Ki67在胃癌细胞株中的表达及意义
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Livin和Ki67在胃癌组织的表达及其临床意义的开题报告
背景介绍
胃癌是一种常见的恶性肿瘤,是全球范围内造成死亡的第五大肿瘤。
因其早期症状不明显,难以及时诊断,使得患者的生存率较低。
因此,寻找可靠的预测标志物对
于开展早期筛查及诊断具有重要意义。
Livin是一个属于基因家族的抗凋亡分子,在多种癌症组织中都有高表达的现象。
Ki67则是细胞周期蛋白,其在增殖活跃的细胞中高度表达,被认为是一个明显的增殖
指标。
前人的研究表明,Livin和Ki67在胃癌的发生和发展中都发挥了重要的作用,但它们在胃癌组织中的同时表达情况及临床意义目前尚未明确。
研究目的
本研究的目的在于探究胃癌组织中Livin和Ki67的表达情况,分析它们之间的相关性,并探讨它们在胃癌临床治疗中的意义。
研究方法
收集胃癌患者的活检组织标本,采用免疫组织化学方法检测Livin和Ki67在胃癌组织中的表达情况,并分析它们之间的相关性。
同时,对患者的临床资料进行统计分析,探讨Livin和Ki67在胃癌预后评估中的意义。
预期结果
预计本研究能够揭示胃癌组织中Livin和Ki67的表达情况及其相关性,探讨它们在胃癌临床治疗中的意义,为制定更加个体化的治疗方案提供科学依据。
P53及Ki67在胃癌中的表达及其临床意义刘佩【摘要】Objective To study expression and clinical significances ofP53,Ki67 in gastric carcinoma. Methods 80 cases of gastric cancer and other 80 cases of chronic gastritis used immunohistochemical method to had P53 protein and Ki67 detection. Results In 80 cases of gastric cancer patients,19 cases had P53 and Ki67 both positive,21 cases were both negative. Correlation analysis showed,there was a significant correlation(r=0.427,P=0.004) between positive and negative. Conclusion P53 protein and Ki67 expression in gastric carcinoma is significantly increased,and can be used as an important reference index for judging the malignant degree and prognosis of gastric cancer.%目的:探讨P53及Ki67在胃癌中的表达及其临床意义。
方法采用免疫组化法对我院收治的胃癌患者80例及慢性胃炎患者80例进行P53蛋白和Ki67检测。
结果80例胃癌患者中,P53及Ki67均为阳性者19例,均为阴性者21例,相关性分析提示,二者呈显著相关关系(r=0.427,P=0.004)。
MDR1和Ki67在胃癌中的表达及临床意义作者:杨志慧刘玉龙何金徐毅刘惠敏【摘要】[目的]探讨MDR1和Ki67在胃癌中表达的临床意义。
[方法]应用免疫组织化学方法检测100例胃癌组织中MDR1及Ki67的表达。
[结果] MDR1和Ki67在胃癌组织中的表达高于癌旁组织,而与年龄、性别、组织学类型、浸润深度以及淋巴结转移均无相关性。
MDR1与Ki67之间也无明显相关性。
[结论] MDR1和Ki67都不能作为胃癌病人判断预后和临床化疗耐药的单一指标。
【关键词】胃肿瘤多药耐药MDR1基因P-糖蛋白Ki67Expressions of MDR1 and Ki67 in Gastric Cancer and their Clinical SignificanceAbstract: [Purpose] To explore the expressions of MDR1 and Ki67 in gastric cancer and their clinical significance.[Method] One hundred cases with gastric cancer were detected for MDR1 and Ki67 by immunohistochemistry technique. [Results] The expressions of MDR1 and Ki67 in cancer tissues were higher than those in cancer surrounding tissues anddidn’t correlated to the age, sex, histological type, depth of invasion and lymph node metastasis. There was no correlation between MDR1 and Ki67 either. [Conclusion] Neither MDR1 nor Ki67 serves as a single indicator to estimate prognosis and drug resistance in clinic.Key words: gastric neoplasms; multiple drug resistance; MDR1 gene; P-glycoprotein; Ki67 antigen胃癌是临床最常见的肿瘤之一,手术后辅以化疗成为治疗的主要手段。
胃癌中β-catenin、ki67与Her-2-Neu的关系及临床意义摘要:胃癌是全球范围内最常见的一种恶性肿瘤,其发病率和死亡率一直居高不下。
β-catenin、ki67与Her-2/Neu作为目前研究相对较多的胃癌相关标志物,其在胃癌的发生、发展过程中具有重要的作用。
本文对β-catenin、ki67与Her-2/Neu在胃癌中的表达情况、相互关系及临床意义进行详细综述,以期为胃癌临床诊治及预后评估提供参考。
关键词:胃癌;β-catenin;ki67;Her-2/Neu;临床意义正文:一、β-catenin在胃癌中的表达及作用β-catenin是一种细胞间粘附蛋白,参与调节胃癌细胞生长、转移和转化等过程。
目前研究表明,β-catenin在胃癌的发生、发展中发挥着重要作用。
β-catenin与胃癌的关系:大量研究表明,β-catenin在正常胃黏膜中的表达很低,但在胃癌组织中常常出现明显升高。
在胃癌的发生过程中,前癌病变阶段的细胞中β-catenin表达也常常出现异常。
在胃癌组织中,β-catenin参与了某些信号转导途径的激活,促进了肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。
β-catenin的作用机制:β-catenin参与胃癌的发生、发展主要通过两个途径发挥作用。
一是参与Wnt/β-catenin信号途径,当Wnt/β-catenin途径被激活时,β-catenin进入胞核与转录因子结合形成复合物,激活多种靶基因,在胃癌细胞中发挥作用。
二是参与胞间连接的调节,β-catenin能够将细胞连接蛋白E-cadherin与α-catenin连接起来,进而形成细胞连接结构,维护正常的组织结构。
二、ki67在胃癌中的表达及作用ki67是一种核质共存蛋白,在细胞增殖活动中起到重要作用。
它广泛存在于许多肿瘤和正常组织中,是一种较为敏感的细胞增殖标志物。
ki67与胃癌的关系:ki67在胃癌的发生、发展过程中表达升高,与胃癌的分级、浸润度和预后具有相关性。
胃癌中Ki-67的表达及临床价值摘要:目的探讨Ki-67的表达与胃癌临床病理特征及预后的关系。
方法采用免疫组织化学技术,检测326例胃腺癌组织及相应326例正常胃粘膜组织中Ki-67蛋白的表达情况;采用Western blotting实验检测随机选取10例胃腺癌组织和相对应的正常胃粘膜组织中Ki-67 蛋白的表达情况,应用χ2检验、Kaplan-Meier生存分析及COX 回归分析分析其与患者临床病理特征及预后的关系。
结果胃癌组织中Ki-67蛋白明显高于正常胃粘膜组织(P < 0.05)。
Kaplan-Meier生存分析显示Ki-67蛋白表达与胃癌患者的预后密切相关(χ2=8.086,P=0.005),COX 回归分析显示Ki-67为胃癌患者预后的独立因素(P = 0.002)。
结论 Ki-67的表达与胃癌预后密切相关,为胃癌患者预后的独立因素。
关键词:胃癌;Ki-67;临床病理特征;预后胃癌(gastric cancer,GC)为消化道肿瘤中发病率最高的恶性肿瘤。
全世界每年胃癌新发病例数约为100万,约占整个恶性肿瘤新发病例总数的8%,位居第4位。
每年约有70多万人死于胃癌,死亡率位居第2位。
资料和方法1.1组织标本来源选取收集2005年3月~2010年3月于安阳市肿瘤医院接受胃癌根治术治疗的326例胃癌患者的手术标本,入组患者术前均排除远处转移,均未接受放化疗、免疫治疗,术后均经过病理确诊。
标本应用多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,连续切片,分别用于HE染色及免疫组织化学染色。
新鲜实验标本保存于液氮中,用于Western blotting实验。
正常胃粘膜组织:取自手术标本中距癌组织边缘5cm以上的手术切缘,均经病理学证实为正常的胃粘膜组织。
1.2 实验方法1.2.1 免疫组化1.2.1.1 方法免疫组织化学方法采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法技术(streptavidin-perosidase,SP技术),染色步骤严格按照试剂盒说明书进行;1.2.1.2 结果判定采用双评分半定量积分法,对Ki-67的免疫组化结果进行分析。
Pgp\ki67\Her-2在胃癌中的表达及相关性分析摘要目的:探讨Pgp、Her-2和Ki67在胃癌中的表达及临床病理学意义。
方法:应用免疫组织化学的方法检测74例胃癌中Pgp、Her-2和Ki67表达。
结果:Pgp在胃癌中的表达与淋巴结转移有显著性差异(P<0.05)。
Ki67在胃癌中强表达与TNM分期、淋巴结转移和组织分级有显著性差异(P<0.05)。
Her-2的强表达与临床病理次数之间差异均无显著性,但与Ki67的强表达有显著性差异(P<0.05)。
结论:Pgp的强表达预测进展期胃癌对化疗的耐药性,尤其是淋巴结出现转移时对化疗的耐药情况起着重要作用。
Ki67的表达与胃癌的发生发展有关,表达强度与癌组织的分化程度、TNM分期、转移有关,可作为评估患者预后的指标。
提示Her-2的表达虽然与胃癌的发生发展有关,但作为预后判断的意义有限。
与Ki67的强表达有显著性差异(P<0.05),提示在肿瘤的发生及发展过程中两者或许存在某种联系,有待进一步研究。
关键词胃癌Pgp Ki67 Her-2 免疫组化资料与方法标本来源:2008~2010年收治胃癌患者手术标本74例,其中男52例,女22例。
按照WHO标准进行分类,术前均未作任何治疗。
方法:全部标本均经4%甲醛溶液固定,常规脱水,石蜡包埋,4μm厚连续切片,分别进修HE染色及免疫组化染色染色。
免疫组化采用MaxVision即用型染色方法,按试剂盒说明书进行。
免疫组化结果判断:Pgp阳性表达部位为细胞质和膜,表达数量>10%为阳性表达。
Ki67阳性表达部位为细胞核,表达数量>25%为强表达。
Her-2为细胞膜表达,按Hofmann标准判定[1]。
由两位病理医师阅片,得出最终结果。
统计学方法:应用SPSS11.5进行统计学分析,计数资料用X>/sup>2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
结果Pgp的阳性表达与淋巴结转移差异有显著性(P<0.05),与其他参数比较差异,无显著性(P>0.05)。
Ki67、LRP在胃癌中的表达及其临床意义开题报告【摘要】胃癌是全球常见的肿瘤之一,其病因复杂,且具有高度异质性。
本文旨在探究Ki67、LRP在胃癌中的表达及其临床意义。
通过对近年来相关文献的综述和分析,发现Ki67、LRP在胃癌中的表达水平显著升高,并且与胃癌的恶性程度密切相关。
Ki67在胃癌的分子病理诊断中起到了重要的作用,可以预测患者的生存率及其预后。
同时,LRP是一个与多种肿瘤相关的膜糖蛋白,在胃癌中也起到了重要的作用,其表达水平与胃癌细胞的侵袭和转移密切相关。
本文的研究发现,Ki67、LRP在胃癌中的表达水平升高,可以作为预测胃癌预后和治疗效果的生物标志物。
为进一步明确胃癌分子机制,提高病例诊断及治疗水平提供了新的研究方向,有望为胃癌的早期诊断和预防提供依据。
【关键词】胃癌,Ki67,LRP,表达,生物标志物【Abstract】Gastric cancer is one of the common tumors worldwide, which is complex in etiology and highly heterogeneous. This paper aims to explore the expression and clinical significance of Ki67 and LRP in gastric cancer. Through a review and analysis of relevant literature in recent years, it was found that the expression level of Ki67 and LRP in gastric cancer was significantly increased, which was closely related to the malignancy of gastric cancer. Ki67 plays an important role in the molecular pathological diagnosis of gastric cancer, which can predict the survival rate and prognosis of patients. Meanwhile, LRP is a membrane glycoprotein associated with multiple tumors, which also plays an important role in gastric cancer. Its level of expression is closely related to the invasion and metastasis of gastric cancer cells.The research found that the increased expression of Ki67 and LRP in gastric cancer can be used as a biomarker to predict the prognosisand therapeutic effect of gastric cancer. To further clarify the molecular mechanism of gastric cancer, this provides a new research direction to improve the diagnosis and treatment level of cases, and is expected toprovide a basis for the early diagnosis and prevention of gastric cancer.【Keywords】Gastric cancer, Ki67, LRP, expression, biomarker。
p57kip2和ki67在胃癌组织中的表达及临床意义【摘要】目的:探讨p57kip2和ki67在胃癌组织中的表达及临床意义。
方法:采用免疫组织化学Envision二步法检测40例胃癌组织的p57kip2和ki67表达水平。
结果:p57kip2和ki67在胃癌组织中的阳性表达率分别为35﹪(14∕40)和87.5﹪(35∕40),两者的表达与胃癌组织的病理组织学分级及临床分期有关(P<0.05),而与组织学类型无关(P>0.05);p57kip2与ki67表达强度呈负相关,相关系数r=-0.093(P<0.01)。
结论:p57kip2表达下调及ki67表达上调在胃癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用。
【关键词】蛋白质p53 ki67抗原癌胃免疫组织化学胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其发生是多因素、多基因参与的复杂生物学过程。
研究发现,p57kip2 具有负性调节细胞增生的生物学功能,可能具有对肿瘤的抑制作用,p57kip2失活与多种人类恶性肿瘤的发生和进展相关,包括肺癌、肝癌、结肠癌、胆管癌和胰腺癌等。
ki67广泛表达于增殖期细胞,是评价细胞增殖的较好指标,ki67表达增殖与多种恶性肿瘤的进展和预后相关。
本研究采用免疫组织化学方法检测p57kip2和ki67在胃癌组织中的表达,探讨其与胃癌的发生及发展的关系。
1 材料与方法1.1 研究对象收集病理科2000-2004年确诊的40例胃癌标本,根据1999年WHO组织学分类标准分为两组:高分化组(乳头状腺癌或管状腺癌)16例,低分化组(低分化腺癌或未分化癌)24例。
按照胃癌国际分期Ⅰ~Ⅱ期9例,Ⅲ~Ⅳ期31例。
所有组织经10%中性福尔马林溶液固定,常规石蜡包埋切片。
1.2方法1.2.1 主要试剂鼠抗人p57kip2单克隆抗体为Santa Cruz美国公司产品,购于福州迈新生物公司; 鼠抗人ki67单克隆抗体及Envision试剂盒为Dako丹麦公司产品,购于成都基因公司。
研究在胃癌中p53和Ki67蛋白的表达及临床意义【摘要】目的研究分析p53和Ki67蛋白在胃癌中的表达及临床意义。
方法选取选取2012年6月至2014年12月我院收治的胃癌患者84例作为胃癌组;另选取同期收治的胃炎患者84例作为胃炎组。
观察两组患者p53和Ki67蛋白表达情况,按不同病理特征将胃癌患者分组并比较p53和Ki67蛋白的表达情况。
结果胃癌组患者p53蛋白阳性率为32.1%高于胃炎组的6.0%,胃癌组患者Ki67蛋白阳性率为70.2%高于胃炎组的36.9%,差异有统计学意义(P<0.05);p53和Ki67蛋白阳性率临床分期I+Ⅱ期患者低于临床分期Ⅲ +Ⅳ期患者,浆膜下浸润患者低于侵及浆膜患者(P<0.05);p53蛋白阳性率有淋巴结转移患者高于无淋巴结转移患者,Ki67蛋白阳性率有淋巴结转移患者与无淋巴结转移患者比较,差异无统计学意义(P>0.05);按分化程度情况分组,两组患者p53和Ki67蛋白阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
结论 p53和Ki67蛋白在胃癌中的表达率高,具有重要的临床意义。
【关键词】胃肿瘤;基因,p53;Ki-- 67抗原;诊断Abstract:Objective To study the expression and clinical significance of p53 and Ki67 protein in gastric cancer. Methods from December 2014 to June 2012,84 cases of gastric cancer patients treated in our hospital were selected as the gastric cancer group;84 patients with gastritis treated in the same period were selected as gastritis group. To observe the expression of p53 and Ki67 protein in the two groups,and to compare the expression of p53 and Ki67 protein in gastric cancer patients with different pathological features. Results the positive expression rate of p53 protein in gastric cancer patients was 6% higher than that in patients with gastritis. The positive rate of Ki67 protein in gastric cancer was 36.9% higher than that in patients with gastritis. The positive rate of Ki67 and p53 was lower than that in patients with clinical stage I+,p53,P<0.05,P<0.05,P>0.05,Ki67,p53 and Ki67,and the difference was statistically significant(P>0.05). Conclusion the expression of p53 and Ki67 protein in gastric cancer is high,and has important clinical significance.[Key words]:stomach neoplasms;gene,p53;Ki-- 67 antigen;diagnosis胃癌是较常见的恶性肿瘤[1]。
CD133、Ki―67在胃癌的表达及临床病理意义在所有胃癌患者癌旁正常组织的石蜡标本上采集组织芯,直径选择1.0mm,孔间距设置为1.2 mm,排列成9行×8列共72点微阵列,每2点代表1例患者组织,共制成11块组织芯片。
表1 CD133、Ki-67在胃癌组织中的阳性表达与病理特征的关系临床病理因素 CD133 x2 P Ki-67 x2 P年龄(岁) 1.029 >0.05 1.057 >0.05n≤40 42 30 41 394065 46 29 34 20肿瘤大小 6.579 15 43 19 45 20TNM分期Ⅰ期2523 9.206 1.7 统计学方法采用统计学软件SPSS 17.0进行分析。
CD133和Ki-67在胃癌表达的相关性采用Spearman等级资料相关分析;计数资料采用x2检验;对生存率影响的单因素分析采用Log-rank检验;多因素分析采用Cox比例风险模型,P [7] 王晓瑜,甘润良.胃癌相关基因的功能和作用[J]. 医学综述,2012,18(6):854-858.[8] Torosyan Y, Simakova O, Naga S, et al. Annexin-A7 protects normal prostate cells and induces distinct patterns ofRB-associated cytotoxicity in androgen-sensitive and resistantprostate cancer cells [J] . Int J Cancer, 2009, 125(11):2528-2539.[9] Xie HL, Li ZY, Gan RL, et al. Differential gene and protein expression in primary gastric carcinomas and their lymph node metastases as revealed by combined cDNA microarray and tissue microarray analysis[J]. J Dig Dis,2010,11(3): 167-175.[10] Yerushalmi R, Woods R, Ravdin PM.Ki -67 in Breast Cancer:Prognostic and Predictive Potential[J]. Lancet Oncol, 2010,11(2):74-83.[11] 张艳红,吕晓军,马香稳,等.Ki-67在胃癌组织浸润和转移中的作用[J].中国优生与遗传杂志,2011,19,(1):33-34.[12] 刘伟,余英豪,欧阳学农,等.P53和Ki-67在胃癌中的表达及其临床意义[J].世界华人消化杂志,2011,19(4):367-373.[13] 孔东方,何庆泗,孙国瑞,等.胃癌组织中 Ki-67 及 CD34 的表达及其临床意义[J]. 中国现代普通外科进展,2012,15(6):451-454.[14] 林金銮,林建华,吴朝阳,等. 骨肉瘤CD133 CD117 Ki-67的表达及与临床病理因素和危险度的相关性研究[J]. 中国肿瘤临床,2014,41(5):304-310.[15] 周丽.p53 和 Ki67 蛋白在胃癌中的表达及临床意义[J]. 临床合理用药,2015,8(5C):27-28.[16] 罗庆丰,饶华民,黄传生. CXCL12 和 CD133 蛋白在胃癌中的表达及意义[J]. 广东医学,2014,35(13):2045-2047.[17] ZHOU F, MU Y D, LIANG J, et al.Expression and prognostic value of tumor stem cell markers ALDH1 and CD133 in colorectal carcinoma[J].Oncol Lett,2014,7(2): 507-512.[18] 王晓亮,李绍刚,李赛飞,等. 胃癌复发的独立因素和ABCC4、p53的应用价值[J].中国医学创新,2014,11(34):51-54.(收稿日期:2015-05-28)希望以上资料对你有所帮助,附励志名言3条:1、生气,就是拿别人的过错来惩罚自己。
CD133、Ki—67在胃癌的表达及临床病理意义目的探讨CD133、Ki-67在胃癌的表达及临床病理意义。
方法随机选取本院2008年5月~2012年9月的首发胃癌患者300例,所有患者进行免疫组化检测,对胃癌组织中CD133、Ki-67的阳性表达及病理特征的关系进行分析,观察患者的术后生存时间。
结果300例胃癌中,CD133阳性的患者184例,阳性率为61.33%。
Ki-67阳性的患者179例,阳性率为59.67%。
CD133和Ki-67的表达随着肿瘤增大、分化降低、浸润加深、淋巴结转移数目增多、TNM分期递增,出现腹腔及远处转移等因素而逐渐增高(P<0.05)。
Cox多因素术后生存分析结果显示,胃癌术后生存时间的独立预后因子为患者年龄、肿瘤大小、组织学类型、CD133、Ki-67、腹腔及远处转移。
结论CD133和Ki-67联合检测可作为胃癌的临床评价肿瘤生物学行为及判断预后的有用指标之一。
[Abstract] Objective To investigate the The expression of CD133 and Ki-67 in gastric cancer and its clinical significance. Methods 86 cases of patients with diabetic retinopathy from May 2008- September 2012 were selected as the observation group,98 cases of diabetic patients without retinopathy were selected as the control group,80 cases of healthy people were selected as normal group . All subjects were resting fasting urine microalbumin(UmAlb)and glycosylated hemoglobin (HbA1C),using ABC- enzyme-linked immunosorbent assay and analysis of peripheral blood IGF-1 and TGF-β1 expression and among the three groups level situation. Results In 300 cases of gastric cancer,184 cases of CD133 positive patients,positive rate of Ki-67was 61.33%. Positive patients in 179 cases,the positive rate was 59.67%. The expression of CD133 and Ki-67 increased with the increase of tumor,differentiation,invasion,lymph node metastasis,TNM stage,P<0.05. Cox,and survival analysis showed that the independent prognostic factors were age,tumor size,histological type,Ki-67,CD133,abdominal and distant metastasis. Conclusion The combined detection of CD133 and Ki-67 can be used as a useful index for clinical evaluation of tumor biological behavior and prognosis of gastric cancer.[Key words] Gastric cancer;CD133;Ki-67;Expression;Clinical pathology胃癌(gastric cancer,GC)作为临床常见的消化道恶性肿瘤,发病率及死亡率皆均高。
Ki67在胃癌细胞株中的表达及意义摘要目的:探讨ki67在人胃癌细胞sgc7901、bgc-823中的表达及意义。
方法:选择两种不同的胃癌细胞(人胃癌转移淋巴结细胞sgc7901,人胃低分化腺癌细胞bgc-823细胞),采用细胞免疫化学sabc法和及western-blot法对两种胃癌细胞中ki67表达情况进行检测和分析。
结果:ki67在两种胃癌细胞中都高表达,且差异有统计学意义(p<0.01)。
结论:ki67参与了胃癌的发生发展。
且ki67蛋白高表达可能是胃癌细胞的重要生物学标志。
关键词胃癌免疫细胞化学 western blot ki67doi:
10.3969/j.issn.1007-614x.2012.30.213
胃癌是全世界最常见的恶性肿瘤,且死亡率极高,严重威胁人类的生命[1]。
ki67是一与增殖细胞相关的核抗原,与肿瘤增殖、浸润及转移和预后密切相关[2]。
本研究应用免疫细胞化学技术sabc和western blot对胃癌细胞株sgc7901、bgc-823进行检测,探讨ki67在胃癌细胞中的表达及在胃癌发生发展中的意义。
资料与方法
材料:①细胞:人胃癌转移淋巴结细胞sgc7901购自武汉生命科学细胞中心,人胃低分化腺癌细胞bgc-823细胞购自武汉博士德生物工程有限公司。
②试剂:rpmi-1640购自gibeo公司;ki67单克隆抗体购自北京中杉金桥有限生物公司;dab显色试剂盒及即用型(鼠/兔)sabc免疫组化染色试剂盒购自北京中衫生物技术有限公司。
pira裂解液购自北京中衫生物技术有限公司。
方法:①细胞培养:细胞株sgc7901、bgc-823在rpmi-1640完全培养液中常规培养。
完全培养液中含有10%的小牛血清(cs)、1%青霉素、1%链霉素。
培养条件为湿润状态下37℃和5% co2。
②免疫细胞化学:常规消化细胞,制备细胞悬液,并调整细胞密度2×105/ml。
将高压灭菌的盖玻片放入6孔培养板内,滴加细胞悬液2.5ml/孔,待细胞爬满盖玻片时,取出细胞爬片,浸入固定液4%
多聚甲醛30分钟,pbs(ph 7.2~7.6)浸洗3×3分钟后进行染色。
采用sabc免疫组化法,具体步骤按照试剂盒说明操作。
试剂盒里的阳性片为阳性对照,用pbs代替一抗做阴性对照。
③结果判定标准:cyclind1、ki67阳性细胞均表现为细胞核内含棕黄色颗粒。
在光镜下,结合免疫细胞化学染色强度和阳性细胞率两个参数,综合判定cyclind1、ki67的阳性染色。
用biomias图像处理系统在100倍镜下选取癌视野中5个区域,分别在高倍镜(400×)下随机选择25个视野。
采用image pro plus 5.0图像分析软件检测阳性染色的积分光密度值(iod)。
④western blot方法:收集细胞,裂解得总蛋白,考马斯亮蓝法定量蛋白。
调整样品蛋白浓度使其相同,取样品经sds-page后,转印至pvdf膜上。
pvdf膜以5%脱脂奶粉封闭2小时,加入一抗过夜。
经洗涤后,加入二抗,室温孵育2小时。
最后用ecl显影并扫描测灰度值。
统计学处理:采用spss13.0统计软件,实验数据以(x±s)表示,根据数据来源和统计学要求进行重复测量的方差分析。
p<0.05有统计学意义。
结果
免疫细胞化学法检测ki67在两种胃种胃癌细胞株中的蛋白表达:ki67在胃癌细胞株中阳性表达均呈棕黄色,并且定位于细胞核。
人胃癌转移淋巴结细胞sgc7901中ki67的蛋白表达iod值(5018.210±107.628)△明显高于bgc-823细胞(1966.439±123.020),差异有显著性(p<0.05)。
western blot检测ki67在各宫颈癌细胞株中的蛋白含量:人胃癌细胞株sgc7901、bgc-823内均有ki67阳性蛋白表达条带。
蛋白条带灰度值分析表明:人胃癌转移淋巴结细胞sgc7901中ki67蛋白的阳性表达均高于人胃低分化腺癌细胞bgc-823细胞,差异有显著性(p<0.05)。
讨论
细胞的增殖状态,对研究肿瘤生物学行为、判断其危害性具有及其重要意义。
一旦细胞周期调控失常,就会导致肿瘤的恶性增生[3]。
ki67是应用最广泛的增殖细胞标记之一。
ki67蛋白是由两条多肽链组成,ki67抗原的量随细胞周期的不同而发生改变。
在g1中期到后期出现表达,s期和g2期逐渐增加,有丝分裂期达到高峰,分裂后迅速降解或丢失抗原决定簇。
现认为ki67的功能与染色质相连,与细胞的有丝分裂有关[4]。
ki67的表达和细胞增殖状态密切相关,是反映细胞增殖的主要生物学指标。
因此,通过本研究结果表明,在转移癌细胞株sgc7901中ki67的表达明显高于非转移细胞株bgc-823(p<0.05),提示ki67的高表达与胃癌的发生和发
展密切相关。
肿瘤细胞的异常增殖可以通过多种方式与细胞外基质相互作用促进了肿瘤细胞的浸润和转移。
由此可见,ki67在胃癌的发生、发展过程中起到了重要的作用。
它不仅能客观反映胃癌细胞的增殖活性,并能评估癌细胞发生增殖、转移的潜能[5]。
因此认为,ki67高表达可能导致胃癌细胞增殖周期调控失常,使细胞发生无限制增殖及异常分裂,最终导致胃癌细胞恶性转化,甚至发生转移。
参考文献
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