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高效液相色谱-串联质谱法测定保健食品中牛磺酸康明芹;陈明岩;王岸英;张蕊蕊;徐立明;李荣荣【摘要】采用高效液相色谱-串联质谱法测定保健食品中牛磺酸的含量.称取保健食品样品适量(精确至0.001 g),制成溶液并加水稀释至一定体积,液体制剂可直接用水稀释.所得样品溶液分别用于分析.以BEH Amide色谱柱为分离柱,以不同体积比的乙腈(A)和水(B)的混合液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾负离子源多反应监测模式检测.牛磺酸的质量浓度在0.01～2.0 mg·L-1内与其对应的峰面积呈线性关系,测定下限(10S/N)为1.0 mg·kg-1.方法用于保健食品样品的分析,加标回收率为94.0％～102％,测定值的相对标准偏差(n=6)为0.67％～3.9％.%HPLC-MS/MS was applied to the determination of taurine in health-care food.An appropriate amount of the health-care food sample was weighed (to the nearest 0.001 g) and dissolved.The solution was diluted to a definite volume with water.Liquid sample could diluted with water directly.The sample solution obtained was used for analysis.BEH Amide chromatographic column was used as stationary phase,and mixtures of acetonitrile (A) and water (B) in different ratios were used as mobile phase in gradient elution.Mode of ESI-and multireaction monitoring mode were adopted in MS/MS.Linear relationship between values of peak area and mass concentration of taurine was kept in the range of 0.01-2.0 mg · L-1,with lower limit of determination (10S/N) of 1.0 mg · kg-1.The proposed method was applied to the analysis of health food samples,giving values of recovery and RSD's (n=6) in the ranges of 94.0％-102％ and 0.67％-3.9％respectively.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2018(054)002【总页数】4页(P153-156)【关键词】高效液相色谱-串联质谱法;牛磺酸;保健食品【作者】康明芹;陈明岩;王岸英;张蕊蕊;徐立明;李荣荣【作者单位】吉林出入境检验检疫局,长春130062;吉林出入境检验检疫局,长春130062;吉林出入境检验检疫局,长春130062;吉林大学公共卫生学院,长春130021;吉林出入境检验检疫局,长春130062;吉林出入境检验检疫局,长春130062【正文语种】中文【中图分类】O657.63保健食品属于食品的特殊种类，具有某些特定保健功能，一般适宜于特定人群食用，不以治疗疾病为目的，并且对人体不产生任何急性、亚急性或者慢性危害［1］。
牛磺酸含量测定原理牛磺酸是一种重要的营养物质，对于人体的健康具有重要的作用。
那么，如何进行牛磺酸含量的测定呢？本文将介绍牛磺酸含量测定的原理和方法。
首先，我们需要了解牛磺酸的化学性质。
牛磺酸化学名为2-氨基乙磺酸，是一种含有氨基和磺酸基的有机化合物。
它是一种无色结晶，可溶于水和酒精，不溶于醚和醋酸。
牛磺酸在人体内主要存在于肌肉、心脏、脑组织等处，对于人体的正常生理功能发挥着重要的作用。
牛磺酸含量的测定方法有很多种，其中比较常用的是高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）。
下面我们将分别介绍这两种方法的原理。
高效液相色谱法是一种基于溶液中物质在固定相和流动相之间分配系数不同而实现分离的方法。
在测定牛磺酸含量时，我们可以通过选取合适的固定相和流动相，使得样品中的牛磺酸与固定相之间有较强的相互作用，从而实现其分离。
通过检测样品中牛磺酸峰的面积或峰高，可以计算出样品中牛磺酸的含量。
气相色谱法是一种基于物质在气体流动相中传质速率差异而实现分离的方法。
在测定牛磺酸含量时，我们可以通过将样品中的牛磺酸转化为易于挥发的衍生物，然后将其注入气相色谱仪进行分析。
通过检测样品中牛磺酸衍生物峰的面积或峰高，可以计算出样品中牛磺酸的含量。
除了高效液相色谱法和气相色谱法之外，还有其他一些测定牛磺酸含量的方法，如比色法、荧光法、质谱法等。
这些方法各有特点，可以根据实际需要选择合适的方法进行测定。
需要注意的是，在进行牛磺酸含量测定时，我们需要使用标准品进行定量分析。
标准品是已知浓度的牛磺酸溶液，通过与标准品进行比较，可以确定待测样品中牛磺酸的含量。
总结起来，牛磺酸含量的测定方法有很多种，其中比较常用的是高效液相色谱法和气相色谱法。
通过选择合适的方法和使用标准品进行定量分析，我们可以准确地测定牛磺酸含量。
这对于了解牛磺酸在人体内的水平以及评估其对人体健康的影响具有重要意义。
希望本文能够对读者了解牛磺酸含量测定原理有所帮助。
牛磺酸含量测定方法牛磺酸（Taurine）是一种非必需氨基酸，存在于人体和许多动物的组织中，尤其是在肌肉、大脑、心脏和眼睛中含量较高。
牛磺酸在维持生理功能、调节酶活性、参与脂类代谢、抗氧化等方面具有重要作用。
因此，准确测定牛磺酸的含量对于研究其在生物体内的功能以及制定适当的剂量和用药路线至关重要。
目前常用的牛磺酸含量测定方法主要有以下几种：1.高效液相色谱法（HPLC）HPLC方法是最常用的牛磺酸含量测定方法之一、该方法使用色谱柱将样品中的牛磺酸与其他组分分离，并通过检测器（如紫外检测器）测定牛磺酸的峰面积或峰高，进而计算出牛磺酸的含量。
HPLC方法具有高灵敏度、高精确度和高重复性的优点，适用于多种样品的检测，但需要耗费较长的时间。
2.气相色谱法（GC）GC方法使用气相色谱柱将样品中的牛磺酸分离，并通过检测器（常用的是质谱检测器）测定牛磺酸的峰面积或峰高，然后通过校准曲线计算出其浓度。
GC方法的优点是分离效果好、分析速度快，但需要将样品进行预处理，如甲醇提取和衍生化等。
3.生化分析法生化分析法是目前常见的一种快速测定牛磺酸含量的方法。
该方法使用牛磺酸酶（Taurine aminohydrolase）作用于样品中的牛磺酸，将其水解为丙醛胺（Acetaldehyde amine）和氨，然后通过比色反应测定产生的丙酮酸（Pyruvic acid）的含量来计算牛磺酸的浓度。
生化分析法操作简单、快速，但需要使用特定的酶和反应物，对样品的性质有一定要求。
4.核磁共振法（NMR）核磁共振法是一种非常准确的牛磺酸含量测定方法。
该方法通过测定样品中的^1H或^13C核磁共振信号来确定牛磺酸的浓度。
核磁共振法需要使用昂贵的仪器并对操作人员有一定的技术要求，但其结果具有较高的准确性和可靠性。
总结来说，测定牛磺酸含量的方法有高效液相色谱法、气相色谱法、生化分析法和核磁共振法等。
在选择具体方法时，需要综合考虑样品特性、分析目的、仪器设备和实验人员的技术要求，并进行合适的方法验证和准确性评估。
牛磺酸含量测定方法牛磺酸含量测定方法牛磺酸含量测定方法1.牛磺酸提取1.1前期处理将原料洗净，称取 50g，按1∶3 加入蒸馏水，匀浆并调pH为5.5。
1.2自溶匀浆液于55 ℃的水浴锅内，调 pH5.5，放置 22 ~24h。
1.3提取匀浆液置于80 ℃的水浴锅内，加热。
提取 50 min，四层细纱布过滤。
1.4除蛋白将提取液浓缩后用1∶1 的盐酸调节 pH3.5～4.0，4500 r/min 离心 15 min，除酸性蛋白；再用 5 mol/L 的氢氧化钠调节 pH 至 8.5～9.0，4500r/min离心20min去除碱性蛋白。
1.5 脱色浓缩每100ml加入2~3g活性炭脱色，过滤。
旋转蒸发仪浓缩到50ml，调pH到4.5，待纯化后测定。
2.纯化及牛磺酸含量测定2.1离子交换柱的制备将树脂研磨,置于烧杯中蒸馏水反复冲洗; 2. 0mol·L - 1NaOH 溶液浸泡24 h, 用蒸馏水洗至中性; 2. 0 mol·L - 1 HCl溶液浸泡24 h, 再用蒸馏水洗至中性, 4℃保存备用。
测定样品前,用玻璃棉塞住自制离子交换柱小口, 树脂填充高度为4 cm, 除去管中气泡后, 再用玻璃棉塞住大口待用。
2. 2显色剂配置1. 0 mol·L - 1的醋酸钠溶液10. 0 mL, 加入0. 4 mL乙酰丙酮, 再加入1. 0 mL甲醛, 加蒸馏水稀释至25. 0 mL, 当日配用。
3.含量测定吸取10 mL置于阳离子树脂交换柱, 用蒸馏水洗脱, 每次5 mL , 共3次。
收集此溶液25mL , 再从中取2 mL溶液加入1 mL显色剂, 100℃水浴中加热15 min , 冷却至室温, 于400 nm波长下测定吸光度可确定牛磺酸的含量。
柱前衍生法测定保健液中牛磺酸含量摘要：利用邻苯二甲醛(OPA)与牛磺酸定量反应生成邻苯二甲醛牛磺酸衍生物,采用高效液相色谱法分离并测定口服液中牛磺酸的含量,结果衍生化反应迅速,分离条件好,在0~50ng线性关系良好,检测限为20ng,回收率可达到90％以上,该法灵敏度高,迅速,高效。
关键词：柱前衍生法高效液相色谱法牛磺酸含量牛磺酸广泛分布于动物组织细胞内,海生动物含量尤为丰富,哺乳类组织细胞内亦含有较高的牛磺酸,特别是神经、肌肉和腺体内含量更高,是机体内含量最丰富的自由氨基酸。
牛磺酸也是细胞不可缺少的因子,特别是肝脏、心脏、大脑、脾脏等细胞中都特别需要牛磺酸。
牛磺酸是一种非蛋白氨基酸。
牛磺酸不参与蛋白质的合成,与胱氨酸、半胱氨酸的代谢有密切关系,人体合成牛磺酸的能力很低,必须从食物中获得,是人体必需的一种氨基酸。
天然的牛磺酸在脑内的含量丰富、分布广泛,能明显促进神经系统的生长发育和细胞增殖、分化,且呈剂量依赖性,在脑神经细胞发育过程中起重要作用。
如果补充不足,将会使幼儿生长发育缓慢、智力发育迟缓。
牛磺酸与幼儿、胎儿的中枢神经及视网膜等的发育有密切的关。
补充适量牛磺酸不仅可以提高学习记忆速度,而且还可以提高学习记忆的准确性,并且对神经系统的抗衰老也有一定作用。
牛磺酸无共轭双键,在紫外区无吸收,需经衍生后方可产生吸收从而进行含量测定[1],本法采用邻苯二甲醛(OPA)与牛磺酸定量反应生成邻苯二甲醛牛磺酸衍生物,利用其有荧光这一特性,对其进行检测,结果获得了良好的灵敏度与回收率。
1、材料与方法1.1 检测仪器LC20液相色谱仪、荧光检测器（日本岛津公司）,CAPELL PAK C18色谱柱（15cm×0.46 mm,5 μm）（日本资生堂）,ALC-1100 电子天平（德国赛多利斯公司）。
1.2 试剂试药邻苯二甲醛(OPA,分析纯,国药集团化学试剂有限公司);甲醇(色谱纯,天津康科德科技有限公司);乙硫醇(分析纯,国药集团化学试剂有限公司);乙腈(色谱纯,美国天地);0.4mol/L硼酸钠缓冲液(2.48g硼酸和1.41g氢氧化钠,加水溶解并定容至100mL);衍生化试剂(取OPA0.1g,加0.1mL乙硫醇,0.4mol/L磷酸钠缓冲液定容至100mL);牛磺酸(生化试剂)。
食品安全国家标准食品中牛磺酸的测定1 范围本标准规定了食品中牛磺酸的测定方法。
本标准适用于婴幼儿配方食品，乳粉，谷物类制品、豆粉、豆浆，含乳饮料，特殊用途类饮料，风味饮料，固体饮料，果冻中牛磺酸的测定。
第一法 OPA 柱后衍生法2 原理试样用偏磷酸溶液溶解，经超声波振荡提取、离心、微孔滤膜过滤后，通过钠离子色谱柱分离，与邻苯二甲醛（OPA）衍生反应，用荧光检测器进行检测，外标法定量。
3 试剂和材料注：除非另有规定，所用试剂均为分析纯。
试验用水应符合GB/T 6682规定的一级水规格。
3.1试剂3.1.1偏磷酸。
3.1.2柠檬酸三钠。
3.1.3苯酚。
3.1.4硝酸。
3.1.5甲醇：色谱纯。
3.1.6硼酸。
3.1.7氢氧化钾。
3.1.8邻苯二甲醛（OPA）。
3.1.9 2-巯基乙醇。
3.1.10聚氧乙烯月桂酸醚（Brij-35）。
3.2试剂配制3.2.1偏磷酸溶液（20 g/L）：称取10.0 g 偏磷酸，用水溶解并定容至1000 mL。
3.2.2柠檬酸缓冲液：称取19.6 g柠檬酸三钠，加950 mL水溶解，加入1 mL苯酚，用硝酸调pH 值至 3.10～3.25，经0.45μm微孔滤膜过滤。
3.1.3柱后荧光衍生溶剂（邻苯二甲醛溶液）3.2.3.1 硼酸钾溶液（0.5 mol/L）：称取30.9 g硼酸，26.3 g氢氧化钾，用水溶解并定容至1000 mL。
3.2.3.2 邻苯二甲醛衍生溶液：称取0.60 g邻苯二甲醛，用10 mL甲醇溶解后，加入0.5 mL 2-巯基乙醇和0.35 g Brij-35，用0.5 mol/L的硼酸钾溶液定容至1000 mL，经0.45 μm微孔滤膜过滤。
临用前配制。
3.3 标准品牛磺酸标准品：纯度≥99%，CAS: 107-35-7。
3.4牛磺酸标准溶液的配制3.4.11mg/mL牛磺酸标准储备溶液：准确称取0.1000 g牛磺酸标准品，用水溶解并定容至100 mL。
饲料中牛磺酸含量测定方法牛磺酸（分子式NH2CH2CH2SO2OH，分子量125）是一种氨基磺酸，牛磺酸除了能促进大脑的正常发育外，还能增强机体的免疫力。
牛磺酸常用的含量测定方法有：邻苯二醛柱后衍生、2,4-二硝基氟苯柱前衍生、邻苯二醛柱前衍生高效液相色谱法。
本文采用2,4-二硝基氟苯柱前衍生高效液相色谱法测定饲料中牛磺酸的含量。
1.原理：采用2,4-二硝基氟苯为柱前衍生化试剂与牛磺酸在pH9.0的碳酸氢钠溶液中定量进行化学衍生反应，缩合成二硝基苯氨基酸，在反相色谱柱上进样分离，用紫外检测器进行检测。
2.检测方法2.1试剂：牛磺酸对照品（中国药品生物制品检定所）、乙腈（色谱纯）、超纯水、2,4-二硝基氟苯（分析纯）、碳酸氢钠（分析纯）、磷酸二氢钾（分析纯）、硫酸锌（分析纯）、磷酸盐缓冲液pH7.0（取磷酸二氢钾6.8g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液291ml，用水稀释至1000ml，即得）。
2.2 仪器：SHIMADZU-10A液相色谱仪（UV检测器）、离心机、超声仪。
2.3色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Phenomenex C18 Synergi 4u Hydro-RP 80A（150×4.6mm,4um）；流动相：磷酸盐缓冲液（pH7.0）-乙腈-水（70:20:10）；检测波长：360nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样量10ul。
理论板数按牛磺酸衍生物峰计算不低于1500，牛磺酸衍生物与2,4-二硝基氟苯乙腈峰的分离度应大于1.5。
2.4溶液的制备2.4.1对照品溶液的制备：精密称取牛磺酸对照品10mg，加水制成每1ml含0.5mg的溶液，精密量取2ml，按2.4.3方法操作，即得。
2.4.2供试品溶液的制备：精密称取样品约5g于具塞锥形瓶中，精密加入25ml水，超声15分钟溶解，精密加入0.1mol/L盐酸溶液10ml，摇匀，加入15g/L硫酸锌溶液5ml，摇匀，精密加入10ml水，摇匀，4000r/min离心20分钟，取上清液过滤，取续滤液2ml，按2.4.3方法操作，即得。
