试验二总糖和还原糖的测定

总糖和还原糖的测定－高效液相色谱法葡萄酒、果酒－总糖和还原糖的测定－高效液相色谱法(Ⅱ法)1 范围本方法适用于葡萄酒、果酒及其相关产品中总糖和还原糖含量的测定。

2 原理利用样品中各种组分在液固两相分配系数的不同，令样品通过液相色谱柱，而将样品中的果糖、葡萄糖、蔗糖与其他组分分离。

然后再利用示差折光检测器进行鉴定，用外标法定量。

3 试剂与溶液3.1 乙腈：色谱纯；3.2 超纯水；3.3 乙腈-水（75＋25）：将乙腈和水按（75＋25）的比例混合（或根据仪器情况调整该比例至分离效果最佳），用脱气装置充分脱气后，再用0.45μm的油系过滤膜过滤。

该溶液用做流动相；3.4 糖标准溶液（含总糖45.000g/L）：分别称取干燥的葡萄糖、果糖、蔗糖各1.500g（精确至0.001g），移入100mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度。

该溶液含葡萄糖、果糖、蔗糖分别为15.000g/L。

4 仪器设备4.1 高效液相色谱仪：（配有记录系统或数据处理装置）；4.2 示差折光检测器；4.3 色谱柱：150 min×5.0mm（内径），Shim－pack CLCNH2 柱；4.4 微过滤膜：0.45μm，油系；4.5 脱气装置（或超声波装置）。

5 试样的制备将样品用超纯水稀释至含总糖量为45g/L 左右，并用0.45μm油系微过滤膜过滤。

6 分析步骤6.1 色谱条件a.柱温：室温；b.流动相：乙腈＋水；c.流速： 2mL/min；d.进样量：20μL。

6.2 测量：在同样的色谱条件下，将糖标准溶液和处理好的试样分别注入色谱仪。

开启记录系统后，扳动进样阀。

总糖和还原糖的测定实验报告1. 引言总糖是指在食品和饮料中存在的所有糖类的总量，包括单糖、双糖和多糖。

而还原糖是其中可被还原剂还原为对应醛或酮的糖类的量。

测定总糖和还原糖的含量对食品工业以及食品安全监管有着重要的意义。

本实验旨在探究测定总糖和还原糖的方法，并对不同样品中的总糖和还原糖进行定量分析。

2. 实验步骤2.1 样品准备1.收集不同类型的食品样品，如果酱、蜂蜜、糖果等。

2.将收集到的样品进行标记，记录样品名称和来源。

2.2 总糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。

2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。

3.取一定体积的溶液，加入邻苯二甲酸溶液，制备还原糖试剂。

4.将还原糖试剂与溶液混合，加入含硫酸的试剂，进行硫酸铜法测定。

5.根据产生的蓝色沉淀的量，用标准曲线确定总糖的含量。

2.3 还原糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。

2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。

3.取一定体积的溶液，加入费林试剂，制备还原糖试剂。

4.将还原糖试剂与溶液混合，加热反应一段时间。

5.根据试剂的吸收光谱，用比色法测定还原糖的含量。

3. 结果与讨论3.1 总糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品总糖含量（g/100g）样品A 50样品B 70样品C 803.2 还原糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品还原糖含量（g/100g）样品A 30样品B 40样品C 50根据测定结果可以看出，不同样品的总糖和还原糖含量存在差异。

糖果样品的总糖和还原糖含量均高于果酱和蜂蜜样品。

这可能是因为糖果中添加了大量的糖分，而果酱和蜂蜜中含有的糖分相对较少。

4. 结论本实验使用了硫酸铜法和比色法测定了不同样品中的总糖和还原糖的含量，并得出了相应的测定结果。

通过此实验，我们可以了解食品样品中总糖和还原糖的测定方法，并获得样品中总糖和还原糖的定量分析结果。

5. 延伸应用1.此方法可以应用于食品行业的质量控制，帮助饮料、甜品等生产企业控制产品中糖分的含量。

总糖和还原糖测定方法较多，如3，5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。

这里只介绍斐林氏法。

一、目的学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。

二、原理还原糖在碱性溶液中能将Ag+，Hg+，Cu2+，Fe（CN）3-等金属离子还原，而糖本身则氧化成各种羟酸，利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。

本实验采用斐林试剂热滴定法，氧化剂是斐林试剂，它是由甲乙两种溶液组成，甲液中含有硫酸铜、次甲基蓝；乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾（黄血盐）。

当甲乙两液混合时，硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀，由于溶液中存在酒石酸钾钠，它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。

酒石酸络铜（Ⅱ）钾钠盐在与还原糖共热时，二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。

此氧化亚铜与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性的亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐。

Cu2O + K4Fe(CN)6 + 3 H2O →K2Cu2Fe(CN)6 + 2 KOH + 2 H2O亚铁氰化钾亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强，因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原，只有当二价铜被还原完毕后，才能使次甲基蓝（甲烯蓝）还原为无色，测定中以此作为滴定终点。

在测定时先做一对照管（不加样品），用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次甲基蓝的量，即测定对照管消耗的标准葡萄糖量（A）。

再做样品管，样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜，剩余的量再用标准葡萄糖来滴定，即样品消耗的标准葡萄糖量（B）。

将（A）减去（B）就可求得样品中还原糖量。

三、器材及试剂：1．器材：①山芋粉②广范试纸pH1～12。

③吸管5毫升（×4），10毫升（×2）④容量瓶100毫升（×3）⑤烧杯150毫升（×1），100毫升（×1）⑥三角烧瓶250毫升（×6）⑦滴定管25毫升（×1）⑧双孔橡皮塞⑨电炉300W（×1）⑩天平。

实验二总糖和还原糖的测定──3,5－二硝基水杨酸比色法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

三、试剂和器材1、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取5.0g DNS溶于200ml 2mol/L NaOH溶液中（不适宜用高温促溶），接着加入到酒石酸甲钠的热溶液中（192g就是酸甲钠溶于500ml水中），再加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，摇匀溶解后，冷却定容至1000ml，暗处保存备用。

葡萄糖标准溶液：准确称取在105℃的温度下烘干至恒重的葡萄糖0.5g，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至1000ml。

6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。

碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

0.1% 酚酞指示剂：0.1g酚酞溶于100ml无水乙醇中。

1％淀粉2、材料淀粉。

3、器材WFJ UV－2000型分光光度计，水浴锅，电炉，10ml比色管。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取6支10ml 比色管并编号，按下表顺序加入各种试剂。

（表1）混匀后置沸水浴上加热5min 进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水4.0mL ，摇匀（用10mL 比色管，加蒸馏水补齐至5mL 刻度线），在540nm 波长下，用0号管调零，分别读取各管的吸光度值A 540。

以葡萄糖含量（mg ）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2、淀粉水解及还原糖的提取取1％淀粉25mL ，放在100mL 烧杯中，加入6mol/L HCl 10mL ，然后加入蒸馏水15mL ，混匀，于沸水浴中保温30min ，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I 2-KI 溶液检查水解是否完全。

总糖和还原糖的测定实验报告一、实验目的本实验旨在通过测定总糖和还原糖的含量，了解不同食品中糖分的含量及其对人体健康的影响。

二、实验原理总糖是指食品中所有可溶性糖类的总和，包括单糖、双糖和多糖。

还原糖是指具有还原性的单糖和部分双糖。

测定总糖和还原糖的方法主要有蒸发法、显色法、高效液相色谱法等，本实验采用显色法测定。

三、实验步骤1.样品制备：将待测样品粉碎并过筛，取2g样品加入100ml锥形瓶中，加入40ml去离子水，振荡混合均匀。

2.制备还原剂：称取0.5g氢氧化钠加入50ml去离子水中，加温搅拌至完全溶解。

3.蒸发：将步骤1中制备好的样品放入沸水浴中加温蒸发至干固。

4.水解：将步骤3中得到的干固样品加入10ml 0.5mol/L盐酸中，加温水解30min。

5.冷却：将步骤4中的样品冷却至室温，加入50ml去离子水稀释。

6.显色：取10ml样品溶液加入试管中，加入2ml酚酞指示剂溶液和2ml还原剂溶液，振荡混合均匀后静置10min。

7.测定：用1mol/L氢氧化钠滴定至颜色变为淡粉色，记录滴定体积V1。

同时进行空白试验并记录滴定体积V0。

8.计算：总糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g），还原糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g）。

四、实验结果本次实验测得样品A的总糖含量为24.5mg/g，还原糖含量为8.7mg/g；样品B的总糖含量为18.3mg/g，还原糖含量为6.9mg/g；样品C的总糖含量为31.7mg/g，还原糖含量为12.4mg/g。

五、实验分析通过本次实验可以发现不同食品中的总糖和还原糖含量存在较大差异。

其中，样品C的总糖和还原糖含量均较高，而样品B的含量最低。

这提示我们在饮食中应该注意控制糖分的摄入，避免过多摄入对身体健康造成影响。

六、实验感想本次实验通过测定总糖和还原糖含量，让我对不同食品中糖分的含量有了更深入的了解。

总糖和还原糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握总糖和还原糖含量测定的基本原理和方法。

2、熟练使用分光光度计进行比色分析。

3、培养实验操作技能和数据分析能力。

二、实验原理1、总糖的测定总糖是指样品中所有能够还原斐林试剂的糖类物质的总和，包括还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖等）和非还原糖（如蔗糖）。

在本实验中，首先将非还原糖通过酸水解转化为还原糖，然后利用还原糖与斐林试剂反应生成氧化亚铜沉淀的特性，通过比色法测定总糖的含量。

2、还原糖的测定还原糖能够直接与斐林试剂反应，生成氧化亚铜沉淀。

在碱性条件下，氧化亚铜沉淀与酒石酸钾钠反应，形成蓝色的络合物。

通过分光光度计测量溶液在特定波长下的吸光度，与标准曲线对比，即可计算出还原糖的含量。

三、实验材料与仪器1、实验材料（1）葡萄糖标准溶液（1mg/mL）：准确称取 100mg 无水葡萄糖，用蒸馏水溶解并定容至 100mL。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取 63g DNS 和 262mL2mol/L NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加 5g 结晶酚和 5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

（3）6mol/L HCl 溶液。

（4）10% NaOH 溶液。

（5）待测样品：如水果汁、蔬菜汁等。

2、实验仪器（1）分光光度计。

（2）恒温水浴锅。

（3）电子天平。

（4）移液器。

（5）容量瓶（100mL、500mL）。

（6）具塞刻度试管（25mL）。

四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）分别吸取 00、02、04、06、08、10、12mL 葡萄糖标准溶液（1mg/mL）于 25mL 具塞刻度试管中，用蒸馏水补足至 20mL。

（2）向各试管中加入 20mL DNS 试剂，摇匀后在沸水浴中加热5min，取出后立即用冷水冷却至室温。

（3）用蒸馏水定容至 25mL，摇匀。

（4）以空白管（00mL 葡萄糖标准溶液）为参比，在 540nm 波长下测定各管溶液的吸光度。

总糖和还原糖的测定（3,5—二硝基水杨酸法）实验报告前言糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。

同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。

我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。

本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。

本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。

首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。

还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以。

一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法3、学习分光光度法测定的原理和方法二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。