还原糖和总糖含量的测定(3 ，5 一二硝基水杨酸比色法)

3,5-二硝基水杨酸(dns)法测定甘蔗茎节总糖
和还原糖含量
3,5-二硝基水杨酸法是常用的测定甘蔗茎节总糖和还原糖含量的
方法。

该方法操作简便、灵敏度高、重现性好。

具体步骤如下：
1. 样品制备：取适量甘蔗茎节，去除表皮和髓部，仅留下髓骨。

将髓骨切成小丁块，加入清水，煮沸5分钟，离火冷却后离心取上清，过滤掉杂质，即为样品。

2. 取样：取样品5mL，加入试管中。

3. 加试剂：加入2mL DNS试剂，混匀。

4. 加热：将试管放在沸水中加热10分钟。

5. 冷却：取出试管，放置至室温下冷却。

6. 吸光度测定：利用分光光度计测定样品的吸光度。

7. 计算含量：根据标准曲线计算出样品中总糖和还原糖的含量。

总糖和还原糖含量的计算公式如下：
总糖含量（%）=（样品吸光度值-对照吸光度值）×标准糖液浓
度×20/样品量（mL）
还原糖含量（%）=（样品吸光度值-对照吸光度值）×标准还原
糖液浓度×20/样品量（mL）。

3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。

本文将介绍该方法的操作步骤、原理及注意事项。

一、操作步骤1. 样品制备：精确称取适量糖样品，加入足量去离子水稀释至1 mL，摇匀。

2. 试剂制备：(1) Na2CO3试液：称取0.5 g Na2CO3加入50 mL去离子水中，溶解并稀释至1 L。

(2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS)重量浓度为1 g/L的甲醛溶液：按比例称取适量DNS和甲醛，在去离子水中稀释制成重量浓度为1 g/L的甲醛溶液。

3. 测定步骤：(1) 取3个试管，编号为A、B、C，并进行空白对照。

将A、B、C试管分别加入0.1 mL 样品，每个试管中加入相同量的0.9 mL去离子水。

在空白试管中加入相同量的去离子水代替样品。

(2) 在A试管中加入0.5 mL Na2CO3试液，摇匀。

(3) 将B试管浸于沸水中加热3-5分钟，使其中的还原糖完全还原。

(4) 在A、B两样品试管中加入0.5 mL甲醛溶液，摇匀并置于60℃水浴上加热10分钟。

(6) 加入1.5 mL水后，在空白对照试管和样品试管中均加入0.5 mL DNS溶液，摇匀。

(7) 在95℃水浴加热10分钟，并立即冷却至室温。

(8) 测量吸光度值，通过标准曲线计算样品中还原糖或总糖含量。

二、原理还原糖或总糖与Na2CO3在典型的碱性条件下发生醛基反应，把碳水化合物中的亲电基转化为醛基，再将其还原为对应的醇，生成糖醇和尿素等。

然后，在碱性条件下，醛基与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应，发生环化，生成糖醛酸化合物，这些化合物在pH9.0以下表现为桥形分子，具有紫色的吸收峰。

在高温条件下，DNS与糖醛酸化合物相结合，形成柿子色化合物，进一步增加吸收光的强度。

还原糖或总糖的含量可以通过比较样品的吸光度值和标准曲线来测定。

三、注意事项1. 避免试管附着并确保试管内部表面干净。

3,5-二硝基水杨酸法测定山楂片中还原糖和总糖含量3,5-二硝基水杨酸法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法，其原理基于还原糖在酸性条件下与3,5-二硝基水杨酸反应生成红色化合物，而总糖则在强硫酸存在下加热分解，生成由葡萄糖和六碳糖等组成的还原糖，在酸性条件下与3,5-二硝基水杨酸反应生成红色化合物。

具体操作步骤如下：1. 取一定质量的山楂片粉末，加入适量的蒸馏水，加热水浴至沸腾，过滤，将过滤液冷却至室温。

2. 取0.2 ml 过滤液，加入2 ml 3,5-二硝基水杨酸溶液，摇匀后在60摄氏度恒温水浴中反应10分钟，然后放冷。

3. 吸收液的吸光度在515 nm处测定，还原糖含量的计算公式为：还原糖含量（%)= (As–A0)/(有效光程×C×0.88)×100，其中As为样品吸光度，A0为空白试剂吸光度，有效光程为1 cm，C为样品初始体积，0.88为还原糖的摩尔吸光系数。

4. 取剩余过滤液，加入相当于5倍于样品初始体积的浓硫酸，浸于沸水中煮2小时，浸于水中冷却，并用蒸馏水将瓶口水洗入容量瓶，摇匀。

5. 取0.1ml 还原糖水样稀释液加入容量瓶，加入相当于5倍于样品初始体积的浓硫酸，摇匀后加入适量的蒸馏水到刻度线，摇匀后离心。

6. 取0.1 ml 离心上清液，加入2 ml 3,5-二硝基水杨酸溶液，摇匀后在60摄氏度恒温水浴中反应10分钟，然后放冷。

7. 吸收液的吸光度在515 nm处测定，总糖含量的计算公式为：总糖含量（%)= (As–A0)/(有效光程×C×0.88)×100，其中As为样品吸光度，A0为空白试剂吸光度，有效光程为1 cm，C为样品初始体积，0.88为还原糖的摩尔吸光系数。

总之，3,5-二硝基水杨酸法是一种稳定可靠的方法，能够准确测定山楂片中的还原糖和总糖含量，为山楂片的质量控制提供了重要的参考。

还原糖和总糖含量的测定（3，5 一二硝基水杨酸比色法）还原糖和总糖含量的测定（3 ，5 一二硝基水杨酸比色法）作者：佚名文章来源：生物化学实验技术点击数：2132 更新时间：2021-5-13 11:29:24一、目的植物体内的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。

它们在植物体内的分布，不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。

还原糖还能形成其他物质如有机酸等。

此外，水果蔬菜中糖量的多少，也是坚定其品质的重要指标。

还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉蔗糖等，经水解也生成还原糖。

通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，练习比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的使用方法。

二、原理各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用溶解度不同，可以植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。

在碱性条件下，还原糖与 3 ， 5 一二硝基水杨酸共热， 3 ， 5 一二硝基水杨酸被还原为 3-氨基 -5- 硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。

一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系， 540nm 波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。

三、仪器、试剂和材料1 .仪器（ 1 ）刻度试管： 25 ml X 11（ 2 ）离心管或玻璃漏斗 X2（ 3 ）烧杯： 1OOml X 1（ 4 ）三角瓶： 100m1 X 1（ 5 ）容量瓶： 100ml X 3（ 6 ）刻度吸管： 1 ml X 1 ， 2m1 X 4, 10ml X 1（ 7 ）恒温水浴（ 8 ）沸水浴（ 9 ）离心机（过滤法不用此设备）（ 10 ）电子顶载天平（ 11 ）分光光度计2 .试剂（ 1 ） 1 mg/ ml 葡萄糖标准液：准确称取 100mg 分析纯葡萄糖（预先在8 0 ℃ 烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到 100ml 的容量瓶中，以馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。

实验二十还原糖和总糖含量的测定—3、5-二硝基水杨酸比色定糖法目的要求1、掌握3，5-二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。

2、用3，5-二硝基水杨酸定糖法测定山芋粉中的总糖及还原糖。

3、熟悉721型光电比色计的原理及使用方法。

实验原理3，5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。

该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。

试剂和器材1.试剂（1）6mol/L盐酸溶液、10%氢氧化钠溶液、碘化钾-碘溶液（碘试剂）、酚酞指示剂、85%乙醇。

（2）3，5-二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）：甲液——溶解6.9g结晶酚于15.2ml 10%氢氧化钠中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠。

乙液——称取255g酒石酸钾钠，加到300ml 10%氢氧化钠中，再加入880ml 1%的3，5-二硝基水杨酸溶液。

将甲液与乙液相混合即得到黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，在室温下，放置7～10d以后使用。

（3）0.2%葡萄糖标准液：准确称取200mg分析纯的葡萄糖（预先在70℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100ml，冰箱保存备用。

2.器材试管和试管架、碱滴定管（50ml）、铁架台、滴定管夹、移液管（1ml，2ml）、移液管架、容量瓶（100ml）、铜水浴锅、玻璃漏斗、烧杯、铁三脚架、量筒（10ml、100ml）、电热恒温水浴、煤气灯、玻璃棒、白瓷板、721型分光光度计。

操作方法1.葡萄糖标准曲线的制定取9支刻度试管（25ml）或血糖管，分别按下表顺序加入各种试剂：DNS试剂1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5（ml）加热均在沸水浴中加热5min冷却立即用流动冷水冷却蒸馏水（ml）21.5 21.5 21.521.521.521.521.521.5 21.5 将上述各管溶液混匀后，在721型分光光度计上进行比色测定，用空白管溶液调零点，记录光密度值,以葡萄糖浓度为横座标，光密度值为纵座标绘制出标准曲线。

实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。

2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。

实验二总糖和还原糖的测定──3,5－二硝基水杨酸比色法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

三、试剂和器材1、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取5.0g DNS溶于200ml 2mol/L NaOH溶液中（不适宜用高温促溶），接着加入到酒石酸甲钠的热溶液中（192g就是酸甲钠溶于500ml水中），再加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，摇匀溶解后，冷却定容至1000ml，暗处保存备用。

葡萄糖标准溶液：准确称取在105℃的温度下烘干至恒重的葡萄糖0.5g，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至1000ml。

6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。

碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

0.1% 酚酞指示剂：0.1g酚酞溶于100ml无水乙醇中。

1％淀粉2、材料淀粉。

3、器材WFJ UV－2000型分光光度计，水浴锅，电炉，10ml比色管。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取6支10ml 比色管并编号，按下表顺序加入各种试剂。

（表1）混匀后置沸水浴上加热5min 进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水4.0ml ，摇匀，在540nm 波长下，用0号管调零，分别读取各管的吸光度值A 540。

以葡萄糖含量（mg ）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2、淀粉水解及还原糖的提取取1％淀粉25ml ，放在100ml 烧杯中，加入6mol/L HCl 10ml ，然后加入蒸馏水15ml ，混匀，于沸水浴中保温30min ，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I 2-KI 溶液检查水解是否完全。

百度文库- 让每个人平等地提升自我实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以。

三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。

2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。

实验二还原糖及总糖的测定（3、5——二硝水杨酸比色法）目的和要求：1．掌握3、5-二硝基水杨酸比色法测定糖量的原理及方法。

2．熟悉722分光光度计基本工作原理和操作方法。

原理：各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。

在碱性条件下，还原糖与3、5—二硝基水杨酸共热，3、5—二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它物质。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，可在分光光度计540nm波长测定棕红色物质的吸光值。

查标准曲线计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。

多糖水解时，在单糖残基上加了一分子水，因而在计算中须扣除已加入的水量，测得所得到的总糖量乘以0.9即为实际的总糖量。

该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。

试剂和材料：1．试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100ml分析纯葡萄糖（预先在105℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml容量瓶中，以蒸馏水定容到刻度，摇匀，冰箱中保存备用。

（2）3、5—二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）甲液——溶解6.9g结晶酚（苯酚）于15.2ml 10%NaOH中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠。

乙液——称取22.5g酒石酸钾钠，加到300ml 10% NaOH中，再加入880ml 1%的3、5—二硝基水杨酸溶液。

将甲液和乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，放置7—10天使用。

（3）碘—碘化钾溶液（碘试剂）：称取5g碘和10g碘化钾，研匀后溶于100ml蒸馏水中。

（4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞溶于70%乙醇中。

（5）6 mol·L-1 HCl（6）6 mol·L-1NaOH（7）面粉2．器材比色管、离心管、量筒、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、玻璃漏斗、滤纸、白瓷板、电热恒温水浴槽、离心机、天平、分光光度计。

还原糖和总糖的测定(3,5-二硝基水杨酸比色法)一、实验目的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类。

单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。

对非还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成还原性单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。

还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，而氧化剂3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。

三、实验材料和试剂1、实验材料面粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。

②3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。

③碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏水中。

④酚酞指示剂：称取0.1g酚酞，溶于250ml 70%乙醇中。

⑤6M HCl和6M NaOH各100ml。

四、实验器材具塞璃玻刻度试管：20ml×11 大离心管：50ml×2烧杯：100ml×1 三角瓶：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；2ml×2；10ml×1恒温水浴锅沸水浴离心机扭力天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7支具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。

一、概述还原糖是一类可溶于水的碳水化合物，通常具有甜味。

在食品加工和生产中，还原糖的含量是一个重要的指标。

测定食品中还原糖的含量对于保障产品质量和食品安全具有重要意义。

而3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的方法来测定还原糖的含量。

二、3,5-二硝基水杨酸比色法原理3,5-二硝基水杨酸比色法是利用还原糖与3,5-二硝基水杨酸在酸性溶液中发生还原反应，生成带有黄色的还原糖-3,5-二硝基水杨酸络合物。

通过比色测定络合物的吸光度，可以间接测定还原糖的含量。

这种方法的优点是操作简便、灵敏度高、准确性较好，因此被广泛用于食品、医药等领域的还原糖含量测定。

三、实验步骤1. 样品制备：将待测食品样品制成均匀的糊状。

2. 提取还原糖：将制好的样品用水提取，得到含有还原糖的提取液。

3. 混合试剂：将3,5-二硝基水杨酸试剂与提取液进行混合，使其发生化学反应生成还原糖-3,5-二硝基水杨酸络合物。

4. 比色测定：用比色计测定络合物的吸光度，据此计算出还原糖的含量。

四、实验注意事项1. 实验操作中需注意安全，避免接触到有毒化学品。

2. 实验操作要严格按照步骤进行，避免操作失误。

3. 比色计要保持清洁，以确保测定结果的准确性。

五、实验结果分析通过3,5-二硝基水杨酸比色法测定出的还原糖含量可以作为食品加工和质量控制的重要数据。

实验结果的准确性和稳定性对于保障产品质量和食品安全具有重要意义。

六、实验应用3,5-二硝基水杨酸比色法不仅在食品加工领域有重要应用，还在医药、化工等领域具有广泛的应用。

对该方法的研究和实际应用具有重要价值。

七、结论3,5-二硝基水杨酸比色法是一种简便、灵敏度高的测定还原糖含量的方法，具有较好的准确性和实用性。

在食品加工和生产中，该方法有着重要的应用价值，能够为保障产品质量和食品安全提供重要数据支持。

八、参考文献1. Zhang, Y.; Wu, X.; Chen, Z. A. M. Determination of Reducing Sugars in Low Concentrations by 3,5- dinitrosalicylic Acid Method in Tapered Microfluidic Channels. Anal. Chem. 2017, 89, 9750-9756.2. Miller, G. L. Use of Dinitrosalicylic Acid Reagent for Determination of Reducing Sugar. Anal. Chem. 1959, 31, 426-428.以上就是3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖含量的一些基本内容，该方法的简便性和高灵敏度使其成为食品加工和生产中常用的一种检测手段。

3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖含量
3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用于测定糖含量的方法。

该方法基于糖的还原性，利用糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成一个特定的有色产物，通过测量这个有色产物的吸光度，可以确定糖的含量。

下面是该方法的步骤：
1. 准备一定浓度的3,5-二硝基水杨酸溶液。

可以将一定量的3,5-二硝基水杨酸粉末溶解在适量的溶剂（如醇）中，制备出一定浓度的3,5-二硝基水杨酸溶液。

2. 准备样品溶液。

将待测糖溶解在适量的溶剂中，制备出合适浓度的糖溶液。

3. 反应。

将一定量的样品溶液与一定量的3,5-二硝基水杨酸溶液混合，在适当的温度下进行反应。

4. 吸收测量。

将反应后的溶液用比色皿装入分光光度计中，设置波长（通常为540 nm），测量吸光度。

5. 构建标准曲线。

根据已知浓度的糖溶液，按照上述步骤测量吸光度，并绘制出吸光度与糖浓度之间的关系图。

可以根据标准曲线来确定未知样品中糖的含量。

需要注意的是，该方法只适用于对还原性糖进行测定，不适用
于非还原性糖的测定。

同时，实验过程中要注意操作规范和安全，避免接触有毒物质。

还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密pH 试纸。

2. 主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3. 试剂（1）1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密pH 试纸。

2. 主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3. 试剂（1）1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

实验一还原糖和总糖含量的测定原理3，5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范实验围内还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，可用比色测定。

操作简便，快速，杂质干扰较少。

实验方法一葡萄糖标准曲线的制定葡萄糖标准曲线的制定：准确称取100mg分析纯的无水葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后，定量转移至100mL容量瓶中，再定容至刻度，摇匀。

浓度为1mg/Ml。

取9支25mm×250mm的试管，分别按下表加入试剂：（ml）项目0 1 2 3 4 5 6 7 8G标液0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 G的量0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 H2O 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 3，5-二硝基水杨酸加入21.5mL蒸馏水,摇匀。

于520nm波长处测A值。

以葡萄糖mg数为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

二样品中总糖和还原糖含量的测定以测定山芋中总糖和还原糖含量为例。

1．样品中还原糖的提取：准确称取2g山芋粉，放在100mL烧杯中，先以少量水调成糊状，然后加工50-60mL蒸馏水，于50o C恒温水浴中保温20分钟，过滤，将滤液收集在100mL 容量瓶中，再定容至100mL。

2．样品中总糖的水解及提取：准确称取1g山芋粉，放在锥形瓶中，加入10mL6mol/L 盐酸，15mL水，在沸水浴中加热半小时，取出一、二滴置于白瓷板上，加1滴碘-碘化钾溶液检查水解是否完全。

如已水解完全，则不呈蓝色。

冷却后加1滴酚酞指示剂，以10%氢氧化钠溶液中和至溶液呈微红色，过滤并定容到100mL。

再精确吸取上述溶液10mL于100mL 容量瓶中，定容到刻度，混匀备用。

3．样品中糖含量的测定：取7支队5mm×250mm试管分别按下表加入试剂：加完试剂后，其余操作均与制作标准曲线时相同。

还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、材料、主要仪器和试剂1、材料小麦面粉;精密pH试纸。

2、主要仪器(1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11 （2）大离心管：50mL×2（3)烧杯：100mL×1 (4）三角瓶：100mL×1(5）容量瓶：100mL×3 （6）刻度吸管：1mL×1;2mL×2;10mL×1 （7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）分光光度计3、试剂（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg,置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

(2）3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS和262mL2MNaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解,冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

（3）碘—碘化钾溶液:称取5g碘和10g碘化钾,溶于100mL蒸馏水中.（4)酚酞指示剂：称取0。

1g酚酞，溶于250mL70%乙醇中.（5）6MHCl和6MNaOH各100mL.二、操作步骤1．制作葡萄糖标准曲线取7支20mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5—二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。

表1葡萄糖标准曲线制作管号1mg/mL 葡萄糖标准液（mL）蒸馏水（mL)DNS(mL）葡萄糖含量(mg）光密度值（OD540nm）0 0 2 1.5 01 0。

2 1.8 1。

5 0。

22 0.4 1。

6 1.5 0.43 0。

6 1.4 1.5 0。

64 0.8 1。

2 1。

5 0.85 1。

0 1。

0 1。

5 1.06 1.2 0。

8 1.5 1.2将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温,用蒸馏水定容至20mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。

１１３ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ２０２０年５月５日第２９卷第９期Ｖｏｌ．２９牞Ｎｏ．９牞Ｍａｙ５牞２０２０基金项目：山西省科技厅面上自然基金项目犤２０１８０１Ｄ１２１２９６犦。

第一作者：高文军，男，硕士研究生，助理工程师，研究方向为食品药品成分分析，（电子信箱）ｑｘｙｇｗｊ＠１６３．ｃｏｍ。

△通信作者：李卫红，女，大学本科，教授级高级工程师，研究方向为食品药品检测技术及质量标准，（电子信箱）ｌｗｈ１９１＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ。

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－４９３１．２０２０．０９．０３４调查犤Ｊ犦．中药材，２００１，２４（１）：２０－２１．犤２犦毛文山，严智慧，马兴民，等．中药真伪鉴别犤Ｍ犦．西安：陕西科学技术出版社，１９８４：２６１．犤３犦卫生部药品生物制品检定所－中国科学院植物研究所．中药鉴别手册（二册）犤Ｍ犦．北京：科学出版社，１９７９：２６５．犤４犦肖培根．新编中药志：一卷犤Ｍ犦．北京：化学工业出版社，２００１：６９１．犤５犦韦欣，任广聪，孙庆文，等．贵州产菝葜属及肖菝葜属８个品种的鉴别研究犤Ｊ犦．时珍国医国药，２０１１，２２（２）：４９２－４９４．犤６犦杜素兰，张晋宏，耿爱萍，等．短梗菝葜的定性与定量检测方法研究犤Ｊ犦．中国药事，２００８，２２（３）：２３０－２３２．犤７犦陈艺粼，吴小利，聂飞，等．短梗菝葜药材的生药学鉴别研究犤Ｊ犦．中药材，２０１８，４１（２）：３１３－３１６．犤８犦张凌燕，叶冰莹，黄骐，等．ＭＰＬＣ测定虎杖中白藜芦醇含量犤Ｊ犦．天然产物研究与开发，２００６（２）：３０８－３１０．犤９犦张存莉，李文闯，高锦明，等．黑刺菝葜中的甾体皂甙研究犤Ｊ犦．西北农林科技大学学报（自然科学版），２００３，３１（４）：１６３．犤１０犦ＳＩＥＭＡＮＮＥＨ，ＣＲＥＡＳＹＬＬ，Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｈｙｔｏａｌｅｘｉｎｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌｉｎｗｉｎｅ犤Ｊ犦．ＥｎｏｌｏｇｙａｎｄＶｉｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，１９９２，４３（１）：４９－５２．犤１１犦ＣＡＲＵＳＯＦ，ＴＡＮＳＫＩＪＡ，ＶＩＬＬＥＧＡＳＥ，ｅｔ．ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｂａｓｉｓｆｏｒａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｒａｎｓ－ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ：Ａｂｉｎｉｔｉｏｃａｌｃｕｌａ－ｔｉｏｎｓａｎｄｃｒｙｓｔａｌａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅ犤Ｊ犦．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４，５２（２４）：７２７９－７２８５．犤１２犦ＦＡＲＺＡＮＥＧＡＮＡ，ＳＨＯＫＵＨＩＡＮＭ，ＪＡＦＡＲＩＳ，ｅｔａｌ．Ａｎｔｉ－ｈｉｓｔａｍｉｎｉｃＥｆｆｅｃｔｓｏｆＲｅｓｖｅｒａｔｒｏｌａｎｄＳｉｌｙｍａｒｉｎｏｎＨｕｍａｎＧｉｎｇｉｖａｌＦｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ犤Ｊ犦．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１９，４２（５）：１６２２－１６２９．犤１３犦ＣＨＥＮＹＲ，ＣＨＥＮＹＳ，ＣＨＩＮＹＴ，ｅｔａｌ．Ｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｙｔｏｋｉｎｅｓｉｎｔｅｒｆｅｒｅｗｉｔｈｒｅｓｖｅｒ ａｔｒｏｌ－ｉｎｄｕｃｅｄａｎｔｉ－ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｏｒａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ犤Ｊ犦．Ｆｏｏｄａｎｄｃｈｅｍｉｃａｌｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ：ａｎｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｊｏｕｒｎａｌｐｕｂｌｉｓｈｅｄｆｏｒｔｈｅＢｒｉｔｉｓｈＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，２０１９，１３２：１１０６９３．犤１４犦培勤，郭传勇．自藜芦醇药理作用的研究进展犤Ｊ犦．医药导报，２００６，２５（６）：５２４－５２５．牗收稿日期：２０１９－０９－１６牘檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨３，５－二硝基水杨酸法测定蔓菁中还原糖和总糖含量 高文军，李卫红△，王喜明，乔丽芳（山西省医药与生命科学研究院，山西太原０３０００６）摘要：目的建立测定晋南蔓菁还原糖和总糖含量的３，５－二硝基水杨酸比色（ＤＮＳ）法。