金银花叶中绿原酸的提取、纯化及抑菌性质研究
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第二章金银花叶中绿原酸的提取工艺研究金银花叶的主要有效成分是绿原酸，有文献报道同一时期的金银花叶中绿原酸类有效成分约为花的６０％到７０％，并且８、９月的金银花叶含量最高。
绿原酸具有抗菌、抗病毒、止血、抑制突变和抗肿瘤等多种生物活性效用；此外，绿原酸还是一种活性很强的抗氧化剂，抗氧化能力与常用的丁基羟基茴香醚和维生素Ｅ相当‘４７１。
绿原酸除医用外，还广泛用作食品保鲜剂和化妆品的抗衰老剂。
因此，从金银花叶中提取分离绿原酸具有重要的意义。
国内外已有不少文献报道了金银花中绿原酸的提取和分析方法，主要的提取方法有酶解法、超滤法、超声提取法、索氏提取法等【４８】。
不同方法各有优缺点，例如酶解法有利于细胞内物质（绿原酸等）的溶出且反应条件温和但是大大增加生产成本【４９】；超滤法能有效保留有效成分、无污染且绿原酸得率较高但是对提取液预处理较高，产量易受超滤条件的影响且膜的清洗麻烦［４９】。
超声波提取法因其独具的物理特性能促使植物细胞组织破壁或变形，使有效成分提取更充分，所以提取率比传统工艺显著。
此外，超声波提取法还具有提取温度低、适应性广、提取工艺运行成本低，综合经济效益显著、操作简单易行，设备维护、保养方便等优点【４９】。
虽然研究者报道了绿原酸的各种提取工艺，但是没有对不同方法提取的绿原酸得率进行比较。
实验确定提取工艺最优条件所用方法一般采用的是正交实验法，但正交实验也有其局限性，它只宜用于水平数不多的实验中，而均匀设计实验法较正交试验法有单因素试验的次数明显减少、考虑因素间交互作用变得简单等优点。
均匀设计和正交设计相似，也是通过一套精心设计的表来进行设计的即均匀设计表。
每一个均匀设计表是一个方阵，设方阵有ｎ行ｍ列，每一行是｛１，２，…，ｎ）的一个置换（即１，２，…，ｎ的重新排列），表的第一行是｛１，２，…，ｎ）的一个子集，但不一定是真子集。
５０３。
本章对超声波提取工艺与索氏提取工艺进行研究，并采用均匀设计实验优化了两种提取工艺的条件，在此基础上对两种工艺在绿原酸提取率、提取条件等方面进行了综合的比较。
１试剂与仪器
金银花叶：重庆市秀山县：
绿原酸标准品：购于贵州迪大生物科技有限责任公司：
其余试剂均为分析纯。
７５２Ｎ紫外分光光度计：上海圣科仪器设备有限公司：
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重庆工商大学硕士学位论文
醇层萃取液再经减压蒸馈浓缩得至Ｉ｜绿原酸粗品，绿原酸粗品再经乙酸乙酯．甲醇（３：２，ｖ／ｖ）混合溶剂萃取后在５０＂Ｃ恒温干燥后备用【６１】。
２．２傅里叶红外光谱仪测定金银花叶提取物
称取适量光谱纯ＫＢｒ于真空冷冻干燥机或者烘箱中干燥一定时间，置于干燥器中备用。
分别称取适量干燥的绿原酸标准品与方法２．１的金银花叶纯化物样品和适量的ＫＢｒ（样品与ＫＢｒ比例控制在１：５０．１：１００之间）于研钵中研细并充分混合均匀，在４０００．４５０ｃｍ‘１区间扫描，进行红外光谱测定【４３】。
２．３ＨＰＬＣ测定金银花叶提取物（绿原酸）
２．３．１流动相的制备【６２】
测定前分别将色谱纯乙腈、色谱纯磷酸溶液通过有机滤膜抽滤后超声３０ｍｉｎ脱气，冷却后供测定。
２．３．２对照品储备液的制备【６２】
精密称取绿原酸标准品０．０２５ｍｇ置于２５ｍｌ棕色容量瓶中用５０％甲醇溶液定容至刻度线摇匀，并用一次性注射器和滤头（滤膜孔径为０．４５ｕｒｎ）过滤，配制成浓度为ｌｕｇ／ｍｌ的储备液。
２．３．３样品储备液的制备
分别将纯化前和纯化后金银花叶提取物（绿原酸）用５０％甲醇溶液配制成浓度在０．２－１．４ｕｇ／ｍｌ之间的溶液，并用一次性注射器和滤头（滤膜孔径为０．４５ｕｒｎ）过滤备用。
３结果与分析
３．１金银花叶提取物的傅里叶红外光谱分析
通过傅里叶红外光谱仪扫得绿原酸标准品和金银花叶纯化物的红外光谱为图３．１，数据如表３．１。
