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HPLC法测定金银花中绿原酸的含量

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２ 结 果
湖南 隆 回县 金银 花绿 原酸 含量 较 山东 平 邑县 和 河南 密县 高 ， 且差 异有 显 著性 （Ｐ ｄ０ ０ ） ． ５ 。见表 １ 。
裹 １ 不 同 产 地 金 银 花 样 品 中绿 原 酸 的 含 量 （ ＝ ３ 士 ５ ， ）
可靠 ， 宜绿 原酸 含量 的测 定 。 适
［ 参 考 文 献］
１ ２ ３
山东临沂地区平邑县金银花种植基地 河 南 密 县 金 银 花 种 植 基 地 湖南 隆 回 县 金 银 花 种 植 基 地
２１４ ．６４ ． Ｏ 士ｏ １ ８ ２４５ ．９２ ． １ 士ｏ １ １ ３９７ ｏ２２ ＊ ． ６ 士 ． ７ ４
３ 讨 论
［ 要］ 摘 【目的】 察 不 同剂 量瑞 芬 太 尼 对 气管 插 管血 流 动 力 学 的 影 响 。【 法 】 机 将 ３ 现 方 随 Ｏ例 ＡＳ Ａ Ｉ～ Ⅱ 级 择 期 手 术 病 人 分 为 ３组 ， 组 １ 每 Ｏ例 ， 静 注咪 唑 安 定 ０ ０ ／ ｇ 异 丙 酚 １ｍｇ ｋ ， 库 溴铵 ０ １ｍｇ ｋ 在 ．４ｍｇ ｋ ， ／ｇ 维 ． ／ ｇ
教研 室周 日宝 教授 核定 为 正品 。 １ １ ２ 仪 器 ＡＢ ０ 一 电 子 天平 ： 特 勒—— 托 ． ． １ ４Ｎ 梅
８ １ ，０ ｈ分 别 进 样 １ ｌ记 录 峰 面 积 积 分 值 ， 得 ０ ， 测
ＲＳ Ｄ为 ０ １ ， 明 １ ．４ 说 ０ｈ内仪 器稳 定 性好 。 １ ２ ５ 重复 性 试 验 ．．
后 ， 分 别 予 芬 太 尼 ３￣ ／ ｇ Ｆ组 ）瑞 芬 太尼 １￣ ／ ｇ Ａ－ ） ２￣ ／ ｇ Ａ ３组 ｇｋ （ 、 ｇ ｋ （ 组 、 ｇ ｋ （ ２组 ） 插 管 ， 察 围 插 管期 血 流 后 现
动 力 学 变化 。【 果】 组 患 者诱 导 后 Ｂ 结 三 Ｐ下 降 、 ＨＲ减 慢 ， 诱 导 前 比较 有 统 计 学 差异 （ ＜ Ｏ０ ） 与 Ｐ ． ５ 。Ｆ组 插 管 后 ３ｍｉ ｎ内各 项 参 数 明显 升 高 ， 诱 导前 及 Ａ－Ａ 与 、 ２组 比较 ， 异 均 有 显 著 性 （ ＜ Ｏ ０ ） Ａ。组 患 者 插 管后 各 差 Ｐ ．５， 项参数变化与诱导前 比较无显著差异 ， Ａ 与 ２组 比较 差 异 有 显 著 性 （ ＜ ０ ０ ） 插 管后 血 压 降 低 与 诱 导 前 无 Ｐ ．５ ，
绿 原酸 、 绿原 酸为 奎 宁酸 和咖 啡酸 的酯 ， 金 异 为
１ 临 床 资 料
１ １ 一 般 资 料 选 择 ３ ． ０例 ＡＳ 工～ Ⅱ级 的全 麻 Ａ 患者 ， 年龄 ２ ￣５ ６ ３岁 ， 重 ４ ～ ７ ｇ 术 前 检 查 无 体 ５ ２ｋ ， 明显插 管 困难 ， 心肺 功能 良好 ， 肾 功能 及 电解 质 等 肝 各 项检 查正 常 。将 患 者 随机 分 为 三组 ， 组 １ 每 ０例 。 三 组患 者一 般情 况 （ 年龄 、 性别 、 重 ） 体 及血 流动 力学
本结果 显示 ， 湖南 产灰毡毛忍冬 花蕾 中有效 化学 成分绿 原酸 的含量 高 于金 银花 传统 产 地 山东 省 济银 花 和河南省密银 花花蕾 中绿 原酸 的含量 。 因此 ， 就测 量样 品 中有效成 分绿原酸含量 的高低 而 言 ， 灰毡 毛忍 冬优 于正品金银 花忍冬 ， 更适 宜作为提 取绿 原酸 的原 料 ， 多种致病 菌和病毒 的抑 制和匀灭 作用 也优 于正 对 品金银 花 的传 统产地 山东的济银花 和河 南 的密银花 ， 这一结 论与本科 进行 的药 理实验结果 一致 。
第 ５期
ＪＣｉ ｓ ｌ Ｒｅ，Ｍａ ０ ６ ｎ ｙ２ ０ ．Ｖｏ ２ ，Ｎ ５ ｌ ３ Ｑ
・
临床 研 究 ・
不 同剂 量 瑞 芬 太 尼对 气 管 插 管 血 流 动 力 学 的 影 响
周 辉 龚 松 林 谭 贤刚
４ ２０ ） ２ ０ ０
（ 湖南 省邵 阳市 中心 医院麻醉 科 ， 南 邵 阳 湖
０ ６ ， 明仪 器较精 密 。 ．０ 说 １ ２ ７ 回收 率试验 ． ． 采 用加 样 回收 法 ， 已 知含 量 取
金银 花 样 品 粉 末 约 ０ １ 含 量 为 ３ ５ ８ ． ８ ｇ（ ． ４ ５ ｍｇ・ ｇ ） 精 密称 定 ５份 ， 份 加 入 对 照 品 液 １ ０ｍｌ置 ， 每 ． ，
制和 降低 气管 插 管引起 的心血 管反 应 是 麻 醉 医生 关
注 的问题 ， 文通 过 与芬 太尼 进行 比较 ， 本 观察 瑞 芬 太 尼 在插 管 期 间 Ｂ Ｐ和 ＨＲ 的变 化及 适宜 的 剂量 。
１ ３ 统 计 学分析 ．
两组 间 比较采 用 ｔ 验 。 检
本文 通 过对该 法 的方 法学 考察 即线 性关 系 ， 现性 、 重 精密 度 、 稳定性 ， 收率 的考 察 ， 果 表 明 该 法 稳定 回 结
１ ２ ２ 对 照 品溶 液 的 配制 精 密称 取 减 压 干 燥 至 ． ． 恒 重 的绿原 酸 标准 品 ， 入 ９ 乙醇制 成 ０ ２ ８ｍｇ 加 ５ ． １
・ 对 照品溶 液 。 ｍｌ
维普资讯
医学 临 床研 究
２０ ０ ６年 ５月 第 ２ ３卷
通 过 ＨＰ Ｃ测 定 不 同 品 种 样 品 的 绿 原 酸 含 量 。【 果 】 回 县 金 银 花 绿 原 酸 含 量 较 高 ， 南 密 县 金 银 花 绿 原 Ｌ 结 隆 河
酸 含 量 较 低 ， 东临 沂 地 区平 邑县 金 银 花 绿 原 酸 含 量 更 低 。【 论 】 绿 原 酸 含 量 而 言 ， 回 县金 银 花 种植 基 山 结 就 隆
显 著 差 异 。【 结论 】 芬 太尼 １０｝ ／ ２０￣ ／ ｇ的 效 果 好 ， 能 维 持 全 麻 诱 导 期 血 流动 力 学稳 定 。 瑞 ． ｔ 比 ． ｇｋ ｇ 更
［ ■ 词 ］ 插 管 法 ， 管 内 Ｉ 血 液 动 力 学 ； 芬 太 尼 ／ 药 和 剂 量 关 气 投
［ 中田分类 号］ Ｒ ７ ． ［ ４ ２ ９ 文献标识码］ Ａ ［ 文章编号］ １ ７— １ １２ ０ ）５０ ６ —２ ６ １７ ７ （０ ６０ —７ ００
全 麻 诱 导 后 喉 镜 窥 视 和气 管插 管 可 引 起 心 率 （ ＨＲ） 加快 ， 压 （ Ｐ 升 高 等 心 血 管 反 应 。如 何 控 血 Ｂ ）
１ ２ ３ 线性 关 系的 考察 ．．
精 密 吸取 上 述 对 照 品 溶
腺 忍冬 、 山银 花 或 毛 花 柱 忍 冬 的 干燥 花 蕾 或 带 初 开 的花［ ， １ 性寒 、 甘 ， 肺 、 、 ｊ 味 归 心 胃经 ， 有 清 热解 毒 、 具 凉 散 风热之 功 。《 草纲 目》 ： 主 治一 切 风湿 气 及 本 云 “ 诸 肿毒 、 痛疽 、 癣 、 疥 杨梅 诸恶 疮 ， 热解 毒 。 亦 为 重 散 ” 要 的保 健饮 品 和食 品 、 取绿 原 酸 （ Ｃ 原料 。 提 ＴＬ ）
（． １ 中南 大学 湘雅 医院 ， 南 长 沙 湖 ４ ０ ８ ２ 湖 南 中 医学院 ， １ ０ ；． 湖南 长 沙 ４ ００ ） １ ０ ７
［ 要 ］ 目的 】 摘 【 比较 三种 不 同产 地 的 金 银 花 中绿 原 酸 的 含 量 ， 别 出含 绿 原 酸 含 量 较 高 的 品 种 。【 法 】 鉴 方
地 的金 银 花 最好 。
［ 键 词 ］ 绿 原 酸 ／ 析 ； 金 银 花 ； 色谱 法 ， 关 分 高压 液相 ［ 图 分 类 号 ］ Ｒ ４ ． ［ 献 标 识 码 ］ Ａ ［ 章 编 号 ］ 中 ４６１ 文 文
金 银 花又 名 双 花 、 花 ， 银 为忍 冬 科 植 物忍 冬 、 红
Ａｌｒｃ ｈ ｍｉ Ｇｍｂ 公 司提供 ； ｄｉ ｃ ｅ ｃ ｈ Ｈ 乙腈 为 色谱 纯 ； 其 他试 剂 均为 分析 纯 。
１２ 检 测 方法 ． １２ １ 色谱 条 件 固定 相 大连 江 申公 司 ， ． ． ｏＤＳ柱 ： ２ ０ ． ｍ， 填 料 ； ５ Ｘ４６ ５ 流动 相 ： 乙腈一． 磷 酸 （ ０ ０１ ２ ： ０ ｖ ｖ ｌ ｎ 。检 ３７ ｎ 进 样量 ：０ ； ｍ， １ ｌ柱温 ： 温 。 室
力多 有 限公 司 ； 效 液 相 色 谱 仪 ： 国 Ｗａｅｓ 司 高 美 ｔｒ 公 生产 ； Ｃ ２ ５紫外 检 测 器 ，０ Ｌ －９ ２ ０系 列 二 元 泵 ： 京 千 南 谱 公 司 Ｈｗ 色谱 工作 站 。
１ １ ３ 试 剂 绿 原 酸 对 照 品 由 美 国 Ｓｇ ．． ｉｍａ—
于 超声 提取 器 中提取 ２ｈ 过 滤 、 ， 冷却 、 容 。按上 述 定 色 谱 条件 ， 各进 样 １ ｌ测 定 峰 面积 ， 算 回收 率 ， ０ ， 计 平 均 回收率 为 １ ０ １ ， Ｄ 为 ０ ４ 。 ０ ． ＲＳ ． １ ２ ８ 样 品 测 定 精 密 称 取 上 述 ３种 不 同 产地 的 ．． 金银 花粉末 １０ ０ｇ 分 别加 入 １ 倍 量 的 ９ 乙醇 ， ． ０ ， ０ ５ 置于 超声 提取 器 中室温 提 取 ２ｈ 过滤 ， 去滤 渣 ， ， 弃 冷 却 ， 经 ０ ４ ｍ 的微孔 滤 膜滤 过 ， ５ 容 量瓶 再 ．５ 置 ０ｍｌ 中 ， ９ 乙醇 定 容 。然 后 分 别 精 密 吸 取 对 照 品 、 用 ５ 样品 溶液 各 １ ｌ按 上述 色 谱 条 件 测 定 ， 外标 法 ０ ， 以 计 自然样 品 中绿 原酸 的含 量 。
液 ０ ，． ｌ１ ｌ １ ｌ２ ｌ２ ｌ 样 ， 上 ｌ５ ０ ，０ ，５ ， ０ ， ５ 进 按
述 色谱 条件 测 定峰 面积 ， 以峰面 积各 分 值 为纵 坐 标 ，
绿 原 酸进样 量 （ ） ｇ 为横 坐标 ， 制标 准 曲线 ， 出 回 绘 得
归方程 为 Ｙ一６ ９ ４ １ ８ ５ ７ ｒ ．． ９ ７ ９ ０ － ９ ４ ５ Ｘ，￣０ ９ ９ 。表 明绿 －

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高效液相色谱法测定金银花含片中绿原酸含量

高效液相色谱法测定金银花含片中绿原酸含量

高效液相色谱法测定金银花含片中绿原酸含量摘要提供色谱柱为Spherigel C18色谱柱（200mm×4.6mm，5μm）、流动相为乙腈-1.0%醋酸水、检测波长327nm等色谱条件，建立了高效液相色谱法测定金银花含片中绿原酸含量的方法。

在该色谱条件下，绿原酸的含量在1.56~25μg/mL范围内线性关系良好，相关系数r=0.999 2，加样回收率为99.7%，RSD为2.63%（n=5），最低检出限为0.05μg/mL。

结果表明，该方法操作简单，分离度好，适用于金银花含片中绿原酸含量的测定。

关键词高效液相色谱法（HPLC）；绿原酸；金银花含片金银花（Flos lonicerae）为忍冬科（Caprifoaceae）忍冬属（Lonicera）植物[1]。

金银花的活性成分之一为绿原酸（结构式见图1）。

绿原酸为咖啡酰奎尼酸衍生物，由奎尼酸和咖啡酸缩合而成，易溶于甲醇、乙醇、丙酮等极性溶剂，微溶于乙酸乙酯，难溶于三氯甲烷、乙醚、苯等亲脂性溶剂，是一种重要的生理活性物质。

绿原酸为抗菌消炎的主要成分，对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、痢疾球菌、伤寒杆菌、肺炎球菌有显著的抑制作用；有抗病毒、升高白细胞、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基等作用；与人体血小板凝集和凝血因子的生成有关，还具有抗生育作用及对免疫系统的调节作用[2]。

本文采用高效液相色谱法，对金银花含片中绿原酸的含量进行测定，以期提高金银花含片质量标准可控性，为进一步完善其质量标准提供试验依据。

1仪器与试药1.1仪器DionexAT330（美国）高效液相色谱仪：由P680四元泵、UVD170U紫外检测器和AT330恒温箱组成；KQ 3200 B型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司生产）。

1.2材料与试剂金银花含片（河北省某厂生产）；绿原酸标准品（购自中国药品生物制品检定所）；甲醇、丙酮、无水乙醇、磷酸均为分析纯、乙腈为色谱纯，二次蒸馏水。

高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量

高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量

高效液相色谱法测定金银花提取物中绿原酸的含量【摘要】目的建立金银花提取物中绿原酸含量的HPLC测定方法。

方法国产C18柱（4.6 mm×250 mm，7 μm）;流动相为乙腈：0.4%磷酸（12∶88）；检测波长为327 nm；流速1 ml・min-1；进样量10 μl；柱温25℃。

结果绿原酸在0.071 6～0.644 4 μg范围内线性关系良好，r=0.999 6；平均回收率99.99%，RSD=1.61%（n=6）。

结论该方法简便、快速、准确，可用于金银花提取物的含量测定及质量控制。

【关键词】金银花提取物；绿原酸；高效液相色谱法AbstractObjectiveTo establish a method for the determination of Chlorogenic acid in the extract of Flos Lonicerae.MethodsThe chromatographic conditions were as follows: C18 chromatographic column (4.6 mm×250 mm，7 μm)，a mobile phase of acetonitrile and 0.4%H3PO4(12:88)，the detection wavelength at 327 nm and the flow rate being 1 ml・min-1. ResultsA linearity of Chlorogenic acid in the extract was obtained in the range of 0.071 6～0.644 4 μg r=0.999 6(n=6).The average recovery was 99.99% and RSD=1.61%(n=6). ConclusionThis method is easy，sensitive and accurate for the determination of Chlorogenic acid in the extract of Flos Lonicerae.Key wordsChlorogenic acid; HPLC; Determination金银花Flos Lonicerae又名忍冬、双花，为临床常用中药，具有清热解毒、凉散风热之功效，主治痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等［1］。

初均速法预测金银花的有效期

初均速法预测金银花的有效期

初均速法预测金银花的有效期目的：研究不同温度下金银花的稳定性，预测其室温下（25 ℃）的有效期。

方法：采用HPLC测定金银花中绿原酸的含量，以初均速法得到其活化能Ea和分解速率常数K，预测有效期。

结果：金银花在25 ℃下有效期为1.29年。

结论：用初均速法预测金银花的稳定性，以测定绿原酸含量为指标，其操作简便，结果可靠，所以金银花在储存时应避高温，用室温保存，以保证其质量。

标签：初均速法；金银花；有效期；高效液相色谱法金银花，忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花，有清热解毒、凉散风热之功效[1]，主要有效成分为绿原酸和挥发油。

临床上多用于治疗风热感冒、湿病发热、咽喉肿痛、丹毒、肺炎、痢疾和蜂窝状组织炎等，有“中药之中的青霉素”之称[2]。

近年来，国内外学者从科学的角度证实了金银花具有广谱抗病毒、抗菌、抗肿瘤、抗生育、增强免疫及解热抗炎、利胆、保肝、降脂、止血、抗溃疡等多种药理作用[3]。

目前对金银花药理作用的研究比较广泛和深入，但其稳定性的研究报道未见。

为考察金银花的有效期，本文以绿原酸为指标，通过初均速法结合高效液相技术，测定各温度下绿原酸的含量，推算出常温下的速率常数，从而计算出金银花的有效期，为评价其质量提供实验依据。

1 材料岛津LC- 2010AHT高效液相色谱仪，自动进样器，CLASS-VP工作站，SPD-10A VP紫外-可见检测器，KQ3200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），101 型电热鼓风干燥箱（北京中兴伟业仪器有限公司），电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。

乙腈为色谱纯，水为纯净水，甲醇、磷酸为分析纯。

绿原酸对照品由四川省维克奇生物科技有限公司提供，纯度≥98%，批号110315。

金银花药材采集于河南省封丘金银花种植基地。

2 方法2.1 绿原酸含量测定[1]2.1.1 色谱条件Purospher star RP-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87），流速1 mL·min-1，柱温25 ℃，检测波长327 nm，进样量5 μL。

HPLC(液相色谱)-绿原酸检测方法

HPLC(液相色谱)-绿原酸检测方法

HPLC-绿原酸检测方法2020版本药典有效成分测定参考2020版《中国药典》金银花项下绿原酸和木犀草苷测定的方法，采用高效液相色谱法测定其含量。

2.3.4.1 供试品溶液制备取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率35kHz)30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液4ml，置5ml离心管中，摇匀，即得。

2.3.4.2 绿原酸的高效液相色谱检测方法(1) 标准品溶液的配制取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含50µg的溶液，即得对照品溶液10℃以下保存。

(2) 检测条件色谱条件：色谱柱为安捷伦SB-C18柱（250mm×4.6mm，5µm）；流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液（13:87）；检测器为安捷伦G1314B可变波长紫外检测器；流速为1.0ml/min；柱温为25℃；检测波长为327nm；进样量为10µl。

用外标法进行定量。

(3) 标准曲线的绘制分别吸取绿原酸对照品溶液2、4、6、8、10、20µl注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以进样量为横坐标X，色谱峰峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，得回归方程Y = 830.69X -16.516(R2=1)。

(4) 精密度实验取同一浓度的对照品溶液每次进样10µl，连续进样6次，按上述色谱条件测定绿原酸含量，根据检测结果计算相对标准偏差（RSD）。

(5) 稳定性考察分别取同一浓度的对照品溶液10µl，每隔两小时进样一次，连续进样检测６次，根据结果计算相应的相对标准偏差（RSD），检测10小时之内绿原酸的稳定性。

(6) 重现性实验取同一批次的提取样品，在设定的HPLC条件下连续进样6次，测定绿原酸含量，计算标准偏差（RSD）。