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HPLC法测定银黄颗粒中绿原酸的含量

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ｕｅ ． ｈ ａ ｐｅ ｗ ｒ ｓｐｒｔｄｂ Ｐ Ｏ Ｓｃｌｍ （ ５ ｍ × ． ｍ， ｍ）Ｔ ｅｍ ｂ ｅｐａｅ ｓ ｃ ｎｔｌ－．％ ａｅｉ ａｉ １ ｓｄ Ｔ ｅｓｍ ｌ ｅ ａａ ｙＶ －Ｄ ｏ ｎ １０ｍ ｓ ｅｅ ｅ ｕ ４ ６ｍ ５ｔ ． ｏｉ ｈ ｔ ｉｉ ０ ４ ｚ ｈ ｌ ｓ ｉ ａ ｏ ｒｅ ｃｔ ｃ ｃ ｄ（３
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属性 ， 因此作为 山茱萸 的指标成 分不 合适 ， 中国药典 ２０ ０５年
版一部 已将 ２ ０ ００年版标准 中熊果酸 的含量测 定改 为马钱 苷 的含量测定。马钱苷属于环 烯醚萜 苷类化合 物 ， 具有 明显 的
总体情况
数据具体分布情况（ ％）
０ ６ ％ ～０ ９ ％ ５ ．０ ．０ ０批 （３ ３ ６ ．） ０ ６ ％ ～１ １％ ０ ９ ％ 以上 ２ ．ｏ ．２ ，０ ９批 （ ６ ７ ３ ．）
刘 文 丽
（ 徽 六安 市 药 品检 验 所 中药 室 ， 徽 六 安 安 安 ２ ７０ ） ３０ ６
摘要 ： 目的
建立银黄颗粒 中绿原酸的含量测 定方法 。方法
采 用 高效液相 色谱 法 ， 色谱柱 Ｖ — Ｄ ＰＯ Ｓ柱 （ ５ ｍ × ． ｍ， １０ｍ ４６ｍ ５
ｔ ； ｚ 流动相 ： ｍ） 乙腈 －． ％磷酸溶液（ ３ ８ ） 检测波长 ３ ７ｎ 流速 １０ｍ ・ ｉ～， ０４ １ ：７ ， ２ ｍ， ． ｌ ｍｎ 柱温室温 。结果 本法灵敏度高 ， 操作 简便 ， 重复性好 ， 准确可靠 ， 可作为银黄颗粒 中绿 原酸的含量测定方法。
表 ３ 山茱萸 含量测定结果 标准 限度
不得少于 ０６％ ，ｏ
含量测定方法。本文采用 高效液相 色谱法 ， 对银 黄颗粒 中主 药金银花 的有效成分 绿原酸 的含 量测定方 法进 行研究 。 以期
提高银黄颗粒 质量标 准可控性 ， 为进一 步完善该制剂 的质 量 标准提供实验依据。
１ 仪器与试药
关键词 ： 银黄颗粒 ； Ｐ Ｃ； 原酸 ； ＨＬ 绿 含量测定
回归方程 Ｙ＝ 一１４ ０× ．４
１ ＋１２５×１ ｒ ０ ９ ９９ ｎ＝ ） 绿原酸在 ０ ８ ０ ，４ ０ ｘ（ ＝ ．９ ， ５ ， ． ８—１ ． ｇ ３ ２ 范围 内线性 良好 ， 加样 回收率 ９ ．９ ， Ｓ ９ ３ ％ Ｒ Ｄ＝０５ ％。结论 ．３
ｒ ｎ ｌ ｓ ｇａ ｕｅ ．
Ｋｅ ｒ ｓ Ｙｉｈ ａ ｇ ｇ ａ ｕ ｅ ； Ｌ ｃ ｌｒ ｇ ｎｃ ａ ｉ ； ｅｅ ｉ ａｉ ｎ ｙ ｗｏ ｄ ： ｎ ｕ ｎ ｎ ｌ ｓ ＨＰ Ｃ； ｈ ｏ ｏ ｅ ｉ ｃ ｄ ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｒ ｍ ｏ
银黄颗粒收载于中华 人民共和国卫 生部 药品标准 中药成 方制剂第六册（ ９２年 ） 是 由金银 花提取 物 、 １９ ， 黄芩 提取物 制 成 的复方制剂 。 具有清热 、 解毒 、 消炎之功效 ， 用于治疗急慢 性 扁桃体炎 、 慢性 咽喉 炎 、 呼吸道感 染 等症 …。部 颁标 准 急 上 中以性状 、 鉴别 和颗粒剂通则检查评价银黄颗粒 的质量 ， 见 未
Ｃｏ ｔｎ ｅｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｈ ｏ ｏ ｅ ｉ ｃｄ ｉ ｎ ａ ｇ ｇ ａ ｕ ｅ ｙ ＨＰＬＣ ｎ ｅ ｔｄ ｔｒ ｎ ｔｏ ｆｃｂ
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（ ｕｎＩｓｔｔｆ ｒ ｒ ｏ ｔ ｌ ｎ ｕ Ｐ ｏｉｃ ３ ０６ Ｃ ｉａ Ｌ ａ ｔｕｅｏ ｕ Ｃ ｎ ｏ， ｈ ｉ ｒ ｎｅ２７ ０ ， ｈｎ ） ｎｉ Ｄ ｇ ｒ Ａ ｖ
５ ％ ． ｎ ｌ ｓｏ Ｔ ｉ ｍｅｈ ｄ ｉ ｅ ｓ ｉｅ， ｕ ｃ ， ｃ ｕ ａｅ ａ ｄ ｃ ｎ ｂ ｓ ｄ ｔ ｅｅ ｉｅ ｔ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔ ｏ ｈ ｏ ｏ ｅ ｉ ａ ｉ ｎ Ｙｉ ｈ ａ ｇ ３ Ｃｏ ｃｕ ｉ ｎ ｈ ｓ ｔ ｏ ｓｓ ｎ ｉ ｖ ｑ ｉｋ ａ ｃ ｒｔ ｎ ａ ｅ ｕ ｅ ｏ ｄ ｔｒ ｎ ｈ ｏ ｔｎ ｓ ｆ ｌ ｒ ｇ ｎ ｃ ｃｄ ｉ ｎ ｕ ｔ ｍ ｃ ｎ
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ＨＬ Ｐ Ｃ法测定 银黄颗 粒中绿 原酸的含量
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银黄胶囊中绿原酸的含量测定(HPLC法)

银黄胶囊中绿原酸的含量测定(HPLC法)

３ 实验方 法
表 １ 绿原 酸 回收 率实验 结 果
３１ ．标准品溶液的制备 ： 取绿原酸对照品约 ５ ｇ精密 ｍ，
称定 ， ５ｍＬ量瓶 中 ， ５％ 甲醇 溶解 并 稀 释至 刻 置 ０ 加 ０ 度 ， 匀 即得 。 摇 ３２样品溶 液的制备 ： ． 取银 黄胶囊 约 ０ ｇ精密称 定 ， ．， ５ 置 ５ｍＬ量瓶 中，精 密加 入 ５％甲醇 ，定 容 ，超声 处理 ０ ０ ３ｍｉ， ， ０ ｎ放冷 摇匀 ， ， 滤过 精密量取 ｌ Ｌ置 ５ 量 瓶中 ， ｍ ， ｍＬ
和黄芩 ，标准 中无 主要成分的含量测定 ，我们采用 ２４ ６ ８ １ ，４ Ｌ 按上述色谱条件测定峰面积积分 ，， ，，０ １ ，
ＨＰ Ｃ法 对 其 中金银 花 的 有 效 成 分 绿 原 酸 的含 量 进 值 ， Ｌ 以峰面积积分值为纵坐标 ， 进样量为横坐标 ， 经线
行测定 。该法操作简单 、 灵敏准确 ， 可适用于银黄胶 性 回归 处 理 ， 回 归 方 程 为 Ｙ＝ ５ ５８ １ ９ ４ （： ２９ ． Ｘ＋ ． ６ ｒ ２
Ｆ ｎ ｉｕ（ｅ ａ ｍ ｎ ｈ ｒ ａｙ Ｆｒ ｆｌ ｔｄ ｓｉ ｌ ｆｎ ｅ ｎ ｏｉ Ｍｅ ｉａ Ｃ ｌ ｇ， ｏ ｈ ｔ １０ ￣ ｅ ｇ ｈ ａ ｐ ｒ ｅ ｔ ｆ ａｍ ｃ， ｉ ｔ ｉ ｉ ｅ ｐｔ ｎ ｒ ｇ ｌ ｄｃｌ ｏ ｅ ｅＨ ｈ ｏ ０ ０ １ Ｗｅ Ｄ ｔ ｏＰ ｓＡ ａ Ｈｏ ａ ｏ Ｉ Ｍｏ ａ ｌ
超声波清洗器（ 昆山市超声仪器公司 ） 。绿原酸（ 中国 进样， 按 述色谱条件测定峰面积积分值，Ｓ ＝． ％ Ｒ Ｄ Ｉ０ 。 ０
药 品生物 制 品检 定所 ）经归 一 化法 进行 纯度 检查 ， ３ 重现性试验 ： 同一批银黄胶囊 ６ ， ， 绿 ． ５ 取 份 分别精密称 原 酸纯度 为 ９ ． ％。 乙腈 、 ９８ ７ 甲醇为 色 谱 纯 ， 黄胶 囊 定 ， 银 按上述样品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积 由 石 药 集 团制 药 有 限 公 司 生 产 ，批 号 为 ０ ０ １、 积 分值 ， ５ ３ ｌ 绿原 酸 Ｒ Ｄ ０４ ％。 Ｓ ＝． ６
高效液相色谱／质谱联用法测定银黄颗粒中绿原酸含量

高效液相色谱／质谱联用法测定银黄颗粒中绿原酸含量

高效液相色谱／质谱联用法测定银黄颗粒中绿原酸含量摘要：目的：建立高效液相色谱-电喷雾质谱(HPLC/ESI/MS)联用测定银黄颗粒中绿原酸含量。

方法：以质谱定性，高效液相色谱定量进行检测，检测波长327nm。

所用的色谱柱为Spherigel C18色谱柱(200 × 4.6 mm，5m)流动相为乙腈-0.4%磷酸水。

结果：在该色谱条件下，绿原酸的含量在1.56g/mL~25g/mL范围内线性关系良好，相关系数为：r=0.9992，加样回收率为99.7%，RSD为2.63%(n=5)，最低检出限为0.05g/mL。

结论：该方法操作简单，分离度好，适用于银黄颗粒及其提取物中绿原酸含量的测定。

关键词：高效液相色谱/质谱法(HPLC/MS)；绿原酸；银黄颗粒银黄颗粒是由金银花、黄芩两味药材加工制成的复方制剂，具有清热、解毒、消炎的功效[1]，主要用于急慢性扁桃体炎、急慢性咽喉炎、上呼吸道感染等症。

金银花(Flos lonicerae)为忍冬科(Caprifoaceae)忍冬属(Lonicera)植物，是本方的主药之一[2]。

金银花的活性成分之一为绿原酸(结构式如图1)。

绿原酸为咖啡酰奎尼酸衍生物，由奎尼酸和咖啡酸缩合而成，易溶于甲醇、乙醇、丙酮等极性溶剂，微溶于乙酸乙酯，难溶于三氯甲烷、乙醚、苯等亲脂性溶剂，是一种重要的生理活性物质。

绿原酸为抗菌消炎的主要成分，对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、痢疾球菌、伤寒杆菌、肺炎球菌有显著的抑制作用；有抗病毒、升高白细胞、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基等作用；与人体血小板凝集和凝血因子的生成有关，还具有抗生育作用及对免疫系统的调节作用[3，4]。

银黄颗粒中主药金银花的有效成分绿原酸的含量测定主要采用高效液相色谱法[5，6]，本文采用高效液相色谱/质谱联用法，对银黄颗粒中绿原酸的含量进行测定。

以期提高银黄颗粒质量标准可控性，为进一步完善该制剂的质量标准提供实验依据。

高效液相法测定银黄冲剂中绿原酸的含量

高效液相法测定银黄冲剂中绿原酸的含量

号 ０ ５ — ２ ０ １ ） 样 品来 源 （ 徽 丰 原 药 业 股 份 有 ７３ ０ １１ ； 安 限公 司涂 山分 厂 ， 号 ０ ０ ２ 、 ３ ３ ７ ０ ０ ２ ； 南 批 ３ ３ ６ ０ ０ ２ 、３ ３ ８ 湖 三 九 南开 制药 有 限公 司 ， 号 ２ ０ ０ １ ） 批 ０ ３ ３０ 。
２ 方法 与结 果
２ ３ 线 性 关 系的 考 察 精 密 称 取 绿 原 酸 对 照 品 ． １ ． ０ｍｇ 置 １ ０ｍｌ ９ ９ ， ０ 棕色 量 瓶 中 ， ５ 甲醇 溶解 ， 用 Ｏ 并定 容 至刻度 ， 匀 ； 别精 密 吸取 ０ ２ ０ ８ １ ０ １ 摇 分 ． 、 ． 、． 、 ． ４ １ ８ ３ ０ｍｌ １ 棕 色 量 瓶 中 ， ５ 甲醇 至 、 ． 、 ． 至 Ｏｍｌ 加 Ｏ 刻度 ， 匀 ， 密 吸取 上 述溶 液 各 ２ ｌ按 上 述色 谱 摇 精 Ｏ肛 ， 条件 测定 峰 面积 ， 以峰 面积 为 纵 坐标 ， 原 酸 浓度 为 绿 横坐标 ， 制标准 曲线 ， 绘 计算 回归方 程 、 相关 系数 （ 一
结 果 表 明绿 原 酸在 ３ ９ ～５ ． ０￣ ／ 的浓 度 ． ８ ９ ７ ｇ ｍｌ 范 围内呈 良好 线性 关 系 。 ２ ４ 精 密度 试验 ． 精 密 吸取 ０ ０ ２ ３ ３ ８批 供 试 品溶 液 ２ ｌ连 续 进样 ６次 ， 含 量测 定 方 法 测 定 峰 面 积 ， Ｏ ， 按 ＲＳ Ｄ为 ０ ２ ５ｎ ） ． ４ ／ 一６ 。 ９（
银 黄 冲 剂 由金 银 花 、 黄芩 ２味 中药 组 成 ， 功 能 其
主 治 为清 热 、 毒 、 解 消炎 ， 于 急 慢性 扁 桃 体炎 、 慢 用 急 性 咽喉炎 、 呼 吸道感 染 ， 果 良好 。 文选 择 了测定 上 效 本 金 银 花药 材 中绿 原 酸的 含 量作 为 本 品有 效成 分 的控
HPLC测定银黄颗粒剂中绿原酸和黄芩苷的含量

HPLC测定银黄颗粒剂中绿原酸和黄芩苷的含量


D-!ED’"!OE!.#F’"PIC*J的 对 照 品 溶 液!按 上 述
色 谱条件进样测 定 峰 面 积!以 峰 面 积 积 分 值 为 纵 坐
标 !绿 原 酸 量 为 横 坐 标 绘 制 标 准 曲 线 !计 算 得 回 归 方
程 QRS )E).FTU .E"D)VWS #’GGGG% 表 明 绿 原 酸
1=B21>61:>=
超 声 时 间 C*+, 绿 原 酸 含 量 C$ 黄 芩 苷 含 量 C$
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H 对照品溶液的制备
H’/ 绿 原 酸 对 照 品 精 密 称 取 对 照 品 绿 原 酸 D’-
*I!置 .#*J棕 色 量 瓶 中!加 "#$甲 醇 .#*J!超
万方数据
收 稿 日 期 !"##$%#&%#’
供 含 量测 定用3-黄芩 苷 对 照 品 .中 国 药 品 生 物 制 品 检 定所-批 号 ,,#’,1%"##","-供 含 量 测 定 用 32银 黄 颗 粒 剂.安 徽省亳 州市 辉 发 药 业 有 限 公 司32醋 酸 为 分 纯 -甲 醇 ;乙 腈 为 色 谱 纯 -水 为 重 蒸 水 4 ’ 色谱条件
表 ( 绿原酸回收率试验结果KfSNM
012’( g5<9:7<84;568h5;i5jk5;>?5=748;6@:8;8A5=>616>BKfSNM
取样量 CLI
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加入量 CLI