生物技术大实验

一、实验背景随着科技的不断发展，生物技术已成为当今世界重要的研究领域之一。

生物技术涉及基因工程、细胞工程、酶工程等多个方面，旨在利用生物体或其组成部分进行技术创新和产品开发。

本实验旨在通过学习生物技术的基本原理和实验操作，掌握相关技术，提高学生的实验技能和创新能力。

二、实验目的1. 了解生物技术的基本原理和实验操作。

2. 掌握分子克隆、蛋白质纯化等生物技术实验方法。

3. 提高学生的实验技能和创新能力。

三、实验内容1. 分子克隆实验（1）目的：学习DNA的提取、连接、转化等分子克隆技术。

（2）原理：利用DNA连接酶将目的基因与载体连接，并通过转化将重组质粒导入宿主细胞。

（3）操作步骤：①DNA提取：取适量细胞，加入裂解缓冲液，进行细胞裂解。

②DNA纯化：利用离心柱纯化DNA。

③连接：将纯化后的目的基因与载体连接。

④转化：将连接产物转化至宿主细胞。

⑤筛选：通过PCR、酶切等手段筛选阳性克隆。

2. 蛋白质纯化实验（1）目的：学习蛋白质纯化的原理和实验操作。

（2）原理：利用蛋白质的物理化学性质，如分子量、电荷、亲和力等，通过层析、离心等方法进行纯化。

（3）操作步骤：①样品制备：取适量蛋白质样品，加入适当缓冲液。

②离心：通过离心去除细胞碎片和杂质。

③层析：利用层析柱进行蛋白质分离纯化。

④收集：收集纯化后的蛋白质样品。

四、实验结果与分析1. 分子克隆实验结果：通过PCR、酶切等手段筛选出阳性克隆，证实了目的基因已成功克隆。

2. 蛋白质纯化实验结果：通过层析、离心等方法，成功分离纯化了目标蛋白质。

五、实验讨论1. 分子克隆实验中，DNA提取和纯化是关键步骤。

实验过程中，应严格控制操作条件，确保DNA质量。

2. 在蛋白质纯化实验中，层析柱的选择和操作对实验结果有很大影响。

应选择合适的层析柱，并严格按照操作规程进行实验。

3. 实验过程中，要注意实验操作的安全性，如使用生物安全柜、穿戴防护用品等。

六、实验总结通过本次生物技术实验，我们掌握了分子克隆、蛋白质纯化等基本实验操作，提高了实验技能和创新能力。

科学实验带领学生进行有趣的生物学实验生物学实验是培养学生科学精神和创新能力的重要途径。

通过科学实验，学生能够亲自动手进行观察、实验和分析，深入了解生物学的知识和原理。

本文将介绍几个有趣的生物学实验，希望能够激发学生的学习兴趣和探索精神。

实验一：昆虫观察在这个实验中，学生可以选择一种昆虫，如蚂蚁、蜘蛛或苍蝇，观察它们的行为和特征。

首先，学生需要提前准备一个透明容器，并在容器内放入一些适合昆虫生存的环境，如土壤、叶子和水。

然后，学生可以捕捉一些昆虫放入容器中观察。

他们可以观察昆虫的食性、活动规律以及体型特征，并记录下所观察到的现象和发现。

通过这个实验，学生可以更好地了解昆虫的生态习性和行为特征。

实验二：植物生长实验这个实验可以让学生亲自体验植物的生长过程，了解植物的光合作用和水分吸收等基本原理。

学生需要准备一些植物的种子、土壤和透明的种植容器。

首先，学生需要在容器中放入一定量的土壤，并在适当的位置播种植物种子。

之后，他们需要为植物提供充足的阳光和适量的水分，观察植物的生长情况，并进行记录和测量。

在实验过程中，学生可以观察到植物的根系生长、茎叶的发育以及花朵的开放，从而了解植物生长的基本原理。

实验三：动物解剖实验这个实验适合高年级的学生，通过解剖动物，了解动物的解剖结构和器官功能。

学生需要准备一个已经死亡的小动物，如青蛙或鱼类，并准备一套解剖工具。

在进行解剖之前，学生需要熟悉动物的解剖图和器官结构，并进行相应的防护措施。

然后，学生可以逐步进行解剖，并观察每个器官的位置和功能。

通过这个实验，学生可以更加深入地了解动物的内部结构和功能，并对生命科学有更深入的认识。

实验四：细菌培养实验这个实验可以让学生亲自实践细菌的培养和观察，了解微生物的生长规律和对环境的适应能力。

学生需要准备一些培养皿、琼脂平板和细菌样本。

首先，学生需要将细菌样本均匀涂抹在琼脂平板上，然后将其放入培养皿中，并进行适当的温度和湿度控制。

在一定的培养时间后，学生可以观察到细菌的生长情况，并进行记录和分析。

史上最全的30个生物实验技术及原理!（一）引言概述：生物实验技术的快速发展在许多领域中发挥着重要作用。

本文将介绍史上最全的30个生物实验技术及其原理，希望能够为读者提供一些有关生物实验的有用信息和启发。

本篇文档将详细阐述其中的五个大点，并在文末进行总结。

正文：1. PCR技术（聚合酶链式反应）及其原理a. 反应原理：DNA的扩增b. 所需材料和试剂c. 反应步骤d. PCR在基因检测和疾病诊断中的应用e. PCR扩增的局限性和优化方法2. Western Blot技术及其原理a. 反应原理：蛋白质的检测和定量b. 所需材料和试剂c. 实验步骤d. Western Blot在蛋白质研究中的应用e. Western Blot的优缺点及其改进方法3. 细胞培养技术及其原理a. 细胞培养的目的和意义b. 常用的细胞培养基和培养环境要求c. 细胞培养的方法和步骤d. 细胞培养在药物筛选和细胞研究中的应用e. 细胞培养的注意事项和常见问题解决方法4. ELISA技术（酶联免疫吸附测定法）及其原理a. 反应原理：特定抗原或抗体的检测b. 所需材料和试剂c. 实验步骤d. ELISA在免疫学和生物医学研究中的应用e. ELISA的优点和缺点，以及改进方法5. 荧光显微镜技术及其原理a. 反应原理：荧光信号的检测和成像b. 所需设备和试剂c. 实验步骤d. 荧光显微镜在细胞和组织成像中的应用e. 荧光显微镜的局限性和技术进展总结：本文介绍了史上最全的30个生物实验技术及其原理。

从PCR 技术、Western Blot技术、细胞培养技术、ELISA技术到荧光显微镜技术，每个大点均分别阐述了技术的原理、所需材料和试剂、实验步骤、应用领域以及优缺点。

这些实验技术在生物医学研究、药物开发和生物工程等领域中起着重要作用。

读者可以根据自己的研究需求和兴趣，选择适合自己的技术进行实验和研究。

在使用这些技术时，应注意实验操作的细节和安全性，以提高实验的准确性和可靠性。

生物技术制药实验武汉大学药学院生物技术实验室湖北·武汉目录实验一质粒DNA的小量制备 (2)实验二质粒DNA电泳鉴定 (4)实验三感受态细胞的制备和转化 (5)实验四目的基因的表达及表达产物的初步提取 (8)实验五蛋白质纯化—盐析沉淀法 (10)实验六凝胶过滤层析 (14)实验七蛋白质免疫印迹实验（Western Blotting） (16)实验八HRP结合物的过碘酸钠交联法 (19)实验一质粒DNA的小量制备【目的】学会最常用的碱裂解法小量制备质粒DNA的方法。

【原理】根据共价闭合环状质粒DNA和线性DNA在拓扑学上的差异来分离。

在pH12.0~12.5这个狭窄的范围内，线性DNA双螺旋结构解开而被变性。

尽管在这样的条件下共价闭合环状质粒DNA也会变性，但两条互补链彼此互相盘绕，仍会紧密结合在一起。

当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液使pH恢复中性时，共价闭合环状质粒DNA复性快，而线性的染色体DNA复性缓慢，经过离心和蛋白质和大分子RNA等发生共沉淀下去而被去除。

【器材】超净工作台，接种环，酒精灯，台式离心机，旋涡混合器，微量移液器，1.5ml微量离心管，恒温摇床，试管，双面微量离心管架，试管架，标签纸，磁力搅拌机。

【试剂】pET-28a质粒载体菌, LB培养基1000ml（含10μg/ml卡那霉素），葡萄糖/Tris/EDTA 溶液（溶液I），NaOH/SDS溶液（溶液II），KAc溶液（pH4.8）（溶液III），RNase A，95%乙醇，70%乙醇，TE buffer（pH8.0）。

【实验准备】1. 配制卡那霉素储存液（无菌水配制10mg/ml，分装后-20︒C保存）。

2. 配制LB培养基（胰化蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10g加200mL 双蒸水搅拌完全溶解，用约200μL 5N NaOH调pH至7.0，加双蒸水至1L，121︒C灭菌20min）。

3. 溶液I（50mmol/L葡萄糖，25mmol/L Tris HCl pH8.0，10mmol/L EDTA pH8.0）。

生物技术实验报告生物技术实验报告引言生物技术是一门涉及生物学和工程学的交叉学科，通过利用生物体的特性和生物分子的相互作用，来解决现实世界中的问题。

本实验旨在探索生物技术在实验室中的应用，以期增进对生物技术的理解和认识。

实验目的本实验的目的是通过使用PCR技术，对特定基因片段进行扩增，并通过凝胶电泳分析扩增产物。

通过这个实验，我们将学习PCR技术的原理和操作步骤，并了解如何使用凝胶电泳进行DNA分析。

实验材料和方法材料：- DNA样本- PCR试剂盒- 扩增引物- DNA电泳仪- 琼脂糖凝胶- DNA标记物方法：1. 准备PCR反应体系：将PCR试剂盒中的反应液与DNA样本、扩增引物混合。

2. 进行PCR扩增：将混合好的反应液放入PCR仪中，按照设定的温度和时间进行扩增。

3. 准备琼脂糖凝胶：将琼脂糖溶解在缓冲液中，倒入电泳仪中，等待凝固。

4. 准备样品：将PCR扩增产物与DNA标记物混合。

5. 进行电泳：将混合好的样品倒入琼脂糖凝胶槽中，进行电泳分析。

6. 分析结果：观察凝胶上的DNA条带，判断扩增是否成功。

实验结果与讨论在进行PCR扩增和凝胶电泳后，我们观察到在琼脂糖凝胶上出现了一些DNA 条带。

这些条带代表了PCR扩增产物的大小和数量。

通过比较这些条带与DNA 标记物的迁移距离，我们可以确定PCR扩增产物的大小。

在实验中，我们使用了PCR技术对特定基因片段进行扩增。

PCR技术通过利用DNA聚合酶酶的特性，在不断变化的温度条件下，使DNA链的两端进行反复扩增。

这种扩增过程可以快速产生大量目标DNA片段，从而使我们能够对其进行进一步分析。

凝胶电泳是一种常用的DNA分析方法，通过利用DNA的负电荷特性，在电场的作用下，使DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移。

由于DNA片段的大小不同，迁移速度也不同，因此在凝胶上形成了不同大小的DNA条带。

通过与DNA标记物的比较，我们可以确定PCR扩增产物的大小。

在本实验中，我们成功地扩增了目标基因片段，并通过凝胶电泳分析得到了相应的结果。

《微⽣物技术⼤实验》实验指导《微⽣物技术⼤实验》实验指导（适⽤专业：11级本科⽣物技术微⽣物学⽅向）柯野编韶关学院英东⽣命科学学院2014年实验⼀、重组毕⾚酵母发酵表达蛋⽩酶及其初步鉴定⼀、实验⽬的1、学习重组毕⾚酵母培养基产物表达的⽅法。

2、学习发酵过程中菌体浓度的测定。

3、学习表达的重组蛋⽩酶的鉴定及其酶活的测定。

⼆、实验内容1、毕⾚酵母的菌体⽣长和诱导表达的培养基的制备。

2、重组毕⾚酵母⽣长菌体曲线的测定。

3、对重组毕⾚酵母⼯程菌株的诱导表达。

4、对重组毕⾚酵母⼯程菌株的诱导表达发酵液的酶活测定。

5、SDS-PAGE鉴定重组蛋⽩酶。

三、实验原理蛋⽩酶是催化蛋⽩质化合物中肽键⽔解为⼩肽或氨基酸的⼀类酶总称，⼴泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实及微⽣物中，并且对⽣物体的⽣理调控、催化各种代谢反应等⽅⾯具有重要的作⽤。

蛋⽩酶是⼀类重要的⼯业⽤酶，约占整个⼯业⽤酶量60%以上；⼴泛应⽤于⾷品加⼯、⽪⾰、医药和化⼯等⾏业。

由于蛋⽩酶具有⼴泛的⼯业、⾷品和医药等⽅⾯的应⽤价值，⽬前⼯业上需求量⼤。

植物中提取的蛋⽩酶主要是中性蛋⽩酶。

植物蛋⽩酶⽣产依赖于植物种植，这易受到季节、地理、⽓候等多因素的影响致使来源不稳定。

动物源性蛋⽩酶多从⽜、⽺和猪等的胰脏中提取⽽得。

动物来源蛋⽩酶⽣产成本较⾼，并受到世界动物保护协会和⼈员的强烈反对，⽬前主要⽤于医药⽅⾯。

因此，动植物源蛋⽩酶不能满⾜当代⼯业的需要。

微⽣物源蛋⽩酶⼏乎具有所有植物和动物来源蛋⽩酶的应⽤特性，成为了⽬前的蛋⽩酶的重要来源。

据统计，微⽣物蛋⽩酶占据了世界蛋⽩酶销售⼤约70%以上的份额。

⽬前商业化的蛋⽩酶主要来源于芽孢杆菌，中性蛋⽩酶来⾃植物⽊⽠，⽽来源于真菌的极少。

⽬前，国内外学者对来源于霉菌的蛋⽩酶的研究主要集中于通过优化固体(或者液体)发酵来提⾼蛋⽩酶的产量或通过分离纯化其产⽣的部分酶进⾏性质研究；⽽优化发酵条件很难⼤幅度提⾼蛋⽩酶产量，且发酵过程易受多种因素(如易污染或菌株⽣长状态)影响。

生命的基本特征：①细胞是生物的基本组成单位（病毒除外）②新陈代谢、生长和运动是生命的基本功能③生命通过繁殖而延续，DNA是生物遗传的基本物质④生物对外界可产生应激反应和自我调节，对环境具有适应性生物学经历的三个阶段：描述生物学阶段、实验~、创造~生物技术：也称生物工程，是以现代化生命科学为基础，运用先进科学原理和工程技术手段按预先的设计来加工或改造生物材料，从而产生出人类需要的产品或达到某种目的生物技术发展三个阶段：作坊式生物技术、工业化~、现代~生物技术内容：基因工程技术、细胞~、酶~、发酵~、蛋白质~细胞工程：指以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传特性，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术蛋白质工程：是以蛋白质结构功能关系的知识为基础，通过周密的分子设计，把蛋白质改造为合乎人类需要的新的突变蛋白质。

蛋白质工程也成为“第二代基因工程”生物技术基本特征：①高效益②高智力③高投入④高竞争⑤高风险⑥高势能透光度t：某一波长的光透过某一物质的溶液时，其入射的角度I0与透过溶液后的强度I相比发生了变化：I与I0的比值（I /I 0)称为透光度实验室常用水的制备：①利息交换法②蒸馏法③反浸法④超纯法消毒灭菌方法：①高压高温灭菌②干热灭菌③滤膜灭菌④化学消毒法⑤紫外线灭菌⑥抗生素灭菌消毒核酸的一级结构：线性结构，核苷酸的排列顺序，也称碱基序列二级结构：双螺旋结构三级结构：超螺旋结构DNA的变形：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程增色效应：核酸变性后，在260nm处吸收值上升DNA的复性：在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象减色效应：DNA复性时，OD260值下降影响复性速度的因素：①溶液温度的高低②单链片段的大小③单链片段浓度④溶液离子强度的大小⑤片段内重复序列的多少OD260的应用：OD260=1.0 相当于①50ug/ml 双链DNA ②40ug/ml 单链DNA或RNA③20 ug/ml 寡核苷酸基因（分子生物学概念）：基因是DNA双螺旋分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列管家基因：某些基因是维持细胞基本代谢所必须的基因，其在一个生物个体的几乎所有细胞中持续表达阅读框架：在DNA链上，由蛋白质合成的起始密码开始，到终止密码子为止的一个连续编码序列基因的结构：外显子、内含子、前导区、尾部区、调控区三个关键因素：①自由复制的DNA序列②着丝粒DNA序列③端粒DNA序列原核生物和真核生物染色体的区别：①原核生物的染色体实质上是一个裸露的DNA双螺旋结构，DNA通常呈环状，且与相对少量的蛋白质结合，长度可打达几厘米，DNA复制从单一复制起点开始②真核生物都有许多线状的染色体，且染色体存在于细胞核内，真核生物染色体由DNA、组蛋白、RNA、非组蛋白等成分组成。

分子生物学实验技术
第一篇：PCR技术
PCR（聚合酶链反应）是一种基于体外体内 DNA 复制的技术。

PCR 技术广泛应用于分子生物学、生物医学研究、医学诊断、生物技术等领域。

在 PCR 中，核酸模板、引物、聚合酶和反应缓冲液是必不可少的组成部分。

PCR 引物是在特定位置的 DNA 片段，用于诱导聚合酶模板 DNA 的扩增。

聚合酶通过催化模板 DNA 在 DNA 引物的引导下合成相应的 DNA 片段，产生大量的重复 DNA 片段。

PCR 是一种快速、高效、灵敏的 DNA 分析技术，可以对非常小的样本进行扩增。

PCR 的操作流程如下：
1．取得合适的 DNA 样品。

2．准备 PCR 反应体系，包括 PCR 反应缓冲液、聚合酶、DNA 模板和引物。

3．用 PCR 机进行程序设定和反应。

4．检查 PCR 反应产物，包括 PCR 产物的带型和验证PCR 产物的特异性和纯度等。

PCR 的应用
1．DNA 序列鉴定以及 DNA 序列变异检测。

2．基因表达分析、基因定量、等位基因分析等基因功能研究操作。

3．分子诊断，可以根据染色体、基因、蛋白质等材料进行分析。

4．农业和畜牧业生物工程的研究。

优点：
PCR 反应时间逐渐缩短，灵敏度高，重现性好，稳定性强。

PCR 技术可以在非常小范围内进行 DNA 分析，并可以处理复杂的实验体系。

缺点：
PCR 技术还有一些局限性，比如需要合理设计引物，需要准确的温度控制，需要恰当的试剂，且对样品的纯度和净化度有严格的要求。

第1篇一、实验目的1. 了解生物冷冻技术的原理和方法。

2. 掌握生物样本冷冻保存的操作步骤。

3. 评估冷冻保存对生物样本的影响。

二、实验原理生物冷冻技术是一种利用低温环境减缓生物样本内细胞和分子活动的技术，从而实现生物样本长时间保存的技术。

主要方法包括液氮冷冻、干冰冷冻、低温冰箱保存等。

低温环境可以降低生物分子的代谢速率，减缓细胞衰老和死亡，保持生物样本的活力、功能和完整性。

三、实验材料1. 生物样本：细菌、细胞、组织等。

2. 冷冻设备：液氮罐、干冰、低温冰箱等。

3. 试剂：固定液、解冻液、无菌水等。

4. 实验器具：冷冻管、离心管、移液器、显微镜等。

四、实验步骤1. 准备工作（1）将生物样本置于无菌环境中，避免污染。

（2）将所需试剂和器具准备齐全。

2. 生物样本冷冻保存（1）液氮冷冻：将生物样本置于液氮中，使其快速冷冻至-196℃。

（2）干冰冷冻：将生物样本置于干冰中，使其缓慢冷冻至-78℃。

（3）低温冰箱保存：将生物样本置于低温冰箱中，使其缓慢冷冻至-20℃。

3. 生物样本解冻（1）液氮冷冻样本：将样本从液氮中取出，立即置于37℃水浴中解冻。

（2）干冰冷冻样本：将样本从干冰中取出，置于室温下自然解冻。

（3）低温冰箱保存样本：将样本从低温冰箱中取出，置于室温下自然解冻。

4. 评估冷冻保存对生物样本的影响（1）观察样本外观，记录细胞形态、活力等变化。

（2）进行显微镜观察，记录细胞核、细胞质等结构变化。

（3）进行生化实验，检测细胞内酶活性、蛋白质表达等指标。

五、实验结果与分析1. 外观观察：冷冻保存后的生物样本，细胞形态基本完整，活力较高。

2. 显微镜观察：冷冻保存后的生物样本，细胞核、细胞质等结构基本完好，未出现明显损伤。

3. 生化实验：冷冻保存后的生物样本，酶活性、蛋白质表达等指标基本正常。

六、实验结论1. 生物冷冻技术可以有效保存生物样本的活力、功能和完整性。

2. 液氮冷冻、干冰冷冻、低温冰箱保存等不同冷冻方法对生物样本的影响较小，可根据实际情况选择合适的冷冻保存方法。

实验名称：植物细胞质壁分离与复原一、实验目的1. 观察植物细胞质壁分离与复原现象；2. 了解植物细胞渗透调节作用；3. 掌握显微镜操作技术。

二、实验原理植物细胞在正常生理状态下，原生质层与细胞壁之间存在着一定的压力差，当外界溶液浓度低于细胞液浓度时，细胞吸水膨胀；当外界溶液浓度高于细胞液浓度时，细胞失水收缩。

当细胞处于一定浓度的溶液中时，细胞膜、液泡膜以及两层膜之间的细胞质构成原生质层，原生质层具有选择透过性。

当外界溶液浓度高于细胞液浓度时，细胞失水，原生质层与细胞壁逐渐分离，发生质壁分离现象；当外界溶液浓度低于细胞液浓度时，细胞吸水，原生质层逐渐恢复与细胞壁的接触，发生质壁分离复原现象。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞片叶、蔗糖溶液、蒸馏水、滴管、显微镜、载玻片、盖玻片等。

2. 仪器：酒精灯、酒精、蒸馏水、烧杯、量筒、剪刀、镊子等。

四、实验步骤1. 取洋葱鳞片叶，剪取约0.5cm×0.5cm的透明鳞片，放入载玻片中。

2. 用滴管滴加适量的蒸馏水于载玻片上的洋葱鳞片叶，盖上盖玻片，制成临时装片。

3. 在显微镜下观察洋葱鳞片叶细胞的正常状态。

4. 用滴管滴加适量的蔗糖溶液于载玻片上的洋葱鳞片叶，盖上盖玻片，制成临时装片。

5. 在显微镜下观察洋葱鳞片叶细胞的质壁分离现象。

6. 用滴管滴加适量的蒸馏水于载玻片上的洋葱鳞片叶，盖上盖玻片，制成临时装片。

7. 在显微镜下观察洋葱鳞片叶细胞的质壁分离复原现象。

五、实验结果与分析1. 洋葱鳞片叶细胞在正常生理状态下，细胞质与细胞壁紧密相连，原生质层与细胞壁之间无空隙。

2. 当洋葱鳞片叶细胞处于蔗糖溶液中时，细胞失水收缩，原生质层与细胞壁逐渐分离，发生质壁分离现象。

3. 当洋葱鳞片叶细胞处于蒸馏水中时，细胞吸水膨胀，原生质层逐渐恢复与细胞壁的接触，发生质壁分离复原现象。

六、实验结论1. 植物细胞质壁分离与复原现象是由于细胞渗透调节作用引起的。

2. 通过显微镜观察，可以清晰地观察到洋葱鳞片叶细胞的质壁分离与复原现象。

生物技术实验报告篇一：生物技术实验报告组别：第六组组员：苏琳伟、陈治、陈家和、陈硅报告人：陈硅学号：10349069词汇&释义：Parafilm 封口膜Chloroform 氯仿（三氯甲烷）Isopropanol 异丙醇DEPC 焦碳酸二乙酯TRIZOLa mono-phasic solution of phenol and guanidine isothiocyanatePhenol苯酚isthiocyanate 异硫氰酸胍MCS multiple cloning site （polycloning site）注：MSC是DNA载体序列上人工合成的一段序列，含有多个限制内切酶识别位点。

能为外源DNA提供多种可插入的位置或插入方案。

实验任务：1. 从猪肌肉纤维中提取RNA;2. 2对RNA上EGFP基因密码子片段进行RT-PCR扩增;3. 将经RT-PCR技术扩增的cDNA与插入载体质粒，并将其转化入大肠杆菌进行克隆；4. 从大肠杆菌中提取含目的基因的载体质粒。

实验目的: 1.掌握提取纯化总RNA的原理和技术；2.掌握RT-PCR原理和技术；3.掌握TA克隆原理和技术。

实验原理：A．总RNA提取和纯化RNA 分离的最关键因素是尽量减少RNA 酶的污染。

但RNA 酶活性非常稳定，分布广泛，除细胞内源性RNA 酶外，环境中也存在大量RNA 酶。

因此在提取RNA 时，应尽量创造一个无RNA 酶的环境，包括去除外源性RNA 酶污染和抑制内源性RNA 酶活性，主要是采用焦碳酸二乙酯（DEPC）去除外源性RNA 酶，通过RNA 酶的阻抑蛋白Rnasin 和强力的蛋白质变性剂如异硫氰酸胍抑制内源性RNA 酶。

Trizol试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂，是一种由苯酚和异硫氰酸胍组成的单相溶液它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，裂解细胞并释放出RNA,酸性条件使RNA与DNA分离,加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。

实验名称：植物组织培养技术实验目的：1. 学习植物组织培养的基本原理和方法。

2. 掌握植物组织培养的实验操作步骤。

3. 熟悉植物组织培养在植物繁殖和育种中的应用。

实验时间：2021年10月15日实验地点：生物实验室实验材料：1. 植物材料：辣椒种子2. 实验器具：超净工作台、手术刀、镊子、移液枪、培养皿、培养瓶、恒温培养箱、酒精灯、火焰消毒器等3. 试剂：MS培养基、植物激素（生长素和细胞分裂素）、琼脂、蔗糖、活性炭等实验步骤：1. 材料预处理：将辣椒种子用75%酒精消毒2分钟，再用无菌水清洗3次，最后用无菌滤纸吸干水分。

2. 胚芽诱导：将消毒后的种子接种于MS培养基中，加入适量的生长素和细胞分裂素，置于恒温培养箱中培养。

3. 菌落形成：观察胚芽诱导后的培养皿，记录菌落形成的时间和数量。

4. 生根诱导：将胚芽诱导后的植株转移到生根培养基中，加入适量的生长素，置于恒温培养箱中培养。

5. 生根观察：观察生根情况，记录生根数量和长度。

6. 移栽：将生根后的植株移栽到装有土壤的花盆中，进行常规管理。

实验结果：1. 胚芽诱导：经过2周的培养，大部分种子成功诱导出胚芽，菌落形成时间为5-7天，菌落数量为10-15个。

2. 生根诱导：将胚芽诱导后的植株转移到生根培养基中，经过2周的培养，大部分植株成功生根，生根数量为8-12条，平均生根长度为2-3cm。

3. 移栽成活：将生根后的植株移栽到花盆中，经过一段时间的适应期，植株生长良好，成活率为90%。

实验讨论：1. 植物组织培养技术在植物繁殖和育种中具有广泛的应用。

本实验通过辣椒种子进行组织培养，成功诱导出胚芽和根系，实现了植物的无性繁殖。

2. 生长素和细胞分裂素是植物组织培养中的关键植物激素。

在本实验中，通过调整生长素和细胞分裂素的浓度，可以控制胚芽和根系的生长。

3. 本实验中，辣椒种子的胚芽诱导率和生根成活率较高，说明植物组织培养技术在辣椒繁殖和育种中具有较好的应用前景。

《分子生物学实验技术》实验报告实验一碱裂解法小量提取质粒DNA一、实验原理在碱性环境中，细菌膜破裂释放内容物。

染色体DNA变性分开，而质粒DNA虽变性但仍处于缠绕状态。

将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下，染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。

通过离心，可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，最后用酚、氯仿抽提纯化得到质粒DNA。

二、操作步骤主要步骤1.细菌的培养2.细菌的收集和裂解3.质粒DNA的分离和纯化4.质粒的鉴定具体操作如下：1. 取1.5 ml过夜菌液于EP管中，12 000 r/min离心1min，弃去上清液。

2. 加100 μl 溶液Ⅰ，剧烈震荡使菌体悬浮均匀，室温放置5min 。

3. 加200 μl 溶液Ⅱ（现配现用），轻柔颠倒混匀4~6次，室温放置5min 。

4. 加150μl预冷溶液Ⅲ，轻柔颠倒混匀4~6次，冰上放置10分钟。

5. 12 000 r/m离心10 分钟(如果上清液仍然浑浊，可将上清液移出，再次离心5分钟）。

6. 吸出上清液，加2.5倍体积的无水乙醇，混匀，室温放置10分钟，12 000r/min离心10分钟，沉淀DNA 。

7. 弃上清，挥干，所得DNA溶于30μlddH2O中，用于后续试验。

三、实验结果获取极少量白色固体，主要为DNA，也不排除有蛋白质等杂质，但是不影响后续实验的继续进行。

实验二氯化钙法进行质粒转化及筛选一、实验原理细菌处于0 ℃，在CaCl2低渗溶液中，菌体细胞膨胀成球形，DNA则与CaCl2形成抗Dnase的羟基－磷酸钙复合物粘附于细胞表面，经42 ℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖，重组子的基因在被转化的细菌中得到表达，在选择性培养基平板上，可选出所需的转化子。

1. 氯化钙（二价钙离子）的作用：提高细胞壁（膜）的通透性。

生物技术综合大实验work Information Technology Company.2020YEAR2013-2014学年生命科学综合大实验GFP分离与纯化1.文献综述绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）是由238个氨基酸组成，分子量是26.9kDa，最初是从维多利亚多管发光水母(Aequorea victoria )中分离出来的，在蓝光照射下会发出绿色荧光。

来源于水母的野生型GFP在395nm和475nm分别有主要和次要的激发峰，它的发射峰在509nm，处于可见光谱的绿色区域，来源于海肾的GFP只在498nm有单个激发峰。

GFP是典型的β桶形结构，包含β折叠α和螺旋，将荧光基团包含在其中。

严密的桶形结构保护着荧光基团，防止它被周围环境淬灭，内部面向桶形的侧链诱Ser65-Tyr66-Gly67三肽环化，导致荧光基团形成。

北京时间10月8日下午5点45分，2008年诺贝尔化学奖揭晓，三位美国科学家，美国Woods Hole海洋生物学实验室的Osamu Shimomura(下村修)、哥伦比亚大学的Martin Chalfie和加州大学圣地亚哥分校的Roger Y.Tsien（钱永健）因发现并发展了绿色荧光蛋白（GFP）而获得该奖项。

下修村首次从Aequorea victoria中分离出GFP。

他发现该蛋白在紫外线下会发出明亮的绿光。

Martin Chalfie证明了GFP作为多种生物学现象的发光遗传标记的价值。

在最初的一项实验中，他用GFP使秀丽隐杆线虫的6个单独细胞有了颜色。

钱永健的主要成就在于让人们理解了GFP发出荧光的机制。

同时，他拓展出绿色之外的可用于标记的其他颜色，从而使科学家能够对各种蛋白质和细胞施以不同的色彩。

这一切，令在同一时间跟踪多个不同的生物学过程成为了现实。

2.实验器材2.1实验材料：含GFP融合质粒，Top10菌株2.2实验试剂：质粒提取：溶液Ⅰ：50mM葡萄糖/10mM EDTA /25mM Tris-HCl，pH=8.0；溶液Ⅱ：0.2M NaOH/1% SDS；溶液Ⅲ：3M醋酸钾/2M醋酸；无水乙醇，75%乙醇，TE Buffer；转化：0.1M预冷 CaCl2，LB培养基，氨苄青霉素，阿拉伯糖；GFP提取：液氮，Lysis Buffer，饱和(NH4)2SO4溶液，溶菌酶；疏水作用层析柱材：苯基琼脂糖凝胶CL-4B；离子交换柱层析柱材：DEAE+纤维素，Start Buffer(A液20mM Tris-HCl，pH7.0（透析液）)Elution buffer(B液20mM Tris-HCl，1M NaCl，pH7.0) SDS-PAGE电泳：PEG10000，Loading Buffer，溴酚蓝，丙烯酰胺，Tris，SDS，过硫酸铵，TEMED，Gly，SDS，甘油，β-巯基乙醇，溴酚蓝，甲醇，考马斯亮蓝，乙酸等2.3实验仪器高速冷冻离心机,移液枪，超声波破碎仪，梯度混合器，恒流泵,层析柱,色谱仪,自动记录仪,SDS-PAGE电泳装置。

关于生物技术综合实验报告生物技术综合实验甘薯γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆和原核表达学生：学号：同实验者：谷胱甘肽(glutathione, GSH) GSH具有多种重要生理功能, 抗自由基和抗氧化应激作用, 爱惜细胞膜的完整性等。

γ-GCS是植物细胞中GSH生物合成的限速酶, 能够调控GSH的生物合成量。

GSH在生物体抵御冷害、干旱、重金属、真菌等胁迫进程中起着重要作用, 说明γ-GCS也与植物抗逆进程紧密相关。

实验一甘薯叶片RNA提取一、实验目的1. 了解真核生物RNA提取的原理；2. 把握Trizol提取的方式和步骤。

二、实验原理Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解进程中，能在破碎细胞、降解细胞其它成份的同时维持RNA的完整性。

TRIzol 的要紧成份是苯酚。

苯酚的要紧作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚取得释放。

苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。

%的8－羟基喹啉能够抑制RNase，与氯仿联合利用可增强抑制作用。

异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，致使细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。

β-巯基乙醇的要紧作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。

在氯仿抽提、离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。

用这种方式取得的总RNA中蛋白质和DNA污染很少。

三、实验材料1. 材料甘薯叶片，品种为徐薯182. 试剂①无RNA酶灭菌水：加入%的DEPC，处置留宿后高压灭菌；②Trizol试剂；③氯仿；④异丙醇、75％乙醇；⑤TBE缓冲液；⑥上样缓冲液3. 仪器高压灭菌锅、微量移液器、台式离心机、超净工作台、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、塑料离心管、枪头和EP 管架四、实验方式1. 将叶片掏出放入研钵中，加入适量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100 mg植物叶片加入1 mL Trizol试剂，室温放置5 min，使样品充割裂解；2. 每1 mL Trizol试剂加入200 μL氯仿，用手猛烈振荡混匀后室温放置3-5 min使其自然分相；3. 4℃12,000 rpm 离心15 min，吸取上层水相转移到新管中；在上清中加入等体积冰凉的异丙醇，室温放置15 min；4. 4℃12,000 rpm 离心10 min，弃上清，RNA沉淀于管底；5. RNA沉淀中加入1 mL 75%的乙醇，温和震荡离心管，悬浮沉淀；4℃8,000 rpm离心2 min，弃上清；6. 室温放置10 min晾干沉淀；7. 沉淀中加入20μL RNase-free ddH2O，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保留；8. 用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，用EB染色并照相。