菠萝蛋白酶提取液

从菠萝中提取菠萝蛋白酶
菠萝蛋白酶是一种有机物，也称为溶菌酶或蛋白水解酶。

它的特点是可以分解蛋白质，具有较强的酸性和碱性环境适应能力，因此，广泛应用于医疗、食品、化妆品等领域中。

从菠萝中提取菠萝蛋白酶是一项艰巨的任务。

以下是一些步骤：第一步是采集新鲜的菠萝果肉。

必须选用成熟度好的金丝菠萝果肉。

应选择外皮金黄色、果肉红黄相间的菠萝果肉。

第二步是制备浸出液。

将新鲜的菠萝果肉去皮、去核，切成小块，加入适量的水，搅拌并煮沸，经过静置、过滤，即可得到浸出液。

第三步是提取菠萝蛋白酶。

将制备好的浸出液冷藏，待其沉淀，将上层的冰冷水慢慢倒出，留下沉淀。

然后，在沉淀中加入适量的酸性酶解剂，轻轻摇晃，放置几小时。

第四步是酶活测定。

将提取的菠萝蛋白酶放在适宜的酶活测定条件下，如适宜的温度和酸碱度等，测定其活性或浓度。

以上是从菠萝中提取菠萝蛋白酶的一些步骤。

菠萝蛋白酶的应用范围广泛，可用于肉制品、啤酒、乳制品、水产品等食品中。

同时，它还能被用于医疗和化妆品领域，例如用于抗肿瘤、消炎、增加皮肤弹性等。

因此，菠萝蛋白酶的提取十分重要，细节决定了酶的纯度和活性，也影响到菠萝蛋白酶在不同领域中的应用。

菠萝蛋白酶得提取、初步分离纯化及活性测定１5食安(1)班张凯摘要:本研究运用硫酸铵沉淀法与透析法并结合考马斯亮蓝G520染色法测定菠萝皮中蛋白酶活性及蛋白质含量,得到同一品种及成熟度得菠萝皮经两种不同得纯化方法处理,菠萝皮中得蛋白酶都能被有效纯化,但就是蛋白酶活性会损失一部分、关键词:菠萝蛋白酶;透析法;分离纯化;酶活性;前言菠萝蛋白酶(bromelａｉｎ)就是从菠萝植株中提取得一类蛋白水解酶得总称,主要存在于菠萝茎与果实中,根据提取部位得不同,分为茎菠萝蛋白酶与果菠萝蛋白酶。

Mａrcaｎo于18９1年研究发现菠萝汁中含有蛋白酶、随后,人们对菠萝蛋白酶展开了一系列研究,发现其在医药与化工领域有很好得利用价值。

1957年,Heineche等从菠萝茎中提取得到蛋白质水解酶,从而使菠萝蛋白酶实现商品化生产。

目前,菠萝蛋白酶得一些功能成分已得到成功分离,并应用于医药领域、随着提取纯化技术得不断进步,高活性得菠萝蛋白酶将广泛应用于医药、化工与食品领域。

[１］利用菠萝皮分离纯化菠萝蛋白酶,不仅可充分利用资源,拓展菠萝蛋白酶得获取途径与应用空间,还可降低菠萝加工废料对环境得污染;随着市场对菠萝加工产品需求量得增大,对于菠萝皮得研究与利用就显得尤为重要,尤其对最主要得功能成分蛋白酶得分离、纯化与性质得研究更有意义、[２]本文通过对菠萝皮蛋白酶得提取,初步分离纯化及活性测定进行了初步研究,探讨影响菠萝蛋白酶活性得影响因素,并解决实验存在得一些问题、1实验材料与仪器１、1实验材料与试剂新鲜菠萝,透析袋(截留相对分子质量８00０~１４０00),0。

１mo1／ＬpH 7.8磷酸缓冲液配制(ＰBS),0.0１mｏ1/L pH 7。

８磷酸缓冲液配制(PBS),1%酪蛋白,激活剂[含20mｍo1/L半胱氨酸-盐酸盐、1mｍo１/L EDTA—Na2(乙二胺四乙酸二钠)],10%三氯乙酸(TCＡ)。

1、2实验仪器７2２型可见光分光光度计:上海舜宇恒平科学仪器有限公司;７52型光栅分光光度计:北京光学仪器厂;TＤL－６0B台式离心机:上海安宁科学仪器厂;D5Ｍ离心机:长沙湘智离心机仪器有限公司;DK-８Ｄ电热恒温水浴锅:上海森信实验仪器有限公司;可控硅恒温水浴锅:上海锦屏仪器仪表有限公司;AMPUT电子天平:深圳安普特科技有限公司;BS１１０S分析天平北京赛多利斯天平有限公司;ＤS—１型高速组织捣碎机:上海标本模型厂;HZS-H型水浴振荡器:哈尔滨市东联电子技术开发有限公司。

菠萝蛋白酶提取液简介：菠萝蛋白酶(Bromelain)简称菠萝酶，亦称凤梨酶、凤梨酵素等，是存在于菠萝植株中的蛋白水解酶，可从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到，菠萝蛋白酶已被广泛应用于食品、医药等行业。

利用吸附力、离子键、共价键等不同的联结方式，将酶与不溶性载体联结，制成固定化酶，可以很好的避免酶的失活，易于储存运输。

Leagene 菠萝蛋白酶提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的菠萝蛋白酶。

该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 离心管或试管操作步骤(仅供参考)：1、取g 菠萝肉或植物组织，切碎后在研钵或匀浆器中加入等体积组织匀浆液进行研磨或匀浆。

2、静置，滤纸过滤或纱布过滤。

3、留取滤液，边搅拌边加入Bromelain Lysis buffer ，搅拌，静置。

4、离心，弃上清液，收集沉淀，加入Bromelain 洗脱液，搅拌洗脱。

5、离心，取上清液，冻存，用于组织匀浆液的检测或其他用途。

计算：组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100% 注意事项：1、 待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

编号 名称 CS0411 2×500ml Storage 试剂(A): 组织匀浆液 500ml 4℃ 试剂(B): Bromelain Lysis buffer 500ml 4℃ 避光 试剂(C): Bromelain 洗脱液 100ml 4℃ 使用说明书 1份2、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用菠萝蛋白酶稀释样品后重新测定。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

相关：编号名称CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032 Masson三色染色液DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)NR0001 DEPC处理水(0.1%)PS0013 RIPA裂解液(强)TC1167 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。

从菠萝中提取菠萝蛋白酶的实训任务一从菠萝汁中提取菠萝蛋白酶【提取工艺】1、选取70%-80%成熟度菠萝的果皮，榨汁，用四层纱布过滤得鲜果皮汁。

2、称取1kg制备好的鲜菠萝果皮汁，加5%苯甲酸钠溶液10ml，搅拌均匀。

3、4000r/min离心7min，取上清液倒入干净的烧杯中。

4、在上清液中缓缓加入0.2%的单宁溶液，边加边搅拌约15min，可见沉淀析出。

静置40min。

5、除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4000r/min离心5min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。

6、把提取的蛋白酶糊倒入烧杯中，加0.1%EDTA溶液100ml搅匀，再把1.5%氯化钠溶液200ml倒入烧杯中搅匀，以4000r/min离心7min，倒掉上清废液，得到洗涤剂I酶复合沉淀物。

7、将洗涤剂I酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0.5%乙酸锌溶液20ml，搅拌均匀，静置5min；加0.06%抗坏血酸溶液30ml，搅拌均匀，静置5min；加1.5%氯化钠溶液20ml，搅拌均匀，静置5min；最后加0.5%EDTA溶液20ml，静置5min后，以4000r/min 离心7min，把上清液倒掉，得到洗涤剂II酶复合沉淀物。

8、把洗涤剂II酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0.5%硫代硫酸钠溶液20马力，搅拌均匀，静置5min；加1%L-半胱氨酸溶液10ml，搅拌均匀，以4000r/min离心7min，倒掉上清废液，最后得到蛋白酶糊。

9、把酶糊放入冰室（-12℃），低温冷冻15-20h。

取出解冻，离心得酶膏。

10、把酶膏倒入装有氯化钙或五氧化二磷的干燥器中干燥6～10h，得到的是菠萝酶。

研成粉状，低温保存。

任务二质量鉴定以菠萝蛋白酶活力来标志它的质量。

1、取酶制品0.15g克加入到0.05mol/L磷酸缓冲溶液（pH7.0）定容至100mL，过滤。

此滤液为溶液酶制剂。

2、取1mL溶液酶加入0.9mL激活剂，于37℃水浴中保温。

3、保温恒定后，加入同样预热的1%酪蛋白溶液，混匀，在37℃下准确反应10min，加入8mL1mol/L氢氧化钠溶液，迅速摇匀，于室温放置半小时。

菠萝蛋白酶的提取和分离朱明英 林文光(云南省热带作物科学研究所　景洪　666100) 菠萝蛋白酶,是菠萝下脚料综合利用的重要产品之一,一种新的生物化学制品。

菠萝蛋白酶有着广泛的用途,在制革、食品、饮料等生产中应用很多,在医学上用之医治炎症等多种疾病,特别对橡胶脱蛋白效果也很显著。

其水解蛋白质的活性大,适应性广。

菠萝蛋白酶的提取和分离方法主要参照文献[1—2]。

本试验在分离和提取工艺上作了一些摸索改进。

1　材料1.1原料:选70%—80%成熟度无刺卡因品种菠萝果皮,榨汁,用4层纱布过滤得鲜果皮汁。

1.2试剂:防腐剂:5%苯甲酸钠溶液。

沉淀剂:0.2%单宁溶液。

洗涤剂Ⅰ:0.1%乙二胺四乙酸二钠。

1.5%氯化钠溶溶洗涤剂Ⅱ:0.5%醋酸锌溶液、0.06%抗坏血酸溶30ml、0.15%氯化钠溶液200ml、0.5% EDT A溶液20m l洗涤剂Ⅲ:0.5%硫代酸钠溶液。

1%L—半胱氨酸溶液10m l(配制方法:称取L—半胱氨酸0.1g加水10ml,加1N盐酸溶液6—8滴助溶解,最后用6N N a OH溶液中和至pH3—4。

)2　方法和步骤2.1菠萝蛋白酶的提取称取1kg制备好的鲜果皮汁,加5%苯甲酸钠溶液10m l搅匀,以4000r/min离心7min,取上清液倒入干净烧杯中。

在上清液中缓缓加入0.2%的单宁溶液75ml,边加边拌约15min,沉淀物析出,静止40m in。

虹吸除去上清废液,把酶复合沉淀物倒入离心杯中,以4000r /min离心5min,倒掉上清废液,得到酶糊复合物。

2.2分离、洗涤和保护2.2.1洗涤Ⅰ把提取的蛋白酶糊倒入烧杯中,加0.1% EDTA溶液100m l搅匀,再把0.15%氯化钠溶液200m l倒入烧杯中搅匀,以4000r/m in离心7min,倒掉上清废液,得到洗涤Ⅰ酶复合沉淀物。

2.2.2洗涤Ⅱ把洗涤Ⅰ酶复合沉淀物倒入烧杯中,加0.5%醋酸锌溶液20ml搅拌均匀,静止5min,加0.06%抗坏血酸溶液30ml搅匀,静止5min;加1.5%氯化钠溶液20m l搅匀,静止5min;最后再加0.5%EDT A溶液20ml搅匀,静止5min以4000r/min离心7m in,把上清废液倒掉,得到洗涤Ⅱ酶复合沉淀物。

[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因菠萝蛋白酶提取一、实验目的：1、了解菠萝蛋白酶的提取和纯化工艺2、优化和加深熟悉菠萝蛋白酶提取二、实验原理：菠萝蛋白酶(Bromelain，简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素)是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。

其外观为浅灰色粉末状，分子量为 33000 ，等电点为 9.55 。

品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工,采用超滤方法进行过滤浓缩,低温冷冻干燥而得的。

产品已被广泛应用于食品、医药等行业。

结果表明。

提取菠萝中菠萝蛋白酶最佳提取工艺条件是添加单宁溶液的浓度为0．2％，提取时最适pH值为6．5～8．5左右，而最适提取温度为60℃。

菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化，啤酒澄清，还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。

在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。

三、实验步骤操作要点：菠萝蛋白酶的提取称取1 kg制备好的鲜果皮汁，加5％苯甲酸钠溶液10 ml搅匀，以4 000 r／min离心7 min，取上清液倒人干净烧杯中。

上清液分装在6个小烧杯中，每个装100 ml菠萝汁，分别缓缓加入空白、0．1％、0．2％、0．3％、0．4％、0．6％单宁溶液10 ml，边加边拌约1 5min，沉淀物析出，静止40 min。

虹吸除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4 000 r／min。

离心5 min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。

分离、洗涤和保护把提取的蛋白酶糊倒人烧杯中，加0．1％EDTA溶液100 ml搅匀，再将1．5％氯化钠溶液200 ml倒人烧杯中搅匀，以4 000 r／min离心7 min，倒掉上清废液，得到洗涤剂I酶复合沉淀物。

把洗涤剂I酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0．5％乙酸锌溶液20 min，搅拌均匀，静止5 min，加0．06％抗坏血酸溶液30 ml，搅匀，静止5 rain，加1．5％氯化钠溶液20 ml，搅匀，静止5 min，最后再加0．5％EDTA溶液20 ml，搅匀，静止5min，以4 000 r／min离心7 min，把上清废液倒掉，得到洗涤剂Ⅱ酶复合沉淀物。

菠萝蛋白酶的提取原理菠萝蛋白酶是一种天然的蛋白酶，广泛存在于菠萝的果汁和果肉中。

提取菠萝蛋白酶的原理主要涉及菠萝蛋白酶的特性、细胞破碎、酶的活化与稳定化等过程。

下面将详细介绍菠萝蛋白酶的提取原理。

菠萝蛋白酶是一种催化蛋白质水解的酶，属于半胱氨酸蛋白酶家族。

菠萝蛋白酶具有较强的蛋白质降解活性，可以在酸性条件下或中性条件下发挥作用。

在酸性条件下，菠萝蛋白酶通常具有最佳催化活性。

提取菠萝蛋白酶的第一步是破碎菠萝，以释放细胞内的菠萝蛋白酶。

菠萝果实的表面有一层防护性的角质层，需要先去除这层角质层，使其暴露出果肉。

然后，将果肉切成小块，用果汁机或搅拌器进行细胞破碎，以破坏细胞壁释放细胞内的菠萝蛋白酶。

提取菠萝蛋白酶的第二步是酶的活化。

菠萝蛋白酶是一种活性酶，在一定条件下可以被活化。

常用的活化剂有酒精、盐酸、醋酸等，其中以酒精最常见。

将细胞破碎液与酒精混合，放置一段时间，使菠萝蛋白酶被活化。

提取菠萝蛋白酶的第三步是稳定酶的活性。

由于菠萝蛋白酶容易被环境因素（如温度、pH等）影响而失去活性，因此需要采用一些方法来稳定酶的活性。

常用的方法包括温度控制、pH调节、添加保护剂等。

例如，可以将活化后的菠萝蛋白酶溶液进行冷冻保存或加入抗氧化剂来延缓酶的衰老过程。

提取菠萝蛋白酶的最后一步是纯化酶。

菠萝蛋白酶的提取通常是作为一种复杂液体提取物，其中除了目标酶外还含有其他杂质。

为了获得高纯度的菠萝蛋白酶，需要进行纯化步骤，如离心、过滤、层析等。

这些步骤可根据酶的特性和特定实验要求来选择。

总的来说，菠萝蛋白酶的提取原理主要涉及菠萝蛋白酶的特性、细胞破碎、酶的活化与稳定化以及纯化。

通过这些步骤，可以获得菠萝蛋白酶的高纯度提取物，为进一步研究和应用菠萝蛋白酶提供了基础。

在实际操作过程中，还需根据具体需求和条件进行改进和优化，以提高菠萝蛋白酶的提取效果。

从菠萝中提取菠萝蛋白酶
菠萝蛋白酶是一种酶类蛋白质，可分解蛋白质成分。

菠萝是其主要来源之一，因此，从菠萝中提取菠萝蛋白酶成为一种常见的方法。

提取菠萝蛋白酶的方法可以通过多种方式实现，其中包括机械压榨、超声波处理、低温浸泡、固相萃取和酵素技术等。

不同的方法会对提取效果产生不同的影响。

机械压榨是最简单的提取方法之一，通过将菠萝果肉或茎汁挤压后，分离出含有菠萝蛋白酶的液体。

超声波处理则是一种快速、高效的提取方法，它利用超声波能量刺激菠萝细胞释放菠萝蛋白酶。

低温浸泡是一种保留菠萝蛋白酶活性的提取方法，通过在低温下将菠萝浸泡一段时间，可提高菠萝蛋白酶的纯度和活性。

固相萃取是一种常用的精细化提取方法，它将菠萝蛋白酶从其他成分中分离出来，通过针对菠萝蛋白酶特异性的化学反应，可将菠萝蛋白酶浓缩，从而得到纯度高的菠萝蛋白酶。

酵素技术则是利用大肠杆菌等细菌表达人造菠萝蛋白酶，通过纯化酶产物得到菠萝蛋白酶。

总之，从菠萝中提取菠萝蛋白酶是一种常见的方法，通过不同的提取技术可以得到不同品质的菠萝蛋白酶。

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食品酶学综合性实验实验1 菠萝蛋白酶的提取、初步分离纯化及活性测定【目的和要求】1. 了解酶分离纯化的一般程序；2. 掌握硫酸铵沉淀法、透析法分离提取菠萝蛋白酶的基本原理和方法；3. 熟悉蛋白质含量测定、菠萝蛋白酶活力测定等实验原理和方法。

【实验原理】1.建立有效的酶纯化程序应考虑的原则（1）利用酶在分离纯化上最有利的特性；（2）尽早使用一种选择性好的方法；（3）选择交换能力高的层析技术作为第一步层析；（4）不要连续使用相同的纯化方法；（5）将各层析步骤连接起来，使前一步得到的样品适用于下一步层析；（6）在造成酶被稀释的步骤后来要用浓缩酶的方法；（7）要使每步过程的分辨能力呈递增趋势；（8）每步纯化过程后，通过量体积，酶活力和蛋白质浓度测定，监测纯化的进程。

2.菠萝蛋白酶简介菠萝蛋白酶（Bromelain，EC 3.4.22.3）简称菠萝酶，是从凤梨属植物菠萝中提取的一组复合的半胱氨酸巯基蛋白水解酶。

在食品工业中菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂，能分解蛋白质、肽、酯和酰胺等，可用于肉质嫩化、水解蛋白、啤酒澄清、干酪生产等。

在医药上它可以治疗水肿及多种炎症。

1891年Mercaro于菠萝的汁中首先发现。

菠萝蛋白酶属于糖蛋白，是由巯基蛋白酶和非蛋白酶组分构成的复杂复合物，因含有一个不稳定的游离巯基，所以菠萝蛋白酶极易被氧化而使其酶活下降。

菠萝蛋白酶的相对分子质量大约为33 000DW，等电点9.55，最适pH在7.1左右，在偏酸环境下酶活下降较快，碱性环境能延缓失活。

菠萝蛋白酶的温度的最稳定范围是55℃~65℃。

金属盐离子中NaCl、KCl对酶活的影响不是很大，维生素C、半胱氨酸、硫代硫酸钠、2-巯基乙醇是菠萝蛋白酶的稳定剂，，EDTA能通过螯合对酶活有影响的金属离子而保护菠萝蛋白酶，有机溶剂中甲醇、乙醇、乙二醇对酶活损失较大。

3.菠萝蛋白酶的粗分离（1）盐析分离盐析法是粗分离蛋白质的重要方法之一。

在稀盐溶液中，蛋白质的溶解度随盐浓度的增加而升高，这种现象称为盐溶。

菠萝蛋白酶的提取、初步分离纯化及活性测定14食安（5）班马俊宇201430520516摘要：本次实验通过对菠萝皮中存在的菠萝蛋白酶进行粗提取、盐析和透析从而纯化和分离；并采用考马斯亮蓝法测定提取液中蛋白质的含量，利用菠萝蛋白酶水解酪蛋白后的水解产物酪氨酸，在280nm处吸光值的高低，判断酶活性的大小。

从实验结果看出，纯化程度越高，提取液中蛋白质的含量先降低，后升高。

同时，实验测得菠萝蛋白酶的比活力、回收率随纯化程度的提高而先升高后降低。

关键词：菠萝蛋白酶纯化酶活性蛋白质含量前言菠萝蛋白酶主要分布于菠萝的茎和果实中，能分解蛋白质、肽、脂和酰胺，具有较高的生物活性，在各个生产领域中得到广泛的应用[1]。

在食品工业中菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂，能分解蛋白质、肽、酯和酰胺等，可用于肉质嫩化、水解蛋白、啤酒澄清、干酪生产等。

菠萝蛋白酶来可以用来增加豆饼和豆粉的PDI值和NSI值，从而生产出可溶性蛋白制品及含豆粉的早餐、谷类食物和饮料。

其它还有生产脱水豆类、婴儿食品和人造黄油；澄清苹果汁；制造软糖；为病人提供可消化的食品；给日常食品添味等。

在医药上它可以治疗水肿及多种炎症，并有助消化，健胃消食等功能[2]。

菠萝萝蛋白酶 p H 在 4.0~5.5处于较稳定的状态，在中性环境中酶活保持最高，在偏酸环境下酶活下降较快，碱性环境能延缓失活[3]。

本实验研究粗提取、盐析和透析所得到的菠萝蛋白酶提取液中的蛋白质含量、酶活性高低、回收率和纯化倍数等，对酶的纯化情况进行研究。

1 实验材料与仪器1．1 实验材料与试剂新鲜菠萝（3个），盐析粗提液（PBS），酪蛋白试剂，激活剂，三氯乙酸(TCA)，透析袋，牛血清蛋白，考马斯亮蓝，乙醇1．2 实验仪器电子天平，台式天平，恒温水浴锅，冰箱，高速离心机，分光光度计，研钵，烧杯，量筒，容量瓶，移液管，漏斗，漏斗架，滤纸，试管，试管架，滴管，玻璃棒，纱布，洗耳球，标签纸，橡皮筋DS-1型高速组织捣碎机：上海标本模型厂HZS-H型水浴振荡器：哈尔滨市东联电子技术开发有限公司2 实验方法2．1 菠萝蛋白酶的粗酶提取称取菠萝皮材料20g，将菠萝皮在清水中洗净，沥干，切成小段后置于超高速搅拌机中，加入约60mL预冷的0.1mo1/L pH 7.8 PBS，持续搅拌10~15min 至粉碎，搅拌完成后用4层纱布过滤，得到滤液后，用冷冻离心机于4°C 3000rpm离心6min，弃沉淀，即得到菠萝蛋白酶粗提液，测定粗提液的体积、蛋白质含量和酶活性。

菠萝蛋白酶的提取纯化工艺研究梁 雪，方欢乐，刘建利（西安培华学院 医学院，陕西西安 710199）摘 要：为降低环境污染，提高菠萝蛋白酶的附加值以及延长菠萝的产业链，以菠萝废弃物为原料，采用盐析浓缩-透析提纯-乙醇有机溶剂沉淀相结合的方法提取菠萝蛋白酶。

实验考察料液比、缓冲液温度、搅拌时间、缓冲液pH值、盐析浓度以及透析时间对菠萝蛋白酶酶活性和酶活回收率的影响。

结果表明，菠萝蛋白酶的最佳工艺条件为料液比1.0∶1.5（m∶v）、缓冲液温度30 ℃、搅拌时间40 min、缓冲液pH值7、盐析浓度30%和透析时间28 h，该条件下菠萝蛋白酶酶活回收率为68.45%。

关键词：菠萝蛋白酶；盐析法；透析提纯；有机溶剂沉淀Study on Extraction and Purification of BromelainLIANG Xue, FANG Huanle, LIU Jianli(Medical College, Xi’an Peihua University, Xi’an 710199, China)Abstract: In order to reduce environmental pollution, increase the added value of bromelain, and extend the industrial chain of pineapple, a method combining salt precipitation concentration dialysis purification ethanol organic solvent precipitation was used to extract bromelain from pineapple waste as raw material. The experiment investigated the effects of material liquid ratio, buffer temperature, stirring time, buffer pH value, salting out concentration, and dialysis time on bromelain enzyme activity and enzyme recovery rate. The results showed that the optimal process conditions for bromelain were material to liquid ratio of 1.0∶1.5（m∶v）, buffer temperature of 30 ℃, stirring time of 40 minutes, buffer pH of 7.0, salt out concentration of 30%, and dialysis time of 28 hours. Under these conditions, the recovery rate of bromelain enzyme activity was 68.45%.Keywords: bromelain; salting out; dialysis purification; organic solvent precipitation菠萝蛋白酶为白色至淡棕黄色无定形粉末，是我国目前大规模生产的植物蛋白酶之一[1]。

菠萝蛋白酶提取方法的研究一、本文概述Overview of this article菠萝蛋白酶是一种从菠萝茎部提取的巯基蛋白酶，具有广泛的生物活性，包括抗炎、抗水肿、抗凝血、抗肿瘤等作用。

由于其独特的生物活性，菠萝蛋白酶在医药、食品、饲料、纺织、制革、造纸和化妆品等行业中具有广泛的应用前景。

因此，研究菠萝蛋白酶的提取方法对于其工业化生产和应用具有重要意义。

Pineapple protease is a thiol protease extracted from the stem of pineapple, which has a wide range of biological activities, including anti-inflammatory, anti edema, anticoagulant, and anti-tumor effects. Due to its unique biological activity, bromelain has broad application prospects in industries such as medicine, food, feed, textiles, leather making, papermaking, and cosmetics. Therefore, studying the extraction method of bromelain is of great significance for its industrial production and application.本文旨在研究菠萝蛋白酶的提取方法，通过对不同提取方法进行比较和优化，找出最佳提取工艺条件，以提高菠萝蛋白酶的提取效率和纯度。

本文首先介绍了菠萝蛋白酶的基本性质和应用领域，然后详细阐述了各种提取方法的原理、操作步骤和优缺点，包括传统提取方法、超声波提取法、微波提取法、酶解法等。

菠萝蛋白酶提取一．实验目的:1.了解菠萝蛋白酶的基本性质，设计提取方法并测性其蛋白总量及酶活性；2.计算从菠萝中提取菠萝蛋白酶时每步的回收率，判断提取方法的优劣。

二．实验原理：菠萝蛋白酶外观为白色至浅棕黄色无定形粉末；可溶于水，水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚；属糖蛋白。

主要作用原理是使多肽类水解为低分子量的肽类，尚有水解酰胺基键和酯类的作用。

其作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化,啤酒澄清,还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。

在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂,对正常组织无害,不影响植皮,适用于中小面积深度烧伤的治疗。

提取菠萝蛋白酶的传统工艺是高岭土吸附法和单宁沉淀法。

高岭土吸附法生产工艺和操作都比较复杂,原材料消耗多,所需设备也多,酶活总回收率低,但产品质量较好,纯度较高,单宁沉淀法工艺和操作比高岭土法简单,原材料消耗少,所需设备少,但酶活回收率低。

有些研究用超滤法对传统工艺进行了改革,不仅使菠萝蛋白酶产品更纯,而且酶粉得率比传统工艺高,但超滤法生产工艺和和操作比上述两种方法复杂,工人素质要求高,且设备一次性投资大。

本实验采用新型吸附法提取菠萝蛋白酶,步骤简单,产率比传统方法有所提高,是一种有发展的方法。

在新型吸附沉淀法提取菠萝蛋白酶中,所使用的锌离子对酶有激活作用,乙二胺四乙酸是一种螯合物,可有效地螯合原料中某些重金属离子,以避免其与酶结合而使酶失去活性,抗坏血酸则具有还原性,分子上的活泼羟基氢可使酶活性中心保持还原状态,从而有效地保持酶活性,其中以EDTA 和L2半胱氨酸组合,效果最佳。

单宁用量多少会直接影响酶产量,一般范围0. 15 %～0. 25 %的浓度。

采用Folin-酚法测定蛋白酶含量，发生双缩脲反应的蛋白中酚基（酪氨酸），在碱性条件下将磷钼酸和磷钨酸还原成钼酸和钨酸，呈蓝色，在650nm和66onm处有最大吸收值。

Folin-酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。

菠萝蛋白酶提取的主要工艺介绍
菠萝蛋白酶又称菠萝酶。

由菠萝汁、皮等提取的巯基蛋白酶。

可用于啤酒澄清、药用助消化和抗炎消肿。

菠萝蛋白酶提取的传统工艺虽然简单、投资少、成本低，但是工艺周期长，菠萝汁容易变质。

超滤膜分离技术分离浓缩菠萝蛋白酶可大大节约其他辅助材料的用量，总生产成本减少，且产品质量好，纯度高，酶活力高，经济效益明显比传统工艺好。

下面就为大家介绍一下菠萝蛋白酶提取的主要工艺操作。

菠萝蛋白酶提取的主要工艺操作：
1、压榨：将菠萝下脚料洗净，用压榨机压出汁液，加入0.05%苯甲酸钠防腐，迅速过滤除杂质。

可采用压滤法或离心法去杂质。

2、超滤浓缩：将澄清液在管式超滤设备中进行浓缩，使体积浓缩至原体积的1/5。

3、沉淀：将浓缩液降至0-4℃，边搅拌边加入-20℃95%的乙醇，直至混合液中的乙醇浓度为50%，静置使酶沉淀，移出上清液，即得湿酶。

4、干燥：将湿酶在0℃下减压干燥或冷冻真空干燥即得菠萝蛋白酶精品。

以上为大家介绍的就是菠萝蛋白酶提取的主要工艺操作，希望对大家有帮助。

菠萝蛋白酶的提取方法：（1）沉淀法沉淀法是粗提酶蛋白的方法之一，主要用于前期酶的初步分离和浓缩，常用的方法有盐析法，有机溶剂沉淀法，聚乙二醇沉淀法，等电点沉淀法等。

用新型吸附洗涤沉淀法和单宁沉淀法也可以提取菠萝蛋白酶，操作简单，产率也较高，但酶的产量与单宁的用量密切相关，而且所含单宁有毒，导致这种方法逐渐被淘汰了。

以酒精为沉淀剂提取菠萝蛋白酶时，酒精的加入量会对菠萝蛋白酶产生较大的影响，酒精的浓度太低时，不能使菠萝蛋白酶沉淀下来，浓度太高容易使酶变性失活。

酒精的浓度为80%时，酶的收率最高。

从茶叶中提取的多酚类物质茶多酚也可用于菠萝蛋白酶的分离，用0.5%的茶多酚提取物对菠萝汁中菠萝蛋白酶进行沉淀最多可达78%，其最大沉淀率明显比单宁法高。

（2）离子交换色谱法离子交换色谱层析法是蛋白质研究领域内比较高效的纯化技术，目前国外用于分离菠萝蛋白酶常用的离子交换剂有Sephacryl S-200柱、Mono S阳离子交换剂、S-Sepharose、弱酸性阳离子交换树脂、CM-纤维素阳离子交换柱、Q阴离子交换柱。

国内常用的有羧甲基纤维素（CMC）、二乙胺乙基纤维素（DEAE），酶的纯化过程通常是将若干色谱纯化技术联合使用来实现的。

Ota最早用SephadexG-75结合CM-SephadexC-25柱层析分离得到5种茎酶的组分。

用DEAE-52离子交换柱层析结合Sephadex G-75分子筛柱层析色谱法纯化果酶，能获得比活力为12.5U/mg的单一电泳纯酶制剂。

（3）固定化金属离子亲和色谱法固定化金属离子亲和色谱法是以普通凝胶作为载体，连接上合适的螯合配体和足够暴露的金属离子，制成亲和吸附剂，进行分离纯化蛋白质的方法。

此法介于高特异性的生物亲和分离法和低特异性的离子交换色谱法之间，对组氨酸基团有特异性。

Huali Nie 等（2008）首次应用固定化金属亲和膜（IMAM）—肽-尼龙膜，这是一种将七肽共价固定到复合膜上作为配体的新型尼龙膜，用其从菠萝中分离和提纯菠萝蛋白酶，可使菠萝蛋白酶纯化15.4 倍，回收率达94.6%，而且不会造成任何变性。