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猪防御素的研究进展及其在饲料中的应用

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防御素抗菌肽对断奶仔猪生产陛能的影响试验

防御素抗菌肽对断奶仔猪生产陛能的影响试验

能量更多地利用到对生产性能的提高。对仔猪腹
泻 率 的影 响 ， 能 是 因为 防御 素 有抗 细 菌 ， 有 抗 可 也
寄生虫的作用 ， 仔猪的免疫力提高 。 所得 出的结论
也与 Ｂ ｌ、 刘发 等学 者 的研究 结果 基本 相符 。有 ａ 温 ｓ 关 猪源 抗 菌肽 的分子 机 理还 不 是 很清 楚 ，所 以对 本 试 验 产生 的结 果 也 没 有 确 切 的分 子 机 理 解 释 ， 具体 机理 有待 进一 步研 究 。 口
试 验期 ３ ０天 ， 行饲 养试 验 。 进
表 １ 基 础 日粮 及 营 养 水 平
越多 的病原菌 已对原有抗生素产生耐药性 ，因此 用抗 菌肽替代抗生素 的研究便就更为显得重要 。
许 多研 究 表 明抗 菌 肽 可 提 高 动 物 的抗 病 能 力 、 促
进 动 物生 长发 育 ， 而且不 易产 生耐 药性 。
南名放虏廛
ｄ ｉ ．９ ９ｊｓ ｎ１ ０ － ９ ７２ １ ． ．０ ｏ：０３ ６ ／ｉ ．０ ６ ４ ０ ．０ ０ ０ ４ ｌ ．ｓ ２ ３
２２ ０ 年第３ （ 第１ 期） １ 期总 ６ ９
防御 素抗菌肽对 断奶仔猪 生产 陛能的影响试验
王 菊 芳 （ 南省 冷 水 江 市 畜 牧 水 产局 ， 南 娄 底 ４７ ０ ） 湖 湖 １５０
摘 要： 为研 究不 同水平 的 防御 素抗 菌肽 添加 量 对仔猪 的生 长性 能 的影 响 。 验选 用 ２ 试 ８日龄 、 健康 状 况 良好 、 重相 体
近 的杜 长大三 元杂 交仔猪 ９ ０头 ， 机 分 成 ３个 处 理 ： 对 照 组 ， 试 验 组 。 组 ３个 重 复 ， 照 组 仔 猪 饲 喂 随 １个 ２个 每 对 基 础 日粮 ， 验 Ｉ、 Ｉ 仔 猪 分 别 饲 喂 添 加 ０５ １ 防御 素 抗 茵 多肽 的 试 验 日粮 。 结 果 表 明 ， 试 Ｉ组 ．％、 ％ 日粮 中 添加 防御

重组防御素对母猪生产性能的效应试验

重组防御素对母猪生产性能的效应试验
２ ４
养猪 Ｓ ＷＩ Ｎ Ｅ Ｐ Ｒ Ｏ Ｄ Ｕ Ｃ Ｔ Ｉ Ｏ Ｎ（ １ ）
２ ０ １ ４
重 组 防 御 素 对 母 猪 生 产 性 能 的 效 应 试 验
邓 杰 文 ， 陈 荣 ， 徐 亮 ， 赵 文婧 （ １ ． 湖南省常德市枫树乡四通养殖场 ， 湖南 常德 ４ １ ５ ０ ０ ０ ； ２ ． 广州和仕康生物技术有限公司， 广东 广州 ５ １ ０ ０ ０ ０ ）
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ３ — ０ ９ — ３ ０收 稿 ， ２ ０ １ ３ — １ ０ — ２ ９修 回 基金项 目： 国家科技 型中小企业技术创新基金 （ １ ２ Ｃ ２ ６ ２ １ ４ ４ ０ ５ ３ ９ ０ ）
御素 ６ ５元／ 千克 ， 仔猪 ２ ｌ天断奶 ， 仔猪 ＇ ３ 时行情 为 ２ － ３元／ 千克， 断奶仔猪 ３ ０ ０元／ 头： ２ ．依据表 １数据分析经济效益 ：防御 素开 支＝ （ ３ ｘ ３ ５ ｘ ３ ６ ／ １ ０ ０ ０ ） ￣ｘ ６ ５ ７ Ｌ／ 千克× ２千克／ 吨＝ ４ ９ １ ． ４元 ； 多增重 收入＝ ［ （ ２ ６ １ ． ６ ３ — ２ ５ ６ ． ６ ７ ） ｘ ２ １ ｘ ３ ２ ６ ／ １ ０ ０ ０ ］ 千克ｘ ２ ３元／ 千 克＝ ７ ８ ０ ． ９ ９ 元； 降低死亡率收入＝ （ ３ ６ ７ — ３ ２ ６ ） 头ｘ ３ ０ ０元／ 头＝ １ ２ ３ ０ ０元。
［ １ 】 Ｓ ｅ ｅ ｂ ａ ｈ Ｓ ， Ｓ ｕ ｒ ｅ ｓ ｈ Ａ， Ｚ ｈ ｕ ｏ Ｓ ， ｅ ｔ ｎ ｆ ． Ｄ ｅ ｆ ｅ ｎ ｓ ｉ ｎ ｓ ｋ ｎ ｏ ｗ ｌ ｅ ｄ ｇ ｅ ｂ ａ ｓ ｅ ： Ａ
１ ． １ 试 验 材 料
注： 同行 肩标 不 同大 写 字母 表 示 差异 极 显 署 （ 尸 ≮ Ｏ ． ０ １ ） ， 不 同小 防御素 由广』 、 ｉ ＇ ｌ ￣ Ｎ 仕康生物技术有 限公司提供 ， 写字母表示差异显著（ Ｐ ＜ Ｏ ． ０ ５ ） ， 无字母表 示差异不显著（ 尸 ＞ Ｏ ． ０ ５ ） 。 商品名为防御素 Ｈ ６ ０ 。 ２ － ２ 经济效益分析 １ ． ２ 试 验 动 物 与 试 验 方案 结果显示 ，与对 照组相 比， ３ ６头防御素 组母猪 试验于 ２ ０ １ ３ 年 ４月 １ ５日至 ５ 月２ ０日 在湖南常 增收 １ ２ ５ ８ ９ ． ５ ９ 元， 防御 素投入为 ４ ９ １ ． ４ ０ 元， 投入产 德四通养殖场进行。 选择 ３ 胎健康、 年龄及体况相近 出比约为 １ ： ２ ５ ． ６ ２ ， 详见表 ２ 。此外， 防御素组母猪发 的妊娠母猪 ７ ２ 头， 随机分成 ２ 组， 每组 ３ ６头、 设 ６个 病率显著低于对 照组母 猪，这也部分减少 了由母猪 重复， 每个重复 ６ 头母猪 。 从预产期前 １ ５ 天开始 ， 对照 疾病防治带来的开支， 还会增加经济效益 。 组喂基础饲粮， 试验 组在基础饲粮中添加 ０ ． 防御素 表 ２ 母猪饲粮中添加防御素 的经济效益分析 元 Ｈ ６ ０ ， 试验期 ３ ５ 天， 至仔猪 ２ １日 龄 断奶结束 。所有母 猪 自由采 食和饮水， 试验期间用药方式 、 给药剂量 、 免 疫程序 、 管理措施均按猪场原有方案进行。

猪β防御素研究进展

猪β防御素研究进展
dvance on Procine 卩 Defensins
LIANG Yu, ZHANG Kun, WANG Mengyun, ZHAO Xinhao, LlChunli" (College of Animal Science and Veterinary Medicine , Henan Agricultural University ,
及环境污染等问题。文章介绍了猪！防御素的结构特征、表达特异性及生物学功能，主要综述了外源刺激对！防御
素表达的影响及其作用机制！
明外源！防御素作为饲料添加剂在仔猪生产中的效果，旨在为猪！防御素的深
入研究及其在生猪健康养殖中的应用
关键词：猪！防御素；免疫；表达;应用
中图分类号：S828
文献标识码：A
Doi： 10. 16431/j. cnki. 1671-7236. 2019. 08 019
中国畜牧兽医 2019,46(8)：2346-23)3 China Animal Husbandry & Veterinary Medicine
猪卩防御素研究进展
梁 "，张 坤，王梦云，赵新豪，李春丽
（河南农业大学牧医工程学院，郑州450046）
摘 要：！防御素是猪体内分泌的一类抗菌肽，广泛分布于各个组织中，在抵抗病原入侵和免疫调节中发挥着重要
8期
梁 锤等：猪P2御素研究进展
in healthy pig breeding. Key words: porcine 0 defensins ； immune ； expression ； application
收稿日期：2019-01-23 基金项目：国家自然科学基金项目（1101694）河南省高校创新人才支持计划（14HASTIT021） 作者简介：梁 饪（1995-），女，河南郑州人，硕士，研究方向：动物遗传育种,E-mail:1053983727@qq. com "通信作者：李春丽（1971-）,女，河南洛阳人，博士，教授，研究方向：猪的抗病育种,E-mail:hnclli@ 163. com

猪β-防御素129和114的表达及其功能研究进展

猪β-防御素129和114的表达及其功能研究进展

猪β-防御素129和114的表达及其功能研究进展李菊;黄晓刚;韩贝贝;刘松柏;高凤磊;李莉;赵云翔;张守全;卫恒习【期刊名称】《中国畜牧杂志》【年(卷),期】2024(60)3【摘要】防御素是广泛分布于脊椎动物体内的高度保守的小型阳离子肽,具有抵抗病原微生物的能力,并在先天性免疫与适应性免疫中发挥重要作用。

猪β-防御素129(Porcine β-Defensin 129,pBD129)和猪β-防御素114(Porcine β-Defensin,pBD114)广泛分布于猪的各个器官和组织中,它们除抵抗病原微生物、调节机体免疫功能外,还对猪的繁殖与发育具有重要作用。

近年来研究表明,pBD129和pBD114在公猪附睾中有较高的表达量,并参与精子的成熟、运动和受精过程,对雄性动物的精子功能和受精能力具有重要影响。

本文对pBD129和pBD114在猪体内的表达分布情况、参与调节的信号通路以及相关生物学功能等进行综述,旨在为pBD129和pBD114的功能研究和应用提供理论和参考依据。

【总页数】6页(P73-78)【作者】李菊;黄晓刚;韩贝贝;刘松柏;高凤磊;李莉;赵云翔;张守全;卫恒习【作者单位】华南农业大学动物科学学院;广东农工商职业技术学院热带农林学院;佛山科学技术学院生命科学与工程学院;岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心【正文语种】中文【中图分类】S828.2【相关文献】1.防御素基因在乌金猪与约大乌猪组织中的表达及东亚飞蝗抗菌活性物质对防御素基因表达的调节作用2.β-防御素在金华猪和长白猪肠道中表达规律的研究3.家畜防御素体内组织表达及体外表达研究进展4.猪β防御素3表达载体的构建及其\r 在大肠杆菌中的表达5.猪β-防御素的表达及其生物学功能研究进展因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

防御素对母猪生产性能及仔猪生长性能的影响

防御素对母猪生产性能及仔猪生长性能的影响
２ １ 第 ４期 ０２
养 猪 Ｓ Ｎ Ｒ Ｄ Ｃ ＩＮ ＷＩＥＰ Ｏ Ｕ ＴＯ
４ ５
防 御 素 对 母 猪 生 产 性 能 及 仔 猪 生 长 性 能 的 影 响
员月明 ， 莫 俊， 吴指挥 ， 汪 猜， 皮灿 辉
５０６） １６ ３ （ 广州和仕康 生物技术有 限公司， 广东 广州
中 图 分 类 号 ：８ ６７ ￥ １． 文献标志码 ： Ａ
１ 材 料 与 方 法 ２ 结 果 分 析 １１ 试 验 材 料 ． ２１ 基 因重 组 防御 素 对母 猪 生 产性 能 的影 响 ． 基 因重 组 防御素 由广 州和 仕康 生物 技 术有 限 从 表 １ 以 看 出 ， 对 照 组 初 生 仔 猪 死 亡 率 为 可 公司提供 ， 品名 为防御 素 Ｈ ０ 母猪用） Ｈ １ 仔 ６ ０ 基 因重组 防 御素 组为 ２８％， 商 ６（ 和 ０（ ． ％， ４ ． ０ 降低 ５ ． ％， ６５ ２ 猪 用 ） 。
文 章 编 号 ：０２ １５ （０ ２０ — ０５ ０ １ ０ — ９ ７２ １）４ ０ ４ — ２
摘 要： 为研 究防御素对母猪 生产 性能及 仔猪生长性 能的影响 ， 选择 ３ ５胎健康 状况 良好 、 ～ 体况相 近 的母猪 ３ ６头 ， 共分娩产 出仔猪 ４ ２头 ， ２ 随机分 为对照组和基 因重组 防御 素组 ， 跟踪 记录母猪 的 生产性 能及 仔猪 的生长 性能。结果显 示 ， 因重组 防御 素组与对照组相 比 ， 生仔猪 死亡率 降低 基 初 ５ ． ％， ６２ ５ 弱仔率 降低 ２ ． ％， ６３ ６ 木乃伊 率下降 ５ ． ％， 生重增加 １ ． ％；５ 日龄仔猪 个体重增加 ６５ 初 ２ ５１ ｔ ７ １ ． ％， ２６ ８ 日增重提 高 １ ： ％， ７３ ２ 发病率 降低 ２ ． ％， ９４ ７ 成活 率提高 ８８％；８日龄 时， ．８ ３ 仔猪 个体重提 高 １ ． ％， ６８ ５ 日增重增加 ３ ．１ 发病率 降低 ２ ． ％， 活率提 高 １ ． ％。 ４１％， ５１ 成 ５ ０７ ５ 试验表 明， 防御 素能够 明显 改善母猪 的生产性 能， 同时显著提 高仔猪 的生长性能。 关键词 ： 防御素 ； 生产性 能； 生长性 能； 活率 成

β-防御素在金华猪和长白猪肠道中表达规律的研究

β-防御素在金华猪和长白猪肠道中表达规律的研究

肠 黏 膜 免 疫 ）中作 用 的研 究 较 少 Ⅲ 。 研 究 表 明 ， ５ ｊ
ｐ Ｄ一 Ｂ １和 ｐ Ｄ－ Ｂ ３基 因为 组 成 型 表 达 ， 猪 的 肠 黏 在
膜 具 有较 高 表 达 量 ； Ｂ ２基 因为 诱 导 型 表 达 ， ｐ Ｄ－ 在猪肠道 中的表达 受肠道微 生物 的影 响 ， 沙 门 如 氏菌 可 上调 体 外 培 养肠 上 皮 细 胞 系 ｐ Ｄ一 因 的 Ｂ ２基 表 达 。 金华 猪 ， 又称 “ 金华 两 头 乌 ”， 我 国著 名 的 优 是 良地 方 品 种 之 一 ， 有 肉 品质 好 、 殖 率 高 、 逆 具 繁 抗 性 强 等 优点 。原 产 丹 麦 的 长 白猪 ， 因生 长 速 度 快 、
在 动 物 呼 吸 道 、 化 道 等 上 皮 组 织 中 ， 一 类 富含 消 是 精 氨 酸 的 阳 离子 多肽 ， 有 ６～ 含 ８个 半 胱 氨 酸 组 成 的 ３～ ４个 二 硫 键 ， 成 的分 子 结 构 稳 定 。根 据 防 形 御 素 二硫 键 的 连 接 位 置 及 形 成 的 空 间 结 构 ， 将 可
均 高于 长 白猪 。３ 初 生 和 ２ 日龄 ， 华猪 十 二 指 肠 ｐ Ｄ— 因表 达 量极 显 著 高 于 长 白猪 （ ） ０ 金 Ｂ ｌ基 Ｐ＜
０ ０ ）６ 日龄 ｐ Ｄ— ． １ ；０ Ｂ ｌ基 因 在 空 肠 、 肠 和 结 肠 中 的 表 达 量 ， 华 猪 显 著 高 于 长 白 猪 （ 回 金 Ｐ＜ ０ ０ ），Ｂ ２基 因在 十二 指 肠 、 ． ５ ｐ Ｄ一 回肠 和 结肠 的表 达 量 ， 华猪 显 著 高 于 长 白猪 （ 金 Ｐ＜０ ０ ） 金 华 ．５ ，
肠 道 中的表 达 量 升 高 ，Ｂ ２基 因在 十 二 指 肠 和 空肠 中的 表 达 量 升 高 ， ｐ Ｄ－ 而在 猪 结 肠 和 回 肠 中的 表 达 量 先 下 降后 上 升 。２） ２ 、０和 ６ 日龄 时 ， 华 猪 各肠 段 中 ３种 Ｂ一防御 素 基 因的表 达 量 在 ０４ ０ 金

β-防御素的研究进展及其应用前景

一
８ 防御 素 由 ３ ～ ２个 氨 基酸 组成 ， 一 ８４ 信号 系列 和
前 区系列是 ２ ～ ２个 氨基酸 残基 其分 子 巾带有 较 ２３ 多 正 电荷 ． 问结 构 分 为疏 水 区 和带 点 区 ： 链折 空 肽 叠形 成 ３束 一 折叠 片层 结构 ， ６个保守 的半胱 氨 由
一
防御 素 主要 由哺乳 动物 的皮肤 、 膜等 上皮 细胞 黏
产 生 。通 过生 物信 息学 方法 鉴定 ． 在猪 体 内共 编码
了 ｌ 种 一 御 素 ，其 基 因 分 别 被 命 名 为 ：Ｂ 一 ～ １ 防 Ｐ Ｄ １
４、 ＰＢＤ 一１ ４、 ０ ＰＢＤ 一１ ８、 ０ ＰＢＤ 一１ ４、 ＰＢＤ 一１ ３、 ＢＤ — １ ２ Ｐ
酸 残 基 形 成 ３个 二 硫 键 稳 定 结 构 ． 由 Ｃ ｓ — ｙ５ ｙｌ Ｃ ｓ 、
防御素 、 一 Ｊ 防御素 、一 Ｂ 防御素 。其 中在 动物 科 学
领域 巾 。 一 Ｉ 防御素有较 好研究价 值 ， 菌谱较 广 ， Ｂ 抗 且 不 产生 抗 药性 和毒性 ． 因而受 到广 泛 关注 ， 为 近 成
２２ 结 构 与 功 能 的 关 系 ．
口 防御 素 是 １９ 一 ９ １年 Ｄ ａ ｎ ｉ ｍｏｄ等 ｌ首先 在 牛气 ｌ ｌ 管 黏膜 上皮 细胞 中发现 的 ． 又在 牛粒 性 白细 胞 中 后 发现了 ｌ ３种 与其高 度相似 、但 共有 系列 与 ａ 防 御 一 素 不同的 防御 素 ． 故被命 名 为 一 防御素 。 研究 发现 。
在畜 牧 业 中 的应 用 前 景
关 键词 ：一 御 素 ； 口 防 分子 结 构 ； 用 机 制 ； 物学 活 性 作 生
中图分 类 号 ： ８ ６７ Ｓ ｌ． 文 献标 识 码 ： Ａ 文 章编 号 ：０ ７ ９１ ７ ２ ０ ０ — ０ ３ ０ １０ — ５ 一（０ ９）２ ０ ２ — ３

防御素的研究进展和应用前景

DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2009.04.015 ·综述· 防御素的研究进展和应用前景刘媛媛，赵宝华近年来，在植物、昆虫、两栖类、鸟类和哺乳动物体内发现了一组具有抵抗外界微生物侵害的小分子多肽，称为防御素（defensins）。

自 1984 年从人中性粒细胞分离出HNP123 以来，已有数十种防御素陆续被发现或报道[1]。

防御素具有十分广泛的抗菌谱，对细菌、真菌、病毒等多种微生物都具有杀伤作用，尤其是哺乳动物防御素，除了对细菌、真菌、被膜病毒具有杀伤作用外，还能杀伤支原体、衣原体、螺旋体以及一些恶性肿瘤细胞。

由于防御素具有众多的生物活性，因此对于它们的研究目前也越来越受到人们的广泛关注。

现本文就防御素的结构与类型、生物活性、应用及基因工程制备做一综述。

1 防御素的结构与类型防御素是富含精氨酸残基的阳离子多肽，一般由 18 ~ 54 个氨基酸组成，相对分子质量为 4000 ~ 6000 左右，分子中含有 6 ~ 8 个半胱氨酸残基，形成 3 ~ 4 对分子内二硫键，并通过半胱氨酸分子间二硫键使肽环形成反向平行的β-片状结构，而某些防御素（如昆虫和植物防御素）还含有一个α-螺旋结构。

分子内二硫键对于维持防御素的结构稳定性具有重要作用，也是防御素抗微生物活性和细胞毒效应的重要结构基础。

根据分子内半胱氨酸的位置和连接方式、前体性质以及表达位置的差异，防御素可分为α-防御素、β-防御素、θ-防御素、昆虫防御素和植物防御素 5 种类型。

现已发现6 种人α-防御素，包括髓源性的 HNP-1、HNP-2、HNP-3、HNP-4 和肠源性的 HD-5、HD-6，而人β-防御素包括HBD-1、HBD-2、HBD-3、HBD-4、HBD-5 及 HBD-6[2]。

2 防御素的生物活性2.1 抗菌作用防御素能有效地杀灭革兰阴性细菌和革兰阳性细菌。

在体外浓度为 10 ~ 100 mg/L 的防御素即对多种细菌具有杀伤作用，而防御素在中性粒细胞中的浓度为 g/L 级，远远超过上述数值，这表明在体内防御素可能具有更强的杀菌活性，目前研究发现防御素对革兰阳性细菌的杀伤能力明显要强于革兰阴性细菌[3]。

猪业科学：防御素对猪群抗病力的影响 9 25

2.1 防御素对母猪健康的影响 试 验 结 果 见 表 1， 从 结 果 可 以 看
China Swine Ind us try 27
Swine Dis e a s e
猪病防控 Prevention and Control
出 ， 对 照 组 出 生 成 活 率 为 92.81% ， 试 验 组 出 生 成 活 率 为 95.05% ， 提 高 2.24%， 差异显著 （p＜0.05）； 弱 仔 率 降 低 1.46%， 死 胎 率 降 低 了 1.83%， 差 异 极 显 著 （p＜0.01）； 发 病 率 降 低 4.35%， 差 异 极 显 著 （ p ＜0.01） ， 死 亡 率 降 低 2.66%， 差异极显著 （p＜0.01）。 由 此 可 见， 在母猪日粮中添加基因工程防御 素， 可以明显提高母猪体质， 提高生产 成绩。 2.2 防御素对保育猪健康的影响
试 验 结 果 见 表 2， 发 病 率 降 低 8.64%， 差异极显著 （p＜0.01）， 死 亡 率 降 低 1.77% ， 差 异 显 著 （p＜0.05） 。 由 此可见， 在保育料中添加基因工程防御 素， 可以明显提高仔猪体质， 降低发病 率和死亡率。
3 讨论
防御素普遍存在于生物体内， 对病 原微生物具有广谱的杀灭作用。 有研究 表明， 在一些感染细菌或病毒的组织器 官中防御素的表达上调， 提示防御素在 预防病原微生物感染方面具有重要作 用 [5]。 防御素具备两个 特 点 ： 一 是 抗 性 谱广， 二是病原微生物难以对防御素产 生抗性突变。 这就是科学家们对其应用 前景看好的重要依据。
参考文献： [1] 樊福好. 我国猪群健康管理体系的构
建.养 猪 ，2011（3）:57-60. [2] 佟建明. 饲用抗生素的促生长作用机

基因工程防御素对保育猪生长性能的改善作用


２ ０ （ ）２ — ８ ０ ３， １ ：６ ２ ．
３２ 采食血球蛋 白酶 解物对腹 泻指 数的影响 ． 通过对仔 猪腹泻情 况进行记 录并评分 ， 计算 出
［ 周佳萍 ， ５ 】 王景成－、 ，肽营养研究及应用进展『］山东饲料 科学 Ｊ ｃ， ／
技术交流大会论文集 ． 泰安： 山东畜牧兽医 ，０ ６ １７ １０ ２０ ： ７ — ８ ．
（ 编辑 ： 富春妮 ）
３ ０
养猪 Ｓ Ｎ Ｒ Ｄ Ｃ Ｉ Ｎ（ ＷＩＥＰ Ｏ Ｕ ＴＯ ６ ）
表 ３ 经 济效 益 分 析
２１ ０１
兴食 品有 限公 司猪场进行 。选择体况和遗传基础相 近 、体重 ６ ５ｋ 左右 的 ２ ． ｇ ６ ５日龄杜长大杂种断奶仔
猪 ３６头 ７ 随机分成 两组 ， 中防御素 组 １８头 ， 其 ８ 对 照 组 １８头 ， 组公母各 半、 ８ 每 ４个 重复 ， 每个 重复 ４ ７ 头猪 。对照组饲 喂基础饲粮 （ １ ， 表 ） 试验组每吨基础 饲粮添加 ２ ｇ 基因工程 防御素 ， ｋ 试验期 ３ 。试验猪 ４ ｄ 自由采食和饮水。 试验期 间所有母猪和仔猪用药、 免 疫程序 、 管理按猪场原有方案进 行。
一
降， 最终使靶细胞死亡 ； 防御素的抗 病毒作用 则是通 过与病 毒 包膜 蛋 白结合 导致病 毒 内容物 外泄 而死 亡； 正是由于这种特 殊的作用机理 ， 使防御素不会产 生耐药性 。还有特 点， 防御素在动物体内蛋 白酶的作 用下能分解 成氨基酸被 机体 吸收，不会在动物体 内 残留。 因此， 防御素的开发研究成为 当前一大热点／ ３ １ 。 广州和仕康生物技术有 限公司采用基 因工程技 术 ， 银杏防御素基因克隆至酿酒酵母 ， 将 通过发酵得 到基因工程防御素 。本研 究将此基 因工程 防御素作 为饲料添加剂应用到保育猪饲料中 ，取得 了 良好 的 效果 ， 现将饲养试验情况报告如下。 １ 材 料与方法
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３猪防御素基因工程茵表达研究
３．１
一步开展防御素的生物学功能研究。以及防御素在 医学、食品、农业中的应用奠定了基础。 ４猪防御素替代抗生素在畜禽饲料中的应用 在饲料中长期亚治疗量添加抗生素类生长促进 剂造成的负面影响越来越明显．现在很多国家已经 开始在饲料中禁止添加抗生素。动物肠道内的抗菌 肽能抑制病原菌，同时对肠道内固有益生菌和动物 细胞杀伤作用小，即高等动物肠道抗菌肽具有特异 性“识别”功能。抗菌肽作为饲料添加剂在畜牧生产 中适量添加不仅具有良好的抗菌效果，而且也有利 于提高畜禽的生产性能和畜禽产品品质。试验表明 抗菌肽对肠道内微生物菌群的调节作用与抗生素相 似，但抗菌肽能促进有益菌的生长．从而有利于调节 肠道内微生态环境，起到促进动物生长的作用㈣。从 猪小肠分离纯化的防御素可以提高雏鸡的生长性能
Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ可以增加ｐ肋一Ｊ
ｍＲＮＡ的表
素ＩＬ＿脚｝导＿ｐ肋Ｊ基因并不能使其ｍＲＮＡ的表达匕诃１１１；
Ｓ以ｍｏ础姚Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ和Ａｃ￡ｉ加６∞垅船ｐ三ｅ￡盯＿ｏｐ础ｕ一
达量旧。猪小肠片段灌服术研究表明，Ｓ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ＤＴｌ０４可以改变肠道形态。但却不能改变肠道中
啪ｎ妇感染２ ｄ后，ｐ曰ＤＪ基因的表达量在猪消化道
菌中表达和纯化的Ｈｉｓ—ｐＢＤ２产量达到１０ ｍｇ／Ｌ，重组
ｐＢＤ一２的表达量明显降低。这说明５以ｍｏｎｅ玩
Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ入侵而不是黏附可以激活ｐＢＤ一２的表
达［１６】。 实时定量ＰＣＲ检测发现，ｐＢＤ一１和３主要表达于 猪舌部和口腔黏膜中，三元杂交猪的ｐＢＤ一２主要表 达于肾脏和肝，中国梅山猪的ｐＢＤ一２主要表达于猪
１４、ｐＢＤｌ２３、
ｐ肋３在骨髓和淋巴等组织中表达，这些组织包括胸 腺、脾脏、淋巴结、十二指肠和肝脏。ｐＢＤ２和＿ｐ肋３等６
个猪防御素在肺和皮肤中表达。猪防御素在骨髓、肺 和皮肤等组织中表达量较高，这说明防御素的表达
资助项目：国家国际科技合作专项资助（２０ｌｌＤＦＡ３２３３０）；基因芯 片技术在饲料高效利用与安全调控上的应用研究 作者简介：王丹玉：（１９７７一），女，硕士，现代健康养殖技术与管理 Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａＩｌ酮ａ１１ｙｌｌ＠ｄｂｎ．ｃｏｍ．ｃｎ ｝通讯作者：彭子欣，博士，副研究员，Ｅ—ｍａｉｌ：ｐｅｎｆ；ｚｉ】【ｉｎｌ９８２＠１６３，
达量要高于三元杂交猪。这可能是中国传统地方猪
３．２猪防御素的真核表达
姜丽华等㈣在毕赤酵
母中表达了重组ｐＢＤ一１，抗菌实验表明重组蛋白对 金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性。在Ｐ．ｐ∞￡ｏ廊酵 母中表达的ＤＢＤ２蛋白只对Ｓ．ｃ＾ｏ如伽ｓＭ蠡Ｃ５００７菌有 抗菌活性［矧，而ｐＢＤ２和猪ｉｎｔｅ如ｒｏｎ—ｙ的融合表达产 物没有表现抑菌活性。彭子欣等【Ｚ７】在毕赤酵母中表 达了重组ｐＢＤ２，抑菌实验显示ｒｐＢＤ２对常见猪病原 菌，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌Ｋ８８、猪链球菌、猪霍 乱沙门氏菌和副猪嗜血杆菌具有广谱抗菌作用，最
ｐＢＤ２对金黄色葡萄球菌和耐药性大肠杆菌具有抑 菌活性。对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度可达 ２１．１斗ｇ／ｍＬ，对大肠杆菌的半致死量是１４．３９¨ｇ／ｍＬ， 并且重组ｐＢＤ２显示了低溶血性、盐耐受性和热稳定
性。
舌部和口腔黏膜中，这一结果说明猪防御素在组织 中的表达和猪的品种有关【１７ｌ。藏猪大部分组织中 ｐ日Ｄ—Ｊ和３基因ｍＲＮＡ表达量要高于三元杂交猪，而 三元杂交猪大部分组织的ｐ嚣Ｄ一２基因ｍＲＮＡ表达量 高于藏猪［１８】。中国地方传统猪种组织中防御素的表
点和许多诱导型肛防御素很相似，但是ｐ日ＤＪ基因在炎症
和感染过程中是组成型表达的，ｐ占圆。基因组成型表达的 证据主要表现在脂多糖、肿瘤坏死因子一Ｑ和白细胞介
达量提高ＩＯ倍，而Ｓ．Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ死细胞不能提高
ｐ肋一２的表达量。病原菌Ａｒｃ０６乜ｃ￡ｅｒ ｃ忡ｅｒｏｐ＾ｉｋ和Ｊｓ．
Ｅｎｔｅｒｉ￡ｉｄｉｓ不能提高ｐＢＤ一２ ｍＲＮＡ的表达量．但Ｓ． Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ和Ｓ
对动物先天免疫具有重要作用。ｐ肋Ｊ２３、ｐ肋Ｊ２５和
ｐ口ＤＪ２９在雄性生殖组织中表达，这些组织包括睾丸 小叶和附睾的一些组织，说明这些防御素为雄性生 殖组织提供先天免疫保护【６］。猪防御素在胸腺组织
中固耄牧童志
万方数据
２０１５年第５１卷第５期
Ｒｅｖｉｅｗ
Ｐａｐｅｒｓ・综
述
中表达说明其在连结淋巴组织的先天免疫和获得性 免疫中具有重要作用【６ｌ。
Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ后，小肠细胞系ＩＰＥＣ—Ｊ２上皮细胞中的
有１５个碱基互补配对，ＰＣＲ扩增延伸得到ｐ肋一２基 因，将ｐ肋一２基因克隆至原核表达载体ｐＧＥＸ—ＫＧ，
成功地在大肠杆菌ＢＬ２ｌ（ＤＥ３）中表达出ｐＢＤ一２融合 蛋白。谢飞等俐在大肠杆菌中表达了对金黄色葡萄 球菌具有抑菌活性的重组ｐＢＤ２蛋白。“等【圳在Ｅ．ｃｏ如
综
述・Ｒｅｖｉｅｗ
Ｐａｐｅｒｓ
２０１５年第５１卷第５期
猪防御素的研究进展及其在饲料中的应用
王丹玉１一－，彭子欣１．２．，，王洪彬１，一，王安如１＇２．３
（１．北京大北农科技集团股份有限公司，北京１０００８０；２．饲用微生物工程国家重点实验室，北京１００１９２； ３．北京市饲料安全生物调控工程技术研究中心。北京１００１９２）
Ｐ肋一Ｊ和ｐ肋一２的表达量【１４】。
在回肠上皮细胞系ＩＰＥＣ—Ｊ２中，．ｓ．Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ 活细胞可以诱导ｐＢＤ一１和ｐＢＤ一２表达量上调，而其 细胞壁和分泌物不钝诱导ｐＢＤ—Ｉ和ｐＢＤ一２表达量上
和呼吸道黏膜的表达量没有增加；ｐ肋』基因的启动
子转染进ＮＩＨ／３Ｔ３细胞后，启动子活性对于脂多糖和
ＩＬ一１ｐ的刺激没有变化。ｐ肋ｊ基因在气管和口腔黏
中固舂教京急＠
万方数据
综
述・Ｒｅｖｉｅｗ
Ｐａｐｅｒｓ
２０１５年第５１卷第５期
调。Ｊｓ砌∞船讹的Ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ血清型不能诱导ｐＢＤ一１和
合成了３条基因片段（１、２、３）。片段１、２和片段２、３各
ｐＢ吨的表达悯。当用亚致死量的香芹酚处理５盔，加聊‰
Ｊ基因表达明显上调【１２］。
小肠细胞系ＩＰＩ一２Ｉ中ｐＢＤ～ｌ和ｐＢＤ一２在受到外
界刺激时表现的受调控程度不同。加入特级胎牛血 清（ｆｏｅ“ｃａｌｆ
ｓｅｒｕｍ）可以使ｐ肋一Ｊ和ｐＢＤ一２的表达量 明显上调。Ｓ．Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ活细胞可以使ｐ肋一２的表
尽管ｐ肋瑾因在氨基酸序列、基因组结构和表达位
ｐ日ＤＪ基因的表达量增加【９１。新生仔猪易患由博德特 氏菌引起的百日咳．但４周龄仔猪对百日咳有免疫作 用，而灌服５００斗ｇ ｐＢＤ—ｌ可使新生仔猪获得对百日 咳的免疫能力。有趣的是，ｐＢＤ一１在体外并不能抑制 博德特氏菌。这说明具有先天免疫功能的防御素对 预防仔猪呼吸道感染有重要作用【，０１。
ｐ肋Ｊ的表达相关。当肠道受到单核细胞增多性李氏 菌感染时，ｐＰＣＲＰ—Ｌ２缺陷型使得ｐ肋一Ｊ表达下调。 相反，ｐＰＧＲＰ—Ｌ１或ｐＰＧＲＰ—Ｌ２的过量表达使得ｐ肋一
注：①ＥｓＴ序列中的０ＲＦ框由计算机推算出或测序证实；②相邻ｃｙｓ残基间的间隔氨基酸（ｃ１一ｃ２，ｃ２一ｃ３，ｃ３一ｃ４，ｃ４一ｃ５）；③带正电荷
残基的数量（Ｈ，Ｈｉｓ；Ｒ，ＡＩｇ；Ｋ，Ｌｙｓ），计算范围是第１个ｃｙｓ前７个氨基酸和第６个ｃｙｓ后７个氨基酸；④肠道包括十二指肠、空肠和回肠
和器官异体移植给人类的研究提供帮助。 ２猪防御素的表达调控研究 猪防御素基因ｐＢＤＪ的表达受发育调节。通过
猪防御素基因＿ｐ肋Ｊ，这是在猪体内发现的第１个防
御素基因。Ｓａｎｇ等［６】通过生物信息学方法在猪体内又 鉴定出１１种口一防御素基因，这些基因被分别命名为
和哺乳动物大多数口型防御素不同，ｐ曰Ｄ２和
２璺婴坐望望ｊ里垒望！望堡望！丝、ｐＢＤｌ０８、ＰＢＤｌ
收稿日期：２０１４一１２—０５；修回日期：２０１５一Ｏｌ一０８
１
ｐ曰ＤＪ２５、ｐＢＤＪ２９、ｐＥ尸２Ｃ和ｐＥ尸２Ｅ。在通过生物信息 学方法鉴定出１１种新口一防御素的同时，Ｚｈａｎｇ等【５］发
现克隆到ｐ肋Ｊ是一个偶然事件，因为猪ＥＳＴ数据库
中并没有发现ｐ曰ＤＪ的ＥＳＴ序列。Ｓａｎｇ等【６】研究还发现 ｐＢＤ２在许多组织中都有大量表达，共有１９个ＥＳＴ克 隆被鉴定出。ｐＢＤ３、ｐＢＤ４和ｐＢＤｌ２９在数据库中均有 多个ＥｓＴ标签被鉴定出。其他７个防御素有１～３个ＥｓＴ
小抑茵浓度是３２一１２８¨ｇ／ｍＬ，其中对金黄色葡萄球
种的抗病力高于外国引进杂交猪的原因，这一发现 为我国培育自有知识产权的高抗病猪种提供了新思 路【１７啪ｊ。
为了研究Ａｒｇ、Ｉｌｅ和Ｚｎ２＋对ｐ肋一１、２和３基因
ｍＲＮＡ与蛋白质表达水平的影响．以猪肠上皮细胞 系ＩＰＥＣ—Ｊ２为体外研究模型，在无血清ＤＭＥＭ／Ｆ１２培 养基内分别单独添加不同浓度的Ａｒｇ、Ｉｌｅ和Ｚｎ２＋培养 细胞，处理２４ ｈ后，Ａｒｇ、１１ｅ和Ｚｎ２＋均能够不同程度的 诱导猪肠上皮细胞系中ｐＢＤ基因ｍＲＮＡ水平和蛋白 水平的表达【１９埘】。其中，不同处理浓度的Ａ职均能提 高ｐＢＤ的基因和蛋白的表达，１００“ｇ／ｍＬ Ａｒｇ是刺激
Ｎｏｒｔｈｅｍ
膜的组成型表达．和其启动子缺少ＮＫ—ＦＢ或ＮＦ—ＩＬ一
６的特异性结合位点的特点相符，这说明ｐ肋Ｊ基因
可能在监视黏膜表面微生物区系的稳定性上起作
用【ｌｌ】。
ｂｌｏｔ技术在新生猪的舌上皮细胞中不能检
研究表明，肽聚糖识别蛋白（ｐＧＲＰｓ）和防御素
测到ｐ肋Ｊ基因的表达，但是出生２ ｄ后即可检测到 ｐ肋？基因的表达，第７、２８、４９天时，随着仔猪的生长
防御素基因来源于同一个祖先。除ｐＢＤｌ外，其余猪 防御素在人体内都有对应的类似蛋白。不同种之间 对应防御素的同源性高于同种的不同防御素的同源 性【６】。这一发现将为比较生理和免疫学以及猪组织
大多数都防御素和人卢防御素在序列长度和保
守性上有很大相似性。系统发育分析发现人和猪的