改良二袖套法大鼠小体积肝移植模型的建立
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大鼠肝移植模型建立的经验李温凯;冉江华;刘驳强;郑克谱【期刊名称】《吉林医学》【年(卷),期】2016(037)009【摘要】Objective To discuss surgical techniques and lessons learnedinratliver transplantation model established sta-ble.Method By improved the Kamada “two -cuff”technique,two groups (Pre -experimental group -60 pairs of SD rats;experi-mental group -60 pairs of SD rats)were operated orthotopic liver transplantation.The postoperativerat survived after 24 h day which was taken for the standard of model success.Results In the pre -experimental group,10 rats were successfully established in the liver transplantation model,three -days survival rate was up to 90%,7 days survival rate was 70%.In the experimental group 50 rats were successfully established in the liver transplantation model,three days survival rate was 100%,7 days survival rate was up to 90%.Conclusion The difficulty of the stable establishment of rat liver transplantation model liesin the superior vena cava anastomosis.The key is to shorten the period of anhepatic.%目的:探讨大鼠肝移植模型稳定建立的手术技巧及其经验总结。
大鼠肝移植构建方法
特点:大鼠肝移植模型是肝移植中的缺血-再灌注损伤、排斥反应以及免疫耐受研究的有效手段
详细步骤:
二袖套吻合法
A)供肝的获取:
腹腔麻醉,开腹,游离并结扎胃小弯背腹侧、左膈下静脉、左肝至食管高位血管支、右肾上腺静脉丛、右肾动静脉、肝下下腔静脉至左肾静脉上缘。
游离肝外胆管并插管,行肝脏冷灌注。
剪断肝下下腔静脉,横断肝上、下腔静脉,将供肝置于4℃生理盐水保存。
B)血管袖套制备:
4℃生理盐水中,门静脉、肝下下腔静脉壁外翻,套在管上,丝线环扎固定制备血管袖套。
C)受体准备:
麻醉后,上腹部直切口,取出受体肝脏,将供肝置于原位。
吻合肝上、下腔静脉。
将供体胆管插入受体胆管插管内,缝合腹壁。
两种药物供肝灌注保存对大鼠DCD肝移植的影响第一部分大鼠原位肝移植模型的建立目的:用改良二袖套法建立稳定可靠的大鼠原位肝脏移植模型,为下一步大鼠DCD肝移植提供前提条件。
方法:1实验大鼠均为健康的SD大鼠,体重250-280g,供体为雌性,受体为雄性,供、受体体重相差10g左右,一般为供体体重比受体体重轻。
2结合实践,在取肝、受体麻醉、肝上下腔静脉的吻合、围手术期的处理等几方面对传统的二袖套法进行改良,共施行大鼠原位肝移植动物实验100例,观察术后并发症及存活率。
结果:经过100例次的训练,建立了稳定的大鼠原位肝移植模型。
在实验的第二阶段,受体平均无肝期为13分钟,受体手术时间为50分钟,手术成功率90%,两周存活率88%。
结论:改良的二袖套法具有无肝期短、手术成功率高、大鼠术后存活时间长的优点,是大鼠原位肝移植的理想术式。
第二部分两种药物联合供肝灌注保存对大鼠DCD肝移植的影响目的:前列地尔(PGE1)与三七总皂甙(PNS)广泛参与肝脏生理病理调节,具有改善血流,保护肝细胞,调节免疫反应等多方面功能,已经在临床肝移植中得到了广泛的应用。
国内外不少研究机构都进行了PGE1与PNS对肝脏保护作用的研究,但却少有在大鼠DCD肝移植模型中应用的报道。
本实验通过PGE1与PNS供肝灌注保存对大鼠DCD 肝移植缺血再灌注损伤的影响,进一步提高器官灌注保存液的效果和质量.方法:大鼠术前禁食12h,自由进水,乙醚麻醉后,取仰卧位,腹部十字切口进腹,经阴茎背静脉注入肝素800IU/ml 1ml,完成大鼠肝素化,取胸骨旁两侧切口行开胸手术,左侧分离夹闭胸主动脉,右侧用血管钳夹闭心脏基底部致使心脏停搏,造成无心跳供体(DCD)的供肝模型,并开始计时。
实验动物分为五组:实验组1:前列地尔加肝素加乳酸钠林格灌注保存,热缺血时间30min;实验组2:三七总皂甙加肝素加乳酸钠林格灌注保存,热缺血时间为30min;实验组3:前列地尔联合三七总皂甙加肝素加乳酸钠林格灌注保存,热缺血时间为30min。
改良法构建大鼠减体积肝移植模型刘静;李江;张升宁;李铸;李来帮;冉江华;李立【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2010(014)018【摘要】背景:目前有关活体肝移植后肝脏再生的研究较少.在大鼠肝移植实验中不断改进手术方法和技术,提高肝移植成功率是进行大鼠肝移植研究和获得可靠实验数据的基础.目的:验证以改良方法构建减体积肝移植大鼠模型的有效性.方法:选用健康SD大鼠,70对制备减体积肝移植改良前模型,100对制备减体积肝移植改良后模型.供体为雌性,受体为雄性,供体体质量比受体轻10 g左右.改良前方案采用取下全肝后在修肝盆中进行减体积肝移植.改良后方案如下:供体采用单人裸眼操作,在取肝的过程中即进行减体积操作;修肝时将套管柄置于门静脉和肝下下腔静脉的正前方,将幽门静脉结扎点外翻于套管外并置于套管柄的左侧,即肝脏的左侧;将右肾静脉结扎点外翻于套管外并置于套管柄的右侧,即肝脏的右侧;供肝套管完成后用灌注液对门静脉和肝下下腔静脉进行冲洗;然后以左膈静脉为标识点进行7/0无损伤血管缝线吊线;受体采用双人裸眼配合操作,肝上下腔静脉吻合时,左右固定位点采用"8"字形外翻缝合,后壁和前壁分别采用连续吻合,门静脉和肝下下腔静脉采用改良的双袖套法,胆管支撑管法建立大鼠减体积的稳定模型.结果与结论:改良后供体手术时间为(32+9)min,修肝时间为(6±2)min,受体手术时间为(40±3)min,无肝期时间为(14±3)min.移植成功率为92%,移植后3 d生存率为85%,移植后2周生存率83%.与改良前比较,移植后并发症发生率降低(P<0.05),供肝的冷保存时间缩短(P<0.05).提示改良后的大鼠减体积肝移植模型比较稳定,可靠,移植成功率较高,移植后并发症发生率较低,为研究减体积肝移植后肝脏再生提供了有效的改良手段.【总页数】6页(P3252-3257)【作者】刘静;李江;张升宁;李铸;李来帮;冉江华;李立【作者单位】昆明医学院附属甘美医院肝胆胰一科,云南省昆明市,650011;昆明医学院附属第一医院肝胆外科,云南省昆明市,650032;昆明医学院附属甘美医院肝胆胰一科,云南省昆明市,650011;昆明医学院附属甘美医院肝胆胰一科,云南省昆明市,650011;昆明医学院附属甘美医院肝胆胰一科,云南省昆明市,650011;昆明医学院附属甘美医院肝胆胰一科,云南省昆明市,650011;昆明医学院附属甘美医院肝胆胰一科,云南省昆明市,650011【正文语种】中文【中图分类】R617【相关文献】1.减体积肝移植在大鼠脂肪肝供肝肝移植模型中的应用 [J], 赵英鹏;李立;陈刚;白建华;刘其雨2.构建大鼠减体积肝移植模型的肝脏信号转导差异蛋白表达 [J], 刘静;李立;冉江华;张升宁;李来邦;高扬;陈奕明;张熙冰3.构建大鼠减体积肝移植模型的肝脏信号转导差异蛋白表达 [J], 刘静;李立;冉江华;张升宁;李来邦;高扬;陈奕明;张熙冰;4.减体积肝移植在大鼠脂肪肝供肝肝移植模型中的应用 [J], 赵英鹏;李立;陈刚;白建华;刘其雨;;;;;5.大鼠减体积自体肝移植模型的建立 [J], 李涛;沙地克·阿帕尔;吴警;张皓;江多斯·帕依孜吾拉;曾齐;努尔扎提江·安维尔;吐尔洪江·吐逊因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
#实验研究#文章编号:1671-4555(2006)01-0052-05改良二袖套法大鼠原位肝移植180例刘骅曹晖吴志勇【摘要】目的改进二袖套法大鼠原位肝移植方法,建立稳定的大鼠肝移植模型。
方法采用改良K amada二袖套法进行大鼠原位肝移植180例,观察手术成功率、手术时间、免疫病理改变和术中、术后并发症等。
结果总手术成功率85.6%,供者手术时间(40.0? 3.8)min,修肝时间(14.3?2.1)m in,受者手术时间(48.0?4.2)min,无肝期(22.0?2.3)m in。
SD-Wistar大鼠肝移植后出现免疫排斥病理改变。
常见并发症有麻醉意外、气胸、失血性休克、下腔静脉空气栓塞、血栓形成或胆道梗阻等。
结论改良K amada二袖套法可提高手术成功率,减少并发症。
SD-W istar大鼠肝移植为高排斥组合,可作为肝移植免疫耐受研究的模型。
【关键词】肝移植;大鼠;二袖套法【中图法分类号】R657.3【文献标识码】AModified two-cuff technique for orthotopic liver transplantation in rat Liu H ua,Cao H ui,W uZhiy ong.D ep ar tment o f General Sur ger y,Renj i H osp ital,Shanghai Second M edical Univ er sity,Shanghai200127,China【Abstract】Objective T o impro ve the two-cuff technique of ort ho topic liv er t ransplantat ion inrat.Methods180cases of or tho topic liv er transplantations in rats wer e perfo rmed using modified K a-mada's two-cuff technique.T he successful r ate,operat ion time,allog raft r ejection and incidence ofco mplicatio ns w ere observed.Results T he g ener al successful r ate w as85.6%.T he averag e operatio ntime of donor and recipient w as(40.0?3.8)minutes and(48.0? 4.2)minutes,r espectiv ely.T hedo no r liver pr epar atio n and t he anhepatic t ime was(14.3?2.1)m inutes and(22.0?2.3)m inutes,respectively.In SD to W istar rat co mbinat ion,the ty pical sig ns of allo gr aft r ejectio n wer e observed.T he co mmon co mplications included anesthesia accident,pneumotho rax,hemo rr hag ic shock,air em-bolism or thro mbo sis in infer io r vena cava and o bstr uction of biliary tract.C onclusions T he mo difiedtwo-cuff technique can enhance the successful rat e of operatio n and reduce the incidence o f com plica-t ions.T he SD to W istar r at combination is a rejectio n mo del and can be used to study immuo tolerancein liv er tr ansplantation.【Key words】liver transplant ation;rat;two-cuff technique大鼠原位肝移植模型是肝移植实验研究中非常有价值和常用的动物模型,提高模型的成功率和稳定性是进行基础研究的重要前提。
大鼠肝脏移植模型制作大鼠原位肝移植是研究器官保存、肝脏缺血再灌注损伤、免疫抑制剂、移植排斥反应以及免疫耐受机理等方面常用的动物模型。
最初由Lee在1973年报道,经过许多学者的改进,其手术基本稳定,根据肝上下腔静脉吻合方式,大鼠原位肝移植可分为“二袖套法”和“三袖套法”,下面简单的将大鼠肝脏移植的模型制作介绍一下。
一、手术器械显微外科手术器械包,手术显微镜1台,自制S拉钩(用橡皮筋一端带弯成S形大头针)4个,眼科剪1把,其它外科器械若干及纱布、棉球、棉片和橡皮条等。
二、供、受者大鼠的选择根据不同的研究目的选择不同的动物品系,在同种移植模型中,一般采用两种纯系健康大鼠,如Lewis大鼠,Brown Norway 大鼠(BN),DA大鼠等,国内应用Wistar,SD大鼠也比较多。
如果是异种移植可以选用豚鼠-大鼠,仓鼠-大鼠等不同品系的动物。
三、术前准备供、受者术前禁食14h,自由饮水,采用乙醚吸入麻醉麻醉的方法,提高手术的安全性,受者术前肌肉注射阿托品0.03mg,防治分泌物阻塞呼吸道。
四、供者手术麻醉成功后,经阴茎背静脉注射50U/ml肝素稀释液3.0ml,使供者全身肝素化。
十字切口入腹,经腹主动脉穿刺灌洗供肝;灌洗前,剪开膈肌,阻断腹主动脉,离断胸腔段肝上下腔静脉,灌洗至流出液澄清为止,约需灌洗液20~30ml。
游离肝下下腔静脉,分离结扎离断右肾静脉和右肾上腺静脉,自肠系膜上静脉置管,缓慢注入20ml含肝素的林格氏液,于右肾静脉下方离断肝下下腔静脉,剪开胆总管前壁,近肝端插入外径1.0mm,长4.0mm 的聚乙烯管约2.0mm(可用硬膜外导管制成),结扎固定后远肝端离断之,分离结扎离断肝固有动脉;游离门静脉,结扎离断其分支幽门静脉、脾静脉,于脾静脉下方离断门静脉,锐性分离肝周韧带,结扎左膈下静脉,绕肝上下腔静脉环切膈肌及其腱膜,保留2.0mm边缘,取下供肝置于4℃林格氏液中保存。
五、血管套管的准备供肝置4℃冰浴中,作血管套管放置。