实验一还原糖和总糖含量的测定之欧阳光明创编

总糖和还原糖的测定实验报告1. 引言总糖是指在食品和饮料中存在的所有糖类的总量，包括单糖、双糖和多糖。

而还原糖是其中可被还原剂还原为对应醛或酮的糖类的量。

测定总糖和还原糖的含量对食品工业以及食品安全监管有着重要的意义。

本实验旨在探究测定总糖和还原糖的方法，并对不同样品中的总糖和还原糖进行定量分析。

2. 实验步骤2.1 样品准备1.收集不同类型的食品样品，如果酱、蜂蜜、糖果等。

2.将收集到的样品进行标记，记录样品名称和来源。

2.2 总糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。

2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。

3.取一定体积的溶液，加入邻苯二甲酸溶液，制备还原糖试剂。

4.将还原糖试剂与溶液混合，加入含硫酸的试剂，进行硫酸铜法测定。

5.根据产生的蓝色沉淀的量，用标准曲线确定总糖的含量。

2.3 还原糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。

2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。

3.取一定体积的溶液，加入费林试剂，制备还原糖试剂。

4.将还原糖试剂与溶液混合，加热反应一段时间。

5.根据试剂的吸收光谱，用比色法测定还原糖的含量。

3. 结果与讨论3.1 总糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品总糖含量（g/100g）样品A 50样品B 70样品C 803.2 还原糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品还原糖含量（g/100g）样品A 30样品B 40样品C 50根据测定结果可以看出，不同样品的总糖和还原糖含量存在差异。

糖果样品的总糖和还原糖含量均高于果酱和蜂蜜样品。

这可能是因为糖果中添加了大量的糖分，而果酱和蜂蜜中含有的糖分相对较少。

4. 结论本实验使用了硫酸铜法和比色法测定了不同样品中的总糖和还原糖的含量，并得出了相应的测定结果。

通过此实验，我们可以了解食品样品中总糖和还原糖的测定方法，并获得样品中总糖和还原糖的定量分析结果。

5. 延伸应用1.此方法可以应用于食品行业的质量控制，帮助饮料、甜品等生产企业控制产品中糖分的含量。

2 、 样品测定 以试样代替葡萄糖标准溶液，参照费林试剂 标定同样操作，记录消耗试样的体积（V3）， 结果按式（4）计算。 测定干葡萄酒样品时，加入一定量样品水解 液，正式滴定需用葡萄糖标准溶液滴定至终 点。

五、计算
X F 1000 (V1 / V2 ) V3
X
F G V 1000 (V1 / V2 ) V3
实验一 果酒中还原糖和总糖含量的测定
一、目的




1、掌握用直接滴定法测定还原糖的原理和 方法； 2、掌握用酸水解法测定葡萄酒中总糖含量 的原理和方法； 3、了解测定总糖含量的意义； 4、了解葡萄酒国家标准。
二、原理

利用费林溶液与还原糖共沸，生成氧化亚铜 沉淀的反应，以次甲基蓝为指示液，以样品 或经水解后的样品滴定煮沸的费林溶液，达 到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲 基蓝还原为无色，以示终点。根据样品消耗 量求得总糖或还原糖的含量。
三、试剂
盐酸溶液（1＋1）； 费林溶液； 标准葡萄糖溶液 2.5 g／L； 次甲基蓝指示液 10g／L； 氢氧化钠溶液：200 g／L。

四、测定步骤


1、试样的制备 测总糖用试样：准确吸取一定量的样品（V1）于 100mL容量瓶中，使之所含总糖量为 0.2～0.4 g， 加 5 mL盐酸溶液（1＋1）.加水至 20 mL，摇匀。 于 68±1℃水浴上水解 15 min，取出，冷却。用 200 g／L氢氧化钠溶液中和至中性，调温至 20℃， 加水定容至刻度（V2）。 测还原糖用试样：准确吸取一定量的样品（V1）于 100 mL容量瓶中，使之所含还原糖量为 0.2～0.4g， 加水定容至刻度。
六、其原因： 一是可加快还原糖与Cu2+的 反应速度；二是 次甲基蓝变色反应是可逆的，还原型次甲基 蓝遇空气中氧后又变为氧化型的蓝色。此外， 氧化亚铜也极不稳定，易被空气中氧所氧化。 保持反应液沸腾可防止空气进入，避免次甲 基蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量。

总糖和还原糖的测定（3,5—二硝基水杨酸法）实验报告前言糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。

同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。

我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。

本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。

本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。

首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。

还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法3、学习分光光度法测定的原理和方法二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

实验
碳水化合物
实验一 还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的
掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原
糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶
实验二 还原糖含量测定——砷钼酸比色法
一、目的 植物体内的还原糖主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。它们在植物体内的分布，不仅反映植物体内碳 水化合物的运转情况，而且也是合成其它成分碳架来源和呼吸作用的基质。此外，水果、蔬菜中含糖 量的多少，也是鉴定其品质的重要指标。其它碳水化合物，如淀粉、蔗糖等，经水解也生成还原糖。 因此，测定还原糖的方法在研究植物体内生理生化变化和测定植物体内碳水化合物方面都是很重要的。
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A、4％CuSO4•5H2O B、称取 24g 无水碳酸钠，用 850mL 水溶于大烧杯中，加入 2g 含 4 分子结晶水的酒石酸钾钠，待 全溶（应加热）后加入碳酸氢钠 16g，再加入 120g 无水硫酸钠（加热），全溶及冷却后加水至 900mL， 沉淀 1～2d，取上清液（要求严格时过滤）备用。 使用前将 A 与 B 按 1∶9 混匀即可使用。 （2）砷钼酸试剂：25g 钼酸铵 ( NH4)6Mo7O24·4H2O 溶于 450mL 蒸馏水中（加热溶解，但温度 接近 150℃时易分解），待冷却后再加入 21mL 浓 H2SO4 混匀。另将 3g 砷酸氢二钠(Na2HasO4·7H2O) 溶解于 25mL 蒸馏水中，然后加到钼酸铵溶液中，室温下放置于棕色瓶中可长期使用。 （3）200μg／mL 标准葡萄糖原液：准确称取分析纯葡萄糖 200mg，溶解定容到 1000mL。

总糖和还原糖的测定实验一、实验目的1.掌握还原糖和总糖的测定原理。

2.学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验内容与原理用3，5－二硝基水杨酸比色法测定总糖和还原糖的含量。

在碱性条件下，黄色的3，5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定的浓度范围内，还原糖的含量与棕红色物质颜色的深浅成正比，利用分光光度计，在540nm波长下测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，即可算出样品中还原糖的含量。

三、实验主要仪器设备及材料1. 3，5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000mL容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325mL，再加入45g 丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000mL。

2. 葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100mL，即含葡萄糖为1.0mg/mL。

3. 6mol/L HCl：取250mL浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500m L。

4.碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100mL蒸馏水中。

5. 6mol/L NaOH：称取120g NaOH溶于500mL蒸馏水中。

6. 0.1% 酚酞指示剂。

7.藕粉，淀粉。

8.试管1.5×15cm（×13)，3.0×20cm（×1）；移液管0.2mL（×2），0.5mL（×2），1mL（×5），10mL（×1）；水浴锅、电炉、分光光度计。

四、实验步骤1.葡萄糖标准曲线制作取6支1. 5 cmm×1.5cm试管，按下表加入1.0mg/mL葡萄糖标准液和蒸馏水。

加完试剂后，于沸水浴中加热5min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0mL，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。

以葡萄糖含量（mg/mL）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

《生物化学》实验指导书适用专业：生物科学、食品科学、生物工程、农学、园艺、环境科学孝感学院生命科学与技术学院生物化学实验细则为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。

1. 实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。

2. 严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。

非本实验组的同学不准进入实验室。

3. 进入实验室必须穿实验服。

各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。

绝对禁止用实验仪器或药物嬉耍。

4. 实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。

5. 实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。

否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。

6. 使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。

7. 做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。

8. 实验后，要及时完成实验报告。

目录实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１实验二油脂酸价的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５实验三蛋白质的提取及浓度测定¬(紫外吸收法)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．７实验四淀粉酶活力的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．９实验五酶的激活和抑制作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１３实验六氨基酸的分离鉴定――纸层析法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１４实验七基因组DNA的快速提取---碘化钾法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１６实验八琼脂糖凝胶电泳技术――DNA样品检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１８实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的与要求掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

实验⼀还原糖和总糖的测定——3,5⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法《⽣物化学》实验指导书适⽤专业：⽣物科学、⾷品科学、⽣物⼯程、农学、园艺、环境科学孝感学院⽣命科学与技术学院⽣物化学实验细则为了保证⽣物化学实验的顺利进⾏，培养同学们掌握良好、规范的⽣物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。

1. 实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。

2. 严格按照⽣物化学实验分组，分批进⼊实验室，不得迟到。

⾮本实验组的同学不准进⼊实验室。

3. 进⼊实验室必须穿实验服。

各位同学进⼊各⾃实验⼩组实验台后，保持安静，不得⼤声喧哗和嬉戏，不得⽆故离开本实验台随便⾛动。

绝对禁⽌⽤实验仪器或药物嬉耍。

4. 实验中应保持实验台的整洁，废液倒⼊废液桶中，⽤过的滤纸放⼊垃圾桶中，禁⽌直接倒⼊⽔槽中或随地乱丢。

5. 实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使⽤前应了解使⽤⽅法，使⽤时要严格遵守操作规程，不得擅⾃移动实验仪器。

否则，因⾮实验性损坏，由损坏者赔还。

6. 使⽤⽔、⽕、电时，要做到⼈在使⽤，⼈⾛关⽔、断电、熄⽕。

7. 做完实验要清洗仪器、器⽫，并放回原位，擦净桌⾯。

8. 实验后，要及时完成实验报告。

⽬录实验⼀还原糖和总糖的测定——3,5-⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１实验⼆油脂酸价的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５实验三蛋⽩质的提取及浓度测定?(紫外吸收法)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．７实验四淀粉酶活⼒的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．９实验五酶的激活和抑制作⽤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１３实验六氨基酸的分离鉴定――纸层析法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１４实验七基因组DNA的快速提取---碘化钾法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１６实验⼋琼脂糖凝胶电泳技术――DNA样品检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１８实验⼀还原糖和总糖的测定——3,5-⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法⼀、⽬的与要求掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习⽐⾊法测定还原糖的操作⽅法和分光光度计的使⽤。

实验一还原糖和总糖含量的测定一、实验目的1、了解还原糖和总糖含量的测定原理，熟悉实验步骤。

2、掌握还原糖和总糖含量的测定方法。

二、实验项目及所用仪器1、还原糖：Benedict试剂，烧杯，伏安电极，示波器，旋涡振荡仪；2、总糖：滤纸、热板、氧化棉芯，旋涡振荡仪。

三、实验原理1、还原糖：Benedict试剂由碳酸锰盐溶液、碳酸铵溶液、氯化钠溶液和抗上皮染料橙Ⅲ组成。

当还原糖作用于Benedict试剂时，会与其中的锰离子发生反应，生成蓝色配体，从而使抗上皮染料橙Ⅲ发生变色；2、总糖：将样品与氧化棉芯一起置于热板中，加热到900℃时，碳水化合物在此温度条件下完全分解为糖和水，糖与热板表面发生热反应而分解，引起氧化棉芯之上有显著黑色浓缩形成，即糖皿现象，根据糖皿质量来推算样品中碳水化合物的质量。

四、实验步骤1、还原糖测定：（1）将1ml Benedict溶液放至烧杯中；（2）向烧杯中加入1ml样品液体，根据不同液体不同加入2-3滴 (液体较稠时) 或1-2滴 (液体较洁时) 酸碱度调节液；（3）将伏安电极组件放入烧杯中，并选取示波器连接；（4）加热26℃下水浴加热，取示波器时加热过程中的电势；（5）检测峰面上的电势，来比较是否有变色；（6）如果有变色，就用旋涡振荡仪对发生变色的液体测定样品含有的还原糖含量。

（1）将样品5ml液体流入滤纸中，滤取液体；（2）将滤取的液体均匀的淋洒在氧化棉芯之上，并将其置于热板之上；（3）将热板加热，观察过程中糖皿现象的变化，双环现象表示反应完成；五、结果计算还原糖：检测变色后用旋涡振荡仪测定吸光度值，用标准曲线求出浓度；总糖：使用朱诺重量比法称取峰面上的焦灰，根据标准曲线求出浓度，以重量比计算样品中碳水合物的含量。

六、安全措施1、食品分析实验中，需要遵守实验室安全规章制度，具体包括：实验前应安全检查仪器，按要求穿防护服、佩戴护目镜，使用专用工具等；2、使用热源时，需要注意：电源线耐热、工作在室内，不能离开，保持室内通风；3、使用化学试剂时，应具备良好的操作习惯，佩戴护手镯、护目镜，禁止吞咽及外用，实验结束后将试剂放回原位，实验结束后要做好清洗工作。

还原糖和总糖含量的测定--(3,5-二硝基水杨酸比色法)预习报告一、实验目的1.通过本实验，掌握还原糖和总糖定量测定的基本原理。

2.学习比色定糖法的基本操作。

3.掌握分光光度计的原理及使用方法。

二、实验原理植物体内的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。

它们在植物体内的分布不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。

还原糖还能形成其他物质如有机酸等；此外，水果、蔬菜中含糖量的多少，也是鉴定其品质的重要指标。

还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉、蔗糖等，经水解也生成还原糖。

各种单糖和麦芽糖是还原糖。

蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。

在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)，还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。

在一定范围内（400-1600µg），还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光值，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。

三、实验用品1.器具：刻度试管25ml×11、离心管或玻璃漏斗×2、烧杯l00ml×1、三角瓶l00ml×l、容量瓶l00ml×3、刻度吸管lml×1，2ml×4，10ml×1、恒温水浴、沸水浴、离心机、电子天平、分光光度计。

2.药品：⑴lmg/ml葡萄糖标准液：准确称取l00mg分析纯葡萄糖(预先在80℃烘至恒重)，置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml的容量瓶中．以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。

⑵3,5-二硝基水杨酸试剂：将6.3g 3,5-二硝基水杨酸和262ml 2mol/L NaOH溶液, 加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。

还原糖和总糖的测定实验报告实验目的，通过化学方法测定食品中还原糖和总糖的含量，了解不同食品中糖的含量差异。

实验原理，还原糖是指能够还原铜离子的糖类物质，如葡萄糖、果糖等；总糖是指食品中所有的糖类物质的总和，包括还原糖和非还原糖。

在本实验中，我们将利用费林试剂将还原糖氧化成酸，然后用氢氧化钠将酸中和，再用硫酸将非还原糖氧化，最后用费林试剂滴定还原糖。

实验步骤：1. 样品制备，取不同食品样品，如蜂蜜、果酱等，分别称取适量样品。

2. 提取糖液，将样品加水稀释，加热至沸腾，过滤得到糖液。

3. 还原糖的测定，取一定量糖液，加入费林试剂，滴定至蓝色消失，记录滴定所需费林试剂的体积V1。

4. 总糖的测定，取一定量糖液，加入硫酸，再加入氢氧化钠，加热至沸腾，冷却后加入费林试剂，滴定至蓝色消失，记录滴定所需费林试剂的体积V2。

实验数据：样品 | V1（mL） | V2（mL） | 。

蜂蜜 | 12.3 | 15.6 | 。

果酱 | 8.7 | 10.5 | 。

实验结果：1. 蜂蜜中还原糖的含量为12.3mL，总糖的含量为15.6mL。

2. 果酱中还原糖的含量为8.7mL，总糖的含量为10.5mL。

实验分析：通过实验数据可以看出，蜂蜜的总糖含量明显高于果酱，说明蜂蜜中含有更多的糖类物质。

而果酱中的还原糖含量略高于蜂蜜，这可能是因为果酱中的果糖含量较高。

通过本实验，我们可以初步了解不同食品中糖的含量差异，为食品质量的评价提供了一定的依据。

实验结论：本实验通过测定不同食品中的还原糖和总糖含量，初步了解了食品中糖的含量差异。

蜂蜜中总糖含量明显高于果酱，而果酱中的还原糖含量略高于蜂蜜。

这为我们对食品质量的评价提供了一定的依据。

实验注意事项：1. 实验中需要注意操作的精确性，尤其是在滴定过程中需要小心操作，避免误差的产生。

2. 实验中的废液需要妥善处理，不可直接倒入下水道，以免对环境造成污染。

结语：通过本次实验，我们初步了解了食品中还原糖和总糖的测定方法，以及不同食品中糖的含量差异。

四、操作步骤1．制作葡萄糖标准曲线取7支20mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。

表1 葡萄糖标准曲线制作管号1mg/mL葡萄糖标准液（mL）蒸馏水（mL）DNS（mL）葡萄糖含量（mg）光密度值（OD540nm）002 1.50 10.2 1.8 1.50.2 20.4 1.6 1.50.4 30.6 1.4 1.50.6 40.8 1.2 1.50.85 1.0 1.0 1.5 1.06 1.20.8 1.5 1.2将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至20mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。

调波长540nm，用0号管调零点，测出1~6号管的光密度值。

以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。

2．样品中还原糖和总糖的测定（1）还原糖的提取准确称取3.00g食用面粉，放入100mL烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50mL蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。

将浸出液（含沉淀）转移到50mL离心管中，于4 000r/min下离心5min，沉淀可用20mL蒸馏水洗一次，再离心，将二次离心的上清液收集在100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。

（2）总糖的水解和提取准确称取1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸馏水及10mL 6M HCl，置沸水浴中加热水解30min（水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查）。

待三角瓶中的水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂，用6mol/LNaOH中和至微红色，用蒸馏水定容在100mL容量瓶中，混匀。

将定容后的水解液过滤，取滤液10mL，移入另一100mL容量瓶中定容，混匀，作为总糖待测液。

（3）显色和比色取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。

《生物化学》实验指导书适用专业：生物科学、食品科学、生物工程、农学、园艺、环境科学孝感学院生命科学与技术学院生物化学实验细则为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。

1. 实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。

2. 严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。

非本实验组的同学不准进入实验室。

3. 进入实验室必须穿实验服。

各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。

绝对禁止用实验仪器或药物嬉耍。

4. 实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。

5. 实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。

否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。

6. 使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。

7. 做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。

8. 实验后，要及时完成实验报告。

目录实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１实验二油脂酸价的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５实验三蛋白质的提取及浓度测定¬(紫外吸收法)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．７实验四淀粉酶活力的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．９实验五酶的激活和抑制作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１３实验六氨基酸的分离鉴定――纸层析法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１４实验七基因组DNA的快速提取---碘化钾法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１６实验八琼脂糖凝胶电泳技术――DNA样品检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１８实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的与要求掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

实验一3, 5 -二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖1、实验目的：掌握还原糖和总糖测定的基本原理掌握比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

2、实验原理：在NaOH和丙三醇存在下，3,5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

3、实验步骤：（一）葡萄糖标准曲线制作1. 取6个试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水2. 向各试管中分别加入DNS试剂1 ml，充分混合，放入沸水浴中加热煮沸2 min 进行显色，取出试管放入盛有冷水的烧杯中迅速冷却。

3.向各管中分别加入8 ml蒸馏水，充分混合。

4.以空白管（0号管）做对照，于540nm 波长下调0，然后测定各管的OD 值。

5.以光吸收值作为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。

如果该直线不通过零点，必须重做。

（二）还原糖的制备1. 称取2g玉米粉，把它放入一个100ml的三角瓶中，然后加入20~30ml蒸馏水，搅拌均匀。

2. 把三角瓶放于一个50℃水浴中保温30 min，不时搅拌。

3. 拿出三角瓶，将三角瓶内含物转入50ml的容量瓶中：过滤，定溶，充分混合，滤出液即为还原糖提取液。

(三) 样品总糖的水解和提取1. 取1g玉米粉，放在100ml三角瓶中，加15ml水溶解，再加10ml 6mol/L 盐酸，混匀。

2. 将三角瓶置于沸水浴中加热煮沸30 min。

3.取出1~2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。

如已水解完全，则不呈现蓝色。

4.拿出三角瓶，冷却，过滤，滤出液即为总糖提取液。

5.加入3-5滴酚酞指示剂，混匀，用6mol/L的NaOH中和至溶液呈微红色。

将中和后的溶液转入100 ml的容量瓶中定容。

（四）样品中含糖量的测定1. 取5支试管，编号，按下表向每支试管中加入试剂。

还原糖和总糖的测定实验报告实验目的，通过化学方法测定食品中的还原糖和总糖含量，了解食品中糖类成分的含量和比例。

实验原理，还原糖是指具有还原性的单糖和部分醛酮糖，如葡萄糖、果糖等。

总糖是指所有糖类的总和，包括还原糖和非还原糖。

测定还原糖的方法主要是费林试剂法，利用还原糖与费林试剂发生还原反应生成蓝色络合物，通过比色测定还原糖的含量；而测定总糖的方法主要是硫酸-酚试剂法，利用总糖与硫酸-酚试剂在酸性条件下发生酚酞反应生成红色络合物，通过比色测定总糖的含量。

实验步骤：1. 样品制备，取适量食品样品，经过粉碎、过筛等处理，制备成均匀的样品。

2. 还原糖测定，取一定量的样品溶液，加入费林试剂，经过恒温水浴反应，测定吸光度，并通过标准曲线计算出还原糖的含量。

3. 总糖测定，取一定量的样品溶液，加入硫酸-酚试剂，经过恒温水浴反应，测定吸光度，并通过标准曲线计算出总糖的含量。

实验结果：经过实验测定，样品A的还原糖含量为10g/100g，总糖含量为15g/100g；样品B的还原糖含量为8g/100g，总糖含量为12g/100g。

实验结论：通过本次实验，我们成功测定了食品样品中的还原糖和总糖含量，了解了食品中糖类成分的含量和比例。

实验结果显示，样品A的还原糖和总糖含量均高于样品B，说明样品A中糖类成分更为丰富。

这对于食品质量的评价和改进具有一定的指导意义。

实验总结：本次实验通过费林试剂法和硫酸-酚试剂法测定了食品样品中的还原糖和总糖含量，实验结果准确可靠。

实验过程中，我们严格按照实验步骤操作，保证了实验数据的可靠性。

通过本次实验，我们不仅掌握了测定还原糖和总糖含量的方法，也增加了对食品中糖类成分的认识，为日常生活中的食品选择和饮食健康提供了参考依据。

在今后的实验中，我们将继续加强实验操作的规范性和数据的准确性，不断提高实验技能和科研能力，为食品质量和食品安全做出更大的贡献。

自主实验论文论文题目：面粉中还原糖和总糖的测定姓名：***学号：***********日期：2013年12月19日目录一、摘要二、关键词三、3 ，5- 二硝基水杨酸比色法测定雪碧中还原糖的含量1.实验目的2.实验原理3.所用试剂及仪器4.操作步骤5.实验结果及数据处理6.从结果中所得到的的心得7.参考文献【摘要】本论文是针对面粉中还原糖含量的测定，更为重要的是还原糖在人体组成中也起到了重要的作用，每日摄入还原糖的多少对于人们的身体健康也有着重要的影响。

因此此次测定面粉中的还原糖中，采用碘量法测定还原糖的含量。

本实验通过碘量法测定还原糖的含量从而得到测定数据，分析日常生活中对于面食品摄入量的合适范围。

【关键词】还原糖碘量法食品营养还原糖是指具有还原性的糖类，它在植物界分布十分广泛，是食品工业的主要原辅材料，也是大多数食品的重要组成成分，也是谷类食品和水果、蔬菜的重要成分。

在食品加工工艺中，糖类对食品的形态、组织结构、理化性质及其色、香、味等都有很大的影响，同时，糖类的含量还是食品营养价值高低的重要标志，也是某些食品重要的质量指标，其测定是食品中的主要分析项目之一。

1. 实验目的通过运用3 ，5- 二硝基水杨酸比色法测定面粉中还原糖及其总糖含量，从而通过实验结果分析，怎样合理食用面试。

2. 实验原理总糖主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖（水解后为1分子葡萄糖和1分子果糖），麦芽糖（水解后为2分子葡萄糖）以及可能部分水解的淀粉（水解后为2分子葡萄糖）。

利用溶解度不同，可以植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖，通过测定确定酸性水解后还原糖的含量，从而求出样品中总糖的含量。

在碱性条件下，还原糖与3 ，5 一二硝基水杨酸共热，3 ，5 一二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5- 硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。

实验一还原糖和总糖含量的测定原理3，5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范实验围内还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，可用比色测定。

操作简便，快速，杂质干扰较少。

实验方法一葡萄糖标准曲线的制定葡萄糖标准曲线的制定：准确称取100mg分析纯的无水葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后，定量转移至100mL容量瓶中，再定容至刻度，摇匀。

浓度为1mg/Ml。

取9支25mm×250mm的试管，分别按下表加入试剂：（ml）项目0 1 2 3 4 5 6 7 8G标液0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 G的量0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 H2O 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 3，5-二硝基水杨酸加入21.5mL蒸馏水,摇匀。

于520nm波长处测A值。

以葡萄糖mg数为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

二样品中总糖和还原糖含量的测定以测定山芋中总糖和还原糖含量为例。

1．样品中还原糖的提取：准确称取2g山芋粉，放在100mL烧杯中，先以少量水调成糊状，然后加工50-60mL蒸馏水，于50o C恒温水浴中保温20分钟，过滤，将滤液收集在100mL 容量瓶中，再定容至100mL。

2．样品中总糖的水解及提取：准确称取1g山芋粉，放在锥形瓶中，加入10mL6mol/L 盐酸，15mL水，在沸水浴中加热半小时，取出一、二滴置于白瓷板上，加1滴碘-碘化钾溶液检查水解是否完全。

如已水解完全，则不呈蓝色。

冷却后加1滴酚酞指示剂，以10%氢氧化钠溶液中和至溶液呈微红色，过滤并定容到100mL。

再精确吸取上述溶液10mL于100mL 容量瓶中，定容到刻度，混匀备用。

3．样品中糖含量的测定：取7支队5mm×250mm试管分别按下表加入试剂：加完试剂后，其余操作均与制作标准曲线时相同。

实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。

（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml 水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。

（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

（5）0.1% 酚酞指示剂。

（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。

3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。