中药中黄曲霉毒素检测方法研究

测黄曲霉毒素方法：一．（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（40:18:42）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.8ml/min进样量：20ul(2)色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=0.5:0.125: 0.5:0.125 (ng/ml)533 色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=5: 125: 5: 125 (ng/ml)602 色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=10: 2.5: 10: 2.5 (ng/ml)603（二）（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（40:18:42）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.5ml/min进样量：20ul（2）色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=0.5:0.125: 0.5:0.125 (ng/ml)544 色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=1:0.25: 1:0.25 (ng/ml)545色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=1:0.25: 1:0.25 (ng/ml) cromasil150柱604（三）（1）色谱条件色谱柱：依利特C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（40:18:42）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.3ml/min进样量：20ul（2）色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=0.5:0.125: 0.5:0.125 (ng/ml)594 (四)（1）色谱条件（到此方法时，荧光灯的灯能量快不行了。

峰面积也受影响了。

）色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（30:14:56）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.8ml/min进样量：20ul（2）色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=0.5:0.125: 0.5:0.125 (ng/ml)534 色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=1:0.25:1:0.25 (ng/ml)535 色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=10:2.5:10:2.5 (ng/ml)598（五）（1）色谱条件（从这一步开始，换了新的荧光灯）色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（30:14:56）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.6ml/min进样量：20ul（2）色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=10: 2.5:10:2.5 (ng/ml)611（六）（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（30:14:56）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.5ml/min进样量：20ul（2）色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=5: 1.25:5:1.25. (ng/ml)608 色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=10: 2.5:10:2.5(ng/ml) cromasil150柱609（七）（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（30:14:56）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.3ml/min进样量：20ul(2)色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=1:0.25:1:0.25 (ng/ml).597（八）（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：水（45:55）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.8ml/min进样量：20ul（2）色谱图标品浓度B1：B2：G1：G2=5:1.25:5:1.25 (ng/ml)538 陈皮样品色谱图（一）（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：乙腈：水（30:14:56））荧光检测器：激发波长365nm，发射波长450nm；光化学柱后衍生法流速：0.6ml/min进样量：20ul（2）陈皮色谱图2个重复616617（二）（1）色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱，150*4.6mm，5um流动相：甲醇：水（45:55）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长455nm；光化学柱后衍生法流速：0.8ml/min进样量：20ul（2）陈皮色谱图541（十）分析结果一览表结论：药典中关于黄曲霉毒素的测定法，步骤比较简单。

黄曲霉毒素的检测和分析研究黄曲霉毒素是由黄曲霉属真菌产生的一种毒素，对人和动物具有强烈的毒性和致癌性，对食品安全和人类健康构成了威胁。

因此，开展黄曲霉毒素的检测和分析研究具有重要的现实意义。

本篇文章将从黄曲霉毒素的危害、检测方法、分析研究等方面进行探讨。

一、黄曲霉毒素的危害黄曲霉毒素是一种多环芳烃类毒素，具有高度的毒性和致癌性。

其可引起急性或慢性中毒，主要症状包括恶心、呕吐、腹痛、腹泻、头痛、发热、肝肾损伤等。

而长期暴露于黄曲霉毒素环境下，还可能导致肝、胃、肠道、肺等多种癌症的发生。

因此，黄曲霉毒素对人和动物的健康都构成了巨大的威胁。

此外，黄曲霉毒素还对食品安全产生了负面影响。

黄曲霉毒素污染的食品，如玉米、花生、小麦等，可能会被误食，导致人类健康问题。

因此，黄曲霉毒素的检测和分析研究对于保护食品安全和人类健康至关重要。

二、黄曲霉毒素的检测方法为了确保食品安全和人类健康，需要对食品中的黄曲霉毒素进行检测。

目前，常用的检测方法主要有生物检测法和物化检测法两种。

1.生物检测法生物检测法是通过对特定微生物的反应来检测样品中黄曲霉毒素含量的方法。

常见的生物检测法包括小麦胚芽发芽试验、日本葡糖酸钠涂抹试验、蝎尾鱼毒素试验、酵母荚膜实验等。

这些方法可以通过观察生物体的反应来测定样品中的黄曲霉毒素含量，但是存在较大的误差和不确定性，需要在实验操作和数据处理方面做出很多努力。

2.物化检测法物化检测法是通过对样品所含黄曲霉毒素的物理和化学特性进行分析，确定样品中黄曲霉毒素的含量。

常见的物化检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、液质联用法、电化学法、荧光光谱法等。

物化检测法具有检测快速、准确性高等优点，是目前应用最广泛的检测方法。

三、黄曲霉毒素的分析研究黄曲霉毒素的分析研究对于深入了解其毒性机理、探索其防治方法具有关键作用。

目前，黄曲霉毒素的分析研究主要从以下几个方面展开：1.黄曲霉毒素的合成对黄曲霉毒素进行人工合成，可以深入了解其结构和毒性机理，并探索新的防治方法。

世界最新医学信息文摘 2016年第16卷第98期 119投稿邮箱：sjzxyx88@·医学检验·0 引言作为一类化学结构类似的化合物，黄曲霉毒素也属于主要由黄曲霉（aspergillus flavus）、寄生曲（a.parasiticus）产生的次生代谢产物。

一般情况下，土壤、动植物、坚果等中均有存在黄曲霉毒素的可能性，尤其是会对花生、玉米等粮油产品造成污染。

黄曲霉毒素有一定的毒性，尤其是黄曲霉毒素B1所具有的毒性非常大，如果人们食用了被黄曲霉毒素污染的食物，则会对人类身体健康造成严重的威胁[1]。

由于受到一些因素的影响，如未按照要求合理保存导致受潮等情况，就会有使中药材被黄曲霉毒素污染的可能性。

为了确保人们所使用的中药材是安全的，就有必要准确地检测出中药材中黄曲霉毒素的含量。

本研究对经常使用的中药材黄曲霉毒素检测方法中的参数实施改良和优化，旨在探寻能够对中药材黄曲霉毒素进行准确检测的检测方法。

现把具体实验研究情况汇报如下。

1 材料和方法1.1 所应用的试剂与仪器选择一级纯化水；所采用的甲醇、乙腈都为色谱纯；所应用的碘都为分析纯；选用含量为1.067µg/ml 的黄曲霉素B1、含量为0.308µg/ml 的黄曲霉素 B2、含量为1.046µg/ml 的黄曲霉素G1、含量为0.296µg/ml 的黄曲霉素G2的黄曲霉毒素混合对照品；选用中药原药材——陈皮；ToxinFast ®免疫亲和柱；所应用的高效液相色谱系统为安捷伦1260液相色谱系统；VCETOR PCX 柱后衍生系统。

1.2 所设置的色谱条件色谱柱设定为PhenomenexC18(250×4.60mm，5µ)；所采用的流动相为常见的流动相——乙腈-甲醇-水(比例为35：10：55)；所设定的流速为每分钟0.8毫升。

所设定的柱温为30℃；所采用的衍生溶液为浓度为0.05%碘溶液；衍生化泵流速为每分钟0.3ml/；衍生反应器的温度设定为70℃；荧光检测器激发波长设定为365nm，荧光检测器激发发射波长设定为450nm；进样量定为2µl。

中药材中黄曲霉毒素的测定方法优化及验证（ HPLC-FLD）2云南白药集团股份有限公司，云南昆明 650500摘要：目的：建立一个用液相色谱法测定中药材中黄曲霉毒素含量的方法。

方法：色谱柱：Agilent XDB-C18(5μm，4.6×250mm)；流动相: 甲醇-乙腈-水（30:16:54）；流量: 0.8 ml/min；荧光检测波长:激发波长360nm,发射波长450nm；柱温:30 ℃。

结果：根据药材基质的不同，优化得出相应满足方法要求的前处理方法并进行了验证。

结论：优化后方法可用于中药材中黄曲霉毒素含量的测定。

关键词：黄曲霉毒素；基质效应；FLD检测器；方法确认黄曲霉毒素（aflatoxins，AFTs）是黄曲霉和寄生曲霉等菌种产生的次生代谢产物[1]，毒性极强，可对肝脏造成不可逆的损害，还严重损害其他多种组织器官，并能致癌、致畸、致细胞突变[2]。

中药的基质背景复杂，色素黏液质及中药中不同有效成分都会给AFTs检测带来不同程度的影响，检测中容易出现假阳性结果，故亟需建立适用于中药检测的特殊前处理方式及结果校正曲线等新的AFTs 检测方法研究。

1仪器与材料1.1 样品：陈皮、肉豆蔻、延胡索、地龙、僵蚕、全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫、九香虫、槟榔、莲子、胖大海、大枣、麦芽、远志、马钱子、薏苡仁、柏子仁、桃仁、酸枣仁、使君子、决明子1.2 仪器：美国Agilent液相色谱仪1260(FLD检测器)。

1.3试剂乙腈、甲醇：色谱级；去离子水；氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钾：分析纯。

黄曲霉毒素混合对照品：中国食品药品检定研究院。

2方法与结果2.1色谱条件以C18键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相；采用柱后衍生法检测，光化学衍生法：光化学衍生器（254nm）；检测器为FLD，λex =360nm，λem=450nm。

2.2样品处理取样品粉末15g，精密称定，置于离心管中，加氯化钠3g，精密加入75ml 70%甲醇溶液[3]，11000r/min均质2分钟，离心5分钟，取上清液15ml，置50ml量瓶中加水定容，摇匀，离心，用玻璃纤维滤纸过滤[3]，量取续滤液20ml，通过免疫亲合柱，用淋洗缓冲液20ml洗脱，洗脱液弃去，使柱子暴露在空气中5min，将水吹尽并用快速滤纸擦干亲和柱内壁，加1.5ml甲醇洗脱并收集于2ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。