液100ul，颜色变为黄色，检测步骤1.取生奶或调味乳30ml，在4度静止30分钟，10000转离心5分钟，在脂肪下取0.4ml加0.1ml100%甲醇，混合，（如奶粉取10克，加100ml蒸馏水溶解，混合，按照生奶来做），2.取出绿色的稀释孔和无色的有抗体包被的稀释孔各放入一个板架上，3.吸取200ul酶联偶合物加入到绿色的稀释孔，再吸取100ul标样（0、25、50、100、200、500ppt），和100ul样品，混匀3次，4.然后从300ul混合物中吸取100ul加入到无色的有抗体包被的稀释孔中，静止1小时，5.将孔中的液体倒掉，用稀释后的冲洗缓冲液冲洗每个孔，将微孔倒置于纸巾上把水吸干，6.加入100ul底物，放置20分钟，颜色变为蓝色，7.加入100ul终止液，颜色变为黄色，8.上机检测，（酶标仪滤镜450nm，示差滤镜630nm）9.稀释倍数f：牛奶1，奶粉10.8，奶酪8，10.定量限：生奶0.018ug/kg，脱脂奶粉0.252 ug/kg，全脂奶粉0.257 ug/kg，奶酪0.128ug/kg，酸奶0.270ug/kg11. 生奶或调味乳≤0.5ug/kg，合格，12. 计算公式：X= c*f/1000注：1.酶联偶合物25ml ：sensitive conjugate底物15ml ：substrate终止液15ml ：stop solution样品稀释缓冲液15ml ：assay diluent冲洗缓冲液（20X）25ml ：wash solution concentrate2.试剂盒在使用前恢复到室温（18~30度），使用完毕后，放入2~8度冰箱冷藏，3.标样中含有毒素，致癌性，使用时戴好橡胶手套、安全眼镜、工作服等防护装备，4. 在读数前，微孔中应没有气泡，否则影响分析结果，5. 1 ppm = 103 ppb = 106 pptug/ml ng/ml pg/mlmg/kg ug/kg ng/kg6. 5%冲洗缓冲液：将25ml冲洗缓冲液（20X）加入475ml蒸馏水，混匀，检测原理黄曲霉毒素B1检测试剂盒应用直接竞争酶联免疫吸附原理。

黄曲霉毒素M1检测方案
方案一、免疫亲和层析净化高效液相色谱法
（GB 5413.37-2010第二法）
一、原理：
亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，当试样通过亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体—抗原复合体。

用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。

用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M1含量。

二、所需仪器和耗材
1、高效液相色谱仪
（配荧光检测器—具有365 nm激发波长、435 nm发射波长，在适当的色谱条件下能
够测定0.02 ng的黄曲霉毒素M1(相当于5倍噪音)）
2、离心机（转速≥7000 转/分钟）
3、天平：感量为0.01 g
4、黄曲霉毒素M1免疫亲和柱
方案二、酶联免疫吸附法
（可定性、定量检测牛乳及其他乳制品等样本中的黄曲霉毒素M1）
一、原理
标准溶液和样品试液加入各自板孔，游离的黄曲霉毒素M1与微孔中包被的黄曲霉毒素M1抗体结合，没有结合的物质在洗涤中被清除。

再加入黄曲霉毒素M1酶标记物，将没有结合的抗体位点全部覆盖，结合的酶标记物通过显色液显示出来。

最后加入终止液，用酶标仪在450nm测定吸光度值，吸光度值与样品中的黄曲霉毒素M1含量成反比。

二、所需仪器和耗材
1、微孔板酶标仪450nm/630nm
2、离心机
3、天平：感量为0.01 g
4、微量移液器：单道20μl～200μl、200μl～1000μl、多道250μl
5、振荡器。

牛奶中黄曲霉毒素M1的检测
黄曲霉毒素M1 ELISA检测（定量）
一：实验原理
AFM1 ELISA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被黄曲霉毒素M1抗原，样本中黄曲霉毒素M1和此抗原竞争黄曲霉毒素M1抗体，同时抗黄曲霉毒素M1抗体与霉标二抗相结合，经底物显色，样本吸光值与含有的黄曲霉毒素M1成负相关。

吸光值与标准曲线比较再乘以相应的稀释倍数，即可得到样品中黄曲霉毒素M1的含量。

二：样品处理
液态奶：将液态奶于12000r/min下离心10min,取下层奶样直接检测
稀释倍数：1
三：操作步骤
1·取出所需试剂回温(20-25。

C)，接通酶标仪电源，开启，预热
2·配制溶液
3·加标准品、样本，加霉标物和抗试剂，摇匀，避光反应30min
4·洗板
5·显色
6·加终止液，然后用酶标仪测定，读取OD值
四:计算
标准曲线：横坐标——标准浓度的对数纵坐标——百分吸光度（%）五：结果讨论
黄曲霉毒素M1在国家标准里的限量是<=0.5ppb
（本资料素材和资料部分来自网络，仅供参考。

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黄曲霉毒素M1如何检测黄曲霉毒素M1是一种强致癌物，它一度存在于一些纯牛奶中，引起食品安全隐患的讨论。

相比三聚氰胺，黄曲霉素是否更难检测?这里，环凯技术整理出全套的专业检测方法，让乳和乳制品中黄曲霉毒素M1无处遁形。

检测范围牛奶，奶粉，发酵乳，干酪，奶油等乳制品检测原理黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂，因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取，对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。

本方法采用免疫亲和柱净化，荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素M1。

设备耗材黄曲霉毒素免疫亲和柱高效液相装置带荧光检测器均质机水平振荡器SPE转接头及50ml大容量上样器分析天平(精度0.02 g)SPE装置带抽真空系统黄曲霉毒素M1标准品PBS 缓冲溶液：称取1.16 g Na2HPO4，0.20 g KH2 PO4，8 g NaCl和0.2 g KCl 溶于900ml水中，用HCL或NaOH调节pH至7.4，然后定容至1000ml;甲醇(色谱纯)乙腈(色谱纯)正己烷(分析纯)样品前处理牛奶样品1. 称取25g(精确至0.01 g)混匀的样品，置于50 mL具塞离心管中，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。

收集全部上清液，待净化;2. 发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)3. 称取25 g(精确至0.01 g)混匀的样品，用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.4，9500r/min下均质5 min，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min 下离心10 min。

收集全部上清液，待净化。

4. 乳粉和粉状婴幼儿配方乳制品5. 称取10 g(精确至0.01 g)样品置于250 mL烧杯中，加入50 mL约50 ℃的水于乳粉中，玻璃棒搅拌均匀。

溶解后冷却至室温，移入100 mL容量瓶中，水洗烧杯并转移洗涤液，用PBS定容至刻度后装入离心管6000转/分钟下离心15 min，混合上清液，取50mL上清液待净化。

新型、快速、低成本SPE法检测黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1目前检测黄曲霉毒素的方法通常为免疫亲和层析净化高效液相色谱法和酶联免疫吸附法（ELISA）这两种方法。

酶联免疫吸附法（ELISA）操作简单，快速，但灵敏度低且会出现假阳性，需使用免疫亲和柱法进行精确定性、定量，而免疫亲和柱又存在使用繁琐、价格昂贵、储存条件苛刻、保存期短等缺点。

针对上述问题，迪马科技最新开发出新型、快速、低成本的ProElut TM固相萃取方法。

该方法可实现与免疫亲和柱法相当的高精度回收率结果，但使用成本却大大降低。

ProElut TM固相萃取法单个样品的检测成本为免疫亲和柱法的1/4，酶联免疫法的1/2，同时ProElut TM固相萃取法简单易操作、不需要专用的大型设备、对操作人员要求不高，特别适用于各种食品生产企业及检测机构，将大大降低黄曲霉毒素的检测成本。

以下为使用ProElut TM固相萃取柱开发的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1 和黄曲霉毒素M1的检测方案，供您参考！乳制品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1的检测1 适用范围适用于牛奶、奶粉等乳制品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1的检测。

2 样品准备/提取2.1 牛奶、原料乳等液态奶制品(1) 称取2 g样品，加入2 mL乙腈，涡旋混合1 min；(2) 再加入4 mL乙腈，涡旋混合1 min，4000rpm，离心5 min；(3) 取上清液4 mL，作为上样液待净化。

2.2 奶粉等固体奶制品(1) 称取2 g样品，加入5mL水，涡旋混合2min，样品与水充分混匀；(2) 加入5 mL乙腈，涡旋混合1 min；(3) 再加入10 mL乙腈，涡旋混合1 min，4000rpm，离心5 min；(4) 取上清液5 mL，作为上样液待净化。

3 SPE柱净化——ProElut TM AFT 黄曲霉毒素检测专用柱1500 mg/12 mL（Cat.#65904）(1)活化：10 mL乙腈，流出液弃去；(2)上样：将上样液加入柱中（流速控制每滴/两秒），接收流出液；(3)洗脱：10 mL乙腈洗脱（流速控制每滴/两秒），收集流出液。

《基于荧光适配体传感器快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法及应用研究》篇一一、引言随着食品工业的快速发展，食品安全问题日益受到人们的关注。

黄曲霉毒素M1（AFM1）是一种常见的食品污染物，主要来源于饲料中黄曲霉的污染。

AFM1具有强烈的致癌性，对人类健康构成严重威胁。

因此，快速、准确地检测液态奶中的AFM1显得尤为重要。

传统的检测方法如光谱法、色谱法等虽然准确可靠，但操作复杂、耗时较长，难以满足快速检测的需求。

近年来，荧光适配体传感器因其高灵敏度、高选择性及快速响应等优点，在食品安全检测领域得到了广泛应用。

本文提出了一种基于荧光适配体传感器的快速检测液态奶中AFM1的方法，旨在为食品安全监管和质量控制提供技术支持。

二、方法与材料2.1 材料与试剂实验所需材料包括液态奶样品、AFM1标准品、荧光适配体等。

所有试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。

2.2 方法本方法基于荧光适配体传感器技术，通过合成特异性针对AFM1的荧光适配体，实现液态奶中AFM1的快速检测。

具体步骤如下：（1）荧光适配体的合成与标记：采用化学合成法合成特异性针对AFM1的荧光适配体，并进行荧光标记。

（2）样品处理：取适量液态奶样品，经过适当稀释和净化处理，以去除干扰物质。

（3）荧光适配体传感器制备：将标记了荧光的适配体与固定化探针结合，形成荧光适配体传感器。

（4）检测：将处理后的样品加入荧光适配体传感器中，通过荧光信号的变化判断AFM1的存在及浓度。

三、实验结果与分析3.1 标准曲线制备在最佳实验条件下，制备AFM1标准品系列浓度梯度，测定各浓度梯度下的荧光信号值，绘制标准曲线。

结果表明，AFM1浓度与荧光信号值呈良好的线性关系，相关系数达到0.99《基于荧光适配体传感器快速检测液态奶中黄曲霉毒素M1的方法及应用研究》篇二一、引言黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1，AFM1）是一种由黄曲霉菌产生的有毒代谢产物，在液态奶中经常被检测到。

Mar 2012 CHINA FOOD SAFETY 39分析与检测 ANALySIS & TEST表1 主要国家乳及乳制品中AFM 1的限量标准国家产品限量标准（μg/kg)美国乳及乳制品0.5中国婴儿乳品/牛乳不得检出/0.5瑞士鲜乳0.01欧盟鲜乳0.05日本乳及乳制品0.5牛奶中黄曲霉毒素M 1检测方法研究进展□ 黄良策 程建波 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/安徽农业大学 郑 楠 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所韩荣伟 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/青岛农业大学许晓敏 甄云鹏 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/农业部奶及奶 制品质量监督检验测试中心/农业部奶制品风险评估实验室黄曲霉毒素M 1（Aflatoxin M 1， AFM 1）是黄曲霉毒素中一种二氢呋喃杂萘邻酮衍生物，主要是由于奶牛食用了被黄曲霉毒素B 1（Aflatoxin B 1，AFB 1）污染的饲料后，AFB 1在奶牛体内代谢产生的羟基化代谢物，转化反应式如图1。

AFM 1毒性强、对人体危害大，1993年WHO将AFM 1归为对人类II类致癌物，其毒性是氰化钾的10倍，砒霜的68倍，主要危害的部位在肝脏。

图1 AFB 1转化成AFM 1的反应式A F M 1很难降解，其熔点（裂解温度）为299℃对光、热和酸都比较稳定。

牛奶加工常用的三种热处理方法—巴氏杀菌法（LTLT ，63℃保持30min）、高温快速巴氏杀菌（HTST ，72℃保持15s）和超高温灭菌（UHT ，135℃保持1～2s）均不能破坏其毒性。

因此，生鲜乳中存在的AFM 1会导致乳制品中也含有AFM 1。

许多国家、国际组织依据本国国情制定了牛奶中AFM 1的限量标准，并就AFM 1的检测方法开展了许多研究工作。

本文对不同国家、国际组织对牛奶中AFM 1限量值进行了比对分析，并重点对其检测方法进行了综述，以期对我国奶业生产者和政府监管部门起到一定借鉴作用，切实保证我国牛奶中的AFM 1安全。

泰乐祺科技－高效液相色谱法检测黄曲霉毒素M1操作规程作为国内专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商之一，近年来泰乐祺检测应用实验室重点关注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等检测技术问题，以期望快速提出解决方案。

针对近期奶中出现的黄曲霉毒素M1超标问题，泰乐祺科技提出以下快速解决方案。

1. 仪器1.1 高效液相色谱仪配荧光检测器1.2 震荡器（或高速搅拌器）1.3 高速离心机2. 试剂与试液2.1 色谱甲醇2.2 蒸馏水2.3 乙腈+水（25+75）2.4 石油醚2.5 10%乙腈2.6 氢氧化钠溶液（0.5mol/L）玻璃纤维滤纸（PriboFast免疫亲和柱免费赠送）3. 测定法本法系用高效液相色谱法（GB/T 18980-2003）测定牛奶，奶粉等产品中的黄曲霉毒素M1，除另有规定外，按下列方法测定。

3.1 色谱条件色谱柱：C18柱，150×4.6mm，5um检测器：荧光检测器；激发波长365nm，发射波长435nm；流动相：乙腈-水（25：75）流速：1.0ml/min进样量：20ul柱温：室温3.2 标准品溶液的配制取黄曲霉毒素M1标准品，用乙腈稀释成0.5ug/ml的标准储备液。

根据使用需要，准确吸取10μl、20μl、50μl、100μl、200μl的黄曲霉毒素标准储备液，置5ml的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，配成相当于1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的标准工作液，即得。

3.3 样品前处理3.3.1牛奶将100mL牛奶水浴加热至40℃；4000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用；3.3.2乳粉和粉状婴幼儿配方食品称取10g奶粉样品，将100mL50℃水多次少量加入，搅拌，使奶粉充分溶解；6000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用；3.3.3发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)称取60 g混匀的试样，用0.5 mol/L 的氢氧化钠溶液在酸度计指示下调pH至7.4；用高速均质器在 9500 转/分钟，高速匀浆5 min水浴加热至40℃；4000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用3.3.4干酪称取经切细、过10目圆孔筛混匀的试样5g置于50 mL离心管中，加2 mL水和30 mL甲醇；用高速均质器在 9500r/分钟，高速匀浆5 min；超声提取30 min；在6000r/分钟下离心15 min，收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。