铅黄肠球菌形态观察

肠球菌属标准操作规程1.概述肠球菌属于1984年从链球菌属划出，单独成为一个菌属，包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、坚韧肠球菌、铅黄肠球菌、蒙氏肠球菌、海氏肠球菌、鹑鸡肠球菌和病臭肠球菌等18个种和1个变异株。

临床上常见的菌株为粪肠球菌。

2.标本类型血液、尿液、痰、穿刺液、脓液等标本。

3.鉴定3.1 形态与染色革兰阳性球菌，单个、成双或短链状排列。

3.2 培养特性在血琼脂平板上形成较小、灰白色，有a 溶血或β溶血环的菌落。

在麦康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。

3.3 生化反应触酶试验阴性，分解甘露醇、山梨醇、胆汁七叶苷试验阳性、在含6.5%氯化钠的肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。

3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征革兰阳性球菌，触酶试验阴性，在65g/L 氯化钠中生长，胆汁、七叶苷试验阳性，45℃中生长。

3.4.2与屎肠球菌的鉴别：粪肠球菌不分解阿拉伯糖，而屎肠球菌能分解阿拉伯糖3.4.3 与链球菌属和乳球菌属的鉴别：见表5-353.4.4 粪肠球菌与其他各主要菌种间的鉴别：见表5-36操作步骤3.5.1 触酶试验阳性参见触酶试验标准操作规程3.5.2 鉴定从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。

4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件.5.质量控制参见《质量控制程序》6.检验结果解释与分析在β-内酰胺酶阴性球菌肠球菌中，氨苄西林药敏试验结果可预测阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。

青霉素药敏试验可预测氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等药敏结果。

粪肠球菌中氨苄西林药敏结果可以预测亚胺培南的药敏结果。

对于血培养和脑脊液中分离到的肠球菌，需做β-内酰胺酶检测，β-内酰胺酶阳性，则对青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐药。

屎肠球菌形态特征
屎肠球菌是一种革兰氏阳性球菌，其形态特征包括：
1. 形状：屎肠球菌通常呈现为圆形或椭圆形的细菌细胞。

2. 大小：细胞的大小一般在0.5-1.5 微米之间。

3. 细胞壁：屎肠球菌的细胞壁具有一定的厚度，由革兰氏阳性菌特有的多层结构组成。

4. 染色特性：经过革兰氏染色后，屎肠球菌会呈现出紫色或深蓝色，这是革兰氏阳性菌的特征染色结果。

5. 排列方式：在显微镜下观察，屎肠球菌可以呈现出单个细胞存在、成双排列、链状排列或簇状排列等不同的形式。

6. 表面结构：屎肠球菌的表面可能具有一些特殊的结构，如荚膜、鞭毛等，但这些特征并非所有屎肠球菌都具备。

需要注意的是，屎肠球菌的形态特征可能会受到培养条件、生长阶段和检测方法等因素的影响。

此外，显微镜下的观察只是对屎肠球菌形态的初步描述，更详细的鉴定还需要结合其他生物学特性和分子生物学方法进行。

如果你对屎肠球菌的具体形态特征或其他相关信息有更深入的需求，建议参考微生物学教材、专业文献或咨询微生物学家以获取更准确和详细的信息。

同时，在进行微生物的鉴定和研究时，应遵循科学的方法和标准操作程序，以确保结果的准确性和可靠性。

世界最新医学信息文摘 2018年第18卷第36期 1410 引言由于肠球菌属在人体、动物肠道等区域分布广泛，且极容易对医院等场所造成病原菌感染，并且会让患者出现心内膜炎、败血症等恶性病症，对患者的损伤较大。

故为了减少肠球菌属的感染率，就需要明确其分布特点以及对药物的耐药性，从而减少并发症的发生。

现将抽取的标本测试数据进行分析，以供参考。

1 一般资料和方法1.1 一般资料本次研究中获得的实验对象均为我院在2014年9月至2017年6月接收并进行获取的403株肠球菌属，通过试验标准分析后纳入到研究中，并将抽取的403株肠球菌属通过标本制作后进行检验分析，通过统计学软件对获取的数据进行分析。

获取的肠球菌属标本均排除了同一患者相同部位的重复菌属，并将抽取的标本置于-70℃进行保存。

1.2 研究方法将抽取的肠球菌属采用Bio-Mic法与纸片扩散法进行测定，试剂采用法国进口的药敏纸片、MH培养基和药敏板条，测定过程中，应用VITEK-2Compact检定系统进行分析，并采用纸片扩散法对其进行分析[1]。

观察并分析抽取的403株肠球菌属的标本进行测定，并对获取的数据进行分析和评估，从而确定其分布特性以及耐药性等。

1.3 研究获得的数据整理与判定本次研究中通过对数据的整理与判定，并利用数据统计学软件分析，研究获得的数据全部通过2016年WHO制定的《肠球菌属的特性分布规律》分析，并对抽取的403株肠球菌属应用Bio-Mic法与纸片扩散法进行观察与评估。

1.4 对试验数据进行统计处理本次研究中获得全部数据后进行统计学分析与整理，根据患者的病情进展以及数据图像等对数据加以整理，运用统计学专业软件SPSS 22.0进行处理分析，组内数据与组间数据分别应用t值与卡方值进行检验分析，并比较对照组与研究组数据的差异性。

2 结果（1）抽取的403株肠球菌属的分布情况，其中屎肠球菌、粪肠球菌、鹑鸡肠球菌以及铅黄肠球菌分别为14（3.47%）、361（89.58%）、11（2.73%）与17（4.22%）。

对1例铅黄肠球菌颅内感染患者的药学监护体会李军【摘要】目的:探索临床药师参与抗感染诊治的切入点.方法:临床药师参与1例铅黄肠球菌颅内感染患者的会诊,并进行药学监护.结果与结论:临床药师能结合病情实际参与抗感染治疗方案的制定与调整,提供适当的药学监护,可协同临床医师优化药物治疗方案,保障患者用药安全、有效.【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2014(014)002【总页数】3页(P174-176)【关键词】临床药师;铅黄肠球菌;颅内感染;二重感染【作者】李军【作者单位】福建中医药大学附属厦门市第三医院药学部,福建厦门361100【正文语种】中文【中图分类】R97根据《抗菌药物临床应用管理办法》［1］的要求，临床药师应参与特殊使用级抗菌药物会诊;《医疗机构药事管理规定》［2］明确要求临床药师应当全职参与临床药物治疗工作，参与会诊及治疗方案的制定是临床药师的常工作之一，在工作中应不断地总结分析才能不断提高自身专业素质。

现对某院收治的1 例铅黄肠球菌颅内感染患者的药学监护进行总结分析。

1 病例资料1.1 患者基本情况患者，女性，45 岁，因“突发头痛呕吐1 h 余”急诊入院。

入院诊断:(1)右侧后交通动脉动脉瘤破裂;(2)自发性蛛网膜下腔出血;(3)急性梗阻性脑积水;(4)高血压病。

1.2 主要诊治过程患者于入院第2 d 上午在全麻下行右侧改良翼点入路右侧后交通动脉动脉瘤显微夹闭术加颅内压探头植入术加颅骨成形术，第15 d 夜间在全麻下行血管内介入颅内动脉瘤栓塞术，第2～19 d 使用头孢曲松预防颅内及手术感染。

第19 d开始患者出现发热，体温最高为38．3 ℃，腰穿化验脑脊液提示白细胞计数显著高于正常值，考虑颅内感染。

第20～22 d先后予注射用头孢曲松钠(罗氏芬)静脉滴注及鞘内注射、氯霉素静脉滴注等加强抗感染无效，第22 d 患者体温最高达39．4 ℃。

第23 d 报脑脊液镜检出革兰阳性球菌，医师电话咨询临床药师后，将抗菌药物改为万古霉素+美罗培南继续抗感染治疗，治疗3 d 后患者体温最高为38．4 ℃。

白星花金龟幼虫虫粪可培养微生物的分离鉴定及特性研究张婷１，王霄煜２，吴如微２，张莹莹１，霍燃华１，李海燕１，任杰３，李洁２∗㊀（１．承德市农林科学院，河北承德０６７０００；２．河北民族师范学院，河北承德０６７０００；３．承德市农村土地承包经营权流转管理服务中心，河北承德０６７０００）摘要㊀［目的］筛选可培养功能微生物，为农业废弃物的循环利用提供微生物资源㊂［方法］以喂食废菌渣的白星花金龟幼虫虫粪为研究对象，采用平板涂布法分离虫粪中的可培养微生物，并对其分解纤维素和蛋白质能力进行初步探究㊂［结果］共分离出细菌５株㊁真菌３株，经鉴定，分别为纤维化纤维微细菌㊁铅黄肠球菌㊁原玻璃蝇节杆菌㊁谷氨酸杆菌㊁灰色链霉菌㊁热带假丝酵母㊁长枝木霉和白地霉㊂其中纤维化纤维微细菌和灰色链霉菌具有降解蛋白质的能力，在酪蛋白培养基上透明圈直径与菌落直径的比值（ＨＣ）分别为７．２５９ʃ０．４１７和１．９７１ʃ０．５８４；原玻璃蝇节杆菌㊁灰色链霉菌㊁白地霉㊁长枝木霉具有降解纤维素的能力，在羧甲基纤维素钠上经刚果红染色后透明圈ＨＣ分别为１．１６６ʃ０．０２８㊁２．０４４ʃ０．２４５㊁１．０７５ʃ０．０２９㊁１．２８８ʃ０．０４８㊂［结论］纤维化纤维微细菌㊁原玻璃蝇节杆菌㊁灰色链霉菌㊁白地霉和长枝木霉可作为食用菌废菌渣等农业废弃物循环利用的菌种资源㊂关键词㊀白星花金龟；幼虫虫粪；可培养微生物；分离鉴定中图分类号㊀Ｓ１８２㊀㊀文献标识码㊀Ａ㊀㊀文章编号㊀０５１７－６６１１（２０２３）２４－０００１－０４ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０５１７－６６１１．２０２３．２４．００１㊀㊀㊀㊀㊀开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＣｕｌｔｕｒａｂｌｅＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓｆｒｏｍＦｒａｓｓｏｆＰｒｏｔａｅｔｉａｂｒｅｖｉｔａｒｓｉｓＬａｒｖａＺＨＡＮＧＴｉｎｇ１，ＷＡＮＧＸｉａｏ⁃ｙｕ２，ＷＵＲｕ⁃ｗｅｉ２ｅｔａｌ㊀（１．ＣｈｅｎｇｄｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｅｎｇｄｅ，Ｈｅｂｅｉ０６７０００；２．ＨｅｂｅｉＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｆｏｒＮａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｃｈｅｎｇｄｅ，Ｈｅｂｅｉ０６７０００）Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｔｏｓｃｒｅｅｎｃｕｌｔｉｖａｂｌｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ，ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｏｕｒｃｅｓｆｏｒｔｈｅｒｅｃｙｃｌｉｎｇｏｆａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌｗａｓｔｅ．［Ｍｅｔｈｏｄ］ＴａｋｉｎｇｔｈｅｆｒａｓｓｏｆＰｒｏｔａｅｔｉａｂｒｅｖｉｔａｒｓｉｓｌａｒｖａｗｉｔｈｔｈｅｅｄｉｂｌｅｆｕｎｇｉｒｅｓｉｄｕｅｓａｓｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｂｊｅｃｔ，ｔｈｅｐｌａｔｅｃｏａｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｓｅｐａｒａｔｅｃｕｌｔｕｒａｂｌｅｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓｆｒｏｍｆｅｃｅｓ，ａｎｄｔｈｅｉｒａｂｉｌｉｔｙｔｏｄｅｃｏｍｐｏｓｅｃｅｌｌｕｌｏｓｅａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｅｘｐｌｏｒｅｄ．［Ｒｅｓｕｌｔ］Ａｔｏ⁃ｔａｌｏｆ５ｓｔｒａｉｎｓｏｆｂａｃｔｅｒｉａ，ａｎｄ３ｓｔｒａｉｎｓｏｆｆｕｎｇｉｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄ．Ａｆｔｅｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｔｈｅｙｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓＣｅｌｌｕｌｏｓｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍｃｅｌｌｕｌａｎｓ，Ｅｎｔｅｒｏ⁃ｃｏｃｃｕｓｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ，Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｐｒｏｔｏｐｈｏｒｍｉａｅ，Ｇｌｕｔａｍｉｃｉｂａｃｔｅｒｈａｌｏｐｈｙｔｏｃｏｌａ，Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅｏｌｕｓ，Ｃａｎｄｉｄａｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ，Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｌｏｎｇｉ⁃ｂｒａｃｈｉａｔｕｍ，Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍｃａｎｄｉｄｕｍ．Ａｍｏｎｇｔｈｅｍ，ＣｅｌｌｕｌｏｓｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍｃｅｌｌｕｌａｎｓａｎｄＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅｏｌｕｓｈａｄｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｔｏｄｅｃｏｍｐｏｓｅｐｒｏｔｅｉｎ，ａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｃｉｒｃｌｅｄｉａｍｅｔｅｒｔｏｃｏｌｏｎｙｄｉａｍｅｔｅｒ（ＨＣ）ｏｎｃａｓｅｉｎｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｗｅｒｅ７．２５９ʃ０．４１７ａｎｄ１．９７１ʃ０．５８４，ｒｅ⁃ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｐｒｏｔｏｐｈｏｒｍｉａｅ，Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅｏｌｕｓ，ＧｅｏｔｒｉｃｈｕｍｃａｎｄｉｄｕｍａｎｄＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍｈａｄｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｔｏｄｅｇｒａｄｅｃｅｌｌｕｌｏｓｅ，ａｎｄａｆｔｅｒＣｏｎｇｏｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇｏｎｓｏｄｉｕｍｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ，ｔｈｅＨＣｖａｌｕｅｓｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｃｉｒｃｌｅｗｅｒｅ１．１６６ʃ０．０２８，２．０４４ʃ０．２４５，１．０７５ʃ０．０２９ａｎｄ１．２８８ʃ０．０４８．［Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ］Ｃｅｌｌｕｌｏｓｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍｃｅｌｌｕｌａｎｓ，Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｐｒｏｔｏｐｈｏｒｍｉａｅ，Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅｏｌｕｓ，ＧｅｏｔｒｉｃｈｕｍｃａｎｄｉｄｕｍａｎｄＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍｃａｎｂｅｕｓｅｄａｓｓｔｒａｉｎｒｅｓｏｕｒｃｅｓｆｏｒｔｈｅｒｅｕｓｅｏｆａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌｗａｓｔｅｓｓｕｃｈａｓｅｄｉｂｌｅｆｕｎｇｉｒｅｓｉｄｕｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀Ｐｒｏｔａｅｔｉａｂｒｅｖｉｔａｒｓｉｓ；Ｆｒａｓｓｏｆｌａｒｖａ；Ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ；Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ基金项目㊀河北省重点研发计划项目（２１３２７３０６Ｄ，２０３２６８０７Ｄ）㊂作者简介㊀张婷（１９９２ ），女，河北石家庄人，助理研究员，硕士，从事农业应用微生物研究㊂∗通信作者，教授，硕士，硕士生导师，从事生物资源开发利用研究㊂收稿日期㊀２０２２－１２－１６㊀㊀白星花金龟（Ｐｒｏｔａｅｔｉａｂｒｅｖｉｔａｒｓｉｓ），属鞘翅目花金龟科，是一种宝贵的昆虫资源，在药用㊁饲用㊁生态等方面均具有较高的利用价值㊂研究表明，白星花金龟幼虫多在腐殖质丰富的土壤或粪堆中生活，以腐烂的秸秆㊁杂草以及禽畜粪便为食［１］，其幼虫在对秸秆进行转化的同时，也可以获得虫体和虫粪等副产品，极具有开发利用价值㊂白星花金龟幼虫对平菇菌糠㊁猪粪㊁牛粪㊁玉米秸秆等农业有机废弃物消化率较高［２］㊂对东亚飞蝗粪沙㊁玉米秸秆㊁小麦秸秆和花生壳均有一定的转化作用［３］，且获得的幼虫干物质中蛋白质㊁脂肪和氨基酸含量较高［４］，虫粪沙也富含较多的有机物质［５］㊂因此，在利用白星花金龟幼虫转化利用农业有机废弃物的同时，不仅治理了环境问题，还提高了虫体和虫粪沙资源的利用率㊂目前有关白星花金龟幼虫在废弃物循环利用方面的研究主要集中在幼虫对农业废弃物的转化利用㊁农业有机废弃物对幼虫生物学特性影响㊁幼虫肠道微生物筛选以及幼虫虫粪有机肥等方面，而对于幼虫虫粪微生物的筛选及多样性研究鲜见报道㊂黄婉秋等［６］从白星花金龟幼虫肠道中分离出１株具有较强纤维素降解能力的纤维单胞菌，其ＣＭＣ酶活性峰值能达０．１９Ｕ／ｍＬ，并确定该菌株具有包括内切葡聚糖酶㊁β－葡聚糖苷酶和外切葡聚糖酶等纤维素降解相关基因及代谢通路㊂赖德强等［７］将白星花金龟幼虫虫粪按比例添加在辣椒育苗基质中，结果发现，辣椒幼苗的生物量㊁根系发育情况以及壮苗指数均显著高于对照组，提高了辣椒苗期的耐寒能力㊂刘福顺等［８］研究施用不同量白星花金龟幼虫虫粪对樱桃萝卜生长情况的影响，结果显示，在一定范围内随着虫粪施用量的增加，樱桃萝卜地上部㊁地下部鲜质量均呈现增加的趋势㊂该研究以饲喂食用菌废菌渣的白星花金龟幼虫为研究对象，收集其新鲜虫粪后采用平板涂布法分离其中的可培养微生物，为筛选可高效利用的微生物提供菌种资源和基础数据㊂１㊀材料与方法１．１㊀试验材料㊀白星花金龟幼虫由河北燕塞生物科技有限公司提供，主要以食用菌废菌渣为食㊂１．２㊀培养基㊀ＬＢ培养基：广东环凯微生物科技有限公司；ＰＤＡ培养基：马铃薯２０ｇ，葡萄糖２０ｇ，琼脂２０ｇ，蒸馏水１０００ｍＬ；麦芽汁培养基：青岛海博生物技术有限公司；酪蛋白培养基：酪蛋白１０．００ｇ，牛肉浸粉３．００ｇ，氯化钠５．００ｇ，磷安徽农业科学，Ｊ．ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃ．Ｓｃｉ．２０２３，５１（２４）：１－４㊀㊀㊀酸氢二钠２．００ｇ，琼脂１５．００ｇ，溴麝香草酚蓝０．０５ｇ，ｐＨ７．４ʃ０．１；羧甲基纤维素钠培养基：羧甲基纤维素钠１５．０ｇ，硝酸铵１．０ｇ，酵母膏１．０ｇ，硫酸镁０．５ｇ，磷酸二氢钾１．０ｇ，琼脂２０．０ｇ，蒸馏水１０００ｍＬ，ｐＨ自然；赫奇逊氏无机盐培养液：ＫＨ２ＰＯ４１．００ｇ，ＮａＣｌ０．１０ｇ，ＭｇＳＯ４㊃７Ｈ２Ｏ０．３０ｇ，ＮａＮＯ３２．５０ｇ，ＦｅＣｌ３０．０１ｇ，ＣａＣｌ２０．１０ｇ，蒸馏水１０００ｍＬ，ｐＨ７．２左右；液体产酶培养基：玉米秸秆粉２０ｇ，赫奇逊氏无机盐培养液１０００ｍＬ㊂１．３㊀试验方法１．３．１㊀微生物的分离纯化㊂收集新鲜的幼虫粪沙０．１ｇ于无菌管中，加入０．９ｍＬ无菌水充分混匀后，稀释至１０－２㊁１０－３浓度梯度涂布于分离培养基上，于３０ħ恒温培养箱中培养，待长出菌落后，挑取单菌落至相应的培养基上进行划线培养，纯化次数３次以上，直至获得稳定生长的单菌落㊂１．３．２㊀形态学鉴定㊂菌落形态观察：将获得的菌株挑取单菌落进行平板划线培养，观察菌体在培养基上的菌落形态及生长情况㊂菌体形态观察：染色后置于显微镜下观察菌体形态㊂１．３．３㊀分子生物学鉴定㊂１．３．３．１㊀ＤＮＡ提取㊂分别用Ｅｚｕｐ柱式细菌㊁真菌㊁酵母菌基因组ＤＮＡ抽提试剂盒提取相应微生物的基因组ＤＮＡ㊂１．３．３．２㊀ＰＣＲ扩增及测序㊂采用通用引物进行ＰＣＲ扩增，其中，细菌引物序列２７Ｆ（ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＭＴＧＧＣＴＣＡＧ）㊁１４９２Ｒ（ＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ）；酵母菌引物序列ＮＬ１（ＧＣＡＴＡＴＣＡＡＴＡＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＡＡＧ）㊁ＮＬ４（ＧＧＴＣＣＧＴ⁃ＧＴＴＴＣＡＡＧＡＣＧＧ）；真菌引物序列ＩＴＳ１（ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣ⁃ＣＴＧＣＧＧ）㊁ＩＴＳ４（ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ）㊂扩增产物送至生工生物工程（上海）股份有限公司测序㊂１．３．４㊀降解蛋白质和纤维素能力初探㊂将分离纯化的菌株分别点接种至酪蛋白固体培养基上，培养后观察菌株生长情况及产生透明圈情况，并计算透明圈直径与菌落直径的比值（ＨＣ），探究各菌株降解蛋白质的能力㊂将分离纯化的菌株分别点接种至羧甲基纤维素钠固体培养基上，培养后观察菌株生长情况，用刚果红染色后观察透明圈情况，计算透明圈ＨＣ值，探究各菌株降解纤维素的能力㊂２㊀结果与分析２．１㊀菌种的分离鉴定㊀通过对白星花金龟幼虫虫粪样品进行分离，总共得到细菌５株㊁真菌３株，结合形态学和分子生物学对所分离的菌株进行综合鉴定㊂２．１．１㊀细菌㊂２．１．１．１㊀形态学观察㊂将分离纯化的细菌培养于ＬＢ固体培养基上，观察菌落形态，并挑取单菌落进行显微观察㊂各细菌菌落形态及菌体形态见表１，其中分离出的４株细菌革兰氏染色后均呈阳性㊂２．１．１．２㊀分子鉴定㊂将细菌１６ＳｒＤＮＡ测序结果提交至ＮＣＢＩ进行Ｂｌａｓｔ对比，并结合‘细菌鉴定手册“确定待测菌株的分类地位㊂分子鉴定结果显示，ｘｈ１菌株为纤维化纤维微细菌（Ｃｅｌｌｕｌｏｓｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍｃｅｌｌｕｌａｎｓ），ｄｈ１菌株为谷氨酸杆菌（Ｇｌｕ⁃ｔａｍｉｃｉｂａｃｔｅｒｈａｌｏｐｈｙｔｏｃｏｌａ），ｈｂ２菌株为铅黄肠球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃ⁃ｃｕｓｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ），ｈｄ１菌株为原玻璃蝇节杆菌（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｐｒｏｔｏｐｈｏｒｍｉａｅ），ｈｂ１菌株为灰色链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅｏ⁃ｌｕｓ）㊂表１㊀细菌形态Ｔａｂｌｅ１㊀Ｂａｃｔｅｒｉａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ菌株编号ＳｔｒａｉｎＮｏ．菌落形态Ｃｏｌｏｎｙｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ菌体形态Ｔｈａｌｌｕｓｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｘｈ１菌落呈淡黄色，圆形，脐状突起，表面光滑湿润，边缘整齐革兰氏阳性，菌体为短杆状ｄｈ１菌落呈淡黄色，圆形凸起，表面光滑革兰氏呈阳性，菌体为棒状ｈｂ２菌落透明，圆形，表面光滑湿润革兰氏阳性，菌体为卵圆形接下表２㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２３年续表１菌株编号ＳｔｒａｉｎＮｏ．菌落形态Ｃｏｌｏｎｙｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ菌体形态Ｔｈａｌｌｕｓｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｈｄ１菌落呈白色，圆形，表明光滑湿润，中间有突起，边缘整齐革兰氏阳性，菌体呈杆状ｈｂ１菌落圆形，边缘整齐，基内有菌丝，不易挑起孢子丝直而略波曲２．１．２㊀真菌㊂２．１．２．１㊀形态学观察㊂将分离纯化的菌株培养于麦芽汁固体培养基和ＰＤＡ固体培养基上，观察其菌落形态，并挑取单菌落进行显微观察㊂各真菌菌落形态及菌体形态见表２㊂表２㊀真菌形态Ｔａｂｌｅ２㊀Ｆｕｎｇａｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ菌株编号ＳｔｒａｉｎＮｏ．菌落形态Ｃｏｌｏｎｙｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ菌体形态Ｔｈａｌｌｕｓｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｂｄ１菌落呈白色，圆形，表面粗糙，中间凸起菌体呈椭圆形，出芽生殖ＳＸ２菌落呈乳白色，中间有圆形凸起，表面不光滑，质地油不干燥；周围有褶皱，短绒毛状，地毯式向四周铺开菌体呈砖形，孢子呈长筒状或椭圆形ＳＭ２菌落开始为白色，致密，圆形向周围扩展；中央产生绿色孢子，有明显的轮纹，周围有白色菌丝的生长带菌丝分支常单生，孢子为深绿色椭圆形２．１．２．２㊀分子鉴定㊂将测序结果提交至ＮＣＢＩ进行Ｂｌａｓｔ对比，并结合‘酵母菌鉴定手册“‘真菌鉴定手册“确定待测菌株的分类地位㊂分子鉴定结果显示，ｂｄ１菌株为热带假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ），ＳＭ２菌株为长枝木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ），ＳＸ２菌株为白地霉（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍｃａｎｄｉｄｕｍ）㊂２．２㊀降解蛋白质和纤维素能力㊀酪蛋白培养基上菌株生长结果显示（表３），纤维化纤维微细菌和灰色链霉菌能够产生明显的透明圈，透明圈ＨＣ值分别为７．２５９ʃ０．４１７㊁１．９７１ʃ０．５８４，说明其具有一定的蛋白质降解能力；羧甲基纤维素钠培养后刚果红染色结果显示（表４），原玻璃蝇节杆菌㊁灰色链霉菌㊁白地霉和长枝木霉能够产生透明圈，透明圈ＨＣ值分别为１．１６６ʃ０．０２８㊁２．０４４ʃ０．２４５㊁１．０７５ʃ０．０２９㊁１．２８８ʃ０．０４８，说明其具有一定的纤维素降解能力㊂陈燕红等［９］研究表明，纤维化纤维微细菌具有水解蛋白质的特性，这与该研究结果一致㊂３㊀讨论与结论白星花金龟幼虫能够有效降解秸秆㊁菌渣等农业废弃物，研究表明其肠道中存在丰富的与纤维素降解有关的微生物［３，１０］，而目前对于其幼虫相关的微生物的研究也主要集中在肠道微生物上㊂黄婉秋等［６］从白星花金龟幼虫肠道中分离出１株具有较强分解纤维素能力的纤维单胞菌㊂魏盼盼［１１］对白星花金龟幼虫肠道微生物多样性研究发现，具有降解木质纤维素和固氮功能的纤维菌属㊁纤维杆菌属㊁纤维素单胞菌属㊁假单胞菌属㊁链霉菌属等优势菌属在中肠和后３５１卷２４期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀张婷等㊀白星花金龟幼虫虫粪可培养微生物的分离鉴定及特性研究肠中都有存在㊂田小燕等［１２］对饲喂玉米秸秆的白星花金龟幼虫肠道微生物细菌多样性研究发现，假单胞菌属和脱硫弧菌属分别为幼虫中肠和后肠中的优势菌属㊂表３㊀酪蛋白透明圈情况Ｔａｂｌｅ３㊀Ｃａｓｅｉｎｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｃｉｒｃｌｅ菌种Ｓｔｒａｉｎ酪蛋白培养基透明圈Ｃａｓｅｉｎｔｒａｎｓ⁃ｐａｒｅｎｔｃｉｒｃｌｅ透明圈ＨＣ值ＴｈｅＨＣｖａｌｕｅｓｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｃｉｒｃｌｅ纤维化纤维微细菌Ｃｅｌｌｕｌｏｓｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍｃｅｌｌｕｌａｎｓ７．２５９ʃ０．４１７灰色链霉菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅｏｌｕｓ１．９７１ʃ０．５８４表４㊀纤维素刚果红透明圈情况Ｔａｂｌｅ４㊀ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＣｏｎｇｏｒｅｄｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｃｉｒｃｌｅ菌种Ｓｔｒａｉｎ纤维素刚果红透明圈ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＣｏｎｇｏｒｅｄｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｃｉｒｃｌｅ透明圈ＨＣ值ＴｈｅＨＣｖａｌｕｅｓｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｐａｒｅｎｔｃｉｒｃｌｅ原玻璃蝇节杆菌Ａｒ⁃ｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｐｒｏｔｏｐｈｏｒｍｉａｅ１．１６６ʃ０．０２８灰色链霉菌Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒｉｓｅｏｌｕｓ２．０４４ʃ０．２４５白地霉Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍｃａｎ⁃ｄｉｄｕｍ１．０７５ʃ０．０２９长枝木霉Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｌｏｎｇｉｂｒａｃｈｉａｔｕｍ１．２８８ʃ０．０４８㊀㊀该研究从白星花金龟幼虫新鲜虫粪中共分离出细菌５种㊁真菌３种，对其进行形态学和分子生物学鉴定，初步确定其分类地位及所属类群，分别为纤维化纤维微细菌㊁铅黄肠球菌㊁原玻璃蝇节杆菌㊁谷氨酸杆菌㊁灰色链霉菌㊁热带假丝酵母㊁长枝木霉和白地霉㊂通过选择培养基进行初步的功能筛选，确定纤维化纤维微细菌和灰色链霉菌具有降解蛋白质的能力，原玻璃蝇节杆菌㊁灰色链霉菌㊁白地霉和长枝木霉具有降解纤维素的能力，但其降解能力强弱仍需进一步定量研究㊂㊀㊀农业生产活动中产生的废弃物种类多㊁数量大，但目前对于农业废弃物资源化利用率相对较低㊂我国每年都能生产出大量的食用菌废菌渣，因其利用过程中存在诸多难点，导致其实际循环利用率相对较低㊂而利用微生物发酵技术对农业废弃物进行无害化处理，已成为生态农业可持续发展的重要方向㊂研究表明，纤维化纤维微细菌㊁原玻璃蝇节杆菌㊁灰色链霉菌等细菌，以及长枝木霉㊁白地霉等真菌具有降解纤维素和蛋白质的能力［１３－１５］，且在增加土壤养分㊁提高土壤酶活［１６］㊁增强植物抗逆性［１７－１８］㊁吸附金属离子［１９－２０］等方面表现出积极作用㊂因此，从饲喂食用菌废菌渣的白星花金龟幼虫虫粪中分离可培养微生物，筛选降解纤维素和蛋白质的功能菌，将为食用菌废菌渣的循环利用提供菌种资源㊂参考文献［１］郑洪源，刘建平，南怀林，等．白星花金龟子食性研究［Ｊ］．陕西农业科学，２００５，５１（３）：２３－２４，５４．［２］杨柳，张广杰，徐韬，等．白星花金龟幼虫对不同农业有机废弃物的转化力研究［Ｊ］．新疆农业大学学报，２０１９，４２（３）：１８９－１９３．［３］张广杰，王倩，刘玉升，等．白星花金龟幼虫对不同酵化周期四种物料的转化力研究［Ｊ］．山东农业大学学报（自然科学版），２０１９，５０（５）：７６４－７６７，８０４．［４］张庆镐，朴奎善，李基俊，等．蛴螬矿物元素和维生素含量分析［Ｊ］．微量元素与健康研究，２００２，１９（１）：３０－３１．［５］杨诚，刘玉升，徐晓燕，等．白星花金龟幼虫资源成分分析及评价［Ｊ］．山东农业大学学报（自然科学版），２０１４，４５（２）：１６６－１７０．［６］黄婉秋，石冬冬，蔡红英，等．白星花金龟幼虫肠道中纤维素降解菌的筛选及其全基因组分析［Ｊ］．中国农业科技导报，２０２１，２３（６）：５１－５８．［７］赖德强，王庆雷，吴娱，等．白星花金龟幼虫虫粪对低温条件下辣椒苗期发育的影响［Ｊ］．北方园艺，２０１９（８）：６３－６６．［８］刘福顺，冯晓洁，席国成，等．白星花金龟幼虫虫粪对樱桃萝卜生长情况的影响［Ｊ］．湖北农业科学，２０１８，５７（４）：４４－４６，５０．［９］陈燕红，程萍，杨鹏，等．一株纤维化纤维微细菌的生物学特性及其对几种苯环类化合物的利用研究［Ｊ］．微生物学通报，２００８，３５（７）：１０２１－１０２７．［１０］杨诚，刘玉升，徐晓燕，等．白星花金龟幼虫对酵化玉米秸秆取食效果的研究［Ｊ］．环境昆虫学报，２０１５，３７（１）：１２２－１２７．［１１］魏盼盼．白星花金龟幼虫处理木耳和香菇菌渣的研究［Ｄ］．哈尔滨：东北农业大学，２０２０．［１２］田小燕，宋福平，张杰，等．饲喂玉米秸秆的白星花金龟幼虫肠道细菌多样性［Ｊ］．昆虫学报，２０１７，６０（６）：６３２－６４１．［１３］王兴吉，王克芬，刘文龙，等．灰色链霉菌ＬＤ１８１０产胰蛋白酶发酵条件的优化［Ｊ］．安徽农业科学，２０１９，４７（２）：７－９，５１．［１４］田小海，崔洪艳，王莘．白地霉发酵产物的应用研究进展［Ｊ］．安徽农学通报，２０１６，２２（９）：３１－３２．［１５］李婉云，杨静雅，赵爽，等．纤维素降解木霉菌株的筛选及其生物学特性探究［Ｊ］．河北大学学报（自然科学版），２０２１，４１（６）：６９８－７０８．［１６］李堆淑，何念武，冀玉良．干旱胁迫下灰色链霉菌对桔梗幼苗根际土壤酶活性㊁养分及微生物的影响［Ｊ］．干旱地区农业研究，２０１７，３５（６）：１７３－１８０．［１７］刘佳，张悦，沈志彦，等．长枝木霉Ｔ６菌株对美洲南瓜枯萎病菌的抑制作用［Ｊ］．西北农业学报，２０２０，２９（１２）：１８９１－１８９７．［１８］李瑞，李惠霞，谢丙炎，等．长枝木霉菌株ＴＬ１６防治南方根结线虫的作用机理［Ｊ］．植物保护学报，２０２０，４７（２）：３８４－３９３．［１９］王学松，胡亚兰，付晶，等．原玻璃蝇节杆菌对锌离子的吸附特征［Ｊ］．淮海工学院学报（自然科学版），２０１２，２１（４）：５７－５９．［２０］付晶，王学松，王亮．原玻璃蝇节杆菌对铅离子的吸附性能研究［Ｊ］．湖北农业科学，２０１５，５４（４）：８１７－８２０．４㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２３年。

第1篇一、实验目的1. 掌握肠球菌的分离和纯化方法。

2. 熟悉肠球菌的形态特征和培养特性。

3. 学习肠球菌的鉴定方法，包括革兰氏染色、触酶实验、发酵实验等。

4. 了解肠球菌的耐药性及其对临床治疗的影响。

二、实验原理肠球菌属（Enterococcus）是一类革兰氏阳性球菌，广泛存在于人类肠道、生殖道以及环境中。

作为条件致病菌，肠球菌可引起尿路感染、腹腔感染、败血症等。

本实验通过分离、培养和鉴定肠球菌，旨在了解其生物学特性及耐药性。

三、实验材料1. 实验菌株：疑似肠球菌的纯培养菌液。

2. 培养基：LB培养基、血琼脂平板、麦康凯平板、M-H琼脂平板。

3. 试剂：革兰氏染色液、触酶试剂、糖发酵试剂、抗生素纸片等。

4. 仪器：显微镜、无菌操作台、培养箱、细菌培养皿等。

四、实验方法1. 分离与纯化（1）取疑似肠球菌的纯培养菌液，接种于LB培养基，37℃培养过夜。

（2）挑取单菌落，接种于血琼脂平板和麦康凯平板，37℃培养24小时。

（3）观察菌落特征，选取典型菌落进行纯化。

2. 形态观察（1）将纯化后的菌落涂片，进行革兰氏染色。

（2）显微镜下观察菌体形态、大小、排列等特征。

3. 触酶实验（1）将纯化后的菌落涂片，加入触酶试剂。

（2）观察菌落是否产生气泡，判断是否为肠球菌。

4. 发酵实验（1）将纯化后的菌落接种于M-H琼脂平板，加入不同糖类，37℃培养24小时。

（2）观察菌落周围是否出现透明圈，判断菌株是否能发酵该糖类。

5. 耐药性测试（1）将纯化后的菌落接种于M-H琼脂平板，贴上不同抗生素纸片。

（2）37℃培养24小时，观察菌落生长情况，判断菌株对各种抗生素的敏感性。

五、实验结果1. 分离与纯化从疑似肠球菌的纯培养菌液中成功分离出纯化菌株。

2. 形态观察革兰氏染色结果显示，菌体呈圆形、卵圆形，成对或短链排列。

3. 触酶实验触酶实验结果显示，菌株产生气泡，表明其为肠球菌。

4. 发酵实验发酵实验结果显示，菌株能发酵葡萄糖、乳糖、果糖等糖类。

第1篇一、实验目的1. 学习肠球菌的分离与培养方法。

2. 掌握肠球菌的形态、培养特性及生化反应。

3. 提高微生物实验技能。

二、实验原理肠球菌是一种革兰氏阳性球菌，广泛分布于自然界、动物体内和人类肠道中。

肠球菌对多种抗生素有抵抗力，是医院感染的重要病原菌之一。

本实验通过分离培养肠球菌，观察其形态、培养特性及生化反应，以鉴定其种类。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 肠道内容物- 生理盐水- 0.1%氯化钠溶液- 1%氢氧化钠溶液- 5%硫酸铜溶液- 10%氯化钠溶液- 2.5%碘酊- 生理盐水- 水浴锅- 培养皿- 移液器- 显微镜- 细菌培养箱- 酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒2. 实验仪器：- 电子天平- 高压蒸汽灭菌器- 离心机- 培养箱- 移液器- 显微镜四、实验方法1. 样品处理：- 取适量肠道内容物，加入生理盐水，充分混匀。

- 将混合液进行10倍稀释，取适量稀释液加入0.1%氯化钠溶液中，制成悬液。

2. 分离培养：- 将悬液涂布于含有0.1%氯化钠溶液的平板上，37℃培养24小时。

- 观察菌落特征，挑取典型菌落进行进一步鉴定。

3. 形态观察：- 将菌落制成涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察菌体形态。

4. 培养特性：- 将挑取的菌落接种于生理盐水、0.1%氯化钠溶液、5%硫酸铜溶液、10%氯化钠溶液、2.5%碘酊等培养基上，37℃培养24小时，观察菌落生长情况。

5. 生化反应：- 对挑取的菌落进行触酶试验、氧化酶试验、葡萄糖发酵试验、乳糖发酵试验等生化反应，以鉴定其种类。

6. 肠球菌鉴定：- 使用ELISA试剂盒对分离得到的菌进行肠球菌检测。

五、实验结果1. 样品处理：肠道内容物悬液呈均匀乳白色。

2. 分离培养：平板上出现圆形、光滑、边缘整齐、白色、直径约为1mm的菌落。

3. 形态观察：菌体呈球形，革兰氏染色呈阳性。

4. 培养特性：在生理盐水、0.1%氯化钠溶液、5%硫酸铜溶液、10%氯化钠溶液、2.5%碘酊等培养基上均能生长。

系统医学SYSTEMS MEDICINEDOI:10.19368/ki.2096-1782.2021.05.136尿液细菌培养结果与耐药情况研究沙蕾,古丽扎提·阿哈泰新疆医科大学附属中医院检验科,新疆乌鲁木齐830000[摘要]目的探讨尿液细菌培养结果与耐药情况。

方法选择该院2019年1—12月收治的200例尿培养阳性的患者,观察分析患者培养菌株耐药情况。

结果200例尿路感染菌株中包括革兰阴性杆菌144株(72.00%),革兰阳性球菌38株(19.00%),真菌18株(9.00%)。

其中革兰阴性杆菌主要种类为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌株、变形杆菌株。

革兰阳性球菌主要种类为屎肠球菌株、粪肠球菌株。

大肠埃希菌株对氨苄西林的耐药率最高为94.00%,对亚胺培南、美洛培南、头孢哌酮/舒巴坦和多粘菌素B 耐药率较低,依次为0.00%、0.00%、4.00%、2.00%;非发酵菌对氨苄西林、头孢唑啉、阿莫西林/克拉维酸的耐药率依次为92.00%、93.00%、96.00%,对头孢哌酮/舒巴坦和多粘菌素B 耐药率较低依次为8.00%、12.00%。

肠球菌对替考拉宁、万古霉素、利奈唑胺、夫西地酸的耐药率较低依次为0.00%、0.00%、4.00%、5.00%。

葡萄球菌对万古霉素的耐药率为0,对呋喃妥因、呋西地酸、利福平、阿米卡星的耐药性在10.00%以下。

结论尿液细菌培养结果与耐药情况可以为临床用药提供重要的参考信息和根据,指导临床抗生素的合理应用,减少泌尿道感染相关的耐药菌株的产生。

该方法值得临床进一步推广使用。

[关键词]尿液;细菌培养;耐药情况[中图分类号]R446[文献标识码]A[文章编码]2096-1782(2021)03(a)-0136-04Study on the Results of Urine Bacterial Culture and Drug ResistanceSHA Lei,Gulizati AhataiDepartment of Laboratory Medicine,Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine of Xinjiang Medical University,Urumqi,Xinjiang,830000China[Abstract]Objective To investigate the results of urine bacterial culture and drug resistance.Methods Select 200patients with positive urine cultures admitted to the hospital from January to December 2019,and observe and analyze the drug resistance of the cultured strains of the patients.Results 200cases of urinary tract infections included 144gram-negative bacilli (72.00%),38gram-positive cocci (19.00%),and 18fungi (9.00%).Among them,the main types of gram-negative bacilli were Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae strains,and Proteus strains.The main types ofgram -positive cocci were Enterococcus faecalis and Enterococcus faecalis.Escherichia coli strains had the highest resistance rate to ampicillin at 94.00%,and have lower resistance rates to imipenem,meropenem,cefoperazone/sulbactam and polymyxin B,followed by 0.00%,0.00%,4.00%,2.00%;resistance rates of non-fermenting bacteria toampicillin,cefazolin,amoxicillin/clavulanic acid were 92.00%,93.00%,96.00%,and cefoperazone/sulbactam and polymyxin B resistance rate was 8.00%and 12.00%.The resistance rates of enterococci to teicoplanin,vancomycin,linezolid,and fusidic acid were 0.00%,0.00%,4.00%,and 5.00%.Staphylococcus had a resistance rate of 0to vancomycin,and resistance to nitrofurantoin,fursidic acid,rifampicin,and amikacin was below 10.00%.Conclusion The results of urine bacterial culture and drug resistance can provide important reference information and basis for clinical medication,guide the rational application of clinical antibiotics,and reduce the generation of drug-resistant strains related to urinary tract infections.This method is worthy of further clinical application.[Key words]Urine;Bacterial culture;Drug resistance[作者简介]沙蕾(1974-),女,本科,主管技师,研究方向为医学检验。

动物源性肠球菌的研究进展曾钰然;高原;潘振东【摘要】Research advance in a summary of the classification of enterococcus from animal source,biological charac-teristic,pathogenicity,epidemiology,laboratory diagnosis and drug resistance.% 综述了动物源性肠球菌的生物学特性，致病性，流行病学，实验室诊断和耐药性的研究进展。

【期刊名称】《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(000)003【总页数】3页(P310-312)【关键词】肠球菌;致病性;实验室诊断【作者】曾钰然;高原;潘振东【作者单位】内蒙古民族大学动物科技学院，内蒙古通辽 028043;内蒙古民族大学动物科技学院，内蒙古通辽 028043; 内蒙古高校毒物与动物疾病监控重点实验室培育基地，内蒙古通辽028043;通辽市科左中旗宝龙山动物防疫站，内蒙古宝龙山 029315【正文语种】中文【中图分类】S85肠球菌作为目前一种非常重要的条件性致病菌，多种动物都可以受到它的感染.肠球菌在人和动物之间可以水平传播〔1-2〕.研究者从猪、鸡、鸭、鹧鸪、羔羊和家蚕等多种动物体内均分离到了致病性的肠球菌.这给养殖业造成了严重的损失.能使动物致病的肠球菌的主要是粪肠球菌，坚强肠球菌和屎肠球菌也可感染动物.笔者对动物源性肠球菌的生物学特性、致病性、流行病学以及实验室诊断的研究进展进行了综述，为肠球菌的进一步研究奠定了基础.肠球菌的形状为椭圆形或者圆形，它是兼性厌氧性革兰氏阳性菌.在液体培养基中培养后，肠球菌呈链状或成对排列.肠球菌在血清培养基上培养良好，在脑浸肉汤培养基上培养成完整的圆形菌落且表面光滑.肠球菌对环境适应力强且要求较低.人类及动物肠道中的都普遍存在肠球菌，2002年，毒力岛首次由美国科学家报告在粪肠球菌内被发现.粪肠球菌的毒力岛中，某些基因具有产生蛋白质的功能，这种功能可以帮助肠球菌附着在表面上；还有一些基因可以能控制肠球菌产生毒素，它们可以帮助肠球菌侵入到细胞的内部.肠球菌在离开肠道后，由于这些基因的存在，使它的感染能力得到了增强.研究者发现，毒力岛的基因在猪源肠球菌与人源肠球菌中同源性极高.所以，他们认为肠球菌的毒力岛可以在动物与人之间可以水平转移.2004年有研究报告称，只有在宿主细胞存在的前提下，肠球菌才可以生长，并且在这种条件下溶细胞素才可以被生成.细菌表面有粘附素，肠球菌可以借助它被吸附到肠道、心脏细胞以及尿路上皮细胞.此外，肠球菌还能产生一种叫做“聚集物质”的毒素，这种“聚集物质”可以使粪肠球菌在机体外对肾小管上皮细胞的粘附作用得到增强.此外，有研究推测，肠球菌可以同时诱发细胞因子依赖纤维蛋白以及诱发血小板聚集，推测认为该机制与由肠球菌感染而导致心内膜炎的产生的致病机理有关.在国内，由于感染肠球菌而使动物致病的报道有公猪睾丸炎〔3〕；鸵鸟肺部及胸腔化脓〔4〕；鹑鸡败血症〔5〕；感染肠球菌而导致死鸡胚和弱死雏鸡〔6〕；羊羔脑炎〔7〕.此外，肠球菌引起牛前心包炎、狗尿道感染、鸡败血症及牛乳房炎等疾病的报道也引起人们的关注.在家禽中，鸭源肠球菌对鸡、鸭、火鸡、鹅、和鸽几种动物都具有易感性，在它们中鸡的敏感性最强.肠球菌可以使多种日龄的鸡患病.研究者从实验中得出鸭源肠球菌的人工感染潜伏期大概从1d至几周不等，该病在各个季节均容易爆发，易在一个地方流行或在多个地方爆发，该病的死亡率在0.5%-50%之间.感染途径为损伤的皮肤和粘膜伤口，也可经呼吸道和消化道传播.新生的家禽通过脐带而感染此病〔8〕.在猪的胃肠道中，猪肠球菌普遍存在，属正常菌群.研究者从病死猪的病料组织中共分离到了三种肠球菌（屎肠球菌、粪肠球菌和铅黄肠球菌），以小鼠为试验动物，这三种肠球菌都具有较高的致病能力〔9〕.在实验过程中，肠球菌的初选极易与链球菌混淆.实验中，除了通过显微镜来观察其属性以外，实验室最常采用链球菌选择培养基来进行肠球菌和链球菌的筛选，首先将培养物（待检菌新鲜培养物）接种至链球菌选择培养基上，置35℃温箱中培养，4h后观察结果，培养基（PH值：5.4-5.8）为阳性时颜色为黑色或者褐色〔10〕.1985 年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应（polymerase chain reaction PCR）.PCR方法通过DNA聚合酶扩增基因，该方法可以检测特异基因片断.PCR反应花费时间较少，简单而且方便，该方法是已被广泛应用于检测肠球菌.分子生物学鉴定方法是20世纪80年代生物学界鉴定细菌种属较常使用的方法，该方法在阐明亲缘关系和新菌种的发现中有中药的作用〔11〕.16SrDNA分析法通过PCR扩增基因序列、构建克隆文库、测定核酸序列等操作，样本的16S rDNA的序列信息从该病原微生物样本中获得，比对它与与基因数据库中的16SrDNA序列数据，进而确定其在系统进化树中的位置、评价该样本的遗传多态性及系统发生发育关系〔12〕.运用16SrRNA基因序列分析技术，不仅能准确地确定细菌的种属，而且还可以体现不同的细菌菌属之间的差异.目前，研究者们发现一种新的手段来获得细菌的基因型的信息，这种方法为长度多态性技术分析.过去十年中，肠球菌已经成为非常重要的人畜感染的病原体，人们对于肠球菌耐药性增加的关注越来越多，导致感染疾病的病原体越来越难以治疗.在世界范围内，动物饲料中添加抗生素药物作为生长促进剂已经越来越普遍.目前，粪肠球菌对万古霉素最敏感，对氨苄西林、庆大霉素、青霉素、利萘唑烷较敏感.但近年来，由于临床免疫抑制剂的广泛使用，以及对某些疾病的放射线和化学治疗，使粪肠球菌感染的机会增加，对糖苷类（如万古霉素）的耐药性也在逐年增加，甚至出现了耐万古霉素粪肠球菌〔13〕，成为医院院内感染的重要病原菌之一.多重耐药肠球菌的出现是一个值得关注的动物健康问题.肠球菌的耐受性比较强，但对它的这种机制目前了解较少，包括对抗生素的使用.脂肽类抗生素允许用于治疗革兰氏阳性细菌感染，包括由于肠球菌引起的感染.推出以来，已报道过抗达托霉素的粪肠球菌菌株和屎肠球菌菌株，但十分罕见.研究者描述了基因突变随着耐达托霉素粪肠球菌的存在而增加〔14〕.研究结果表明，不同的遗传变化贯穿整个跃迁、转换和删除碱基的过程.齐亚〔7〕银等采集病死羊的组织，并对该病料依次进行了病原菌的分离培养、生化鉴定、血清学鉴定，最后进行动物回归实验，最终确定是由粪肠球菌导致的疾病的产生；韩红梅等在随后也用相同方法对4株鸭源性肠球菌进行了鉴定；杨霞〔15〕等对12株疑似猪源肠球菌的菌株采用肠球菌的16SrDNA基因的序列分析、构建系统进化树的等方法进行研究，快速鉴定了猪肠球菌及猪链球菌；程金平〔16〕等从来自河南省一些地区的病猪体内分离到了11株菌株，这些菌株被疑似为肠球菌.通过提取细菌菌种的基因组，对其16SrRNA基因进行PCR扩增，克隆过程完成后进行序列分析，进而与GenBank上已经注册的一些肠球菌菌株以及肠球菌的标准菌株的16SrRNA基因序列进行序列比对，然后绘制系统发育树，最终对所分离的菌株进行鉴定.11株分离的菌株中有4株最终被鉴定是粪肠球菌（E.faecalis），7株为屎肠球菌（E.faecium）.吴艳艳〔17〕等分离培养了一些蜜蜂幼虫，它们患有欧洲幼虫腐臭病，分离后获得1株未知菌株.从形态学、分离培养特性、生理生化特性和分子生物学等方面对该未知菌株进行了鉴定，得知该菌株为粪肠球菌，它是欧洲幼虫腐臭病的次生菌，属于肠球菌属，并暂定名为Enterococcus faecalis FB102.鲁兴萌〔18〕等从三种家蚕（感染细菌性肠道病家蚕、感染微粒子病家蚕、健康家蚕）的消化道内分离到了200株肠球菌，并进行了一些实验数据分析.粪肠球菌是动物致病性肠球菌感染的首要细菌.目前检测粪肠球菌应用最多、最可靠的检测方法是16SrRNA基因序列分析技术.粪肠球菌靠菌体分泌的黏附素吸附于靶细胞表面，聚集物质可增强这种作用；溶血素可增加感染程度，引发败血症.粪肠球菌敏感药物万古霉素产生耐药性，而成为感染的重要病原菌.对于肠球菌的鉴定的过程及结论均可证明肠球菌极易感染动物，所以对动物源性肠球菌的研究十分必要.〔1〕程金平.感染猪的肠球菌的生物学特性研究〔D〕.郑州:河南农业大学,2009. 〔2〕李光辉，张婴元.肠球菌感染研究进展〔J〕.国外医学内科学分册.1999,26.（11）.471-474.〔3〕张文东,王永贤,张应国，等.公猪睾丸炎肠球菌的分离与鉴定〔J〕.云南畜牧兽医,1998（3）:18.〔4〕单松华,谢爱织.进口鸵鸟的粪肠球菌的分离与鉴定〔J〕.上海农业学报,1998,14（1）:87-89.〔5〕唐正安,张乃芬,胡燕，等.鹌鸡肠球菌引起败血症3例〔J〕.云南医药,2002,23（5）:426.〔6〕尹崇,乌尼.鸡源肠球菌的分离与鉴定〔J〕.湖南畜牧兽医,1999,（2）:6-7. 〔7〕齐亚银.致羔羊脑炎肠球菌的分离鉴定及部分生物学特性研究〔D〕,石河子:新疆石河子大学,2005.〔8〕韩梅红.鸭源肠球菌的致病性和致病机制的研究〔D〕.武汉:华中农业大学,2006.〔9〕王亚宾,张红英,陈丽颖，等.临床感染猪肠球菌菌株的分离与鉴定〔J〕.河南农业大学学报,2008（42）5:528-531.〔10〕潘跃顺.赵克义.肠球菌的试验室诊断技术近况〔J〕.预防医学文献信息,2001（7）1:46-48.〔11〕都立辉,刘芳.16SrRNA基因在细菌菌种鉴定中的应用〔J〕.乳业科学与技术,2006,21（5）:207-209.〔12〕Brosius J,Dull T J,Sleeter D D,et al.Gene organization and primary structure of a ribosomal RNA operon Escherichia coli〔J〕.J MolBiol,1981,148（2）:107-127.〔13〕史宇翔,李宁.肠球菌的耐药性与耐药机制研究现状〔J〕.中国药师,2008,11（7）:850-852.〔14〕Palmer K L,Daniel A,Hardy C,et al.Genetic Diversity among Enterococcus faecalis〔J〕.Antimicrob Agents Chemother. 2011，55（7）:3345-56.〔15〕杨霞.致病性猪源肠球菌16S rDNA-RFLP研究及系统进化分析〔J〕.中国兽医学报,2010（30）3:332-336.〔16〕程金平.应用16S rRNA基因序列分析鉴定猪源肠球菌〔J〕.江西农业学报,2008,（11）20:1-4.〔17〕吴艳艳.蜜蜂幼虫粪肠球菌的分离与鉴定〔J〕.微生物通报,2010（10）37:1486-1490.〔18〕费晨.家蚕肠球菌16S rDNA序列及生化特性分析〔D〕.杨凌:西北农林科技大学.2006.。